湖南省啮齿动物携带汉坦病毒的分子流行病学研究

目的研究湖南省啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别。方法采用IFA法检测鼠肺中HV抗原;用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的部分S和M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型。结果在湖南省HV流行的地区共捕获啮齿动物344只,其中6份标本HV抗原阳性,病毒携带率为1.74%。对扩增出的部分S与M片段的核苷酸序列分析表明,5份标本中的病毒为汉城型HV(SEOV),1份为汉滩型HV(HTNV)。用S(620～990 nt)与M片段G2区(2001～2301 nt)核苷酸序列所构建的系统进化树显示,湘乡褐家鼠、黄胸鼠及黄毛鼠携带的病毒均为SEOV的S4亚型;宁远褐家鼠携带的病毒为SEOV的一个新亚型;石门小家鼠携带的病毒为HTNV的H4亚型。结论湖南省为混合型HV疫区,以汉城病毒为主,并具有宿主多样性。     

葫芦岛市居民区褐家鼠携带的汉坦病毒分析

目的通过对汉坦病毒的监测分析,掌握葫芦岛市居民区鼠类中的汉坦病毒流行情况,为制定人间汉坦病毒的预防控制措施提供依据。方法用鼠笼捕获小动物,采用间接免疫荧光法（IFA）检测小动物肺中的汉坦病毒抗原,用RT？PCR进行基因分型。结果在2005-2006年选取葫芦岛地区9个不同地点的居民区和2个野外地点捕鼠,共捕获褐家鼠254只,小家鼠17只,黑线姬鼠5只,褐家鼠带病毒率为4.72%,小家鼠为5.88%。提取汉坦病毒抗原阳性鼠肺组织中的病毒RNA,从褐家鼠中共扩增出9株汉坦病毒,基因分型全部为汉城病毒,并且分离到1株病毒。而从小家鼠和黑线姬鼠中未扩增到病毒。结论葫芦岛市居民区的鼠类以褐家鼠为主,其携带的病毒属于汉城型。     

浙江省慈溪市啮齿动物中汉坦病毒分子流行病学研究

目的 研究浙江省慈溪市啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别.方法 采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增阳性样品中HV的部分S片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型.结果 在慈溪市肾综合征出血热(HFRS)疫点共捕获啮齿动物243只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中4只为褐家鼠,3只为黄胸鼠,病毒携带率为2.88%.用汉城型病毒(SEOV)特异性引物从6份HV抗原阳性样品中扩增出部分S片段(620～999 nt)并测定了序列.对扩增出的部分S片段核苷酸序列分析表明,6株病毒与现有的SEOV有最高的同源性,均为SEOV.用部分S片段核苷酸序列所构建的系统进化树显示,6株病毒构成两个单元支,其中由褐家鼠携带的3株病毒与BjHD01株病毒的亲缘关系最近,分在同一分支,由黄胸鼠携带的3株病毒构成另一分支,与L99、R22及Hb8610株的亲缘关系较近.结论 慈溪市的褐家鼠与黄胸鼠分别携带一种不同亚型的SEOV,表现出SEOV在同一地区的遗传多样性,并支持宿主与汉坦病毒共进化的理论.     

浙江省温州市啮齿动物中汉坦病毒的分子流行病学研究

目的 研究浙江省温州市啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别,为该地区肾综合征出血热(HFRS)的预防控制提供科学依据.方法 采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原;用RT-PCR法扩增阳性样品中HV的部分S片段及部分M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型.结果在温州市HFRS疫区共捕获啮齿动物96只,在6份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中4只褐家鼠,1只黄胸鼠与1只黄毛鼠,病毒携带率为6.3%.用汉城病毒(SEOV)特异引物从其中5份HV抗原阳性样品中扩增出部分S片段(620～999nt)及部分M片段(2001～2301nt)并测定序列.对扩增出的部分S及M片段的核苷酸序列分析发现,5株病毒与现有的SEOV有高同源性,均为汉城型HV.但在用部分S片段及部分M片段核苷酸序列所构建的系统进化树上,5株病毒的聚集模式不同.结论温州市的褐家鼠、黄胸鼠、黄毛鼠均携带汉城型HV,并可能发生基因片段的重排.     

山东省汉坦病毒分子流行病学研究

目的探讨山东省汉坦病毒（HV）的分子流行病学特点。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及核苷酸序列测定技术,对肾综合征出血热（HFRs）监测点的阳性鼠肺标本进行目的基因扩增并测序,与国内外的HV毒株进行同源性分析及系统发生树分析。结果有15份标本扩增出汉城（SEO）型S、M片段,对其中10份扩增片段进行序列分析认为均为SEO型HV,S片段之间的同源性≥96.3％,其推导的氨基酸序列同源性（JN5-153S和DY1S除外）≥96．8％;M片段之间及与山东省以往分离的ZB8同源性≥97．5％,其推导的氨基酸序列同源性为98．6％～100％。结论近年来山东省流行的HV仍以SEO型S3亚型为主。同一地区或地理位置相邻的地区病毒基因组同源性较高,具有明显的地区聚集性,基因型别较为稳定。     

浙江省丽水地区2株汉坦病毒分离株的型别鉴定和基因差异研究

目的 从浙江省丽水地区肾综合征出血热(HFRS)疫区阳性鼠肺标本中分离汉坦病毒(HV),并对丽水分离株进行分子生物学鉴定,分析M和S片段基因序列以确定毒株的型别和基因差异程度.方法 收集宿主动物标本,采用直接免疫荧光检测鼠肺标本HV抗原.将HV抗原阳性的鼠肺标本接种Vero-E6细胞,分离HV.提取病毒总RNA,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒M和S基因全片段,克隆入质粒载体,纯化后测定序列,并同HV其他病毒株进行比较.结果 成功分离到2株HV,扩增出2株病毒的M和S全片段并测定了序列,经对核苷酸序列分析表明,2株病毒与现有的HTNV有最高的同源性,均为HTNV,但与国内外其他的HTNV核苷酸差异高达13.4%～20.7%和10.3%～16.1%.用M和S片段核苷酸序列所构建的系统进化树显示,2毒株分在HTNV发生群,与HTNV的Z10、A9、Z5病毒株亲缘关系最近,但独自构成一进化支.结论 浙江丽水分离株可以定型为HTN型病毒,与国内外其他的HTN型病毒基因差异较大.     

北京市城区鼠间汉坦病毒感染的流行病学研究

目的了解北京城区中心地带鼠间汉坦病毒（Hv）感染状况及其病毒型别差异。方法选取北京城区某方圆约1km两街区之内的食物资源丰富、场所隐蔽的中、小餐饮行业、蔬菜集贸市场及周边垃圾堆、卫生死角等生态环境，从2003年12月至2004年11月每月连续采用夹夜法捕鼠，计算鼠密度和鼠种构成。应用间接ELISA法检测鼠血清IgG抗体；针对汉坦病毒M基因部分片段设计汉城型汉坦病毒（SEOV）特异性引物，应用RT-PCR法检测宿主动物携带HV情况，阳性标本直接测序。利用Excel和SPSS软件分析宿主动物HV感染的动态特征。最后用DNASTAR软件对获得序列进行比较分析。结果共捕获啮齿动物229只，平均鼠密度6．41％（229／3570），褐家鼠和小家鼠分别为餐饮业、农贸市场生境的优势鼠种。褐家鼠血清抗体阳性率3．51％（6／171），带病毒率为0．58％（1／171）；小家鼠血清抗体阳性率为6．90％（4／58），带病毒率为172％（1／58）。病毒检出率以11、12月最高，抗体水平冬春季（1、4月）最高，与春季人群肾综合征出血热（HFRS）流行季节基本一致。2份扩增阳性标本（分别来源于小家鼠和褐家鼠）均为SEOV，差异为5．40％，系统发育分析显示他们位于2个不同的较小分支，但均位于Z37支系。结论北京城区2种主要的HV宿主在一些鼠害重点行业密度仍较高，虽然HV基础感染率不高，但持续存在，为春季人群HFRS发病高峰的重要影响因素。来自2个不同宿主的HV基因有一定的差异。小家鼠的传播作用有所加强，应予重视。     

锦州市啮齿动物汉坦病毒分子流行病学特征分析

目的 了解辽宁省锦州市啮齿动物中鼠种构成、带毒率、汉坦病毒(HV)流行情况及病毒分型。方法 采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增阳性样品中的部分M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型。结果 2008-2013年锦州市出血热疫区捕鼠1 838只,分属2科4属5种,病毒携带率为4.24%(78/1 838);各年之间鼠肺带毒率有统计学意义(χ²=13.579,P=0.019,P<0.05);部分M片段序列分析表明, 11株病毒与汉城病毒(SEOV)核苷酸序列同源性为96.2%～100%,而与汉滩型病毒(HTNV)同源性仅为70.6%～71.2%,系统进化树显示检测阳性的11株SEO起源相同,与BjHD01株病毒的亲缘关系最近。结论 锦州地区HV优势毒株为SEO型,变异较小,基因型别较为稳定,并有明显的地区聚集性。     

云南省楚雄州汉坦病毒宿主动物及分子流行病学研究

目的 掌握汉坦病毒(HV)在云南省啮齿动物中的流行情况及其遗传特征.方法 采用笼夜法捕鼠,鼠肺标本用直接免疫荧光法检测HV抗原,用RT-PCR法检测HV核酸及分型,对产物进行序列测定,用PHYLIP软件包进行系统发生分析.结果 2005-2006年在云南省楚雄州10个县(市)居民区共捕获鼠类4属8种1421只,其中褐家鼠1056只,构成比高达74.31%,其次为黄胸鼠(19.70%).检测鼠肺组织1029份,HV抗原阳性53份,总带病毒率为5.15%,带病毒鼠种为褐家鼠(5.08%,38/748))、黄胸鼠(5.97%,12/201)、大足鼠(7.69%,2/26)和斯氏家鼠(6.25%,1/16).HV汉城型(SEO)核酸检测阳性21份(褐家鼠15份,黄胸鼠4份,大足鼠2份).获得的12个病毒S片段核苷酸序列与GenBank中国SEO型病毒R22、L99和HLD65株同源性较高,为87.1%～99.7%;与汉滩型(HTN)76-118株同源性仅为64.4%～69.1%.系统进化分析显示,楚雄州12个病毒S片段核苷酸序列与SEO型亲缘关系较近,与HTN型及其他型HV相距较远,证实这12份病毒标本均为SEO型病毒,并可分S1和S3两个亚型.结论 首次证实楚雄州10个县(市)广泛存在以褐家鼠为主要传染源的HFRS家鼠型疫源地及SEO型病毒的流行.分析发现SEO型不同亚型病毒的分布有其地域特点和独立性.     

褐家鼠种群特征与汉坦病毒感染的关联分析

目的 了解汉坦病毒（HV）优势宿主褐家鼠感染HV的相关危险因素。方法 采集北京不同地区、生境捕获的褐家鼠，用统一的调查表记录宿主动物及环境特征，采用针对HVM基因片段的巢式RTPCR法检测其带病毒情况，运用SPSS软件多因素非条件logistic回归分析。结果 在所调查的10种相关因索中，6种与褐家鼠HV感染相关。多因素非条件logistic回归分析结果显示：成年鼠、处于繁殖期、体表皮肤有伤痕是褐家鼠HV感染的危险因素。雄性睾丸位于阴囊内与雄性HV感染有非常高的危险度（OR=30．92）。发情期雄性个体的体表疤痕率高于非发情期个体（P=0．049），两者的交互作用与HV感染相关有统计学意义（P〈0．001）。结论 从现场多途径观察研究证实：HV在褐家鼠中存在平行传播，雄性的侵犯行为促进HV的传播。     

东南沿海地区汉坦病毒的遗传进化分析

目的 对浙江、福建省及上海市东南沿海地区汉坦病毒的基因进行比较.方法 收集浙江、福建省及上海市汉坦病毒部分M基因序列,应用Mega 4.0和DNAStar软件包进行系统发生分析,以邻位相连法(NJ)构建系统发生树,分析东南沿海地区浙江、福建省及上海市汉坦病毒的基因差异,分析采用1000个多序列组.结果 经对浙江、福建省及上海市若干株汉坦病毒基因的序列比较与系统进化分析,浙江省分离的同型别毒株的基因序列同源性高于福建省与上海市的分离毒株,而浙江省同地区分离株的核苷酸同源性更高,地区接近的分离株系统进化分支的分布也大部分更靠近.汉滩型病毒(HTNV)福建株的ZH53和汉城型病毒(SEOV)浙江建德株Gou3和ZJ5与本研究同型别的其他株及国际标准株的核苷酸同源性较低,分别为82.7％～86.3％和84.0％～85.3％,而且分别在HTNV和SEOV发生群中构成一独立分支.浙江省从田鼠中分离到SEOV,产生宿主“溢出”现象.结论 浙江、福建省及上海市东南沿海地区汉坦病毒的基因差异和亲缘远近关系主要表现在地区性,显示出高度的地理聚集现象,浙江省建德地区和福建省分别存在SEOV和HTNV的特殊亚型病毒.     

珠海口岸鼠间肾综合征出血热病毒的分子流行病学研究

[目的]了解珠海口岸地区鼠间肾综合征出血热汉坦病毒（HV）感染状况及其病毒型别。[方法]选取珠海8个口岸地区，从2006年5月-2007年4月采用鼠笼法捕鼠，计算鼠密度和鼠种构成；应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鼠血清汉坦病毒IgG抗体；应用HV型特异性引物进行RT—PCR扩增及核苷酸序列测定，并进行基因分型。[结果]共发现6种鼠类，分别为褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠、黄毛鼠、板齿鼠、臭嗣鼯，以臭莉鼯为优势鼠种群（38．3％），其次为褐家鼠（26-3％）；鼠密度为4．10％；鼠血清抗体阳性率为2．65％（3／113）；鼠肺带病毒率为1．43％（2／140）；从2只褐家鼠的肺组织检测出汉城型汉坦病毒。[结论]珠海口岸鼠间存在着汉城型汉坦病毒，应继续加强口岸的肾综合征出血热预防控制工作的力度。     

辽宁省葫芦岛地区鼠类汉坦病毒的分离与鉴定

目的研究葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的感染流行情况以及病毒的型别.方法采用夹夜法捕捉鼠类,间接免疫荧光法检测鼠肺中的汉坦病毒抗原,阳性较强的标本接种到Vero E6细胞分离病毒,RT-PCR对分离的病毒与阳性样品扩增核苷酸片段并测序,构建系统发生树进行分型与系统发生分析.结果在200份鼠肺标本中共检测到11个样品阳性,阳性率为5.5%.选择阳性较强的标本,接种到Vero E6细胞并连续传代后分离到3株病毒.用S片段（620～999 nt）与M片段G1区（180～580 nt）的核苷酸构建的系统发生树,结果表明葫芦岛分离的3株病毒均为S3亚型.用G2区的2003～2302 nt的核苷酸序列构建的系统发生树将来自不同地区的SEO型病毒可分为7个亚型,其中从葫芦岛地区分离的3株病毒与北京地区分离株CP211、ch302、dc501和山东省分离株SD10、SD227株的亲缘关系最近.结论葫芦岛地区鼠类中汉坦病毒的携带率较高,主要流行S3亚型SEOV.     

北京不同生境鼠类及其感染汉坦病毒的调查

目的了解北京不同生境鼠形动物及其感染汉坦病毒(HV)的空间分布。方法选取北京5个区(县)9类生态环境．于2002年8月至2003年11月春、秋季节采用夹夜法捕获以鼠类为主的HV宿主。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其携带HV的情况。利用SPSS软件分析宿主及其自然感染HV的空间分布特征。结果共捕获宿主动物387只，平均密度6．67％。6个调查点9类生境的鼠形动物群落构成(多样性、均匀度和优势度)特征不同、生物分配量不同，以褐家鼠在食堂、菜地的生物分配量最高，野栖型生境大林姬鼠的生物分配量最大，高于黑线姬鼠的生物量。携带的HV均为汉城型(SEC))，带病毒宿主主要为褐家鼠、小家鼠，分别占97．20％和2．80％。不同调查点阳性率：昌平区11．49％、海淀区西北部7．58％、海淀区中南部6.38％、延庆县3．57％，门头沟区和怀柔区均为0。9种生境的阳性率分别是：11．88％(养殖场)、10．44％(垃圾场)、8．82％(食堂)、8．16％(工地)、6．85％(菜地)、0(农梯田、低矮灌木、山林和民房)。总体家栖性生境和野栖型生境二者之间差异有显著性(X^2=4．658，P=0．031)。结论北京地区不同生境的鼠类密度、群落构成有不同程度的差异；鼠类及其HV感染空间分布广泛，尚未发现新汉滩型HV疫源地。     

福建口岸啮齿类动物携带汉坦病毒分子流行病学调查

目的了解福建口岸汉坦病毒的基因型别和分子特征。方法对2010年福建口岸捕获的鼠形动物进行汉坦病毒检测,对部分阳性标本进行M基因片段序列分析。结果 2010年福建口岸共捕获鼠形动物839只,以褐家鼠为优势鼠种,占58.52%;鼠形动物携带汉坦病毒阳性率5.84%,均为汉城型(SEO),阳性鼠种为褐家鼠和黄胸鼠,阳性率分别为8.96%和3.09%。汉坦病毒检出呈较明显的冬春季高峰。用M基因片段(nt2001～2301)核苷酸序列构建系统进化树,将福建口岸SEOV分为S2和S3两个亚型。结论 S3亚型SEOV为福建口岸优势流行亚型。