甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞CD90表达的研究

目的检测培养的不同来源眼眶成纤维细胞(OF)是否存在表达CD90抗原的差异,为研究眼眶成纤维细胞潜在的功能异质性奠定基础。方法培养甲状腺相关眼病(TAO)患者和正常对照眼眶成纤维细胞,流式细胞术检测CD90的表达。结果正常人、TAO患者的眼外肌、眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞均有部分细胞表达CD90。正常人/眼外肌来源OF、TAO患者/眼外肌来源OF、正常人/眼眶脂肪来源OF、TAO患者/眼眶脂肪来源OF的CD90 细胞的比例分别为82.95%±6.49%,80.83%±7.14%,64.55%±4.45%,59.20%±11.19%。眼外肌来源的成纤维细胞中CD90 的细胞比例高于眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞(P<0.05),而正常人与患者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。结论正常人和TAO患者OF表达CD90抗原不一致,且与解剖部位有关。     

TAO眼眶成纤维细胞上CCR1的表达

目的 研究趋化因子受体CCR1在甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)的眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts,OFs)上的表达,探讨其在发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法检测25例TAO患者和10例正常对照的眼眶组织中OFs上CCR1的...     

地塞米松对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响

目的 探讨地塞米松对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响.方法 取10例TAO患者和5例正常对照的眼眶脂肪组织与眼外肌,体外培养OF,在培养基中分别加入10-6 mol/L地塞米松、300 U/mL 干扰素-γ(IFN-γ)或10-6 mol/L地塞米松与300 U/mL IFN-γ的混合液,作用72 h,用流式细胞仪检测OF上ICAM-1的表达水平.结论 体外培养的OF均表达ICAM-1,TAO患者的表达量高于正常对照者(P＜0.05).IFN-γ促进OF表达ICAM-1,地塞米松不仅抑制OF表达ICAM-1,而且能抑制IFN-γ诱导的ICAM-1表达.结论 TAO患者OF表达ICAM-1增强可能是促进眶内炎症发生的原因之一,糖皮质激素发挥治疗作用的可能机制之一是其抑制OF表达ICAM-1以及IFN-γ诱导的ICAM-1表达.     

穿透素3对转化生长因子β1诱导的眼眶成纤维细胞纤维化的影响

目的 探索穿透素3（PTX3）对TGF-β诱导的眼眶成纤维细胞（OF）纤维化的作用。方法 以体外培养的甲状腺相关眼病（TAO）患者来源及健康来源OF为研究对象,在培养液中加入人重组PTX3（rhPTX3）蛋白（1 μg/mL）及重组TGF-β1（10 ng/mL）进行刺激,刺激完成后选择特异性抗体标记细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,通过免疫荧光显微镜观察OF的纤维化程度变化。给予细胞相同的刺激,刺激后通过qRT-PCR检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白α1（ColIα1）、IL-6 mRNA表达量的变化。结果 TGF-β1可诱导两组OF中α-SMA蛋白表达量增加,细胞呈现纤维化改变,而rhPTX3对该效应未见明显抑制作用。TAO患者来源OF的纤维化效应较健康来源OF无明显差异。TGF-β1可诱导OF纤维化相关蛋白（α-SMA、ColIα1、IL-6）mRNA表达上调。rhPTX3对OF中α-SMA mRNA的表达无明显诱导作用,但共刺激时可增强TGF-β1对α-SMA mRNA的上调效应。rhPTX3可上调ColIα1和IL-6 mRNA的表达,共刺激时可增强TGF-β1对IL-6 mRNA的诱导上调,但对ColIα1 mRNA的上调未见明显影响。结论 rhPTX3对TGF-β1诱导的OF纤维化过程具有潜在的促进作用,说明PTX3可能参与了TAO患者后期视物重影的发病过程,并发挥了正向作用。     

可溶性CD40L促进甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞增殖和透明质酸合成酶表达

目的 探讨可溶性CD40L(sCD40L)对甲状腺相关眼病(TAO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)增殖和3种透明质酸合成酶(HAS)mRNA表达水平的影响,初步探讨sCD40L在TAO发病中的作用。方法 取5例TAO患者的眼眶成纤维细胞和2例正常人眼眶成纤维细胞进行原代培养,采用MTS比色法检测不同浓度及作用时间下的sCD40L对不同来源的眼眶成纤维细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR技术检测不同浓度的sCD40L对两种不同来源的眼眶成纤维细胞的3种HAS基因表达水平的影响。结果 12.5ng/ml以上浓度的sCD40L作用后对TAO患者眼眶成纤维细胞有促增殖作用,而25ng/ml以上浓度的sCD40L作用后才能对正常人眼眶成纤维细胞有促增殖作用。TAO患者眼眶成纤维细胞HAS3 mRNA的合成受sCD40L的影响而增加,并且呈现出浓度和时间依赖的趋势。结论 sCD40L对TAO患者眼眶成纤维细胞的生长以及HAS3基因的表达均有明显刺激作用,提示sCD40L在TAO的病理过程中起一定作用。     

白细胞介素对Graves眼病患者眼眶成纤维细胞的作用

目的 观察白细胞介素对Graves眼病(GO)患者与正常入眼眶成纤维细胞(OFs)的作用。方法取5例GO患者与4例正常对照者眼眶结缔组织与眼外肌的OFs进行培养,分别在其中加入不同浓度的白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6),用四甲基偶氮唑盐(MTT)法与放射免疫法检测GO患者与正常人OFs的增殖及分泌透明质酸(HA)的情况。结果IL-1在5、50、500 U／ml时,均能刺激OFs的增殖和HA的分泌,且当为500 U／ml时,对GO患者OFs的刺激作用强度大于对正常人OFs;IL-2与IL-6在500 U／ml时能刺激OFs的增殖和HA的分泌。结论白细胞介素(IL-1、IL-2、IL-6)能刺激OFs的增殖和HA的分泌。白细胞介素的异常可能是GO的发病机制之一。     

全反式维甲酸对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察全反式维甲酸对体外培养的眼眶成纤维细胞增殖的影响以及促胞凋亡的作用.方法 体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞;将不同浓度的ATRA(0、10-9 mmol/L、10-8mmol/L、10-7mmol/L、10-6 mmol/L和10-5 mmol/L)作用于成纤维细胞细胞分别达24、48和72 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法观察ATRA对细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测ATRA处理48h后细胞周期的改变及细胞凋亡率;检测ATRA处理48 h后细胞内bcl-2蛋白的表达水平.结果 MTT法显示ATRA能降低成纤维细胞的A值(P＜0.05),细胞生长抑制率随作用时间和药物浓度的增加而增加.流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G1期;凋亡率随着浓度的增加而上升;bcl-2蛋白的表达水平较正常对照组细胞明显下调.结论 ATRA能够抑制成纤维细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性;ATRA通过将细胞阻滞在G1期而起到抑制作用;ATRA可以诱导成纤维细胞凋亡,诱导细胞凋亡作用与下调细胞内bcl-2蛋白的表达有关.     

透明质酸酶对眼眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸的影响

目的 探讨透明质酸酶对人眼眶成纤维细胞增殖以及分泌透明质酸的影响,为透明质酸酶用于甲状腺相关眼病患者的治疗提供实验依据.方法 取健康意外死亡者眼眶脂肪组织行眼眶成纤维细胞培养,用不同浓度透明质酸酶(0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、500 μg/mL)分别处理细胞,在不同时间点(24 h、48 h、72 h)观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;ELISA法检测透明质酸含量.结果 体外成功培养人眼眶成纤维细胞;各浓度透明质酸酶作用眼眶成纤维细胞后细胞形态密度未见明显差别;MTT测得A值在各时间点上的差异无统计学意义(P值均＞0.05);各浓度实验组分别与在同一时间点的正常对照组相比差异无统计学意义(P0.05);各浓度透明质酸酶组均较空白对照组透明质酸含量减少,随浓度升高透明质酸含量降低,随时间变化实验组与对照组透明质酸含量差值增加.各浓度组在3个时间点分解透明质酸量与空白对照组差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 通过获取人眼眶脂肪结缔组织进行组织块法成功培养、传代获得纯化眼眶成纤维细胞;实验设定浓度范围的透明质酸酶对眼眶成纤维细胞的增殖无明显影响;眼眶成纤维细胞能分泌透明质酸,不同浓度透明质酸酶均对其有分解作用,且呈剂量和时间依赖性.     

碱性成纤维细胞因子和透明质酸与甲状腺相关性眼病的研究

目的:有关血碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与甲状腺相关性眼病(TAO)的相关性国内并无报道,国外亦研究较少.文中通过检测TAO患者的血bFGF和透明质酸(hyaluronic acid,HA)水平,初步探讨其在TAO发病中的作用及其特点. 方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测20例TAO患者(TAO组)的bFGF、HA水平,同时检测20例甲状腺功能亢进患者作为对照组. 结果:TAO组的bFGF(98.02±27.66) pg/ml比对照组(77.24±20.14) pg/ml明显增高(P<0.05);HA(551.09±315.93) ng/ml亦比对照组(350.77±248.80) ng/ml明显增高(P<0.05).Spearman相关性分析显示,bFGF与HA呈显著正相关(r=0.57,P<0.001). 结论:TAO组患者外周血bFGF和HA明显增高,提示其可能与TAO的发病机制有关,bFGF和HA可作为TAO活动度的指标.     

富氢水对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞氧化应激的影响

目的 探讨富氢水对甲状腺相关眼病（TAO）的抗氧化应激作用。方法 取TAO患者眼眶脂肪结缔组织的眼眶成纤维细胞进行体外培养,用不同浓度的过氧化氢（H₂O₂）处理细胞18 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力以确定合适的H₂O₂浓度。将细胞为4组：空白组（正常培养）、H₂O₂组（H₂O₂处理18 h）、富氢水+H₂O₂组（富氢水处理72 h的同时用H₂O₂处理18 h）、地塞米松+H₂O₂组（1 μmol/L地塞米松处理72 h的同时用H₂O₂处理18 h）。用流式细胞术检测各组细胞活性氧（ROS）荧光强度,用ELISA检测细胞培养液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量。结果 TAO患者眼眶成纤维细胞体外培养成功。H₂O₂浓度越高对TAO患者眼眶成纤维细胞增殖能力的抑制效果越明显,本实验最终选取的H₂O₂浓度为100 μmol/L。培养TAO患者眼眶成纤维细胞72 h后,空白组、H₂O₂组、富氢水+H₂O₂组、地塞米松+H₂O₂组细胞培养液中MDA、SOD、GSH-Px的含量和细胞ROS荧光强度分别为（1.63±0.29）、（5.06±0.24）、（3.94±0.29）、（2.34±0.24）nmol/mL,（10.51±0.32）、（2.41±0.23）、（5.58±0.29）、（7.98±0.15）U/mL,（107.79±1.06）、（21.07±0.92）、（49.19±6.75）、（76.33±4.70）U/mL和18 275.82±521.05、92 524.81±2 097.01、54 460.87±572.64、35 961.37±540.61,统计分析发现富氢水和地塞米松均可抑制H₂O₂处理后眼眶成纤维细胞的氧化应激（P均<0.01）,且地塞米松的抑制效果较富氢水更明显（P均<0.01）。结论 氢分子可能通过抗氧化应激对TAO发挥治疗作用。     

甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞形态学和超微结构的比较

目的 研究体外培养人球后成纤维细胞,比较甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞形态学和超微结构的差异.方法 用组织块法体外培养甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞并采用透视电镜技术进行观察比较及鉴定.结果 用组织块法成功培养出甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞,电镜显示甲状腺相关眼病和正常患者球后成纤维细胞超微结构无明显差异.结论 经倒置相差显微镜和电镜证实为成纤维细胞,甲状腺相关眼病和正常球后成纤维细胞形态学和超微结构无明显差异.     

甲状腺相关眼病眼眶结缔组织中共刺激分子CD40/CD40L的表达

目的观察甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthal mopathy,TAO)患者眼眶结缔组织中共刺激分子CD40/CD40L的表达,并探讨其可能的作用机制。方法采用免疫组化检测CD40/CD40L、细胞间黏附分子1(intercellular adhesionmolecule1,ICAM-1)/白细胞功能抗原(1eukocyte function antigen1,LFA-1)在甲状腺相关眼病患者(n=12)及正常对照(n=8)眼眶组织中的表达情况;原代培养TAO患者及正常对照眼眶成纤维细胞,应用RT-PCR方法检测CD40L刺激后眼眶成纤维细胞合成ICAM-1mRNA水平的变化。结果 TAO患者眼眶结缔组织中可见高表达CD40、ICAM-1的成纤维细胞,大量淋巴细胞浸润并高表达LFA-1;双酶标组化显示CD40阳性表达的成纤维周围浸润CD40L阳性表达的淋巴细胞;ICAM-1阳性眼眶成纤维细胞与LFA-1阳性淋巴细胞以直接接触的形式存在。RT-PCR结果显示,未激活状态TAO组眼眶成纤维细胞ICAM-1mRNA水平高于正常组(P<0.05);两组眼眶成纤维细胞经CD40L诱导后IC...     

甲状腺相关性眼病患者外周血CD4+、CD8+T细胞百分比及细胞表面程序性死亡蛋白1表达的改变及其意义

目的 观察甲状腺相关性眼病(TAO)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+、CD8+T细胞百分比及细胞表面程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达水平,探索这两者变化在TAO发病机制及疾病诊断中的意义.方法 收集21例TAO患者、21例Graves病(GD)无眼病患者及20例健康对照者资料,采用流式细胞术检测所有受试者PBMC中CD4+、CD8+T细胞百分比及其表面PD-1的表达率,比较组间差异,分析其与患者病程、甲状腺功能、甲状腺相关抗体及TAO疾病活动性和严重程度之间的关系.结果 (1) TAO患者PBMC中CD4+、CD8+T细胞百分比分别为(35.9±14.5)％、(22.2±8.4)％,GD患者分别为(33.1±13.0)％、(18.6±9.2)％,均高于健康对照者[(17.4±7.4)％、(7.7±4.8)％,P＜0.01].(2) TAO及GD患者PBMC中CD4+T细胞表面PD-1表达率分别为(8.3±6.4)％、(28.0±26.6)％,均低于健康对照者[(52.2±28.6)％,P＜0.01.P＜0.05],且TAO患者低于GD患者(P＜0.05);TAO患者PBMC中CD8+T细胞表面PD-1表达率低于健康对照者r(12.7±13.4)％vs(38.2±24.2)％,P＜0.01].(3) TAO患者PBMC中CD8+T细胞百分比与病程呈正相关(r=0.478,P＜0.05).(4) TAO患者活动期组与非活动期组、轻度组与中重度组间CD4+、CD8+T细胞百分比及其表面PD-1表达率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TAO患者PBMC中CD4+、CD8+T细胞百分比及细胞表面PD-1表达存在异常,可能参与TAO的自身免疫过程.     

雷公藤多甙对体外培养的眼眶成纤维细胞增殖和透明质酸分泌的影响

①目的观察雷公藤多甙对体外培养的正常人眼眶后成纤维细胞生长的抑制作用以及对细胞分泌透明质酸的影响,为雷公藤多甙治疗甲状腺相关眼病提供实验室依据。方法用组织块培养技术建立眼眶后成纤维细胞系,用MTT比色法及放射免疫法测定雷公藤多甙对正常人眼眶成纤维细胞增殖和透明质酸分泌的影响。结果雷公藤多甙可明显抑制正常人眼眶成纤维细胞的增殖和透明质酸的分泌,并呈剂量和时间依赖性抑制。结论雷公藤多甙可有效的抑制体外培养的正常人成纤维细胞的生长和透明质酸的分泌。     

联合放化疗对鼻咽癌患者CD4＋/CD25＋与CD28＋/TCR＋T淋巴细胞亚群的影响

目的：研究鼻咽癌患者联合放化疗前后CD4＋/CD25＋与CD28＋/TCR＋T淋巴细胞亚群的变化。方法：招募43例接受联合放化疗的鼻咽癌患者,在联合放化疗前、联合放化疗3周及6周后分别抽取外周静脉血,运用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离并收集淋巴细胞,流式细胞仪检测CD4＋/CD25＋与CD28＋/TCR＋T淋巴细胞亚群的比例。结果：联合放化疗3周及6周后CD4＋/CD25＋淋巴亚群无明显变化（P〉0.05）,CD28＋/TCR＋淋巴亚群明显升高（P〈0.05）。结论：联合放化疗可部分恢复鼻咽癌患者受抑制的免疫功能。     

经皮125I植入联合化疗在中晚期非小细胞肺癌治疗中的应用及对CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的影响

目的 探讨经皮放射性碘125粒子（¹²⁵I）植入联合化疗在中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）治疗中的应用及对CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺的影响。方法 选取2017年1月-2019年1月咸阳市中心医院收治的120例中晚期NSCLC患者,根据治疗方案分为研究组78例（经皮¹²⁵I植入联合化疗）和对照组42例（同步放化疗）。统计两组基线资料,并记录粒子植入情况及并发症情况,治疗6个月后评估两组临床疗效。比较两组外周血T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺占比及CD4⁺/CD8⁺治疗前后的变化。统计治疗期间不良反应发生情况。结果 两组性别、年龄、病灶部位、肿瘤直径、病理类型、临床分期及治疗前卡氏评分比较,差异无统计学意义（P >0.05）。研究组91.03%（71/78）患者植入粒子的分布符合术前模拟剂量分布;术后气胸30.77%（24/78）,肺内渗血28.21%（22/78）,发热19.23%（15/78）,粒子移位2.56%（2/78）,围术期均无死亡病例。两组临床疗效比较,差异有统计学意义（P <0.05）,研究组有效率高于对照组。两组治疗后外周血CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺及治疗前后的差值比较,差异有统计学意义（P <0.05）,研究组高于对照组;两组治疗后外周血CD8⁺及治疗前后的差值比较,差异无统计学意义（P >0.05）。两组不良反应（胃肠道反应、粒细胞减少及放射性食管炎发生率）比较,差异无统计学意义（P >0.05）;两组放射性肺炎发生率比较,差异有统计学意义（P <0.05）,研究组低于对照组。结论 经皮¹²⁵I植入联合化疗可有效治疗中晚期NSCLC,可明显改善患者免疫功能,减少不良反应。     

CD19+CD27+IgD+B细胞与甲状腺相关性眼病患者疾病活动度相关性研究

目的:探讨甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy, TAO)患者外周血CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例变化与病情活动度的关系。方法:采用流式细胞术检测TAO患者和健康对照组CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例,分析TAO患者CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例与健康对照组的差异,并分析CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例与TAO疾病活动度之间的相关性。结果:TAO患者CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例明显低于健康对照(P<0.05);活动性TAO患者CD19⁺CD27⁺IgD⁺B细胞比例细胞显著低于非活动性TAO患者;CD19     

慢性乙型肝炎患者CD4/CCR5、CD4/CD30细胞亚群失衡研究

目的研究辅助性T细胞亚群（rIh）在慢性乙型肝炎（CHB）发病机制中的作用，寻找治疗CHB的新方法。方法用流式细胞仪对20例正常人（NC组）及20例CHB患者外周血单核细胞（PBMC）经植物血凝素（PHA）培养前后的Th1、Th2水平进行了检测，Th1、Th2细胞表面特异性标志分别为CD4／CCR5、CD4／CD30。结果培养前Th1在NC组与CHB组无明显差别（P〉0．05），CHB组Th2明显高于NC组，同时CHB组及NC组Th1均明显高于Th2（P〈0．05）；培养后，NC组的Th1较培养前明显减少（P〈0．05），而NC组的Th2、CHB组的Th1及Th2较培养前均明显增加（P〈0.05），而以CHB组的Th2增加更明显；培养后，CHB组Th1、Th2均高于NC组（P〈0．05），而CHB组及NC组的Th1与Th2之间则无明显差别（P〉0．05）；培养前CHB组明显低于NC组（P〈0．05），而培养后CHB组高于NC组（P〈0．05），2组培养后Th1／Th2均明显低于培养前（P〈0．05）。结论CHB患者体内Th细胞亚群的应答模式与正常人群存在一定的差异；Th1向Th2细胞的漂移与乙型肝炎的慢性化及反复肝损伤有一定的关系。     

重组人干扰素γ对球后成纤维细胞CD40 mRNA表达的影响

目的 探讨在重组人干扰素γ（rhIFN-γ）作用下，正常人和甲状腺相关眼病（TAO）患者球后成纤维细胞（RF）CD40 mRNA的表达情况。方法 用RT—PCR法，对不同浓度rhIFN-γ及400U／mL rhIFN-γ作用不同时间诱导体外培养的正常人和TAO患者RFCD40 mRNA进行半定量分析。结果经100，200。400，1000U／mL rhIFN-γ作用48h后，正常人和TAO患者RFCD40的光密度比值与各自对照组比较，差别有统计学意义（P〈0．01）；两者同一浓度比较差别无统计学意义（P〉0．05）。经400U／mL rhIFN-γ作用12，24，48，72h后，正常人和TAO患者RFCD40的光密度比值与各自对照组比较差别有统计学意义（P〈0．05），两者同一时间比较差别无统计学意义（P〉0．05）。结论 正常人和TAO患者RF均表达CD40 mRNA。rhIFN-γ可上调正常人和TAO患者RFCD40 mRNA的水平，呈浓度和时间依赖。