实验性自体移植静脉内膜增生模型的建立

目的 建立自体静脉移植模型,并观察其平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖和内膜增厚的时空变化。方法 用“Ｃｕｆｆ技术将兔自体颈外静脉移植入同侧颈动脉系统,观察ＰＣＮＡ和α－ａｃｔｉｎ表达,并对自体移植静脉管腔、内膜、中膜面积定量分析。结果 自体静脉移植后扩张,２ｗｋ内最明显,同时ＳＭＣ增殖和迁移,１～２ｗｋ达视峰,ＰＣＮＡ和α－ａｃｔｉｎ表达也明显增高。结论 该模型设计科学,成功率高,ＳＭＤ增殖从术后３ｄ即已     

反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 证实反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的效应。方法 人工合成正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸,转入体外培养的ＶＳＭＣ中,分别于作用后１～５ｄ进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定。结果加入反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸的ＶＳＭＣ增殖受到抑制,崦正义和错配反义寡核苷酸对ＶＳＭＣ增殖没有明显影响。结论 反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸可有效阻遏     

移植静脉平滑肌细胞凋亡及相关基因表达与增殖关系的动态研究

目的 探讨移植静脉狭窄发生机制。方法 建立１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠自体颈静脉移植与肾下腹主动脉模型。采用透射电镜、原位ＤＮＡ片断末端标记（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学法、检测移植静脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及相关基因ｂａｌ－２、ｂａｘ蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果 术后１￣８周,移植静脉ＴＵＮＥＬ及ＰＣＮＡ阳性ＶＳＭＣｓ多于对照静脉（Ｐ〈０．０１）;术后１￣２周为ＴＵＮＥＬ及Ｐ     

自体静脉移植后血管重塑的动态变化

目的：探讨自体静脉移植后血管重逆的动态变化。方法：应用组织形态学、苦味酸天狼星红染色－偏振光法、免疫组织化学方法观察Ｗｉｓｔａｒ大鼠移植后不同时期内膜增生（ｉｎｔｉｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ,ＩＨ）及血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ,ＶＳＭＣｓ）的增殖和Ⅰ型胶原的动态变化。结果：移植后２周出现明显ＩＨ,内膜厚度于８周达到高峰。ＶＳＭＣｓ增殖（即ＰＣＮＡ表     

成纤维细胞生长因子基因表达及对大鼠自体移植静脉内膜增厚的影响

了解自体静脉移植后平滑肌细胞（ＳＭＣ）过度增殖造成内膜增厚的原因。方法以８０只大鼠建立自体静脉移植动物模型，分别于移植早期（２，６，２４小时），移植中期（１，２，４周），利用组织切片原位杂交及反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的动态变化，以及与ＳＭＣ增殖移行及内膜增厚间关系。结果自体静脉移植后ｂＦＧＦ基因表达水平较移植前不断下降，术后１周达最低水平（Ｐ＜０．０５），２周后重新回升。结论ｂＦＧＦ由损伤及濒死的ＳＭＣ释放，其主要生物学作用是通过自分泌及旁分泌促进ＳＭＣ大量增殖，同时也可加速移植静脉内皮重新再生     

反义寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞c-myc, PCNA基因的表达

目的：利用反义寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞基因表达,为移植血管再狭窄的基因治疗提供理论依据。方法：人工合成正义,反义及错配反应ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ基因片断,并转入体外培养的ＶＳＭＣ中,运用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定细胞中相应基因表达的情况。结果：反义寡核苷酸能有效抑制ＶＳＭ中ｃ－ｍｙｃ,ＰＣ－ＮＡ基因的表达,而正义和错配反应寡核苷酸没有此效应。结论：反应寡核苷酸能阻遏ＶＳＭＣ中相应基因     

c-myc反义寡核苷酸对低氧内皮细胞条件培养液诱导的肺血管周细胞增殖的影响

应用细胞培养、核酸斑点杂交、~３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（~３Ｈ－ＴｄＲ）掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）诱导的大鼠肺血管周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ显著促进周细胞 ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ＜０．０１）及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（Ｐ＜０．０１）,反义ＯＤＮｓ显著阻抑 ＨＥＣＣＭ诱导的周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ＜０．０１）及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（Ｐ＜０．０５）,而同义ＯＤＮｓ无上述作用（Ｐ＞０．０５）。结果提示,ＨＥＣＣＭ可通过上调ｃ－ｍｙｃ基因表达促进肺血管周细胞增殖,反义ＯＤＮｓ通过下凋ｃ－ｍｙｃ基因表达,抑制ＨＥＣＣＭ诱导的肺血管周细胞增殖。     

反义c—myc,增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑细胞相关基因表达

目的 研究有效的防治血管术后狭窄的方法,以及应用反义ｃ－ｍｙｃ,增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法 设计并合成ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ正义,反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸,经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后,分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）,应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法,春对ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果 设计     

8—Br—cAMP对肺癌NSCLC—3细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人肺癌ＮＳＣＬＣ－３细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将体外培育的ＮＳＣＬＣ－３细胞分为实验组和对照组,采用原位杂交方法观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对ＮＳＣＬＧ－３细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后的实验且较未加８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ的对照组－ｃ－ｍｙｃ,ｂｃｌ－２基因表达降低（Ｐ〈０．０１）。结论：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可下调与ＮＳＣＬＣ－３     

反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后，分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法，观测其对ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中１～５天未被完全降解；寡核苷酸能顺利进入ＶＳＭＣｓ内；１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣｓ后１～５天，其相应的ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ基因表达减弱，计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５），而正义和错配反义寡核苷酸无此效应（Ｐ＞０．０５）。结论反义ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ寡核苷酸可通过抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖     

静脉移植桥血管内膜PCNA蛋白的表达

目的 :研究PCNA对冠脉动脉旁路移植术再狭窄的作用。方法 :2 5只健康纯种新西兰大耳白兔将按体重随机分五组 ,每组 5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉 ,分别在术后 6h ,2d ,7d ,14d ,2 8d取材。应用免疫组织化学染色法和形态学分析观察不同时间PCNA阳性细胞数的表达 ,采用计算机图象分析法测量管腔内膜 ,中膜厚度及其比值。结果 :实验过程中无实验动物死亡。吻合口完成时各吻合口均通畅。 7d内膜和中膜厚度较 6h明显增厚 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ;在 14d、2 8d时内膜和中膜厚度较 7d没有明显变化 ,无显著性差异 (P >0 .0 5)。移植后 6h至 7d ,在血管平滑肌细胞 (VSMC)中 ,PCNA蛋白逐渐增多 ,于 7d达高峰 (P <0 .0 1)。移植后 14d ,2 8d在VSMC中PCNA蛋白开始下降 ,与 7d相比差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :PCNA阳性细胞数在移植后 7d达高峰。与内膜增殖的高峰期相吻合 ,提示PCNA蛋白表达与内膜增殖有密切联系 ,可做为一个早期反应血管损伤后内膜增殖的指标。PCNA蛋白的表达对冠脉动脉旁路移植术再狭窄起着重要作用     

大鼠自体静脉移植后内膜增生与平滑肌细胞增值

研究大鼠颈外静脉移植入颈总动脉后内膜增生（IH）的发病机制。应用组织切片的特殊染色，单克隆抗PCNA抗体及抗Dm抗体的免疫组化方法观察IH的发生过程。结果：①术后1d移植静脉的内膜消失，术后2d出现IH并逐渐增生，IH中可见大量平滑肌细胞（SMC），术后12周IH的面积与术后18周元显著差异；②IH中SMC的Dm呈阳性；③IH中SMC的PCNA指数于术后2d骤然升高，术后2周达高峰。结论：IH发生在移植术后2d，逐渐增厚至术后12周方停止，术后早期发生的IH是由中膜的SMC移行至内膜并增殖所致。SMC增殖的高峰在术后第2周。     

可降解外套管抑制自体移植静脉内膜增生的研究

目的:研究可降解的外套管束缚自体移植静脉对减轻桥静脉内膜、中层增厚的作用,探讨其防止或延缓桥静脉再狭窄的机制。方法:建立犬自体股静脉至股动脉的端-端静脉移植模型,其中一侧桥静脉外加聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),对侧单纯静脉移植作为对照组。超声多普勒观察在体移植血管的通畅性。术后2、4、6、8、24周再次手术取桥静脉。光镜观察移植静脉中段内膜、中层厚度,胶原、弹力纤维变化;透射电镜观察静脉壁基底膜、细胞排列、细胞增殖、凋亡,细胞骨架结构,细胞外基质(ECM)变化等;免疫组化观察静脉壁细胞增殖、凋亡及分布。结果:术后40条静脉均通畅,吻合口无狭窄。对照组术后2周见内膜、中层增厚;随时间延长,增厚更加明显。外套管组术后2周内膜、中层稍增厚;4~24周持续增厚,但各时间点均明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);对照组术后2周见中层平滑肌、外膜弹力纤维断裂严重,而外套管组无明显断裂。新生静脉内膜由平滑肌细胞(SMCs)和大量ECM构成,中层主要为SMCs和ECM;术后2周,静脉壁细胞增殖和凋亡率都较高,主要分布在内膜和中层,外套管组明显低于对照组(P<0.01),4周以后两者显著下降,凋亡率高于增殖率(P<0.05)。结论:可降解外套管在术后早期可保持静脉结构的完整性,减轻管壁结构破     

抑制C—myc基因表达对移植血管狭窄的影响

目的观察放射菌素D对移植血管中C-myc基因表达及内膜增殖的影响。方法建立大鼠自体静脉移植模型，实验组分别于术前、术后应用不同剂量放射菌素D（0.015，0.15mg/kg），对照组仅做血管移植。分别于术后2h及1周切取移植静脉，应用原位杂交方法检测C-mycmRNA表达，应用计算机图像分析仪测量内膜厚度。结果高剂量组C-mycmRNA表达较对照组明显减少（6.5%，12.5%；P<0.01），移植血管内膜增殖受到明显抑制（18.7，28.5μm；P<0.01）。结论大剂量应用放射菌素D可以抑制C-mycmRNA表达，从而抑制移植血管内膜增殖。早期应答基因C-myc表达在诱导平滑肌细胞增殖中起着重要作用。     

家兔静脉移植桥血管内膜c-myc蛋白的表达

目的 :研究c -myc基因在冠脉旁路移植术静脉桥中的表达。方法 :2 5只新西兰大耳白兔随机分为 5组 ,每组 5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉 ,分别在术后 6h ,2d ,7d ,14d ,2 8d取静脉桥。应用免疫组化和形态学方法观察不同时间c -myc蛋白的表达 ,采用计算机图像分析法测量静脉桥内膜、中膜厚度及其比值。结果 :7d时静脉桥内膜和中膜厚度较 6h明显增厚 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。 14d ,2 8d时静脉桥内膜和中膜厚度较7d没有明显变化 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。移植后 6h至 7d ,c -myc蛋白血管平滑肌细胞逐渐增多 ,于 7d达高峰 (P <0 .0 1)。移植后 14d ,2 8dc -myc蛋白血管平滑肌细胞开始下降 ,与 7d相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :c-myc蛋白表达与内膜增殖有密切联系 ,可作为血管损伤后内膜增殖的早期监测指标     

NANOPARTICLE AS A NEW GENE TRANSFERRING VECTOR IN SPECIFIC EXPRESSION GENE

To evaluate the possibility and efficiency of nanoparticle as a new vector in specific gene transference.Methods. Nanoparticle-DNA complex was prepared with Poly- eM-lactic-co-glycolic acid (PLGA) bearing anti-sense monocyte chemotactic protein-1 (A-MCP-1), a specific expression gene, and the package efficiency, release progress in vitro, and the size of the complex were determined. The possibility of the new vector was evaluated with genomic DNA PCR by transferring gene into cultured smooth muscle cells (SMC), cationic lipids as a control. For study in vivo, jugular vein-to-artery bypass grafting procedures were performed on 20 New Zealand white rabbits, of which 6 grafts were transferred with nanoparticle-A-MCP-1 (200 μg), 6 with A - MCP - 1 (200 μ g) by cationic liposome, 4 with LNCX plasmid, and 4 as control. Fourteen days after the grafts were harvested, the expression of A-MCP-1 and its effect on MCP-1 in vein grafts were detected by dot blot, and the morphologic evaluation of grafts was performe     

C-myc siRNA抑制大鼠自体移植静脉再狭窄的研究

目的静脉移植术后c-myc基因持续高表达是导致血管内膜增生进而再狭窄的原因之一。文中探讨通过局部给药方法给予针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)对自体移植静脉内膜增生的影响。方法建立SD大鼠自体颈外静脉-颈总动脉移植模型。32只大鼠按移植静脉外膜局部给药不同处理方式方法分为未处理组(No treatment组)、凝胶组(Gel组)、无义序列组(scramble sequence group,SCR组)、c-myc RNA干扰组(C-myc siRNA组),于术后3周处死大鼠取移植静脉,光学显微镜下测量内膜厚度,免疫组化染色检测移植静脉增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、c-myc蛋白的表达,Q-RT-PCR检测移植静脉c-myc mRNA的含量。结果 C-myc siRNA组内膜厚度[(15.0±2.2)μm]显著低于No treatment组[(58.3±8.3)μm]、SCR组[(60.5±6.1)μm]和Gel组[(63.5±5.4)μm]。C-myc siRNA组静脉内膜区和中膜区PCNA阳性细胞率显著低于SCR组[分别为(8.4±2.2)%vs(68.5±5.0)%,P<0.05和(15.0±3.1)%vs(55.2±7.5)%,P<0.05],c-myc蛋白阳性细胞率C-myc siRNA组显著低于SCR组[(30.6±2.6)%vs(48.5±3.5)%,P<0.05]。C-myc siRNA组移植静脉中c-myc mRNA的表达相对量显著低于SCR组(0.48±0.05 vs 1.00±0.12,P<0.05)。结论C-myc siRNA能抑制移植静脉中平滑肌细胞的增殖,抑制内膜的增生,减轻移植静脉再狭窄程度。     

生物蛋白胶外支架预防移植静脉早期损伤的实验研究

目的以生物蛋白胶作为外周支持,研究其对兔移植静脉的影响,从而寻找更适合临床的外支架材料。方法24只雄性新西兰大耳白兔随机分为非支架组（NS组n=12）和生物蛋白胶支架组（FS组n=12）。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。FS组给予生物蛋白胶作为外支架。术后28天取出移植静脉,进行超微结构、组织病理分析和免疫组织化学分析。结果超微结构显示与NS组相比,FS组移植静脉损伤程度明显减轻。免疫组化结果显示与NS组相比,FS组移植静脉细胞增殖核抗原表达明显受到抑制 NS组内皮层损伤严重,有淋巴细胞侵润,而FS组内皮层则几乎完好无损（P〈0.01） 在NS组平滑肌细胞增殖活跃且向内膜迁移,FS组平滑肌细胞增殖受到抑制,且向外膜迁移 在FS组移植静脉外膜有丰富的成熟微小血管网形成,但是在NS组,微小血管数量则非常少。结论生物蛋白胶外支架能给兔移植静脉提供足够的外周支持,明显缓解移植静脉植入动脉循环后的早期损伤。该作用与保护血管内皮完整、抑制增殖细胞核抗原表达、促使平滑肌细胞向外膜迁移和形成外膜新生血管网有关。     

大鼠自体移植静脉血管平滑肌细胞增殖与血浆内皮素变化关系的动态研究

目的 :研究自体静脉移植术后血浆内皮素 (ET)变化与移植静脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的关系。方法 :建立大鼠自体颈静脉移植于肾下腹主动脉动物模型 70只 ,于术后 3d～ 8周 ,采用放射免疫法检测血浆ET的变化 ,免疫组化法观察增殖细胞核抗原 (PCNA)在移植静脉VSMC中的表达和分布。结果 :术后 1～ 2周 ,血浆ET比术前明显增高 (P <0 .0 1) ;血浆ET与移植静脉VSMC增殖具有相关性 (r=0 .783,P <0 .0 1)。结论 :静脉移植术后测定血浆ET有助于反映移植静脉VSMC的增殖水平 ,为内膜增生的防治提供线索。