高/低分化大肠癌组织的二维电泳图谱的建立及质谱分析

目的研究人大肠癌高、低分化组织及癌旁正常黏膜之间蛋白质组表达差异，寻找和鉴定癌组织与正常黏膜之间以及高、低分化癌组织之间差异表达蛋白。方法收集新鲜大肠癌标本；根据病理诊断结果将大肠癌标本分为高分化癌组、低分化癌组，以癌旁正常肠黏膜作为对照。提取组织总蛋白，进行双向凝胶电泳。比较得到高分化与低分化组织之间表达差异点。将这些差异蛋白点进行肽指纹图分析及网上数据库鉴定。应用Western blot验证蛋白质组筛选结果。结果在两组癌标本中均存在钙网硬蛋白前体、O98007蛋白类似物的特异表达以及AAH10915、AAH75839蛋白表达上调；在高分化癌组中存在E980237蛋白的特异表达以及三磷酸异构酶、肝脂肪酸结合蛋白表达上调；在低分化癌组中存在2HHEB（氧化血红蛋白变异体）和锌指蛋白312类似物的特异表达以及Q9TQL5蛋白（Fragment）类似物表达上调。Western blot检测HSP27和LFBP表达的结果与蛋白质组分析结果一致。结论高分化癌组织与低分化癌组织之间存在蛋白质组差异表达，这些蛋白与大肠癌细胞分化有关。     

大肠癌并肝转移的蛋白质组学研究

目的采用蛋白质组学技术研究有转移组和无转移组大肠癌组织蛋白质组表达的差异,分析和鉴定两组间特异表达的肿瘤蛋白质,探索大肠癌并肝转移发生的机制. 方法用等电聚焦/SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对比分析20例大肠癌患者原发灶、癌旁肠黏膜和肝转移灶中蛋白表达,经肽质量指纹谱分析、鉴定差异蛋白质.结果双向电泳图像对比分析表明,癌旁大肠黏膜组织、癌原发灶和肝转移灶中蛋白质表达有明显差异.在肝转移组中存在AnnexinA2蛋白和JE0350蛋白特异表达,磷酸丙酮酸水合酶和CAC15744蛋白表达上调;在无肝转移组存在CAD80231和A38983蛋白特异表达,AAH01166蛋白表达上调. 结论大肠癌并肝转移者与无肝转移者在蛋白质组表达上存在一定的差异.对这些差异蛋白质的进一步深入研究,可帮助了解大肠癌易发生远处转移的蛋白质组学机制及采取相应的处理对策.     

高低分化喉癌组织的二维电泳图谱的建立及质谱分析

目的 研究人高、低分化喉癌组织及癌旁正常黏膜组织之间蛋白质组表达差异,寻找和鉴定高、低分化癌组织之间差异表达蛋白.方法 收集新鲜喉癌标本;根据病理诊断结果将喉癌标本分为高分化癌组、低分化癌组,以癌旁正常黏膜组织作为对照.提取组织总蛋白,进行双向凝胶电泳,比较得到高分化与低分化癌组织之间表达差异点.将这些差异蛋白点进行肽指纹图分析及网上数据库鉴定.结果 共鉴定出11个蛋白,在两组癌标本中均存在Cofilin-1、Cyclophilin A特异表达,发现在高分化癌组中有特异表达或升高的蛋白4个,发现在低分化癌组中有特异表达或升高的蛋白有5个.结论 高分化癌组织与低分化癌组织之间存在蛋白质组差异表达,这些蛋白与喉癌细胞分化有关.     

大肠癌中核因子-κB p65蛋白表达与细胞增殖的关系

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)p65蛋白在大肠癌组织中表达与细胞增殖之间的关系.方法 采用免疫组织化学方法.检测32例大肠癌组织和30例癌旁组织中NF-κB p65蛋白的表达;用增殖细胞核抗原(PCNA)指数测定、分析其与NF-κB p65之间的关系.结果 NF-κB在大肠癌组织中的阳性表达率为67.8%,30例癌旁组织中无1例阳性表达,两者间阳性率比较差异有显著性(P<0.01).32例大肠癌组织PCNA指数为20.2%～78.5%,在高、中、低不同分化肿瘤组织中的表达差异有显著性,在淋巴结阳性组与阴性组之间阳性率比较,差异有显著性(P<0.01).结论 NF-κB p65蛋白与大肠癌的发生有关,NF-κB p65蛋白可能通过上调PCNA对大肠癌细胞增殖起重要作用.     

血管内皮生长因子和癌胚抗原与大肠癌的病理学特征及预后相关性的实验研究

目的:通过检测大肠癌组织内血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达及患者术前血清CEA值,探讨它们与大肠癌的病理学特征及预后的相关性.方法:采用免疫组化Envision方法,对78例手术切除大肠癌标本的癌灶、癌旁及正常大肠组织进行血管标记和染色,并进行定位观察,检测其VEGF表达,同时回顾分析血清CEA值变化.结果:78例大肠癌患者中,48例患者(61.2%)VEGF蛋白表达阳性,CEA阳性患者35例(44.7%).它们与肿瘤浸润深度、淋巴结、血行转移及Dukes分期呈明显相关性(P＜0.05);而与肿瘤大小、组织学分型、生长方式无关(P＞0.05).而且VEGF阳性组与阴性组5 a生存率分别为66.8%、86.7%,差异显著(P＜0.05);CEA阳性组与阴性组5 a生存率亦有明显区别(P＜0.05);VEGF /CEA 组5 a生存率最低.结论:VEGF和CEA与大肠癌浸润转移,分期及生存率呈明显相关性,VEGF和CEA联合检测,对大肠癌预后的判断更具有实际意义.     

后纵韧带骨化症患者后纵韧带组织的蛋白质组学

[摘要]目的采用蛋白质组学方法分析、寻找后纵韧带骨化症(OPLL)的特异性蛋白标志。方法采用荧光差异双向电泳法研究OPLL患者及正常人韧带组织的双向电泳图像。采用飞行时间质谱进行鉴定并分析差异表达的蛋白质点。结果两组样本均得到约1 100个蛋白质点,50个点表达有改变。切胶获得45 个蛋白质点的肽段样本,质谱鉴定为21个蛋白质或肽段。其中15个血液蛋白,其余6个蛋白中4个表达下调;2个表达上调。RT-PCR检测表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的激素脱氢酶, 伴肌动蛋白相关锚定蛋白及Ⅵ型胶原蛋白mRNA变化与电泳结果一致。结论这些差异表达蛋白可能是OPLL的特异表达蛋白。     

利用蛋白质组学与人工神经网络构建大肠癌肝转移诊断模型

目的应用双向电泳联合质谱技术筛选大肠癌肝转移血清特异性标志物,并利用这些标志物以数据挖掘技术构建人工神经网络大肠癌肝转移诊断模型。方法收集大肠癌无肝转移、伴肝转移患者各12例血清样本,同组血清等量混合进行双向电泳,用ImageMaster V5.0软件分析两组蛋白质的差异,差异蛋白质进行MALDI-TOF-MS鉴定。ELISA法测定差异蛋白及CEA含量。用受试者工作曲线评价其对大肠癌肝转移的诊断价值,以人工神经网络方法,筛选出准确度最高者作为大肠癌肝转移诊断模型。结果双向电泳显示,大肠癌伴肝转移组与无肝转移组相比较有4个蛋白有统计学意义,其中2个上调的蛋白质分别是Transferrin和Complement component C9;2个下调的蛋白质分别是Haptoglobin和Isoform 1 of Serum albumin。受试者工作曲线分析与大肠癌肝转移相关性依次为Transferrin>Haptoglobin>CEA。人工神经网络的诊断方法以Transferrin和Haptoglobin这两个蛋白联合建立的模型预测准确度最高,为88.57%,其敏感度为63.64%,特异度为100%。结论利用蛋白质组学与人工神经网络构建了Transferrin与Haptoglobin联合的大肠癌肝转移诊断模型,横断面验证有较高的准确度,开辟了诊断大肠癌肝转移的新方法。     

利用2-DE和MALDI-TOP-MS在人大肠癌高低转移潜能细胞株中筛选转移相关蛋白

目的:分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法:利用双向凝胶电泳(2-DE)联合基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱(MALDI- TOF-MS)技术,分析人大肠癌高转移性细胞株SW620和低转移性细胞株SW480差异表达蛋白质图谱,查询数据库筛选可能的大肠癌转移相关蛋白质并进行免疫组化和Western免疫印迹验证。结果:MalenieⅢ软件分析结果显示2-DE图谱重复性、匹配性较好。两种细胞株有25个蛋白点差异表达(SW620 14个,SW480 11个),经质谱分析及数据库查询鉴定有9个蛋白可能与转移相关。其中AnnexinⅠ、β-半乳糖苷结合蛋白1、钙调蛋白、主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原、cofilin、超氧化物歧化酶和Rab相关GTP结合蛋白仅在SW480中表达,可能对大肠癌转移起抑制作用;而人硫氧还蛋白、泛素偶联酶仅在SW620中表达,可能对大肠癌转移起促进作用。选择其中感兴趣的AnnexinⅠ进行验证,其在细胞株的表达结果与2-DE一致。AnnexinⅠ在大肠正常组织不表达,在大肠癌无转移组和转移组中表达上调,三组表达差异...     

甲状腺癌蛋白质差异表达的观察

目的 由于甲状腺结节的高发率和鉴别良恶性的困难,所以需要寻找一种比较特异的分子标志。本研究的目的就是利用蛋白组学方法,建立人甲状腺癌和癌旁正常组织的双向凝胶蛋白图谱,寻找差异表达的蛋白质。方法 双向凝胶电泳分离人甲状腺癌及其周围正常组织的总蛋白质,通过图形软件分析比较,找出差异表达的蛋白质,利用质谱对差异表达的蛋白质进行鉴定。结果 建立双向凝胶图谱,平均蛋白质点数约为1000个左右。发现只在肿瘤表达的点有263个,表达上调2倍及以上的点有134个。在对差异点进行的质谱鉴定中发现了热休克蛋白27在肿瘤中表达下调。结论 建立了人甲状腺乳头状癌和癌旁正常组织的双向电泳图谱,并鉴定了一些与肿瘤相关的蛋白质。     

中国汉族肢端恶性黑素瘤的差异蛋白质组学研究

目的：研究恶性黑素瘤与正常皮肤组织的蛋白质表达差异,寻找可能的恶性黑素瘤的诊断标志蛋白和治疗靶点。方法：选取经病理确诊的3例恶性黑素瘤切除标本,提取样本的总蛋白质,运用差异凝胶电泳技术分离蛋白质,DeCyder软件分析蛋白图谱的差异,以基质-辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)对差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果：质谱鉴定出差异蛋白质点12个,按功能分为4类,其中上调蛋白质3类,为14-3-3蛋白sigma、角蛋白和serpin B3;下调蛋白质1类,为白蛋白。结论：14-3-3蛋白sigma和serpin B3可能参与恶性黑素瘤的发生和发展,其差异表达提示了可能的恶性黑素瘤的发病机制。     

两种大肠癌转移性细胞株双向电泳图谱的初步分析

目的 初步分析大肠癌转移过程中差异表达的蛋白质,为阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 以一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480为实验对象,利用双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE),建立并优化两种细胞株的蛋白表达图谱;之后利用Melanieш软件分析与大肠癌转移相关的差异表达蛋白点。结果 两种细胞株的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性;采用了非线性pH3-10及重叠窄范围的固相pH梯度胶条,提高了2-DE图谱的分辨率;初步选择11个差异表达蛋白点。结论 非线性及重叠窄范围的固相pH梯度胶条可改善2-DE中蛋白分离的效果,初步分离的差异蛋白点为进一步鉴定大肠癌转移相关蛋白及建立大肠癌转移性细胞株的2-DE数据库奠定了基础。     

两种大肠癌转移性细胞株双向电泳图谱的初步分析

目的初步分析大肠癌转移过程中差异表达的蛋白质．为阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法以一对来自同一亲本．转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480为实验对象．利用双向电泳技术(two—dimensional gel electrophoresis，2-DE)，建立并优化两种细胞株的蛋白表达图谱；之后利用Melanie ш软件分析与大肠癌转移相关的差异表达蛋白点。结果两种细胞株的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性；采用了非线性pH3—10及重叠窄范围的固相pH梯度胶条，提高了2-DE图谱的分辨率；初步选择11个差异表达蛋白点。结论非线性及重叠窄范围的固相pH梯度胶条可改善2-DE中蛋白分离的效果，初步分离的差异蛋白点为进一步鉴定大肠癌转移相关蛋白及建立大肠癌转移性细朐株的2-DE数据库奠定了基础．     

应用二维电泳和质谱技术筛选食管癌及癌旁组织的差异表达蛋白质

目的 筛选食管癌组织与正常食管组织中的差异表达蛋白质,以发现用于食管癌早期诊断的生物学标志物.方法 收集食管癌组织及其配对的正常食管组织,提取组织蛋白质,进行二维电泳,选取在癌组织中高表达的3个点和在正常食管组织中高表达的3个点进行基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析,将获得的肽质量指纹图进行生物信息学分析,鉴定差异蛋白质,利用RT-PCR方法验证蛋白质组筛选结果.结果 建立了分辨率高、重复性较好的食管癌和食管正常组织蛋白质的二维电泳图谱,经鉴定发现了鳞状细胞癌抗原1、细胞角蛋白4和膜联蛋白Ⅰ在食管癌组织中表达下调.磷酸丙糖异构酶1、锰超氧化物歧化酶和热休克蛋白27在食管癌组织中表达上调.RT-PCR的实验结果验证了差异蛋白质的可靠性.结论 食管癌组织和正常食管组织的差异表达蛋白质可做为食管癌早期诊断的候选生物学标志物.     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方
法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6 例分别等量混合成2 组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳（2-DE）进行分
离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）
进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting 对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,
筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11 个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋
白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-
糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可
能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。
     

人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的差异蛋白质组分析

目的 分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法 利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析高低转移性细胞株SW620和SW480蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选大肠癌转移相关蛋白质。结果 MalenieⅢ软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好。SW620检测到(1316±62)个蛋白点,平均匹配率82%;SW480检测到(1332±74)个蛋白点,平均匹配率80%;蛋白点分布以PI4~7、相对分子质量20000~70000范围内最多。两种细胞株25个差异蛋白点(SW62014个、SW48011个)胰酶胶内酶解、质谱分析获得23张肽质量指纹谱;数据库查询结果高度匹配已知蛋白质3个,初步匹配已知蛋白质或片段14个。在这些差异表达的蛋白质中,部分与基因转录、细胞周期、信号转导、细胞凋亡有关,可能参与大肠癌的分化、增殖、侵袭、黏附和转移等多种生物学行为。结论 人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620和SW480的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示大肠癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。     

紫杉醇耐药与敏感细胞的差异表达蛋白分析

目的 比较人肺腺癌细胞系A549与肺腺癌紫杉醇耐药细胞系A549-Taxol的差异表达蛋白.方法 提取A549和A549-Taxol总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离,ImageMaster 5.0软件分析并筛选出两者间差异表达的蛋白点,质谱分析加以鉴定.结果 获得分辨率高且重复性好的肺腺癌耐紫杉醇细胞系及亲代细胞系2-DE图谱.ImageMaster软件分析差异大于2倍的蛋白质点共有80个,其中33个在耐药细胞系中上调,47个下调.质谱分析鉴定出19种差异表达蛋白,其中A549-Taxol中上调蛋白11种,涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、分子伴侣和信号转导相关蛋白质.结论 应用2-DE技术整体展示了紫杉醇耐药细胞系及敏感细胞系的蛋白表达谱,质谱法鉴定的差异蛋白为进一步从多因素角度研究紫杉醇耐药机制提供了新线索.     

鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究

目的 采用双向电泳-质谱技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原.方法 鼻咽癌转移组、鼻咽癌未转移组和正常对照组血清先采用高丰度蛋白去除、脱盐预处理等以优化双向电泳,图像分析3组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定.结果 通过调整、优化各个阶段的实验条件,实验结果比较稳定,重复性也比较好,分辨率得到一定的提高.图谱比较所得29个差异蛋白质点,成功鉴定了23种蛋白质.与正常组比较,转铁蛋白、锌指蛋白544、甲状腺激素结合蛋白、NM23-H1蛋白和FAD合成酶在两组鼻咽癌患者中低表达,12-脂氧合酶、血清淀粉样蛋白A1前体、细胞色素P450、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1等在两组鼻咽癌中均高表达.其中12-脂氧合酶、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1在鼻咽癌转移组中比未转移组中表达增高,而热休克蛋白70则只在鼻咽癌转移组表达.结论 双向电泳-质谱技术可发现鼻咽癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为鼻咽癌的早期诊断和治疗奠定基础.     

吗啡耐受大鼠脊髓蛋白质组双向电泳图谱的建立与差异蛋白鉴定

目的：建立吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织蛋白质组双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图 谱,比较分析吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织中蛋白质组的变化和差异表达,鉴定出差异表达的蛋白质点并进行验证。 方法：将16只鞘内置管雄性SD大鼠随机分为吗啡耐受组(MT组,n=8)和生理盐水组(NS组,n=8),取其腰段脊髓组织 蛋白以固相pH梯度等电聚焦(immobilized pH gradients isoelectric focusing,IPGIEF)为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯 酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)为第二向进行2-DE,应用PDQuest分析 软件对考马斯亮蓝染色的2-DE图谱进行图像分析,对差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并利用Mascot查询软件搜索Swiss- Prot数据库进行生物信息学分析。采用蛋白质印迹法验证部分差异蛋白。结果：MT组和NS组大鼠脊髓组织2-DE图谱 中各分离出约1 000个清晰的蛋白质点,其中明显差异表达的蛋白有36个。采用MALDI-TOF-MS分析,并利用Mascot查 询软件搜索Swiss-Prot数据库,共搜索到14个蛋白质,与NS组比较,MT组中表达下调的蛋白质点有2个,表达上调的 蛋白点有12个。采用蛋白质印迹法对其中的NADH脱氢酶及伽玛烯醇化酶蛋白质点进行验证,结果与蛋白质组学结 果一致。结论：初步建立了吗啡耐受大鼠脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱,证明吗啡耐受可以引起脊髓中多种蛋白 质的表达改变。     

运用激光捕获显微切割对食管鳞状上皮癌蛋白质组的分析

目的分析食管鳞癌与正常食管上皮细胞蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。方法激光捕获显微切割技术分离食管鳞癌和正常食管上皮细胞的纯细胞,双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白。结果48个差异蛋白点,通过质谱鉴定出20种有意义的蛋白,其中11种蛋白如galectin7、14-3-3proteinε等在食管鳞癌细胞表达明显增高,9种蛋白如MTCBP-1等表达下调。结论激光捕获显微切割可以有效地解决组织异质性的问题;食管鳞癌和正常食管上皮细胞的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示食管鳞癌的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。