小分子化合物H-131抑制胃癌细胞增殖及机制

目的研究小分子化合物H-131对人胃癌细胞SGC7901、BGC823、MKN-45增殖的抑制作用及其相关机制。方法应用不同浓度的化合物H-131处理人胃癌细胞SGC7901、BGC823和MKN-45,采用MTT法检测该化合物对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,Westernblot检测化合物对周期调控蛋白CyclinD1和CDK4表达的影响。结果化合物H-131能够以剂量依赖的方式抑制人胃癌细胞SGC7901、BGC823及MKN-45的增殖,并且能够抑制上述细胞G_1期向S期的转化。Westernblot结果显示H-131能够以剂量依赖的方式下调胃癌细胞SGC7901中CyclinD1和CDK4的蛋白表达水平。结论化合物H-131能够通过下调胃癌细胞中CyclinD1和CDK4的表达水平,抑制胃癌细胞G_1期向S期的转化,进而抑制胃癌细胞增殖。     

miR-134-3p靶向细胞周期蛋白D1抑制胃癌细胞增殖的作用及机制

目的：研究mi R-134-3p靶向细胞周期蛋白D1(CCND1)抑制胃癌细胞增殖的作用及机制。方法：收集手术切除的胃癌组织及癌旁组织,培养正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823,检测mi R-134-3p、CCND1的表达水平;BGC-823细胞分组并转染阴性对照(NC)模拟物或mi R-134-3p模拟物、感染NC腺病毒或CCND1腺病毒,检测细胞增殖抑制率、细胞周期比例、mi R-134-3p及CCND1表达水平;双荧光素酶报告基因验证mi R-134-3p与CCND1的靶向结合;饲养BALB/c裸鼠,皮下注射感染NC腺病毒或mi R-134-3p腺病毒的BGC-823,成瘤后测定移植瘤质量、体积及CCND1表达水平。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中mi R-134-3p表达水平明显降低、CCND1表达水平明显升高(P<0.05),且mi R-134-3p与CCND1呈负相关;与GES-1细胞相比,BGC-823、MGC-803、SGC-7901细胞中mi R-134-3p表达水平明显降低,CCND1表达水平明显升高(P&...     

小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制

目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭。Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭。     

白藜芦醇抑制胃癌BGC823细胞增殖机制的研究

目的观察白藜芦醇(Res)抑制人胃癌BGC823细胞增殖的影响。方法采用MTT法、集落形成实验、流式细胞仪(FCM)和检测端粒酶活性来观察Res作用于人胃癌BGC823细胞48h后对肿瘤细胞增殖和细胞周期的影响。结果1.5、3.0、6.0、12.0、24.0mg/L的Res对人胃癌BGC823细胞生长抑制率分别为19.1%、25.3%、52.6%、67.9%、91.3%,Res处理后BGC823细胞集落形成明显受到抑制,使细胞周期阻滞于S期,端粒酶活性受到抑制。结论Res对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制作用明显。     

茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的分子机制研究新进展

茶多酚具有抗癌作用,但其分子机制尚未明了.近年来,茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的研究取得了许多突破性进展.茶多酚能下调肿瘤细胞DNA拓扑异构酶与DNA引物酶的活性,抑制DNA的复制;茶多酚可明显促进WAF1/p21,KIP1/p27,p16,p18和p53蛋白表达,抑制cyclin D1,CDK4和CDK6表达,使细胞周期发生G1/S与G2/M阻滞;茶多酚也能通过干预AP-1与NF-kB信号转导通路、调控细胞内氧化还原状态、抑制端粒酶活性等多种机制导致肿瘤细胞增殖抑制.     

miRNA-326调控胃癌细胞活力和凋亡的机制及其在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA-326(miRNA-326)调控胃癌细胞活力和凋亡的机制及其在胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用RT-qPCR检测miRNA-326在55例胃癌组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。以胃癌细胞BGC-823为研究对象,RT-qPCR检测miRNA-326在细胞中的表达;将BGC-823细胞随机分为正常对照组(未转染)、mimic-NC组(转染mimic阴性对照)和miRNA-326 mimic组(转染miRNA-326 mimic),以脂质体转染法上调miRNA-326表达后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、p21、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白水平,RT-qPCR检测cyclin D1的mRNA表达,双萤光素酶报告基因检测法验证CCND1 (cyclin D1的基因)是否是miRNA-326的靶基因。结果:miRNA-326在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P 0. 05),其表达与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度及临床分期均有显著相关性(P 0. 05),而与患者的年龄和性别无关;此外,还与患者生存率密切相关(P 0. 05)。miRNA-326在BGC-823细胞中的表达明显低于正常胃黏膜GES-1细胞(P 0. 05)。与正常对照组相比,mimic-NC组细胞中miRNA-326的表达无明显变化,而miRNA-326 mimic组细胞中miRNA-326的表达明显升高(P 0. 05)。与正常对照组相比,miRNA-326 mimic组细胞活力明显减弱,而细胞凋亡增强(P 0. 05);此外,与正常对照组相比,miRNA-326 mimic组细胞中MMP-9、cyclin D1、Bcl-2蛋白及cyclin D1 mRNA表达下降,而p21和cleaved caspase-3的蛋白水平上升(P 0. 05)。然而,mimic-NC组与正常对照组相比,各检测指标的差异均无统计学显著性。与mimic-NC+miR-326 mimics组相比,转染pmiR-CCND1-WT质粒细胞的萤光素酶活性降低(P 0. 05),而转染pmiRCCND1-Mut质粒的萤光素酶活性无改变。结论:miRNA-326在胃癌组织中低表达,可能通过靶向调控CCND1表达而促进细胞活力并抑制细胞凋亡。     

茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的分子机制研究进展

茶多酚具有抗癌作用,但其分子机制尚未明了.近年来,茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的研究取得了许多突破性进展.茶多酚能下调肿瘤细胞DNA拓扑异构酶与DNA引物酶的活性,抑制DNA的复制;茶多酚可明显促进WAF1/p21,KIP1/p27,p16,p18和p53蛋白表达,抑制cyclin D1,CDK4和CDK6表达,使细胞周期发生G1/S与G2/M阻滞;茶多酚也能通过干预AP-1与NF-kB信号转导通路、调控细胞内氧化还原状态、抑制端粒酶活性等多种机制导致肿瘤细胞增殖抑制.     

高迁移率族蛋白1对大鼠纤维母细胞样滑膜细胞增殖周期的调控作用

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对滑膜细胞增殖周期的调控作用及可能机制。方法:将常规培养大鼠滑膜细胞株RSC364细胞随机分为正常对照组和10μg/LHMGB1刺激组,分别培养6、12和24小时,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞中Cyclin D1/CDK4蛋白表达;免疫细胞化学检测PCNA和p21蛋白表达。结果:HMGB1作用至12和24小时,处于G0/G1期的细胞逐渐减少,G2/M期细胞增多,增殖指数升高分别为(68.00±1.42)和(69.61±5.86),与正常对照组(53.83±4.95)和6小时组(55.98±6.34)相比差异具有统计学意义(P0.01或0.05)。PCNA和p21蛋白阳性信号均表达于滑膜细胞核内,随着作用时间延长,PCNA蛋白表达增强,阳性细胞数目逐渐增多,而p21蛋白表达减低,阳性细胞数目逐渐下降。HMGB1作用6～24小时CyclinD1蛋白相对表达量逐渐增加,分别为(1.42±0.02)、(1.65±0.03)和(1.67±0.01),与正常对照组(1.00±0.01)相比差异具有显著统计学意义(P0.01),CDK4蛋白表达量也显著增加分别为(1.26±0.23)、(1.29±0.07)和(1.26±0.03),与正常对照组(1.00±0.0.25)相比差异具有显著统计学意义(P0.01),但随着刺激时间的延长,其表达量无明显变化。结论:HMGB1可能通过上调细胞周期调控蛋白CyclinD1/CDK4的表达,下调细胞周期抑制剂p21的表达,促进滑膜细胞的增殖和分化。     

过表达NOTCH-1抑制TNFα诱导的胃癌BGC-823细胞增殖抑制及凋亡

目的 探讨过表达NOTCH-1对TNFα诱导的胃癌BGC-823细胞凋亡的调节作用。方法 用包含NOTCH-1胞内段的反转录病毒载体转染BGC-823,G-418筛选后获得细胞克隆。TNFα作用于各组细胞后用MTT法、流式细胞术、Western blot及EMSA等检测细胞生长、凋亡、NOTCH-1表达、NF-κB及caspase-3活性。结果 转染ICN的细胞中NOTCH-1及其靶基因HES-1表达强度明显强于对照组。经TNFα作用后,过表达NOTCH-1的胃癌细胞的细胞杀伤率、凋亡率显著低于对照组;过表达NOTCH-1能明显抑制TNFα诱导的caspase-3活化;然而,未发现过表达NOTCH-1对TNFα诱导的NF-κB活化有明显的影响。 结论 过表达NOTCH-1抑制TNFα诱导的BGC-823细胞增殖抑制与凋亡,可能通过非 NF-κB依赖途径抑制caspase-3活化所致。     

大黄素对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和cyclin D1表达的影响,探讨大黄素抑制平滑肌细胞增殖的作用机制。方法 取对数增长期的平滑肌细胞同步于G0期,药物组:加入含37.5mg·L-1大黄素10％胎牛血清的培养液,对照组:仅加入10％胎牛血清的培养液;作用12、24、36、48 h后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期时相和cyclin D1表达的测定。结果 与对照组比较,药物组在各相同时间点C0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,且随着时间的延长差值增大,cyclin D1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期。结论 大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调,cyclin D1表达,从而阻滞细胞周期进程。     

异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞的细胞周期蛋白D1表达并诱导G0/G1细胞周期阻滞

 目的：探索异丹叶大黄素（ISO）抑制膀胱癌细胞侵袭、转移和增殖活性的机制。方法：以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3细胞后,倒置相差显微镜下观察并以ATP生物荧光法检测癌细胞增殖活性;以RT-PCR和Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达;以流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕法检测细胞迁移活性。结果：20 μmol/L浓度以上ISO可显著抑制UMUC3细胞的增殖,其IC50为(22.5±2.8) μmol/L。同时 UMUC3细胞的细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白水平均显著降低。以低浓度5 μmol/L ISO预处理UMUC3细胞后,与对照组（47.33%）进行比较,可分别在12 h（58.82％）和24 h（63.94％）显著诱导细胞G0/G1期阻滞（P<0.01）。细胞划痕法检测证实5 μmol/L ISO可显著抑制膀胱癌细胞的迁移活性。结论：ISO可抑制膀胱癌细胞增殖,下调细胞周期蛋白D1表达,诱导G0/G1细胞周期阻滞,抑制细胞的迁移能力。     

Effect of bone morphogenetic protein-2 on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells

Objective: To investigate the effects of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) on the proliferation, differentiation and apoptosis of normal human gastric mucosal cells and gastric cancer cells.Methods: Poorly differentiated gastric cancer BGC823 cells, moderately differentiated gastric cancer cells and normal human gastric mucosal epithelial GES-1 cells were independently treated with recombinant human BMP-2 or its inhibitor Noggin. MTT assay was performed to detect the proliferation, flow cytometry done to measure the cell cycle and apoptosis and immunohistochemistry carried out to determine the expression of cyclin-dependent kinase 4 (CDK4).Results: BMP-2 exerted inhibitory effect on the growth of all types of cells and the inhibition become more evident with the increase of BMP-2 dose. After treatment with 200 ng/ml BMP-2, cancer cells arrested in G1 phase and those in S phase reduced. Gastric cancer cells had higher CDK4 expression than GES-1 cells. BMP-2 decreased CDK-4 expression in cancer cells but had no influence in GES-1 cells. Noggin conferred promotive effect on the growth of 3 types of cells. In 2 types of cancer cells, treatment with 2000 ng/ml Noggin significantly increased the proportion of cells in S phase but reduced that in G1 phase. However, Noggin did not affect the cell cycle of GES-1 cells. The CDK4 expression was markedly increased in 2 types of cancer cells but that of GES-1 remained unchanged after treatment with 2000 ng/ml Noggin.Conclusions: BMP-2 may inhibit the proliferation of both normal and malignant gastric epithelial cells, down-regulate CDK4 expression in gastric cancer cells and arrest gastric cancer cells in G1-phase in cell cycle. Through antagonizing BMP-2, Noggin, may accelerate the proliferation of gastric cancer cells. Thus, the abnormality of BMP signaling pathway may play an important role in the pathogenesis of gastric cancer.     

特异siRNA下调卵巢癌H08910细胞NAC-1基因表达并抑制生长

 目的：研究小RNA干扰NAC-1 (Nucleus accumbens-1,Nac1 or NAC-1)基因表达对卵巢癌HO8910细胞增殖的影响。方法：设计、合成针对NAC-1基因的特异性小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体转染HO8910细胞。通过实时荧光定量RT-PCR 和Western印迹法分别检测转染前后HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布。结果：针对NAC-1基因的特异性siRNA均能抑制NAC-1 mRNA和蛋白的表达,其中NAC-1-siRNA-1的沉默效率最高。转染NAC-1-siRNA-1 48h后,HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白表达水平分别下调74%和81%,而且细胞增殖明显受到抑制,细胞周期被阻滞于G1期,与转染阴性siRNA 及未转染组比较,有显著性差异(P?0.05)。结论：NAC-1特异性siRNA能够有效沉默NAC-1基因表达,并显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖。     

异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制研究

 目的：探索异丹叶大黄素（ISO）下调肿瘤细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制。方法：以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3、RT12和RT4细胞后用Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达水平;以RT-PCR法检测细胞周期蛋白D1 mRNA的表达水平。稳定转染细胞周期蛋白D1启动子萤光素酶报告基因至UMUC3细胞并筛选后,检测ISO预处理后萤光素酶活性。ISO预处理UMUC3细胞后,提取核蛋白检测核转录因子表达水平的变化。分别稳定转染GFP和GFP-细胞周期蛋白D1表达构建载体,筛选克隆;ISO预处理后,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达水平, 贴壁依赖性细胞生长实验法检测细胞生长能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化。分别稳定转染人源性细胞周期蛋白D1野生型和-163位点突变型萤光素酶报告基因质粒载体至UMUC3细胞并筛选,ISO预处理后检测细胞的萤光素酶活性。最后利用染色质免疫沉淀的方法,以抗Sp1抗体检测ISO对Sp1与细胞周期蛋白D1启动子结合力的影响。结果：ISO可从mRNA和蛋白水平显著抑制肿瘤细胞的细胞周期蛋白D1水平,并且是从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的转录。ISO可抑制、下调核转录因子Sp1的表达,并抑制Sp1与细胞周期蛋白D1启动子区域的结合力,该结合位点主要位于启动子-92到+27 bp的5’-非翻译区。结论：ISO可通过下调Sp1核转录因子表达及其与细胞周期蛋白D1启动子的结合,从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的表达,从而诱导G 0/G 1细胞周期阻滞并抑制肿瘤细胞增殖。我们的研究将为临床中药单体ISO综合治疗肿瘤提供新的策略。     

ABCC4表达与胃癌细胞增殖的相关性研究

目的 观察ABCC4(ATP-binding cassette,sub-family C member4)基因对胃癌细胞系SGC-7901增殖及凋亡的作用.方法 在胃癌细胞系SGC-7901中导入携带ABCC4的RNAi慢病毒载体,应用CELLOMICS检测细胞生长及克隆形成情况,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 SGC-7901细胞经ABCC4基因RNAi有效靶点慢病毒(ABCC4 siRNA)感染后,SGC～7901细胞生长减慢,细胞周期发生改变,处于G1期的SGC7901细胞显著减少,(t=2.752,P＜0.05),处于G2/M期的SGC-7901细胞显著增加(t=2.973,P＜0.05),同时,细胞凋亡显著增加(t=3.068,P＜0.05),细胞克隆形成能力减弱(t=3.534,P＜0.05).结论 抑制ABCC4基因可以减缓SGC-7901细胞恶性增殖,促进凋亡.