表没食子儿茶素没食子酸酯增强阿糖胞苷对HL-60细胞的抗肿瘤活性

 目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）增强阿糖胞苷（AraC）对人白血病HL-60细胞的抗肿瘤活性。方法：采用生长曲线法、MTT法测定AraC合并应用EGCG前后对HL-60细胞的增殖抑制作用；以对消实验研究EGCG能否逆转脱氧胞苷（dCdR）的补救作用；以流式细胞光度仪分析联合用药前后对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：合并EGCG能增强AraC对HL-60细胞的增殖抑制作用，倍增时间从48 h延长到70 h，生长饱和密度从5.78减少到对5.54；MTT法表明合并EGCG后，AraC对HL-60细胞的IC₅₀从(0.08±0.07) μg·ml^-1减少到0.024±0.026 μg·ml^-1(P＜0.05)；对消实验表明单用AraC的IC₅₀为6.25 ng·ml^-1,加上dCdR后IC50为5.24 μg·ml^-1,而在给予EGCG后IC₅₀减少到1.17 μg·ml^-1。细胞周期研究结果表明AraC可使HL-60细胞阻滞于G₁期，S期细胞减少，低浓度的EGCG对细胞周期几无影响，但增强了AraC的细胞周期阻滞作用及细胞凋亡。结论：AraC合并应用EGCG可增强对人白血病HL-60细胞的抗肿瘤活性。     

莪术油对肺腺癌A549细胞周期及组织蛋白酶K表达的影响

目的 :探讨莪术油对A549细胞增殖抑制作用及组织蛋白酶K表达的影响。 方法 : MTT法观察莪术油对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期阻滞;Western blot检测组织蛋白酶K的表达情况。 结果: 莪术油作用后①MTT法结果显示莪术油在60 mg ·L^-1~200 mg ·L^-1对A549细胞增殖有抑制作用, IC50随作用时间的延长显著前移。②流式细胞术结果出现凋亡峰,与未处理组细胞相比,给药组细胞G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。③Western blot结果显示,莪术油处理细胞24 h后,组织蛋白酶K表达明显上调,100 mg ·L^-1达最大值。 结论 : 莪术油能抑制肺腺癌A549细胞增殖,阻滞细胞周期的作用,其机制可能与上调组织蛋白酶K表达水平有关。     

不同寄主桑寄生水提物对斑马鱼模型的急性毒性及肝损伤

目的 用斑马鱼模型对桑树、漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃6种寄主桑寄生水提物进行急性毒性及肝损伤研究,探索寄主对桑寄生毒性的影响,为桑寄生用药安全提供理论依据。方法 以受精后3 d（3 dpf）发育正常的AB系斑马鱼为对象进行急性毒性研究,根据毒性预实验结果,对不同寄主桑寄生水提物分别设置6个不同剂量浓度对斑马鱼进行处理,统计其72 h死亡率,采用GraphPad Prism 6.0软件绘制量-毒曲线,计算不同寄主桑寄生水提物的半数致死浓度（LC₅₀）和10%致死浓度（LC₁₀）。以受精后4 d（4 dpf）发育正常的gz15Tg/+（AB）肝脏荧光蛋白转基因斑马鱼为对象进行肝损伤研究,将不同寄主桑寄生水提物分别设置低、中、高3个剂量浓度组,设对乙酰氨基酚组,以胚胎水为空白组,给药72 h后观察斑马鱼肝脏形态和荧光面积变化,检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性。结果 急性毒性实验结果显示,桑树、漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃寄主桑寄生水提物的LC₅₀分别为1.24,0.94,0.51,0.38,0.11,0.09 g·L^-1;LC₁₀分别为0.70,0.60,0.35,0.28,0.08,0.07 g·L^-1。肝损伤实验结果,与空白组比较,对乙酰氨基酚组的斑马鱼的肝脏形态变形和荧光面积减小（P<0.01）,ALT和AST活性升高（P<0.01）,结果表明对乙酰氨基酚对斑马鱼有肝毒。桑树寄主桑寄生水提物低、中、高3个剂量浓度组斑马鱼的肝脏形态和荧光面积均无变化,ALT和AST活性均降低;漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃5种寄主桑寄生水提物中、高剂量浓度组斑马鱼均不同程度地表现出肝脏形态变化和荧光面积减小（P<0.05,P<0.01）,ALT和AST活性均明显升高（P<0.05,P<0.01）。结果表明桑树寄主桑寄生对斑马鱼没有肝脏毒性,漆树、油茶、柳树、苦楝和夹竹桃5种寄主桑寄生对斑马鱼表现出不同程度的肝损伤。结论 桑寄生毒性有无或强弱具有寄主依赖性,桑树寄主桑寄生无肝损伤,其他5种寄主桑寄生均不同程度地表现出一定的肝损伤,规范寄主来源可能是实现桑寄生用药安全的重要举措。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分相关性分析

目的:建立超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)的红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分鉴定方法,以桂花树寄主的红花寄生及其寄主桂花树样品为对照,通过与强心苷对照品或文献报道比对,鉴定其中的强心苷化学成分,分析红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分的相关性,并且评价寄主对桑寄生药材质量影响。方法:采集红花寄生及其寄主夹竹桃样品,用桂花寄主及其红花寄生为对照样品,样品用70%乙醇超声提取。采用ACQUITY UPLC HSS T3C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),以流动相0. 1%甲酸水-乙腈梯度洗脱,流速0. 6 m L·min~(-1),柱温40℃,进样量0. 5μL。以Masslynx4. 1软件分析数据,根据正、负离子模式质谱数据及元素组成分析,结合强心苷对照品和相关文献,对红花寄生及其寄主夹竹桃强心苷成分进行鉴定,并分析各成分之间的相关性。结果:共鉴定出26个强心苷成分,其中夹竹桃寄主鉴定出强心苷成分25个,夹竹桃寄主的红花寄生鉴定出强心苷成分5个,桂花寄主及其红花寄生没有强心苷。结论:UPLC-Q-TOFMS/MS技术能快速、准确、全面地鉴定夹竹桃及其红花寄生强心苷成分,红花寄生本身不含强心苷,其强心苷为来自其寄主夹竹桃。     

雄黄纳米微粒对人白血病细胞株HL-60的诱导分化作用

目的：探讨雄黄（As4S4）纳米微粒对于人急性早幼粒白血病细胞HL-60的抑制增殖和诱导分化作用。 方法：采用MTT法观察低浓度雄黄对HL-60细胞增殖的影响,Wright-Giemsa 染色观察细胞形态,硝基四氮唑蓝（NBT）还原反应和流式细胞术抗原检测等鉴定细胞的分化。结果：细胞经雄黄处理后呈现明显的分化形态。经0.25～1.0 μmol·L^-1 雄黄作用24 h 后,NBT阳性率升高。用0.50 μmol·L^-1雄黄处理48 h,细胞表面分化抗原CD11b表达升高,细胞周期阻滞于G1期。 结论：低浓度雄黄对HL-60细胞具有诱导分化作用。     

不同寄主植物桑寄生总黄酮含量研究

目的 考察不同寄主植物的桑寄生总黄酮含量.方法 采用分光光度法测定寄生在16种不同寄主植物的桑寄生样品的总黄酮含量,并用正交实验的方法研究比较了不同提取条件对桑寄生总黄酮提取率的影响.结果 不同寄主植物的桑寄生茎枝的总黄酮含量为4.10～7.82 mg/g,其中以桑树为寄主的人工种植的桑寄生茎枝的总黄酮含量为最高;桑寄生叶总黄酮含量为18.33～32.08 mg/g,其中以夹竹桃为寄主的桑寄生叶的总黄酮含量最高.正交实验结果优选的提取条件茎枝是A_1B_2C_2D_3,即桑寄生茎枝0.5 g,乙醇浓度为60%,超声提取时间为30 min,超声提取温度为45℃,料液比1∶25;叶是A_2B_1C_2D_3,即桑寄生叶0.5 g,乙醇浓度为70%,超声提取时间为20 min,超声提取温度为45℃,料液比1∶25.结论 桑寄生总黄酮含量因寄主植物不同,其总黄酮含量表现出一定的差异性.优选的提取方法稳定、可靠、简洁,提取效率高.     

白附子提取物抑制人胃癌 SGC-7901 细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

 目的 探讨白附子提取物对人胃癌 SGC-7901 细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。 方法 分别采用噻唑蓝（ MTT ）法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、光镜观察细胞结构变化、 Hoechst33342/PI 荧光染色检测细胞凋亡、 Western blotting 法检测 caspase-3 、 Bax 和 Bcl-2 蛋白表达。 结果 0.072~7.2 mg · L^-1 白附子提取物处理 24 h 后,细胞增殖明显受到抑制,且抑制率随时间延长而增加;光镜下可观察到细胞凋亡形态的改变; Western blotting 结果显示,半胱氨酸蛋白酶（ caspase-3 ）酶原蛋白的激活, Bcl-2 蛋白表达的降低和 Bax 蛋白表达上调。 结论 白附子提取物通过影响 SGC-7901 细胞的增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达发挥凋亡诱导作用。     

朱砂七总蒽醌抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:研究朱砂七总蒽醌(ZSQ)对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨其抗肿瘤作用及其机制。方法:应用MTT法检测朱砂七总蒽醌对HL-60细胞的生长抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态学改变,DNA ladder和流式细胞术等方法检测朱砂七总蒽醌诱导肿瘤细胞凋亡及对细胞周期的作用。结果:32、3.2、0.32、0.032mg/ml朱砂七总蒽醌作用HL-60细胞72h后,细胞生长抑制率分别为28.69%,36.84%,63.76%和80.57%,抑制作用呈时间及浓度依赖性,朱砂七总蒽醌在48h的IC50约为3.2mg/ml。形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征,伴有多核细胞形成。FCM分析发现朱砂七总蒽醌阻断HL-60细胞生长于细胞周期的G2/M期,诱导凋亡作用呈时间及浓度依赖性,能够诱发肿瘤细胞产生凋亡小体、DNA ladder和细胞凋亡峰。结论:朱砂七总蒽醌能抑制HL-60肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡。     

红花桑寄生总黄酮提取物选择性抑制人源肿瘤细胞增殖和诱导凋亡

目的 观察红花桑寄生总黄酮提取物（Nispex）的体外抗肿瘤效果。方法 应用MTT法研究Nispex对人及小鼠多种肿瘤细胞和非肿瘤细胞增殖的抑制效果, 采用细胞集落培养法研究Nispex对人源肿瘤细胞中增殖细胞群的影响;采用AO/EB荧光染色、末端原位标记（TUNEL）法以及AnnexinV流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Nispex能显著抑制人源肿瘤细胞增殖和诱导人源肿瘤细胞凋亡, 对肿瘤细胞中的增殖细胞群作用更为敏感。但Nispex对人源非肿瘤细胞的抑制作用不明显, 对鼠源细胞在检测浓度范围内未见有作用。结论 Nispex是一种对人源肿瘤细胞具有良好选择性的天然植物提取物。     

构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响

目的： 研究构树叶总黄酮（total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP）对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。 方法： 取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L^-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化并用流式细胞仪检测细胞的周期及细胞凋亡率。 结果： MTT结果显示,各质量浓度3,6,9,12 g·L^-1的TFBP对HepG-2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系,3,6,9,12 g·L^-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细48 h后,细胞增殖抑制率分别为20.2%,29.44%,39.21%,43.96%;9 g·L^-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达52.46%,与对照组具有显著性差异（P<0.05）;Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,随着TFBP作用浓度的增加,加药组细胞凋亡率加药组凋亡率与对照组相,有显著差异（P < 0.01）,G₀/G₁期细胞逐渐减少,G₂/M期细胞数逐渐增多,与对照组比较差异有显著性（P < 0.05）,细胞周期被阻滞在G₂/M期。 结论： TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其抑制机制可能和诱导细胞凋亡与阻滞细胞周期有关。     

木蝴蝶总黄酮的抗氧化活性

目的:研究木蝴蝶总黄酮的抗氧化活性。方法:采用二苯代苦味酰基苯肼(DPPH)法、水杨酸法和邻苯三酚自氧化法来考察其抗氧化活性,并与Vc做比较。结果:在试验浓度内,木蝴蝶总黄酮对二苯代苦味酰基苯肼自由基(DPPH.)、羟自由基(.OH)和超氧阴离子自由基(O2-.)均有较好的清除作用,其EC50分别为19.73,231.70,318.93 mg·L-1,在9.52～57.12 mg·L-1,其对DPPH.的清除率高于VC。结论:木蝴蝶总黄酮有良好的抗氧化活性,具有进一步开发利用的价值。     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用

目的:探讨参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用。方法:提取原代大鼠腹腔肥大细胞,纯化后以5×106个/mL浓度接种于培养板中,加参莲提取物预处理2 h后,用C48/80刺激肥大细胞脱颗粒,ELISA法检测细胞上清液以及细胞裂解液中组胺(histamine),类胰蛋白酶(tryptase),以及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量,计算活性物质释放率。结果:模型组较对照组组胺释放率由32.36%升至61.71%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,组胺释放率分别降至16.24%,26.25%,27.81%,31.50%(P<0.01);模型组较对照组类胰蛋白酶释放率由13.19%升至21.72%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,类胰蛋白酶释放率分别降至8.60%,15.78%,8.80%,12.15%(100,25,12.5 mg.L-1组P<0.01,50 mg.L-1组P<0.05);模型组较对照组5-HT释放率没有明显变化,但参莲提取物100,50,25 mg.L-1组显著增加5-HT释放率(P<0.01,P<0.05)。结论:参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞有一定的稳定作用。     

神农香菊茎叶总黄酮与总酚的提取纯化和抗氧化活性研究＊

目的 提高神农香菊茎叶总黄酮与总酚的产率和纯度并探究其抗氧化机制。方法 采用正交试验设计，优化神农香菊茎叶总黄酮和总酚的提取参数。使用大孔树脂吸附技术，对提取物中总黄酮和总酚进行纯化。通过UPLC-MS/MS分析纯化前后提取物中黄酮和酚酸类成分的含量变化。采用1，1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）清除试验和分子对接评价提取物的抗氧化潜力。结果 最佳提取工艺为：料液比1：5 g·mL^-1，乙醇浓度70%，提取时间60 min。最佳纯化条件为：上样浓度0.12 g·mL^-1，上样体积3 BV，上样流速3.0 BV/h，洗脱溶剂80%乙醇，洗脱流速4.5 BV/h，洗脱体积4 BV。与纯化前相比，纯化后提取物中总黄酮和总酚纯度分别提高了2.85倍和4.03倍。UPLC-MS/MS分析证实，纯化后部分黄酮和酚类物质含量显著增加。此外，神农香菊茎叶提取物显示出较强的DPPH自由基清除活性，其黄酮成分与黄嘌呤氧化酶具有较强结合能力。结论 本文对神农香菊茎叶总黄酮与总酚的富集和纯化具有重要指导意义，并表明了其潜在抗氧化价值。     

不同寄主上的桑寄生药材毒性的比较研究

目的： 比较研究不同寄主来源的桑寄生（Taxillus sutchuenensis）药材的毒性。方法： 对6种不同寄主上的桑寄生药材进行急性毒性实验,测定半数致死量（LD₅₀）或最大耐受量（MTD）。并根据寄主来源不同,将98只昆明种小鼠随机分为对照组、沙梨组、李树组、白杨组、柞木组、夹竹桃组和漆树组,除对照组,其余各组小鼠每日ig 7.5 g·kg^-1水提物1次,共4周。测定血清中天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）及肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量,并观察肝、肾组织病理改变。结果： 夹竹桃上的桑寄生、漆树上的桑寄生毒性明显,LD₅₀及95%可信限分别为109.276 （96.837~122.645） g·kg^-1和77.286（66.891~89.296）g·kg^-1;其余4种寄主上的桑寄生药材未出现死亡。与对照组比较,夹竹桃上的桑寄生能引起Cr指标的升高,并对小鼠肾组织影响较明显;而其他各寄主上的桑寄生组肝、肾功能检测指标差异不明显,对小鼠肝、肾组织损伤也较轻。结论： 寄主为夹竹桃、漆树有毒木类的桑寄生药材有明显的毒性。     

红花桑寄生多糖抑制小鼠S180肉瘤生长的研究

目的:研究红花桑寄生多糖的体内外抑瘤作用.方法:采用水提醇沉法提取分离红花桑寄生多糖(Scurrula para-sitica polysaccharides,SP),MTT法检测了SP对S180,K562和HL-60细胞增殖的抑制作用,腹腔给药检测SP对S180的体内抑瘤效果,并采用免疫组化方法分析了SP对瘤组织中Ki-67,CyclinD1,Bax和Bcl-2等细胞增殖与凋亡抗原表达的影响.结果:SP体外无抑瘤作用,体内抑制S180实体瘤生长的最适剂量为100 mg·kg~(-1)·d~(-1),抑瘤率为54%,SP对小鼠体重增长无影响.SP可下调瘤组织中Ki-67,CyclinD1和Bcl-2抗原的表达,上调Bax的表达.结论:SP可通过体内途径抑制瘤细胞增殖和促进瘤细胞凋亡而起到抗肿瘤作用.     

大孔吸附树脂分离纯化土茯苓总黄酮

目的:研究大孔吸附树脂分离纯化土茯苓总黄酮的工艺条件。方法:以土茯苓总黄酮收率为指标,通过考察静态和动态吸附实验,筛选了大孔吸附树脂分离纯化土茯苓总黄酮的最佳工艺条件。结果:D101大孔树脂对土茯苓总黄酮的静态饱和吸附容量为45.6 mg.g^-1(干树脂);最佳动态吸附、洗脱条件为土茯苓总黄酮提取液pH 6.00±0.20,质量浓度4.2 mg.mL^-1,吸附流速2 mL.min^-1,上样量15 mL;吸附后的树脂柱先以100 mL纯化水洗脱后,再用100 mL pH 8.00±0.20的60%乙醇以3 mL.min^-1流速洗脱。结论:D101型大孔树脂在所确定的工艺条件下,可较好的分离纯化土茯苓总黄酮,其回收率达到90%以上,且纯化后土茯苓总黄酮含量达到62.6%,是纯化前的近2倍。     

肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量测定

目的:建立肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量方法.方法:采用紫外分光光度法,以去氢二异丁香酚为对照品,测定波长275 nm.结果:去氢二异丁香酚质量浓度在1.5～9.0 mg·L-1与吸光度呈良好线性关系,r=0.999 8,平均回收率97.6％(n=6),RSD 1.2％.结论:建立的方法简便、快速、重复性好.     

侧柏总黄酮的分离纯化及对5-脂氧合酶的抑制作用

 目的从侧柏叶中分离纯化活性成分总黄酮并探讨其对5-脂氧合酶的抑制作用。方法石油醚加热回流除去大部分叶绿素等脂溶性杂质,再用体积分数为50%乙醇加热回流提取;提取液浓缩去除乙醇后用乙酸乙酯提取,减压浓缩得粗黄酮;粗黄酮过聚酰胺色谱柱,用体积分数为70%的甲醇洗脱,浓缩得总黄酮;高效液相色谱法测定大鼠中性白细胞5-脂氧合酶的产物5-羟廿碳四烯酸,Fura-2/AM荧光技术测定细胞内游离钙浓度。结果用芦丁作参照品,测得分离的产物总黄酮含量为93%,总黄酮对5-脂氧合酶抑制的IC₅₀为22.2;25～125 mg·L^-1的总黄酮对fMLP诱导的细胞内游离Ca²⁺水平增高抑制率为15.2%～35.9%。结论该方法较简单,分离的总黄酮纯度高,是一种可行的总黄酮提取方法;侧柏总黄酮对5-脂氧合酶的活性有较强的抑制作用,抑制细胞内游离Ca²⁺水平增高可能是抑制5-脂氧合酶的作用机制之一。     

新藤黄酸对S180细胞株的体内外抗肿瘤作用

目的:评价新藤黄酸对S180肿瘤细胞株的体内外抗肿瘤作用.方法:将不同浓度的新藤黄酸分别作用于体外培养的S180细胞48 h,用CCK-8法检测药物对S180细胞的增殖抑制作用;以8.0,4.0,2.0 mg·kg-1剂量ip给予S180腹水瘤小鼠,每天1次,连续7d,观察45 d对存活时间的影响;以16.0,8.0,4.0 mg·kg-1剂量ig给予荷S180实体瘤小鼠,每天1次,连续12d,评价新藤黄酸的体内抗肿瘤作用;测单次ip给药对小鼠的LD50.结果:新藤黄酸对体外培养S180细胞的增殖有明显的抑制作用,药物作用48 h其IC50为(1.54±0.12) mg·L-1;4.0 mg· kg-1新藤黄酸ip给药可使S180腹水瘤小鼠存活时间较荷瘤对照组延长141.6％,新藤黄酸对S180实体瘤的抑制作用随着剂量的增大而升高,并呈一定剂量依赖性,体内抗肿瘤显著(P＜0.05);单次ip给药对小鼠的LD50为36.66 mg·kg-1.结论:新藤黄酸对S180细胞株具有明显的体内外抗肿瘤作用.