异丙酚对过氧化氢导致PCI2细胞损伤的影响及机制

目的探讨异丙酚对过氧化氢（H2O2）导致的PCI2细胞损伤的影响及机制。方法以H2O2损伤PCI2细胞作为氧化应激细胞损伤模型,加入10μmol／L的异丙酚,采用MTF法分析细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞核形态变化,罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位变化,双氯荧光黄乙酸乙酯（DCF—DA）染色检测细胞内活性氧（ROS）的含量,免疫印迹法检测pAkt蛋白表达;在此基础上,探讨异丙酚保护作用机制时再加入LY294002,分别检测细胞上述指标及pAkt的表达。结果H2O2可致PCI2细胞存活率下降,凋亡增加,异丙酚（10μmol／L）可使PCI2细胞的存活率增加,凋亡率降低;异丙酚可抑制H2O2导致ROS和膜电位变化;增加Akt磷酸化水平;P13K抑制剂LY294002可拮抗异丙酚的保护作用,使细胞存活率降低、ROS生成增加、膜电位下降。结论异丙酚可减轻H2O2导致的PCI2细胞损伤,这一作用是通过激活P13K／Akt通路实现的。     

Orexin A预处理对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用

目的观察食欲素(Orexin)A预处理对过氧化氢(H_2O_2)损伤PC12细胞存活率及凋亡的影响。方法将PC12细胞分为对照组、H_2O_2组和Orexin A+H_2O_2组,分别通过噻唑蓝(MTT)、倒置显微镜进行形态观察、流式细胞术对细胞存活率、凋亡细胞形态、细胞凋亡率进行分析。结果 Orexin A+H_2O_2组细胞存活率显著高于H_2O_2组,细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均显著低于H_2O_2组(P0.05)。结论 Orexin A能提高H_2O_2细胞存活率、降低细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

丙酮酸对过氧化氢诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究丙酮酸对过氧化氢(H2O2)诱发小鼠嗜铬细胞瘤瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用并初步探讨其保护机制.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组;损伤组;保护组,在用H2O2处理前30 min加入丙酮酸.通过细胞形态学方法,化学比色法测定琥珀酸脱氢酶(MTT)含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)含量和丙二醛(MDA)含量,观察丙酮酸的神经保护作用.结果 通过形态学方法,保护组细胞数显著比损伤组多,受损变圆的细胞数较少.保护组可明显降低细胞LDH释放量和细胞内的MDA含量(P＜0.01);提高MTT测定值和SOD活性.结论 丙酮酸对H2O2诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用.     

过氧化氢对PC12细胞中硫氧还蛋白和APE/Ref-1基因表达的影响

目的观察过氧化氢(H2O2)对硫氧还蛋白和APE/Ref-1基因表达的影响,探讨H2O2预处理对神经细胞具有适应性保护的分子机制。方法以PC12细胞作为神经细胞模型,以200和400μmol/L浓度的H2O2处理PC12细胞,用MTT法检测细胞的损伤程度,以Western blot方法测定硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达水平。结果200μmol/LH2O2促进PC12细胞的硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达,400μmol/LH2O2也促进PC12细胞的APE/Ref-1表达,但使PC12细胞的硫氧还蛋白表达显著降低。结论促进硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达可能是低浓度H2O2预处理对神经细胞具有适应性保护的分子机制。     

右美托咪定对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定对过氧化氢(H_2O_2)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法 PC12细胞随机分为正常对照组,H_2O_2组(200μmol/L H_2O_2),右美托咪定低、中、高浓度组(50、100、200μmol/L右美托咪定+200μmol/L H_2O_2),培养48 h,分别检测细胞活力、凋亡情况、天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Caspase9活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2磷酸化水平。结果与H_2O_2组比较,右美托咪定低、中、高浓度组细胞活力显著提高,细胞早期及晚期凋亡率显著降低,LDH释放量显著减少,MDA含量显著降低,SOD、CAT及GSH-Px活性显著升高,Caspase3、9活性显著降低,Bcl-2及p-ERK1/2表达量显著上调,Bax表达量显著下调(均P<0.01)。结论右美托咪定能通过抗氧化及抗细胞凋亡进而抑制H_2O_2引起的PC12细胞损伤。     

过氧化氢抑制PC12细胞IGF-1促存活功能的体外研究

目的研究过氧化氢(H2O2)对PC12细胞胰岛素样生长因子(IGF-1)促存活功能的影响及可能机制。方法不同浓度的H2O2预处理PC12细胞60 min,MTT及Western blot方法观察H2O2对IGF-1促存活及其受体酪氨酸磷酸化的影响;不同的抑制剂预处理研究H2O2影响IGF-1促存活功能的可能机制。结果 H2O2预处理可以剂量依赖性的降低PC12细胞IGF-1的促存活功能及其受体的磷酸化水平,NMDA受体的特异性拮抗剂MK801可以逆转H2O2的抑制作用。结论 H2O2可以通过谷氨酸受体亚型NMDA受体抑制IGF-1R的磷酸化,从而抑制其促存活作用。     

银杏叶内酯N对PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨银杏内酯N对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法用H2O2诱导PC12细胞损伤,刺激其凋亡,给予不同剂量的受试药物干预。用MTT法检测细胞存活率;用吖啶橙染色检测银杏内酯N对PC12细胞凋亡的作用;用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)的影响,荧光定量RT-PCR法、Western印迹法分别检测Bcl-2、Bax mRNA和相应蛋白的表达。结果银杏内酯N可对抗H2O2诱导的PC12损伤,提高存活率和抑制凋亡,降低PC12细胞ROS水平,与模型组比较均有显著差异(P<0.05);Bcl-2蛋白及mRNA表达量升高,而Bax mRNA和Bax蛋白及表达量降低,与模型组比较均有显著差异(P<0.05),且呈一定的量效关系。结论银杏内酯N可对抗H2O2的神经毒性,其机制与调节凋亡相关基因及蛋白的表达有关。     

应用AFM研究淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的机制

目的 利用原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)对淀粉样蛋白(Aβ25 ～35)处理前后细胞全貌和表面超微结构进行成像分析,为进一步了解Aβ25-35诱导的细胞膜损伤机制提供可视化的依据.方法 用不同浓度的Aβ25 ～ 35处理PCl2细胞,CCK-8实验检测细胞活性,流式细胞术分析细胞凋亡,AFM对细胞进行表面超微结构成像和粒径分布分析.结果 CCK-8实验表明,随着Aβ25 ～35蛋白浓度的增加,细胞活性明显下降,特别是Aβ25 ～35 25 μmol/L时细胞活性明显低于正常组.流式细胞术分析细胞凋亡,Aβ25 ～35浓度在15 μmol/L(低浓度诱导组)时,细胞凋亡率为(5.60±0.61)％;但在25 μmol/L时(高浓度诱导组),细胞凋亡率达到(16.17±0.79)％(P＜0.01),可见,随Aβ25 ～35浓度增加,细胞凋亡越明显;AFM分析细胞形貌和超微结构,随着Aβ25～35蛋白浓度增加,细胞塌陷更严重,细胞表面孔洞增加,颗粒物质粒径减小,细胞膜损伤程度更大.结论 AFM分析数据表明,诱导组细胞活性下降,出现细胞凋亡,细胞膜受到损伤.     

甘草苷对一氧化氮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的应用NO诱导PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨甘草苷对PC12细胞损伤的保护作用。方法甘草苷各剂量的PC12细胞用SNAP诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI检测PC12细胞凋亡率。结果与模型组相比,甘草苷可以使PC12细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞凋亡率。结论甘草苷对NO诱导的PC12细胞凋亡有明显保护作用。     

普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制

[目的]探讨普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制。[方法] N9细胞、PC12细胞分为对照组、缺氧组、低、中、高剂量普鲁卡因组(缺氧+2、6、18 mg/L普鲁卡因)、anti-miR-con组、anti-miR-369-3p组、miR-con+高剂量普鲁卡因组(转染miR-con+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)、miR-369-3p+高剂量普鲁卡因组(转染miR-369-3p+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)。流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,RT-qPCR检测miR-369-3p表达水平。[结果]相比于对照组,缺氧组N9细胞、PC12细胞凋亡率升高,MDA、ROS含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,miR-369-3p表达水平升高(P<0.05)。相比于缺氧组,低、中、高剂量普鲁卡因组N9细胞和PC12细胞凋亡率降低,MDA、ROS含量...     

肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤后NF-κB P65表达的影响

目的探讨L-肌肽对H2O2诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)凋亡的保护机制。方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,加入肌肽作用于细胞,采用MTT比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测凋亡相关基因NF-κB P65 mRNA的表达变化;免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和NF-κB P65的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达最大值(P<0.05)。20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低NF-κB P65的mR-NA表达,降低NF-κB P65蛋白的表达,流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率。结论肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制NF-κB P65的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。     

神经甾体化合物对PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究神经甾体化合物(CPU 03-03)对H2O2和Aβ25～35所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法 用H2O2和Aβ25～35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,同时检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA).结果 CPU 03-03能显著减少细胞死亡,降低LDH漏出量及MDA生成.结论 CPU 03-03对PC12细胞损伤具有保护作用.     

清心开窍方含药脑脊液对氯化钾所致PC12细胞损伤的保护机制

目的从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对氯化钾损伤的PC12细胞的保护作用。方法 SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g/kg),2次/d,连续3.5 d,制备清心开窍方含药脑脊液。采用PC12细胞和终浓度800 mmol/L的氨化钾共培养,造成神经细胞损伤模型。RTPCR方法检测Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平,四甲基原氮唑盐(MTT)法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响。结果清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方对氯化钾损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

过氧化氢对PC12细胞活性的调控及脑活素的抗氧化效能

目的　探讨活性氧对神经细胞活性的调控及脑活素的抗氧化功效。方法　以过氧化氢 (H2 O2 )作为活性氧 ,应用四甲基偶氮唑 (MTT)比色法 ,观察对培养的PC12细胞生长活性的调控和脑活素的抗氧化活性。结果　以 0 .0 3mmol LH2 O2 对PC12细胞具有促进生长的作用 ( P <0 .0 5 ) ,0 .1～ 1.0mmol LH2 O2 可导致PC12细胞不同程度的氧化损伤 ;脑活素浓度在 0～ 10g L对细胞的生长无明显影响 ,当浓度超过 2 0g L后 ,可导致细胞生长受抑制 (P <0 .0 1) ,10～ 2 0g L脑活素可有效保护PC12细胞免受氧化损伤。结论　活性氧对神经细胞的生长具有双重作用 ,脑活素具有保护PC12细胞免受氧化损伤的效能。     

褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的研究褪黑素（MT）对β淀粉样蛋白片段（AB25书）诱发PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为三组：正常对照组，Aβ损伤组和MT保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞，MT保护组在用AB25-35处理前2h加入褪黑素。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法及Western印迹法观察MT的神经保护作用。结果形态学观察发现MT保护组细胞数显著比Aβ损伤组多，受损变圆的细胞数较少。MT保护组LDH活性显著低于损伤组（P〈0．01）；OD值显著高于损伤组（P〈0．01）。Western印迹结果表明Aβ25-35损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低；MT保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高。结论褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用。     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨软脉胶囊对PC12细胞损伤的保护作用。方法 采用血清药理学方法体外培养PC12细胞，研究软脉胶囊对缺氧、GLU、NO引起的PC12细胞损伤的影响。结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧、GLU、NO引起的PC12细胞形态改变，降低胞外LDH活性，增加细胞存活率。结论 软脉胶囊含药血清对PC12细胞损伤具有保护作用。     

Carnosine对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的神经保护作用

目的　研究 Carnosine对 β淀粉样蛋白片段 (Aβ2 5- 3 5)诱发 PC1 2细胞损伤的神经保护作用。方法　将培养的 PC1 2细胞分为三组 :正常对照组、损伤组和保护组。损伤组用 Aβ2 5- 3 5处理细胞 ,保护组在用 Aβ2 5- 3 5处理前 30 min加入 Carnosine。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法观察 Carnosine的神经保护作用。结果　通过形态学方法 ,保护组细胞数显著比损伤组多 ,受损变圆的细胞数较少。保护组 LDH活性显著少于损伤组(P<0 .0 1 ) ;MTT显著高于损伤组 (P<0 .0 1 )。结论　 Carnosine对 Aβ2 5- 3 5诱发 PC1 2细胞损伤有显著的保护作用。     

一氧化氮可能参与多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的：探讨多巴胺（DA）诱导的PC12细胞凋亡是否与内源性一氧化氮（NO）生成有关。方法：酶还原法测定NO浓度，RT－PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS)和caspase-3 mRNA表达水平，免疫细胞化学方法和蛋白印迹法分别检测活化型caspase-3蛋白和iNOS蛋白水平。结果：在多巴胺诱导PC12细胞凋亡过程中，iNOS mRNA和蛋白表达明显增加，内源性NO生成增多，caspawse-3mRNA和活化型caspase-3蛋白的表达也明显增加，结论：内源性NO可能参与多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用。     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的 通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆（VD）的机制.方法 采用TUNEL法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率.结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧引起的PC12细胞的凋亡率,使Bcl-2蛋白的表达率明显增加,同时使Bax蛋白表达率明显降低.结论 软脉胶囊对VD具有治疗作用.     

神经甾体化合物CPU 03-03对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的 研究神经甾体化合物CPU 03-03(以下简称CPU)对谷氨酸诱导的嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用.方法 用谷氨酸制作PC12细胞损伤模型.检测不同浓度CPU作用后PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及细胞内钙([Ca2+]i)变化.结果 CPU作用后,PC12损伤细胞LDH和MDA水平降低,[Ca2+]i降低,并呈一定的剂量依赖性.结论 CPU对谷氨酸所致的PC12细胞损伤有保护作用;其机理可能为降低LDH、MDA及受体依赖型钙通道.