用JEV脑内攻击模型评价乙型脑炎灭活疫苗和DNA疫苗的效力

鉴于攻击模型的不同 ,对乙型脑炎 (JE)疫苗效力的研究可有不同结果 ,本文介绍了用JE病毒脑内攻击模型来评价 BIKEN JE疫苗和 DNA疫苗效力的情况     

用JEV脑内攻击模型评价乙型脑炎灭活疫苗的DNAU凤苗的效力

鉴于攻击模型的不同，对乙型脑炎（JE）疫苗效力的研究可有不同结果，本文介绍了用JE病毒脑内攻击模型来评价BIKENJE疫苗和DNA疫苗效力的情况。     

用气溶胶攻击模型代替脑内小鼠保护试验进行百日咳全细胞疫苗效力测定

目前 ,百日咳全细胞疫苗效力试验——脑内小鼠保护试验仍然是显示有关百日咳疫苗对儿童保护作用的唯一效力检测方法。然而 ,它有显著的实验室内和实验室间差异。另外 ,此动物模型还不能产生自然疾病的症状。　　作者以非致死性气溶胶攻击小鼠方法代替目前的脑内小鼠保护试验检测百日咳疫苗的效力。用不同稀释度的百日咳参考疫苗和5种来自不同厂家的试验疫苗免疫 2 0～ 2 5日龄的雌性 NIH小鼠 ,脑内攻击模型所用的参考疫苗剂量分别为每剂含 1.2 5、0 .2 5和0 .0 5 IU百日咳杆菌 ,所用的试验疫苗剂量分别为每剂含 0 .12 5、0 .0 2 5和 0 .0 …     

接种编码乙型脑炎病毒E糖蛋白的质粒DNA可提供显著保护作用

作者构建了单独编码乙型脑炎病毒(JEV)包膜 (E)糖蛋白的 DNA质粒 p CMX-ENV,该质粒转染 Vero细胞后可在细胞内表达 E蛋白。作者就其在小鼠肌内 (im)和鼻内 (in)接种对脑内 (ic) JEV攻击的防御作用进行了研究。　　对 4～ 6周龄异系交配瑞士雄性小鼠间隔两周在四头肌 im接种 5 0 μg DNA质粒 ;或间隔 1周共五次 in接种 2 0 μg DNA质粒。末次接种后两周 ,用 JEV P2 0 788株作 ic攻击(1 0 0 pfu/鼠 ) ,每日观察至攻击后 1 5天。　　经 im免疫 p CMXENV的小鼠的存活率为 33%～ 70 % ,总体存活率为 5 1± 1 2 %。经 in免疫 p CMX…     

青蒿素对CpG DNA攻击小鼠保护作用的实验研究

目的:观察青蒿素对CpGDNA攻击小鼠的保护作用及对CpGDNA诱导小鼠单核 巨噬细胞RAW2 6 4.7释放促炎细胞因子的影响。方法:清洁级昆明小鼠6 0只,随机分为CpGDNA、青蒿素(2 0 0mg·kg-1)、CpGDNA 青蒿素(5 0、10 0、2 0 0mg·kg-1)及生理盐水对照组,每组动物10只。CpGDNA及CpGDNA 青蒿素组小鼠提前1h腹腔注射D 氨基半乳糖溶液(6 0 0mg·kg-1)进行敏化。CpGDNA组尾静脉给予4mg·kg-1的CpGDNA敏化;青蒿素组,灌胃给予2 0 0mg·kg-1的青蒿素;CpGDNA 青蒿素组在给予不同剂量的青蒿素后,立即给予4 0mg·kg-1的CpGDNA敏化;生理盐水对照组仅给予相同量的生理盐水。体外培养小鼠巨噬细胞RAW2 6 4.7,加入不同浓度的青蒿素,观察其对CpGDNA刺激细胞分泌TNF α及IL 6的拮抗作用及其量效、时效关系。结果:青蒿素可降低CpGDNA引起的小鼠死亡,死亡率由80 %降至10 % (P <0 .0 1)。青蒿素在2 0g·ml-1时显著抑制CpGDNA诱导RAW2 6 4.7释放TNF α和IL 6 (P <0 .0 1)。提前给予青蒿素,其拮抗CpGDNA诱导细胞因子释放的作用非常显著(P <0 .0 1) ,但青蒿素在刺激物CpGDNA给予后再加入,也能观察到显著拮抗作用(P <0 .0 5 )。结论:青蒿素对CpGDNA攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制CpGDNA诱导的促炎细胞因子释放     

破伤风抗毒素与氧氟沙星等联合保护在小鼠创伤弧菌实验性攻击中的应用

目的旨在进一步探讨创伤弧菌(Vibriovulnificus,Vv)致病机制以及破伤风抗毒素与氧氟沙星等药物(强的松龙、异丙嗪)联合对创伤弧菌(Vibriovulnificus,Vv)致死性感染小鼠的保护效果,为高危人群Vv感染预防和临床治疗提供实验依据。方法160只清洁级小鼠,随机分1LD50和10LD50Vv攻击组,各攻击组又分盐水(NS)保护对照,破伤风抗毒素预注射与氧氟沙星等药物联合保护组、氧氟沙星等药物保护和破伤风抗毒素单独保护等4组(每小组n=20)。并观察各组12h和24h存活数,比较各组间存活率差异。结果无论是1LD50或10LD50Vv攻击下,破伤风抗毒素和与氧氟沙星等药物联合保护组保护效果显著优于破伤风抗毒素或氧氟沙星等药物单独保护组(P<0.05,P<0.01)。结论破伤风抗毒素预注射与氧氟沙星等药物的联合应用保护效果明显优于氧氟沙星等药物保护组或破伤风抗毒素单独保护组,对预防Vv感染和感染后病人抢救有指导意义。     

表达与组织纤溶酶原激活物信号序列融合的结核杆菌蛋白的DNA疫苗的免疫原性

作者用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码结核杆菌抗原 ESAT- 6、MPT6 4、Kat G和 HB-HA的基因 ,然后再将其克隆至 p JW430 3真核表达载体 ,分别构建成带或不带组织纤溶酶原激活物 (TPA)信号序列的表达载体。　　为确定 TPA 质粒表达的抗原浓度是否高于 TPA- 质粒 ,作者在体外将两组表达ESAT- 6、MPT6 4、Kat G和 HBHA的载体转染横纹肌肉瘤细胞 ,48小时后 ,用免疫印迹法检测 ,结果显示所有 TPA 抗原的浓度均高于相应 TPA-组。为评价胞外蛋白表达水平 ,作者检测了 MPT6 4、Kat G质粒转染的细胞系培养上清 ,结果显示 ,TPA 组…     

两种非病毒载体与质粒DNA的结合及解离过程的停流动力学研究

目的：对由1，2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷[1，2-dioleoyl-3-trimethy-lammonium-propane（chloride salt），DOTAP]、二油酰基磷脂酰乙醇胺（1，2-Dioley-l-s-Glycero-3-Phosphoeth anolamine，DOPE）形成的阳离子脂质体与质粒DNA及壳聚糖与质粒DNA的结合及解离动力学过程进行研究。方法：以钌联吡啶配合物[Ru（phen）2dppz]^2＋作为荧光探针采用荧光停流光谱技术研究两种载体同DNA的结合和解离动力学。结果：结合动力学过程中，随N／P（载体中伯氨基数目／pDNA中磷酸基数目）比的增加，荧光强度的变化幅度增大，在N／P比小于4时，结合速率常数k1〉k2。在解离动力学过程中，随N／P比的增加，荧光强度的变化越来越小，在所选N／P比范围内，解离速率常数k1〉k2。结论：DNA压缩是复合物形成过程中的限速步骤，而DNA的伸展及重排是复合物解离过程中的限速步骤。     

以腺病毒为载体的呼吸道合胞病毒疫苗在新雪貂模型中的效力

作者曾构建了表达呼吸道合胞病毒(RSV)融合糖蛋白(F)和/或附着糖蛋白(G)的重组4、5和7型腺病毒(Ad),在这些重组体中,Ad的大部分E3区被删除.另外,已构建出含有完整E3区的Ad7(E3+)F重组体,用以评价E3区是否具有增强重组疫苗免疫原性的作用.在组织培养中,AdF、AdG和Ad-FG的产蛋白量分别为0.38～1.93μg F蛋白     

H9N2禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶DNA疫苗对小鼠的免疫保护研究

目的 检测H9N2禽流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)DNA疫苗保护小鼠抵抗致死量同源病毒感染的能力.方法 通过小鼠肺对肺传代,建立禽流感病毒A/chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)小鼠适应株.同时,构建病毒HA和NA DNA疫苗,以不同剂量电击法免疫小鼠1或2次,在初次免疫后4周或加强免疫后1周用致死量(40 LD50)鼠适应型病毒攻击小鼠.通过测定小鼠血清抗体滴度、小鼠存活率和肺部病毒滴度来评价疫占的效果.结果 HA或NADNA 10μg免疫1次或3μg免疫2次均可保护小鼠抵抗致死昔H9N2病毒的感染.结论 低剂量HA或NA DNA可为抗H9N2禽流感病毒感染提供有效的免疫保护.     

移植的神经干细胞在MPTP诱导的帕金森病小鼠脑内的存活与分化

AIM: To determine survival and differentiation of cultured neural stem cells (NSCs) into viable and functional neurons upon transplantation into mice brain of MPTP-induced Parkinson disease (PD). METHODS: Mouse model of PD was established with two subcutaneous (sc) injections of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine(MPTP,40mg/kg) twice, 16h apart. NSCs isolated from rat embryo midbrain were cultured in clonal density.After labeled with 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), the NSCs were transplanted into the uni-or bi-lateral striatumof PD mouse. Tyrosine hydroxylase (TH) immunofluorescence was used to evaluate the toxicity of MPTP on the neural cells in the substantia nigra. Immunohistology and laser confocal microscope were used to detect the survival and differentiation of transplanted NSCs. RESULTS: The cultured NSCs generated neurospheres and differentiated into neuron and astrocyte. It indicated that the cultured NSCs were multipotent and self-renewal in vitro.TH-positive neural cells were significantly reduced in the substantia nigra. Immunohistology showed that the uni-or bi-lateral transplanted NSCs survived in the brain of PD model mouse. Laser confocal microscope indicated that some transplanted NSCs could properly differentiate into targeted TH-positive neural cells in vivo. CONCLUSION:The transplanted multipotent NSCs could survive and differentiate into functional dopamine neurons.     

TNF-α在MHV-3诱导的小鼠病毒性肝炎模型肾脏中的表达及意义

目的研究3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠病毒性肝炎模型中肾脏组织肿瘤坏死因子-α的表达及其意义。方法建立MHV-3病毒诱导的小鼠病毒性肝炎模型,测定血清尿素氮、肌酐水平;采用免疫组化方法检测肾脏组织肿瘤坏死因子-α的表达;逆转录-聚合酶链反应法检测肾脏组织肿瘤坏死因子-α的mRNA水平。结果 MHV-3病毒感染小鼠后各时间点血清BUN、Cr水平均较正常对照明显著升高。模型小鼠肾脏组织肿瘤坏死因子-α的表达,随着MHV-3病毒感染时间的延长,肾脏组织中肿瘤坏死因子-αmRNA水平逐渐增高,在第10天达到高峰。结论肾脏组织表达的肿瘤坏死因子-α可能参与MHV-3病毒感染引起的肾脏损伤的病理过程。     

慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因脑内转移对帕金森病大鼠模型的保护作用

目的探讨慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因和酪氨酸羟化酶(TH)双基因直接转移对帕金森病(PD)大鼠的保护作用。方法将携带TH、GDNF基因并含启动子为Palb的四环素应答元件的慢病毒(Lv-TH-GDNF)和四环素反式作用子rtTA2s-M2病毒共同注射到SD大鼠左侧纹状体,用强力霉素(DOX)诱导大鼠目的基因GDNF和TH的表达。1周后在大鼠的同侧纹状体注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁纹状体的DA能神经元。通过旋转行为、黑质TH免疫组化染色以及高效液相色谱-电化学方法(HPLC-ECD)检测纹状体DA含量评估其保护效应;通过RT-PCR、免疫印迹观察Lv-TH-GDNF在脑内的表达。实验与健康对照组、磷酸缓冲液(PBS)对照组进行比较。结果在6-OHDA损伤后4周,Lv-TH-GDNF+rt-TA2s-M2+DOX组大鼠阿扑吗啡诱发的旋转效应均明显低于PBS对照组(P<0.01),损毁侧的的黑质区TH阳性细胞表达强度、纹状体DA含量均明显高于PBS对照组(P<0.01),但二者均低于健康对照组(P<0.01)。RT-PCR、免疫印迹结果显示,与PBS对照组比较,Lv-TH-GDNF+rtTA2s-M2+DOX组大鼠纹状体TH、GDNF基因的表达明显增高(P<0.01)。结论慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因脑内直接转移,在强力霉素诱导下可减缓6-OHDA诱发的大鼠DA能神经元进行性变性,具有保护作用。     

应用鼻内百日咳杆菌感染小鼠模型研究百日咳无细胞菌苗对婴儿的保护作用

作者应用小鼠模型，对接种两组分［百日咳类毒素（ＰＴ）和丝状血凝素（ＦＨＡ）］、三组分〔ＰＴ、ＦＨＡ和６９ｋＤａ蛋白（ＰＲＮ）〕和单组分（ＰＲＮ）百日咳无细胞菌苗ＤＴＰ的小鼠进行了亚致死量的气溶胶攻击及致死量和亚致死量的鼻腔攻击。所有实验均选用３～４周龄雌性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，致死量鼻腔攻击实验为：间隔２周接种２次菌苗，每次１个人用剂量（５００μｌ），第２次接种后２周进行攻击；亚致死量鼻腔攻击实验为：间隔３周接种２次，每次１／１０、１／４和１个人用剂量，第２次接种后１周进行攻击；亚致死量气溶胶攻击实…     

热休克蛋白70在小鼠膀胱癌模型中的表达及其与凋亡的关系

<正>本研究使用N-丁基-N-4-羟丁基亚硝胺(BBN)和抗坏血酸钠(Na-AsA),建立小鼠膀胱肿瘤模型,观察热休克蛋白(HSP)70在膀胱癌发生发展中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。     

平阳霉素在食管癌小鼠组织中的分布与钝化的研究

平阳霉素是从浙江省平阳土壤中分离得到的一株轮枝链霉菌平阳变种产生的抗肿瘤抗生素,其纯品与日本报道的博莱霉素(Bleomycin,BLM)A_5相同。实验研究证明平阳霉素为广谱抗菌、抗肿瘤抗生素,国内临床研究表明:对头颈部鳞癌、宫颈癌有显著近期疗效;对乳腺癌、鼻咽癌、食管癌有较好的疗效;对肝癌也有一定的缓解作用。其作用机理的研究是与DNA特异性结合,与博莱霉素的作用相似。本文的目的在于研究平阳霉素在食管癌小鼠组织中的分布和钝化,以探讨其与疗效和毒性的关系。 材料、方法与结果 实验使用的平阳霉素是去铜的冷冻干燥。