大鼠脑缺血再灌注损伤中星形胶质细胞活化与热休克蛋白70表达上调的关系

业已证实 ,脑缺血性损伤可诱导热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达上调。HSP70作为分子伴侣参与了细胞修复过程 ,在脑缺血损伤中具有神经保护作用。以往认为 ,HSP70主要由神经元及小胶质细胞产生 ,近年来研究发现 ,脑缺血时 ,活化的星形胶质细胞也可表达HSP70。但有关二者关系的报道极少 ,我们观察了可逆性大脑中动脉阻塞后再灌注不同时点HSP70与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达变化 ,初步探讨二者在脑缺血再灌注损伤中的关系及意义。　　一、材料和方法　　 1 动物分组 :健康雄性Sprague Dawley大鼠共 4 2只 ,体重 2 …     

补阳还五汤对动脉粥样硬化大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨补阳还五汤对早期动脉粥样硬化（动粥）大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：50只雄性Wistar大鼠随机分为（1）正常对照组，（2）非高脂手术组，（3）高脂假手术组，（4）高脂手术组，（5）补阳还五汤组5组，其中（3）、（4）、（5）组采用高脂饲料喂养，（5）组每天补阳还五汤灌胃，36例w后采用双侧颈动脉结扎，脑缺血45min，再灌注3d后检测血脂水平，脑组织丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）的变化以及主动脉，脑组织的病理改变。结果：（1）高脂饲料喂养36w能形成早期动脉粥样硬化；（2）高脂手术组脑组织损伤较非高脂手术组严重且有显著性差异；（3）补阳还五汤能降低血脂水平，提高脑组织NOS、SOD、GSH－Px活性，并使病理改变明显减轻，结论：动脉粥样硬化可加重脑缺血再灌注损伤，补阳还五汤对粥大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨补阳还五汤(BHD)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用公式法计算脑组织含水量,TTC染色法计算脑缺血梗死灶,原位末端标记法观察细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫组化检测凋亡相关基因bcl2、Bax蛋白表达的变化。结果与缺血再灌组相比,BHD组脑水肿和脑缺血梗死区减轻,细胞凋亡指数和Bax蛋白表达明显增加,bcl-2蛋白表达明显减少(P均<0.01)。结论BHD对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

补阳还五汤对脑缺血治疗作用机制

<正>现代研究表明,补阳还五汤对脑缺血患者具有神经保护作用,可有效改善其神经行为学功能、减少脑缺血面积、降低梗死率和缺血再灌注损伤〔1〕;并可以刺激神经增殖、调节血管内皮生长因子的表达〔2〕,促进神经细胞的生长和分化、并抑制神经细胞凋亡〔3〕。本文就近年来有关补阳还五汤改善脑缺血作用机制的研究进行综述。1补阳还五汤的有效成分及其作用靶点由于补阳还五汤为复方制剂,且其7种组成成分各自的生     

补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的 观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响并探讨其影响机制。方法 48只SD大鼠随机分为3组：①假手术组（n=16）；②对照组（n=16）；③补阳还五汤组（n=16）。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，再灌注48h后干湿重法测定缺血脑组织含水量，经股静脉注射伊文思蓝观察血脑屏障的通透性，取缺血脑组织提取总RNA和蛋白质分别应用逆转录聚合酶链反应和Western杂交技术检测基质金属蛋白酶9的转录及表达情况，同时电镜观察血脑屏障的变化。结果 脑缺血再灌注48h，对照组缺血侧脑含水量明显升高，伊文思蓝含量也明显增加，电镜观察发现血脑屏障破坏严重，基质金属蛋白酶9的转录与表达也较假手术组显著增加；而应用补阳还五汤处理的大鼠其缺血脑组织含水量明显减少，缺血侧伊文思蓝含量较对照组也明显降低（P〈0．05），同时电镜观察到血脑屏障的破坏减轻，而基质金属蛋白酶9mRNA和蛋白表达水平也明显低于对照组。结论 对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用，其作用机制可能是通过抑制基质金属蛋白酶9的转录和表达来实现的。     

补阳还五汤防治脑缺血损伤的研究进展

时5年来补阳还五汤防治脑缺血损伤的治疗方法和研究进行综述。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用。方法选择雄性清洁级SD大鼠50只分为假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,每组10只。假手术组仅钝性分离右颈总动脉(CCA),右颈内动脉及右颈外动脉,但是不结扎CCA,其余4组均构建大鼠中动脉阻塞模型。低、中、高剂量组大鼠灌胃给予6.5、13.0、26.0g/(kg·d)补阳还五汤,其余2组大鼠给予等量生理盐水,连续灌胃14d。评估各组脑神经功能损伤,检测脑梗死面积、缺血侧脑细胞凋亡率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)3、8、9活性及丙二醛水平,采用Western blot检测Bax和Bcl-2表达。结果模型组神经功能损伤评分、脑梗死面积、脑细胞凋亡率、丙二醛、caspase-3、8、9活性及Bax表达水平明显高于假手术组、低、中、高剂量组,SOD、GPx活性及Bcl-2表达水平明显低于假手术组、低、中、高剂量组,差异有统计学意义(P0.01)。低、中、高剂量组神经功能损伤评分、脑梗死面积、脑细胞凋亡率、丙二醛、caspase-3、8、9活性呈明显降低趋势,Bcl-2(0.27±0.03vs 0.53±0.05 vs 1.19±0.12)、SOD[(3.41±0.36)U/g vs(5.28±0.62)U/g vs(7.89±0.83)U/g]、GPx活性[(12.53±1.35)U/mg vs (16.58±1.85)U/mg vs (20.33±2.45)U/mg]呈明显升高趋势(P0.05)。结论补阳还五汤可通过抑制脑神经细胞凋亡及抗氧化应激来保护脑缺血再灌注大鼠脑损伤。     

补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注小鼠的神经功能与脑梗死体积的影响

目的研究补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经功能与脑梗死体积的影响。方法选择8月龄C57BL/6型小鼠90只随机分为假手术组,模型组,补阳还五汤组,依达拉奉组,补阳还五汤+依达拉奉联合组(联合组),每组18只,采用改良线栓法建立小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。分别在术后1、3、7d观察各组小鼠神经功能缺损评分;比较术后7d各组脑梗死体积大小。结果假手术组神经功能缺损评分0分。模型组较假手术组明显升高(P0.05)。补阳还五汤组、依达拉奉组和联合组3、7d神经功能缺损评分均较1d显著减少(P0.01);联合组神经功能缺损评分[1d(6.35±0.46)分、3d(3.03±0.73)分、7d(0.40±0.24)分]减少最明显(P0.01)。7d时与模型组比较,依达拉奉组、补阳还五汤组和联合组脑梗死体积均明显减少[(28.31±4.52)%、(27.49±4.02)%和(18.92±3.11)%vs(38.75±5.63)%,P0.05],联合组脑梗死体积减少最明显(P0.01)。结论补阳还五汤与依达拉奉联合用药可改善小鼠神经行为缺损症状,并减少脑梗死体积。     

补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法 50只小鼠随机分假手术组,模型组,补阳还五汤(BYHWD)组,依达拉奉(ED)组,补阳还五汤+依达拉奉(BYHWD+ED)组,每组再随机分成缺血再灌注后1、7 d组。首先制备小鼠大脑中动脉缺血模型,TUNEL法观察神经细胞凋亡率,应用免疫组化方法观察各组大脑皮质Bcl-2、Bax、Caspase-3表达阳性细胞数。结果与模型组比较,BYHWD组、ED组及BYHWD+ED组均能明显降低脑组织凋亡指数(P<0.01),升高Bcl-2阳性表达,降低Bax、Caspase-3阳性表达(P<0.01),两药联用变化趋势更明显。结论补阳还五汤与依达拉奉联用能降低脑缺血再灌注损伤模型鼠脑组织细胞凋亡基因Bax、Caspase-3的表达,增加具有神经元保护作用的Bcl-2基因表达,从而抑制神经细胞凋亡,加速神经功能的恢复,协同发挥脑保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达及与细胞的凋亡

热休克蛋白 70 (Hsp70 )为细胞受到缺血损害的一个敏感指标 ,又与缺血耐受有关〔1〕。但 Hsp70与细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌注后的时间表达却鲜有报道。本实验通过测定MCAO再灌后不同时间 Hsp70表达和 TUNEL阳性细胞以探讨缺血半暗带区神经细胞的动态变化。1　材料与方法1.1　 动物　成年 Wistar雄性大鼠 30只 ,体重 2 5 0～ 30 0 g(山东省医科院提供 )。随机分为再灌注后 2 h,6 h,12 h,2 4h,48h,72 h组 ,每组 5只 ,随机抽取 2只作为假手术组。1.2 　 实验方法1.2 .1　 MCAO模型建立　用 Zea- longa〔2〕颈外动脉线栓法 :3.5 %水和…     

脑缺血大鼠脑组织热休克蛋白70的表达

目的　研究脑缺血时大鼠脑组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及不同脑缺血时间对HSP70表达的影响。方法　选取雄性SD大鼠 4 0只 (体重约 2 0 0g)随机分为 4组 ,每组 10只。其中一组为正常对照组 ,一组为脑缺血 2min组 ,一组为脑缺血 6min组和脑缺血 12min。实验后取大鼠脑组织匀浆并用WesternBlot法测HSP70的表达。结果　脑缺血组脑组织HSP70的表达明显增高 ,其中脑缺血 6min和 12min组与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5) ;脑缺血 12min与6min相比亦有显著性差异 (P <0 0 5)。结论　HSP70在脑缺血时的脑组织存在高表达 ,脑缺血时间越长 ,HSP70的表达越高。     

热休克蛋白70心肌保护的研究进展

热休克蛋白是细胞在应激条件下产生的一类高度保守的蛋白质,通过稳定细胞内变性的蛋白质;减轻细胞内的离子紊乱;保护血管内皮细胞的功能;干扰应激所启动的细胞凋亡程序等方面来发挥心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。现对热休克蛋白及其心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及机制进行综述。     

黄芪预处理大鼠心肌保护效应的实验研究

目的 本文研究黄芪预处理对大鼠心肌的保护效应以及心肌保护效应与热休克蛋白之间的关系。方法 用在体大鼠复制缺血再灌注损伤模型,将大鼠随机分成对照组、缺血再灌组、黄芪组三组、观察心肌组织学、SOD酶的活性、MDA含量变化、心肌梗死范围和HSP70蛋白的表达的变化。结果 黄芪预处理组明显减少梗死面积和减少MDA的产生,保护细胞中SOD酶活性和超微结构,HSP70表达水平明显高于对照组及缺血再灌注组。结论 黄芪处理可减少缺血再灌注心肌损伤,并能诱导心肌细胞HSP70的表达。     

脑缺血后可逆性蛋白磷酸化水平变化及电刺激对其的影响

目的研究脑缺血后神经元损伤过程中可逆性蛋白磷酸化水平变化及电刺激对其的影响。方法采用改良Longa线栓法制成永久性大脑中动脉闭塞动物模型,运用免疫荧光染色技术,检测神经颗粒素磷酸化水平(p-Ng)以及钙调神经磷酸酶(CaN)在脑缺血及电刺激不同时间内的变化情况。结果脑缺血3hp-Ng即开始增加,脑缺血1d后p-Ng水平达到高峰,缺血组为120.7±4.9,电针组为100.2±6.0(P<0.05);而缺血6hCaN开始发挥去磷酸化作用,至缺血3d后CaN免疫水平达到高峰,缺血组为44.0±3.7,电针组为48.9±3.3(P<0.05);随缺血时间延长,其免疫活性渐丧失。结论急性缺血性脑卒中,蛋白磷酸化/去磷酸化作用参与了缺血神经元损伤过程。电针刺激有可能通过维持蛋白磷酸化/去磷酸化的平衡,而发挥保护缺血神经元损伤的作用。     

高血压对局部脑缺血及缺血后再灌流梗塞灶的影响

目的观察脑缺血后再灌流对脑梗塞灶的影响。方法用氯化三苯四氮唑（ＴＴＣ）染色技术结合电子计算机图像分析系统定量测定肾血管性高血压大鼠（ＲＨＲ）和ＳＤ大鼠（ＳＤＲ）局部脑缺血及脑缺血后再灌流梗塞灶体积。结果发现持续缺血组及缺血后再灌流组ＲＨＲ的梗塞体积分别为２１８．７３±３１．１２ｍｍ３和２０１．２９±３３．７１ｍｍ３而ＳＤＲ持续缺血组及缺血后再灌流组分别为１３１．６１±２０．８８ｍｍ３和１１９．４０±２７．１４ｍｍ３，ＲＨＲ和ＳＤＲ梗塞体积均存在显著差异。结论长期慢性高血压引起的脑侧支循环障碍对脑缺血及缺血后再灌流梗塞灶有重要影响。     

亚低温对大鼠急性局灶性脑缺血后脑组织内热休克蛋白70表达的影响

目的探讨亚低温对大鼠急性局灶性脑缺血后脑组织内热休克蛋白(Hsp70)表达的影响及意义。方法将64只W istar大鼠随机分为亚低温组及对照组,各组再分为4个亚组,每亚组8只,参照改良的Longa栓线法构建大鼠局灶性脑缺血模型,亚低温组大鼠给予亚低温治疗,而对照组不作亚低温处理。分别于缺血后3h,24h,48h,72h将大鼠处死,用免疫细胞化学技术检测半暗带Hsp70,进行定量分析。结果再灌注3h大鼠脑内即可见Hsp70蛋白表达,随后表达逐渐增加,均在再灌注24h达到峰值,再灌注48h,72h表达逐渐降低,在梗死灶周围的“半暗带”区大脑皮质以及对损伤比较敏感的海马、尾状核和丘脑的部分区域表达最强。但亚低温组Hsp70的表达在各时间点均较对照组强,与对照组同时段比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论亚低温使大鼠急性局灶性脑缺血后脑组织内Hsp70表达增加,具有脑保护作用。     

Reactivity of Brain Parenchymal Arterioles after Ischemia and Reperfusion

Objective: We investigated the effect of ischemia and reperfusion on the vasoactive function of penetrating brain parenchymal arterioles under pressurized conditions. Methods: Parenchymal arterioles (<50 μm in diameter) from within the middle cerebral artery territory were dissected from male Wistar rats that were either nonischemic control (n = 16) or ischemic for one hour and reperfused for 24 hours (n = 16) by temporary filament occlusion of the middle cerebral artery. Arterioles were mounted on glass cannulas within an arteriograph chamber that allowed for the measurement of lumen diameter and control over intravascular pressure. Results: After one hour of equilibration at 10 mmHg, spontaneous myogenic tone developed in both groups of animals, constricting control arterioles from 69 ± 9 to 49 ± 11 μm (29.5 ± 10.2%) and ischemic arterioles from 66 ± 9 to 45 ± 11 μm (33.1 ± 14.1%); p > 0.05. Contraction to the nitric oxide synthase inhibitor nitro‐L‐arginine (10^–4M) was significantly diminished in ischemic arterioles, constricting only 3.2 ± 3.3 vs. 15.6 ± 12.5% in control arterioles (p = 0.017). Both groups dilated to nifedipine; however, the response was significantly diminished after ischemia. The EC₅₀ for nifedipine in control arterioles was 3.54 ± 0.11 vs. 9.90 ± 0.71 nM for ischemic arterioles (p = 0.024). Conclusions: These findings demonstrate that functional changes occur in brain parenchymal arterioles after ischemia and reperfusion, a result that may significantly influence stroke outcome by altering blood flow to an ischemic region.     

大鼠脑缺血后可逆性蛋白磷酸化水平变化的实验研究

目的：研究大鼠脑缺血后可逆性蛋白磷酸化水平的变化。方法：采用线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型,免疫荧光染色法检测神经颗粒素（Ng）、磷酸化Ng（p-Ng）和钙调神经磷酸酶（CaN）在脑缺血不同时间的变化情况。结果：脑缺血3h p-Ng开始增加,1d后达高峰（P〈0．05）,随着缺血时间的延长,P-Ng水平逐渐下降且不再恢复;缺血6hNg总蛋白无明显变化,缺血1d后呈下降趋势;脑缺血6hCaN开始发挥去磷酸化作用,3d时达到高峰（P〈0．05）,以后随着缺血时间的延长,CaN的去磷酸化作用逐渐丧失。结论：急性脑缺血后神经元内的可逆性蛋白磷酸化水平发生失衡,蛋白磷酸化／去磷酸化作用参与了缺血性神经元损伤过程。     

血清热休克蛋白70与急性心肌梗死后心力衰竭的相关性

血清热休克蛋白70是一种高度保守的分子蛋白,其在应激时总被高度诱导。研究发现在动脉粥样硬化斑块中有热休克蛋白70的表达,且抗原递呈细胞也高度激活。热休克蛋白70与冠心病密切相关,且与冠状动脉病变程度有关,新近国外研究报道,热休克蛋白70在急性心肌梗死后心力衰竭患者中高度表达。现综述热休克蛋白70与急性心肌梗死后心力衰竭的相关性,热休克蛋白70有望成为急性心肌梗死后心力衰竭的新诊断标记物及判断病情的重要指标。     

强制性使用运动疗法对脑缺血大鼠生长相关蛋白43和突触素表达的影响

目的观察强制性使用运动疗法(CIMT)对脑缺血大鼠生长相关蛋白43(GAP-43)、突触素表达的影响。方法健康SD大鼠90只,将其随机分为假手术组、模型组和CIMT组,各30只,各组再随机分为缺血后2、4、8周时处死的3个亚组。假手术组大鼠不做任何处理,模型组和CIMT组大鼠进行左侧大脑中动脉闭塞局灶脑缺血模型处理,且CIMT组大鼠在模型成功7 d后进行CIMT干预。时间终点采用原位杂交技术及免疫组化技术分别检测脑梗死区周围皮质GAP-43、突触素mRNA及蛋白的表达。结果脑缺血模型术后2、4周时,CIMT组和模型组GAP-43 mRNA及蛋白表达高于假手术组,CIMT组高于模型组(P0.05)。脑缺血模型术后8周时,CIMT组GAP-43 mRNA及蛋白表达高于模型组和假手术组(P0.05);模型组和假手术组GAP-43 mRNA及蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。CIMT组大鼠突触素mRNA及蛋白表达均高于模型组和假手术组,模型组在脑缺血模型术后2、4周时突触素mRNA及蛋白表达高于假手术组(P0.05);脑缺血模型术后8周时模型组突触素mRNA及蛋白表达与假手术组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 CIMT能促进梗死灶周围皮质GAP-43及突触素的表达,促进脑缺血后的突触发生与重建。