新生大鼠海马神经元体外氧-糖剥夺再灌注模型的建立

目的体外培养新生大鼠海马神经元,建立神经元氧-糖剥夺再灌注(OGD/R)模型,为临床进一步研究新生儿缺氧缺血性脑损伤奠定基础。 方法以L-多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为海马神经元体外培养的生长基质,分离24 h内新生SD大鼠海马,胰蛋白酶水浴振荡消化获得单个细胞,采用Neurobasal维持培养基更继续培养。培养7 d后将神经元细胞培养基更换为无糖缺血液,置于95%高纯度氮气(N₂)三气培养箱内缺氧处理2 h。将其取出更换为正常培养基继续培养24 h,构建神经元OGD/R模型。然后,采用抗微管相关蛋白2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)标记神经元,于荧光显微镜下观察建模前与建模后神经元的形态学改变,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测微管相关蛋白(MAP)2阳性细胞存活率,对OGD/R模型进行评价。 结果荧光显微镜下观察到正常情况下神经元细胞形态结构完整,树突及轴突舒展,交织成网状。建模后,神经元突触回缩,细胞崩解,网状结构被破坏。CCK-8检测结果显示,建模后神经元细胞存活率降低。 结论此方法体外培养神经元细胞纯度在95%以上;使用无糖神经元细胞缺血液联合高纯度N₂培养2 h,再更换为正常培养基培养的方法,可成功建立神经元细胞的OGD/R模型。     

缺氧模型的制造与评价

本文通过细胞的离体缺氧模型和实验动物的在体缺氧模型两方面对近年来几种常见缺氧模型的造模方法、原理及优缺点进行了综述,认为物理性缺氧造模的难点在于实验状态的控制和平衡的维持,而化学性缺氧造模的难点主要是达到缺氧状态所需化学试剂的剂量和作用时间,实验时应根据需要选择合适的造模方法。     

缺氧对滋养细胞E-钙黏蛋白表达的影响

目的:了解在缺氧条件下,单层贴壁培养的滋养细胞系TEV-1中,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达在mRNA水平和蛋白水平变化情况,探讨缺氧环境对滋养细胞迁移能力的影响,深入了解缺氧环境诱发子痫前期发病的潜在分子机制。方法:体外贴壁培养的滋养细胞系(TEV-1),分别直接接种于24孔板进行细胞爬片和培养瓶内,分为常氧组和缺氧组。常氧组加新鲜DMEM/F12培养基,缺氧组加含终浓度为300μmol/L二氯化钴的培养基,然后在正常条件下(37℃,5%CO2)培养。两组细胞培养48 h后,分别收集细胞,采用Trizol法抽提mRNA,并进行RT-PCR,检测E-钙黏蛋白的mRNA表达水平;细胞爬片采用免疫组织化学法进行染色,检测E-钙黏蛋白的蛋白表达水平。统计数据分析两组差异性。结果:二氯化钴化学缺氧条件下培养后,滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均较常氧对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧环境可能导致滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白的表达水平升高,由此降低了滋养细胞的迁移能力。这可能是缺氧造成胎盘浅着床、继而发生子痫前期的重要分子机制。     

牛磺酸对缺氧所致神经胶质细胞凋亡的抑制作用

目的探讨牛磺酸对缺氧引起的神经胶质细胞凋亡的抑制作用方法原代培养神经胶质细胞并制作细胞缺氧模型,实验分为空白对照组、缺氧模型组、缺氧+牛磺酸组。细胞缺氧6 h后加入牛磺酸3 mmol/L继续培养24 h和48 h。采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡相关基因表达水平。结果缺氧组48 h早期凋亡率为(2.48±0.92)%,中晚期凋亡率为(2.97±0.75)%,均显著高于对照组的(1.02±0.44)%(P<0.05);牛磺酸48 h组早期凋亡率为(1.39±1.03)%,中晚期凋亡率为(1.62±0.1)%,均显著低于缺氧组(P<0.05)。缺氧组Bax mRNA相对表达量均显著高于对照组和牛磺酸组(P<0.01);牛磺酸48 h组Bcl-2 mRNA相对表达量比缺氧组升高2倍(P<0.01);牛磺酸组HIF-1αmRNA表达量均比缺氧组升高显著(P<0.01)。结论牛磺酸有助于抑制缺氧所致的神经胶质细胞早期和中晚期凋亡率。     

一种构建慢性缺氧动物模型装置的研制

目的:为了呈现实验动物慢性缺氧的病理过程,研制一种构建慢性缺氧动物模型装置。方法:该装置主要由水槽箱、缺氧箱、动物平台、方槽、金属手柄杆、测氧仪等组成。水槽箱底部设置有动物平台,缺氧箱内部设置有分别放置碱石灰及测氧仪的方槽。水槽箱、缺氧箱均由透明有机玻璃加工制成。结果:该装置利用水封法能够保证缺氧箱内密闭状态,实现氧气逐渐消耗的慢性缺氧过程,从而建立不同程度的慢性缺氧模型。结论:该装置结构简单、操作方便、实用性强,且可以重复使用,适用于教学及科研工作。     

缺氧对脐静脉内皮细胞损伤及可溶性血管内皮生长因子受体-1 mRNA表达的影响

目的:探讨二氯化钴(CoCl2)诱发化学缺氧对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells)损伤和血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1)mRNA表达的影响。方法:采用MTT检测缺氧时人脐静脉内皮细胞的增殖情况,检测上清中LDH量反映脐静脉内皮细胞损伤程度,RT-PCR检测sFlt-1 mRNA表达水平,观察缺氧时间与三者之间的相关关系。结果:CoCl2可诱导脐静脉细胞中sFlt-1 mRNA的表达,导致细胞损伤,降低细胞活性,三者与缺氧时间呈依赖性。结论:缺氧损伤的脐静脉内皮细胞,细胞增殖能力下降,sFlt-1 mRNA表达增加,可能促进妊娠期高血压疾病的发病。     

移植人脐带间充质干细胞治疗缺氧缺血性脑损伤的两种方法比较

目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)经颈静脉及经腹腔两种途径移植后在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠脑内的分布、分化情况,寻找简单易行且有效的移植途径。方法 RICE法制备7日龄新生大鼠HIBD模型,随机分组:HIBD组(n=10)、腹腔移植组(n=15)、颈静脉移植组(n=15),另随机取未造模的10只为正常对照组。造模后72h后分别对颈静脉移植组和腹腔移植组移植等量的hUCMSCs(1×106个/只),而HIBD组及正常对照组不移植。于移植后36d免疫荧光染色比较Dil标记的hUCMSCs移植后在各组大鼠脑中的分布情况;神经元前体细胞标记DCX特异性染色观察hUCMSCs移植后分化成神经元前体细胞的情况。结果移植后hUCMSCs能迁徙到脑组织中,能分化成神经元前体细胞。经颈静脉移植途径优于经腹腔移植(P0.01)。结论 hUCMSCs移植后可以在HIBD新生大鼠脑内存活,并向神经元前体细胞分化,对HIBD新生大鼠脑功能有修复作用,尤以经颈静脉移植明显。     

3种不同方法处理新生儿培养箱的效果比较

目的比较3种消毒或清洁方法处理新生儿培养箱的效果。方法终末消毒后将新生儿培养箱随机分为3组,分别采用500 mg/L有效氯（Ⅰ组）、250 mg/L有效氯（Ⅱ组）及清水（Ⅲ组）每天擦拭消毒1次,待干燥后即刻和24 h分别采样行细菌培养,连续监测6 d,比较3组消毒或清洁效果。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组新生儿培养箱消毒干燥后即刻采样行细菌培养,合格率分别为100.00%（36/36）、97.40%（75/77）、96.67%（58/60）;消毒或清洁24 h采样培养,合格率分别为91.67%（33/36）、94.81%（73/77）、96.67%（58/60）,3组消毒或清洁即刻与24 h的效果比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论上述3种消毒或清洁方法均能达到新生儿环境卫生学要求,采样培养均合格,但清水擦拭法更简单、经济、环保,值得推广。     

两种方法治疗新生儿缺氧缺血性脑病的效果观察

目的:评价早期干预和早期干预联合高压氧(HBO)治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)对患儿预后的影响。方法:将88例中度HIE患儿随机分为干预组A、干预组B和对照组。干预组A、B进行触、听、视觉刺激和前庭功能训练至3个月。干预组A除上述治疗,加用高压氧治疗。每疗程7次,每月1疗程,共3疗程。结果:3月龄、6月龄时智力发育指数(MDI)和心理运动发育指数(PDI)3组比较干预组A最高,干预组B次之,对照组最低。1岁时干预组A、B的发育商无明显差异,但均高于对照组。干预组A、B的后遗症发生率低于对照组。结论:在早期干预基础上配合高压氧治疗对提高患儿3月、6月时发育指数有一定协同作用,但对HIE患儿的远期智能发育的影响尚有待于进一步随访评估。     

子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性

目的探讨子痫前期胎盘组织中层粘连蛋白α4链(LAMA4)蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性。方法收集2012年5月-2016年5月在该院接受治疗及分娩的子痫前期患者56例作为观察组;另选取同期进行产检及分娩的正常产妇50例作为正常对照组。根据胎盘组织中LAMA4蛋白表达中位数,观察组患者被分为高LAMA4蛋白组和低LAMA4蛋白组,每组各28例。采用Western-Blot法检测胎盘组织中LAMA4蛋白表达量;采用荧光定量PCR法检测胎盘组织中滋养细胞侵袭相关基因mRNA表达量;采用化学发光法检测脐血中胎盘缺氧相关指标含量。结果观察组胎盘组织LAMA4蛋白表达量低于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组、低LAMA4蛋白组胎盘组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)mRNA表达量低于正常对照组,可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1(sFlt1)mRNA表达量高于正常对照组,脐血胎盘缺氧指标,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶-1(HPH-1)、瘦素含量均高于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组胎盘组织中MMP-9、VEGF、PLGFmRNA表达量高于低LAMA4蛋白组,sFlt1mRNA表达量低于低LAMA4蛋白组,脐血胎盘缺氧指标HIF-1α、HPH-1、瘦素含量低于低LAMA4蛋白组(P0.05)。结论子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量减少,具体LAMA4蛋白表达水平与滋养细胞侵袭呈正相关,与胎盘缺氧程度呈负相关。     

氟化钠对体外培养大鼠肾细胞增殖的影响

目的 研究不同浓度NaF对体外培养大鼠肾细胞增殖反应的影响以及VE、Vc、Se和GSH对其保护效应。方法 大鼠肾细胞分离培养，分别施加不同浓度NaF、一定浓度VE、Vc、Se和GSH，采用ELISA方法测定OD值．计算肾细胞增殖率。结果 NaF对肾细胞增殖反应具有双向性作用，即低浓度刺激、高浓度抑制。结论 一定浓度VE、Vc和GSH能拮抗1mmol／L NaF对大鼠肾细胞增殖反应的抑制作用。     

缺氧诱导因子-1在宫颈癌发生中的作用研究

缺氧诱导因子-1是一种重要的缺氧应答调控因子,能与缺氧反应基因上特定位点结合,启动靶基因的转录,使机体对缺氧产生一系列适应性反应。其在维持氧稳定、细胞能量代谢、肿瘤血管生成及转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。该文就缺氧诱导因子-1的生物学特性和在宫颈癌中的研究现状作以概述。     

Ang-2和茶多酚对缺氧内皮细胞分泌ET影响

目的观察缺氧条件下血管紧张素（Ang-2）对血管内皮细胞（VEC）分泌内皮素（ET）的影响及茶多酚的保护作用。方法将VEC分为空白对照组、单纯缺氧组、Ang-2组、缺氧＋Ang-2组、缺氧＋Ang-2＋高浓度茶多酚组、缺氧＋Ang-2＋低浓度茶多酚组。除空白对照组和Ang-2组外，其他各组置丁低压舱内进行缺氧暴露。用放免法测定各组ET含量。结果（1）缺氧和ET可促进VEC分泌ET增加（P〈0．01）。（2）茶多酚能显著降低缺氧加Ang．2促VEC分泌ET的作用，在6和24h时，低浓度茶多酚组的ET含量低于高浓度组（P〈0．01）。结论缺氧条件下Ang-2可显著增加VEC分泌ET的功能，茶多酚能显著抑制缺氧和Ang-2促VEC分泌ET的作用，且低浓度茶多酚的保护作用要优于高浓度组。     

环氧化酶-2在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨上皮性卵巢癌中环氧化酶-2(COX-2)的表达及临床意义。方法:采用链霉素抗生物素卵白素-过氧化物酶(SP)法进行免疫组化染色,观察COX-2在正常组织及良恶性上皮性卵巢癌组织中的蛋白表达,应用SPSS13.0软件结合病历资料进行分析。结果:正常组织及良恶性上皮性卵巢肿瘤中COX-2皆有表达,COX-2在卵巢癌组织中的阳性表达率78%(39/50)明显高于正常卵巢组织10%(1/10)及良性卵巢肿瘤组织20%(2/10),差异有统计学意义(P<0.01);在正常组织和良性卵巢肿瘤组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。COX-2表达与病理分级及淋巴结转移明显相关(P<0.05),而与年龄、临床分期、组织学类型无关(P>0.05)。结论:COX-2在卵巢癌组织中的表达明显高于正常组织及良性卵巢肿瘤组织,在卵巢癌的浸润和转移中发挥了重要作用,可以作为判断卵巢癌恶性程度及评估不良预后的重要指标。     

莱菔硫烷对膀胱癌细胞增殖抑制作用

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)信号途径在莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)抑制膀胱癌细胞增殖中的作用。方法噻唑蓝(MTT)法测定膀胱癌细胞的增殖作用,用实时定量PCR方法(re-al time-PCR)测定对环氧化酶(COX-2)mRNA的影响。结果 5～20μmol/L莱菔硫烷能明显抑制膀胱癌细胞的体外增殖、COX-2 mRNA表达;SB202190或LY294002预处理T24细胞,能明显降低莱菔硫烷对T24细胞增殖的抑制作用,提高细胞存活率;SB202190预处理T24细胞1h能完全阻断莱菔硫烷对COX-2 mRNA的抑制作用,而LY294002不影响莱菔硫烷对COX-2 mRNA的抑制作用。结论 莱菔硫烷可能是通过活化p38激酶途径和PI3K激酶途径抑制膀胱癌细胞生长,p38激酶信号途径在SFN抑制COX-2 mRNA中起关键作用。     

氯化镉诱发人支气管上皮细胞恶性转化中hMSH2基因mRNA表达变化

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化过程中hMSH2基因mRNA动态变化的规律。方法用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)技术检测16HBE、氯化镉恶性转化16HBE系不同阶段(第5、15、32代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因mRNA的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA的表达逐渐降低,到第32代细胞后表达明显下降(P<0.01)。结论氯化镉诱发16HBE系恶性转化过程中hMSH2基因表达逐渐下降,hMSH2基因水平的改变可能是氯化镉的致癌机制之一。     

VEGF及其受体在上皮性卵巢癌组织中的表达及预后

目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）及其受体血管内皮生长因子受体1（VEGFR1）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）在上皮性卵巢癌中表达及临床预后意义。方法 采用SP免疫组化法检测139例不同卵巢组织VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2的表达及在上皮性卵巢癌组织中的共表达情况,并结合临床资料进行统计分析。结果 VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌组织中的染色强度明显高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织;并且VEGF及其受体在上皮性卵巢癌组织中的表达与临床分期、腹水量的差异均具有统计学意义（χ^2=4．207,P＝0．034;χ^2=7．432,P＝0．007）;在相关分析中高表达的VEGF与VEGFR2（r＝0．316,P＜0．05）、VEGFR1与VEGFR2（r＝0．415,P＜0．05）均存在相关性;VEGF及其受体三者共高表达较非共高表达患者的5年生存率差异具有统计学意义（χ^2＝4．043,P＝0．044）。结论 高表达和共表达VEGF及其受体VEGFR1和VEGFR2的患者可能存在较差预后,并且三者共表达及高表达可作为一项指导临床应用抗肿瘤血管生成药物（ Bev）靶向治疗的疗效预测分子。     

不溶性镍化合物对人肺癌A549细胞镍含量影响

目的 探讨不溶性镍化合物对细胞中镍含量的影响.方法 用不同浓度的水不溶性氧化镍(NiO)和二硫化三镍(Ni3S2)分别处理人肺癌A549细胞,用原子吸收分光光度计(AAS)检测染毒48 h后细胞内镍含量并估算其摄取率.结果 经过终浓度为0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3μg/cm²的Ni3S2处理后,平均每105个细胞中含镍量为0.002 4,0.077 1,0.015 7,0.226 8,0.475 4,0.7,0.988 2μg;终浓度为0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16μg/cm²的NiO处理后,平均每105个细胞中含镍量为0.003,0.07,0.108,0.255,0.628,1.543,6.571μg;相同浓度(0.5,1.0,2.0μg/cm²)镍颗粒物处理下,Ni3S2处理组细胞镍含量分别为(0.077 1±0.006 6,0.157 4±0.019 0,0.475 4±0.112 1)μg/105个细胞,均高于NiO处理组(0.070 1±0.003 2),(0.108 1±0.015 9),(0.255 2±0.041 5)μg/105个细胞,各剂量组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 人肺癌A549细胞对不溶性镍化合物的摄取与其染毒剂量成正比,且相同浓度下对NiS的摄取率高于NiO.     

Ce(SO4)2对玉米根尖细胞遗传毒性和细胞毒性的研究

[目的]研究Ce(SO4)2对玉米根尖细胞的遗传毒性和细胞毒性。[方法]用不同梯度浓度的Ce(SO4)2对玉米根尖细胞进行染毒处理，检测玉米根尖细胞的微核率和有丝分裂指数。[结果]当Ce(SO4)2≥10mg/L时，玉米根尖细胞的微核率显著上升，当Ce(SO4)2达到1000mg／L时，玉米根尖细胞的有丝分裂指数显著下降。[结论]提示一定浓度的Ce(SO4)2对玉米根尖细胞具有一定的遗传毒性和细胞毒性。     

错配修复基因在氯化镉致16HBE细胞转化中作用

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中错配修复基因hMSH2和hMLH1的mRNA和蛋白动态变化情况。方法用反转录一聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5,15,35代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因和hMLH1基因的mRNA和蛋白的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,至第35代细胞后表达明显下降(P<0.01);而hMLHl基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中无明显变化差异(P>0.05)。结论错配修复基因hMSH2表达水平的下调可能是镉化物分子致癌的重要机制。