大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差.目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达.方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组.荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达.结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因.表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达.     

大鼠CD4~＋CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景：调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的：以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP＋载体转染大鼠CD4＋CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4＋CD25-T细胞中的表达。方法：以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4＋CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4＋CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4＋CD25-T细胞为阴性对照组,CD4＋CD25＋T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论：成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞,细胞存活率为（94±2）%,慢病毒转染的CD4＋CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4＋CD25-T细胞中高表达。     

胃癌患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞检测及临床意义

目的观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞与胃癌患者的关系,探讨其临床意义。方法用流式细胞术分析胃癌患者外周血淋巴细胞中Treg细胞的表达。结果胃癌患者手术前、后外周血淋巴细胞中Treg细胞比例分别为(6.35±1.85)和(4.54±1.42)%(P<0.05),术后复发时比例为(7.17±1.55)%;化疗前、后分别为(6.47±1.97)%和(8.81±2.01)%(P<0.05)。早期胃癌Treg细胞为(5.88±1.54)%,明显低于进展期胃癌(7.04±1.66)%(P<0.05)。结论胃癌患者外周血Treg细胞在术后1周比例减少,复发时比例上调,提示其参与了胃癌发生、发展的全过程。化疗后Treg细胞增加,可能与药物诱导的增值分化有关。不同进展期病人外周血中Treg细胞的水平有助于了解病情,判断预后。     

Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞抑制树突状细胞功能

为了研究Foxp3基因表达与CD4^＋T细胞免疫活性的关系,用逆转录病毒转染Foxp3基因,在幼稚CD4^＋CD25^-T细胞内强制性表达FOXP3蛋白,进而研究转染后的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的免疫共刺激分子和免疫功能的影响,并通过Transwell试验研究转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的作用是否依赖于细胞之间的直接接触。结果表明：通过逆转录病毒载体转染,成功建立了表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞模型,转染后1周Foxp3阳性表达的T细胞比例为38%。强制性表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞可以在体外发挥免疫抑制作用,可以诱导树突状细胞表面免疫共刺激分子CD80和CD86表达水平的下调。体外淋巴细胞增殖试验结果表明,Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞可以抑制树突状细胞对异基因淋巴细胞的活化。结论：转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞发挥的作用依赖于细胞之间的直接接触。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外诱导扩增与临床应用研究进展

CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞在维持外周免疫耐受、预防自身免疫性疾病及移植排斥反应的过程中起着重要作用。Treg细胞治疗方法具有作用时间持久、低毒和靶向特定抗原的特点,但由于Treg细胞在外周血中数量甚少,限制其在临床的应用。研究表明体外扩增得到的Treg细胞的免疫治疗效果大于初始Treg细胞。本文就目前Treg细胞的体外诱导扩增和临床应用等方面的研究进展进行总结。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞与肿瘤及器官移植研究进展

<正>CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞是新近发现的一种抑制机体疾病的一种调节性T细胞。CD4+CD25+调节性T细胞可以调节机体T细胞稳态,抑制机体免疫耐受、肿瘤增殖和转移、控制感染及移植免疫耐受等作用,是肿瘤进展和转移的重要标志。转录因子叉头(Foxp3+)的表达在CD4+CD25+调节性T细胞的发育、成熟及发挥抑制功能过程中起重要作用,是其重要的标志物。CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在各     

CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其功能紊乱或数目下降是导致自身免疫性疾病的重要原因之一。近年来,研究发现Foxp3在调控CD4^＋CD25^＋Treg细胞的发育和功能上起着重要作用。本文就CD4^＋CD25^＋Treg细胞的免疫抑制机制、Foxp3在其发育和功能上的作用、IL-2和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）等对其产生、维持及活化的作用等方面作一综述。     

外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平与心血管病变的相关性

炎症在多种心血管疾病发生与进展中扮演重要角色,CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg)具有阻断由各种原因导致的过度亢进的免疫应答以及炎症反应的作用。多项研究显示,在心血管疾病患者的外周血中,CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg水平明显下降。本文就外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg水平与心血管病变之间的关联作一综述。     

急性白血病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞检测及其对细胞凋亡的作用

目的研究CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在急性白血病患者外周血中的检测,并探讨其对细胞凋亡的作用。方法将65例急性白血病患者(包括急性淋巴细胞性白血病33例和急性髓系白血病32例)分为未缓解组(28例)和缓解组(37例),25例健康志愿者作为对照组。根据是否合并感染又分为合并感染组(39例)和未合并感染组(26例)。采用细胞内染色的流式细胞术及荧光定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3表达,并与正常对照组进行比较。同时,利用荧光定量PCR的方法的检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53的表达。结果与正常对照相比,急性白血病患者(未缓解组和缓解组)外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+比例明显提高,且治疗缓解后CD4~+CD25~+Foxp3~+表达下调(P0.05)。凋亡相关基因Bcl-2表达上调,Bax、P53表达下调。结论急性白血病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞明显升高,并且,影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53的表达,提示CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞可能通过细胞凋亡信号通路影响急性白血病的发展。     

CD4＋CD25＋Treg细胞的分选、表型鉴定及Foxp3表达鉴定

目的为验证从C57BL／6小鼠脾脏中分离出高纯度CD4＋CD25＋Treg细胞及证实CD4＋CD25＋Treg细胞中Foxp3基因的表达。方法使用免疫磁珠分选出CD4＋CD25＋Treg细胞,流式细胞仪检测纯度;使用TRIZOL抽提Foxp3基因mRNA,使用RT—PCR方法逆转录出Foxp3基因的cDNA。结果从C57BL／6小鼠脾脏中分离出了纯度达到90％CD4＋CD25＋Treg。进一步应用RT—PCR技术克隆出Foxp3的cDNA,通过凝胶电泳证实了克隆出了Foxp3的cDNA。结论使用免疫磁珠方法能够分离出C57BL／6小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞,并进行了Foxp3基因表达的鉴定。     

脓毒症患儿CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 观察不同免疫状态下脓毒症婴幼儿外周血CD4+CD25+Foxp3high调节性T细胞(Treg细胞)及相关分子的变化,探讨婴幼儿脓毒症免疫功能紊乱的可能机制.方法 分别收集2007年5月至2007年11月深圳市儿童医院重症监护室收治的婴幼儿脓毒症36例血液标本,另选16例健康同龄儿童作为正常对照进行前瞻性研究;排除既往患有自身免疫性疾病、免疫缺陷病、遗传代谢病及肿瘤的患儿,排除近6个月曾使用影响免疫功能的药物.本研究获得深圳市儿童医院伦理委员会的同意.以外周血CD14+单核细胞HLA-DR表达>30%或<30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组),用流式细胞术检测CD14+单核细胞HLA-DR表达率,CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例;实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测CD4+T细胞Foxp3、CTLA-4、GITR、IL-10mRNA表达.统计方法采用单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 急性期DR-L组CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例明显高于对照组及DR-H组(P<0.05).DR-L组Foxp3、CTLA-4、IL-10等相关分子基因表达高于对照组及DR-H组(P<0.05),DR-L组GITR基因表达高于DR-H组.结论 CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞数量异常增加可能与婴幼儿脓毒症免疫抑制状态有关.     

CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群，具有免疫无能和免疫抑制两大特性，通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4^＋CD25^＋T细胞的抑制作用。GVHD是异基因造血干细胞移植最严重的并发症之一，近来有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论，即该类细胞可有效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比。这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4^＋CD25^＋T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述。     

不同树突状细胞对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外扩增的影响

目的利用不同种类树突状细胞(dendritic cells,DC)体外扩增获得表型和功能稳定的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。方法免疫磁珠法(MACS)分离Balb/c小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,利用与调节性T细胞同基因或异基因成熟DC、未成熟DC和调节性DC刺激其扩增,流式细胞术测定其纯度和表型。以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,验证扩增前后Treg细胞的免疫抑制功能。结果MACS分离的CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(95.38±1.82)%,同基因和异基因DC都能有效刺激Treg细胞体外扩增,其中同基因成熟DC扩增效果最为明显。而且同基因成熟DC扩增后CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(94.16±1.88)%,而且高表达Foxp3分子。当CD4+CD25+调节性T细胞与效应T细胞比例为1∶1时,能够有效的抑制效应T细胞的增殖,而且,同基因成熟DC扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制效果比新分离的Treg效果更好。结论同基因成熟DC能够体外扩增表型和功能稳定的Treg细胞。     

肺癌患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的表达及临床意义

目的通过研究肺癌患者外周血中CD4 CD25 FOXP3 调节性T淋巴细胞的变化,探讨肺癌的发病机制。方法用荧光标记的单克隆抗体染色外周血单个核细胞,利用流式细胞仪检测CD4 CD25 FOXP3 调节性T淋巴细胞的改变。结果肺癌患者外周血CD4 CD25 FOXP3 调节性T淋巴细胞显著增多。结论CD4 CD25 FOXP3 调节性T淋巴细胞的增多与机体的免疫力下降以及肿瘤的发生发展有一定关系。     

CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞在结核病发生中的作用研究

目的:探讨CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在结核病发生中的作用。方法:采用回顾性分析的方法,分析我院收治的60例结核病患者(观察组)和60例健康体检者(对照组)的临床资料。结果:观察组治疗前CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例明显高于对照组,治疗2、6个月末观察组患者CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例明显降低,观察组CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例与CD4+T细胞、CD8+T细胞、IFN-γ和IL-4呈现明显的负相关(P<0.05)。结论:针对CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在结核病发生机制中的作用,开展从免疫治疗和结核病疫苗设计提供新的作用靶点和诊疗依据,值得临床推广应用。     

子宫内膜异位症患者外周血中CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的表达及意义

目的：探讨子宫内膜异位症患者外周血 CD4+CD25+FoxP3+调节性 T 细胞（CD4+CD25+FoxP3+ Treg）的表达及意义。方法选择2012年10月至2013年9月云南省第一人民医院收治的65例子宫内膜异位症患者、30例子宫肌瘤患者及20例健康体检者,应用流式细胞仪检测3组的外周血 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 百分率,并进行比较。结果子宫内膜异位症组患者外周血中的 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 占 CD4+ T 淋巴细胞的比例显著高于子宫肌瘤组患者及健康体检者,组间差异有统计学意义（P<0.001）;而子宫肌瘤患者与健康体检者外周血中的 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 占 CD4+ T 淋巴细胞的比例差异无统计学意义（P>0.05）。结论 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 在子宫内膜异位症患者外周血中的表达显著增加,明显高于非子宫内膜异位症患者,提示机体免疫异常与子宫内膜异位症的发生存在密切关系。     

溃疡性结肠炎患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative coitis,UC)患者外周血CD4+CD25+ Foxp3+T细胞的表达及意义.方法:采用流式细胞术检测UC患者22例及健康对照组20例外周血CD4+ CD25+ Foxp3+在T淋巴细胞的单独或联合表达比例.结果:UC患者外周血T淋巴细胞表达CD4+的比例为(34.76±5.40)%,与健康对照组的(33.23±11.38)%比较无差异(P>0.05);CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例为(8.27±1.46)%,显著低于健康对照组的(11.4±2.17)%(P<0.05);CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例为(0.87±0.25)%,显著低于健康对照组的(1.55±0.55)%(P<0.05).结论:UC患者CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,可能打破了自身免疫耐受,发生了针对肠道抗原的自身免疫反应,参与了UC的发病.     

新生期小鼠CD4+Foxp3-细胞在肝脏中的免疫耐受研究

目的 研究小鼠CD4+Foxp3-T细胞在新生期肝脏获得的免疫耐受表型以及可能的机制.方法 选取新生14 d及相应周龄的雄性C57BL/6或Foxp3-GFP小鼠,通过流式细胞术、体外刺激培养及酶联免疫吸附试验法检测其肝脏、脾脏及胸腺中CD4+Foxp3-细胞的比率、耐受表型,增殖及凋亡等情况,并初步明确影响新生期肝脏...     

HBV-LP阳性患者CD4+CD25+Treg细胞表达的研究

目的 探讨HBV-LP(乙肝病毒大蛋白)阳性患者CD4+CD25+Treg细胞数量的变化规律及其意义.方法 将HBV感染者标本,采用ELISA方法检测HBV-LP,PCR方法检测HBV-DNA,按照HBV-LP阴、阳性患者及正常血清共170例,其中男87例,女83例,平均年龄43(23~61)岁.分成四个实验组,第一组为HBV-LP阳性46例,第二组为正常组(非HBV感染者)50例,第三组为HBV-LP阴性及HBV-DNA阴性HBV感染者43例,第四组为HBV-LP阴性而HBV-DNA阳性的HBV感染者31例.各组之间在性别、年龄上分布均衡,差异无统计学意义.各组分别采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离研究对象外周血,FCM术检测CD3+T,CD4+T,CD8+T,CD4+CD25+Treg细胞数量,进行分析.结果 ①各实验组之间CD3+T,CD8+T细胞数量无显著性差异,各组CD3+T分别为(65.38±4.85)%,(67.07±5.04)%,(64.94±5.26)%,(63.58±4.81)%(P＞0.05),CD8+T分别为(53.41±4.28)%,(54.71±5.05)%,(54.09±5.13)%,(52.59±4.88)%(P＞0.05).②结果以CD4+CD25+Treg来评价:HBV-LP阳性组(5.22±1.81)%分别高于正常对照组(3.13±1.12)%,HBV-LP阴性及HBV-DNA阴性组(3.24±1.22)%,HBV-LP阴性而HBV-DNA阳性组(3.23±1.61)%(P<0.01),而HBV-LP阳性组CD4细胞数量(32.63±3.93)%却低于其他三个实验组(39.32±5.55%),(37.53±4.72)%,(34.03±5.71)%,差异有统计学意义(P<0.05),③值得注意的是,HBV-DNA阳性而HBV-LP阴性组的各项指标几乎与正常组十分接近,之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HBV-LP阳性的HBV感染者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平明显增高,CD4+CD25+Treg细胞的过度表达在乙肝的发病机制及病程的转归中可能起着重要的作用.     

CD4＋CD25＋Foxp3＋/CD4＋CD25＋检测在急性髓系白血病中的应用

目的：探讨CD4＋CD25＋Foxp3＋/CD4＋CD25＋检测与急性髓系白血病的发病机制、治疗效果及预后的关系,并与CD4＋CD25＋/CD4＋法比较两种检测方法是否存在差异。方法应用流式细胞术法分别检测41例初治AML患者（初治组）、11例一次化疗缓解的患者（化疗敏感组）、9例两次以上化疗不缓解的患者（化疗耐药组）、13例化疗缓解后一直没有复发的患者（持续缓解组）、8例化疗缓解后又再次复发的患者（复发组）和20例健康体检者（对照组）CD4＋CD25＋Foxp3＋/CD4＋CD25＋及CD4＋CD25＋/CD4＋在外周血中的比例。结果与对照组相比较, AML患者初治组两类细胞比例均较正常人明显升高（P＜0.01）,初治患者组两种检测方法间存在显著差异（P＜0.01）。与化疗缓解组比较,化疗耐药组两种检测方法检测的比例均明显升高（P＜0.01）,耐药患者组两种方法间存在显著差异（P＜0.01）。与持续缓解组比较,复发组患者的比例明显升高（P＜0.01）,复发组两种方法间存在显著差异（P＜0.01）。结论急性髓系白血病患者外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋/CD4＋CD25＋与急性髓系白血病的发生相关,并且检测其比例能预测白血病患者对化疗药物的反应及预后,且其灵敏度高于CD4＋CD25＋/CD4＋检测法,而其特异性与CD4＋Foxp3＋/CD4＋检测法一致。