小干扰RNA诱导人卵巢癌细胞MDR1基因沉默的研究

目的 采用RNA干扰技术逆转人卵巢癌OVCAR8/TR细胞中多药耐药基因,探讨该技术能否有效地抑制多药耐药基因MDR1的表达,降低该基因编码的糖蛋白P-gp的水平.方法 设计合成针对MDR1的小片段RNA(siRNA),将合成的siRNA用脂质体转染具有多药耐药基因MDR1高表达的人卵巢癌泰素耐药细胞株OVCAR8/TR,用荧光定量RT-PCR检测转染后不同时间点MDR1的mRNA的变化,流式细胞仪定量测定转染后不同时间点P-gp表达的情况.结果 MDR1的siRNA转染细胞48 h基因的抑制达最高,转染的第5 d回到正常水平.阴性对照组mRNA的量与未转染组的mRNA的量差异无统计学意义.P-gp在转染后的72 h其抑制最强,至第5 d时恢复接近正常水平,阴性对照组蛋白表达与未转染组的蛋白表达差异无统计学意义.结论 siRNA能够有效地抑制多药耐药基因MDR1的mRNA和P-gp的表达,为逆转卵巢癌的多药耐药带来了新的希望.     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

MDR1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响

[目的]探讨MDR1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响。[方法]设计合成两种针对MDR1 mRNA的siRNA双链分子（#4123 MDR1 siRNA和#4029 MDR1 siRNA）,并转染入COLO 320DM和HT-29结肠癌细胞,观察其对结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gp表达的影响。并分别与5-FU、阿霉素和长春新碱等抗肿瘤药联用,观察结肠癌细胞活力的变化。用阿霉素处理后,观察转染MDR1 siRNA结肠癌细胞的细胞内阿霉素累积浓度的变化。RT-PCR检测细胞MDR1 mRNA的表达,免疫印迹法检测细胞P-gp的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内阿霉素累积浓度。[结果]#4123 MDR1 siRNA和#4029 MDR1 siRNA均可抑制COLO 320DM结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达,其最低有效浓度分别为5nmol/L和25nmol/L。同时MDR1 mRNA和P-gp表达的抑制伴随着抗肿瘤药（5-FU、阿霉素和长春新碱）对COLO 320DM结肠癌细胞毒性的增强和细胞内阿霉素累积浓度的增加。而在对照HT-29结肠癌细胞却观察不到此效应。[结论]MDR1 siRNAs能特异逆转结肠癌细胞的多药耐药性,为MDR1/P-gp依赖的多药耐药性结肠癌的治疗提供了一条新的途径。     

MDR1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响

 [目的]探讨MDR1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响。[方法]设计合成两种针对MDR1 mRNA的siRNA双链分子（#4123 MDR1 siRNA和#4029 MDR1 siRNA）,并转染入COLO 320DM和HT-29结肠癌细胞,观察其对结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gp表达的影响。并分别与5-FU、阿霉素和长春新碱等抗肿瘤药联用,观察结肠癌细胞活力的变化。用阿霉素处理后,观察转染MDR1 siRNA结肠癌细胞的细胞内阿霉素累积浓度的变化。RT-PCR检测细胞MDR1 mRNA的表达,免疫印迹法检测细胞P-gp的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内阿霉素累积浓度。[结果]#4123 MDR1 siRNA和#4029 MDR1 siRNA均可抑制COLO 320DM结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达,其最低有效浓度分别为5nmol/L和25nmol/L。同时MDR1 mRNA和P-gp表达的抑制伴随着抗肿瘤药（5-FU、阿霉素和长春新碱）对COLO 320DM结肠癌细胞毒性的增强和细胞内阿霉素累积浓度的增加。而在对照HT-29结肠癌细胞却观察不到此效应。[结论]MDR1 siRNAs能特异逆转结肠癌细胞的多药耐药性,为MDR1/P-gp依赖的多药耐药性结肠癌的治疗提供了一条新的途径。     

反义肽核酸阻断人神经母细胞瘤多药耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达

目的探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及其对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药(MDR)相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法以人MDR-1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA-DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK-N-SH.采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和高效液相色谱等方法分别检测反义PNA的转染效率,转染前后细胞P-gp、MDR-1基因mRNA的表达及细胞内阿霉素(ADM)浓度.结果荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,呈浓度依赖性.两反义PNA均使SK-N-SH细胞P-gp表达明显降低,MDR-1 mRNA表达轻度降低,细胞内ADM聚集浓度明显增加.结论PNA-DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取,特异序列的反义PNA可在一定程度上阻断神经母细胞瘤MDR相关蛋白P-gp的表达.     

姜黄素逆转结肠癌裸鼠移植瘤多药耐药的研究

目的探讨姜黄素体内对人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/VCR多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法将HCT-8/VCR种植于裸鼠皮下,建立肿瘤耐药模型。移植瘤裸鼠20只依据治疗方法的不同分为对照组(PBS)、长春新碱(Vincristine,VCR;2 mg/kg)组、姜黄素(50 mg/kg)组、姜黄素联合VCR(50 mg/kg姜黄素+2 mg/kg VCR)4组,每组5只。治疗2周后收集标本,称量各组瘤体质量,采用RT-PCR、Western blot分别检测瘤组织内MDR1 mRNA、survivin mRNA和P-gp、survivin蛋白的表达水平,HE染色观察瘤组织细胞形态学变化,评估姜黄素在不同处理因素中逆转肿瘤多药耐药的效果。结果姜黄素联合VCR能显著抑制瘤体的生长,姜黄素联合VCR组瘤质量[(0.42±0.23)g]明显低于对照组[(1.21±0.25)g]、VCR组[(1.13±0.27)g]、姜黄素组[(0.75±0.27)g](P<0.05)。RT-PCR、Western blot结果显示姜黄素能够下调MDR1 mRNA、survivin mRNA和P-gp、survivin蛋白的表达,姜黄素联合VCR组MDR1 mRNA(0.18±0.05)、survivin mRNA(0.63±0.04)、P-gp(0.15±0.02)、survivin(0.31±0.09)和姜黄素组MDR1 mRNA(0.39±0.11)、survivinmRNA(0.80±0.12)和P-gp(0.34±0.07)、survivin(0.40±0.11)蛋白表达明显低于对照组MDR1 mRNA(0.99±0.23)和survivin mRNA(1.19±0.32)表达,以及P-gp(0.71±0.23)、survivin(0.88±0.15)蛋白表达(P<0.05)。HE病理切片显示姜黄素组和姜黄素联合VCR组较其他2组有较多的淋巴细胞浸润,核固缩较多,核分裂相少,坏死更为广泛。结论多种机制参与姜黄素体内逆转肿瘤多药耐药,姜黄素可能通过下调MDR1、survivin mRNA表达和P-gp、survivin蛋白的表达,促进肿瘤细胞凋亡等多种途径逆转肿瘤的多药耐药性。     

肿瘤细胞特异启动子hTERT介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR的研究

目的:探索应用肿瘤细胞特异启动子hTERT介导靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA在卵巢肿瘤细胞特异表达并逆转MDR的可行性。方法:应用携带luc报告基因的报告质粒验证了hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中的转录活性,构建由hTERT启动子引导的靶向mdr1基因的siRNA表达载体phTERTsiMDR1B,并与携带mdr1基因靶序列的报告质粒进行共转染抑制实验,进一步将phTERT-siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染A2780细胞,检测细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平。以具有耐紫杉醇表型的A2780细胞作为靶细胞进行耐药评价实验。结果:hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中具有良好的转录活性,而在正常人二倍体细胞株MRC-5中无转录活性;hTERT启动子介导的siMDR1B具有良好的抑制效果与特异性;hTERT启动子介导的siMDR1B可显著抑制细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平;转染了hTERT启动子介导的siMDR1B表达元件的细胞对紫杉醇的耐药程度显著降低。结论:hTERT启动子介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR是可行的,本研究结果可为进一步开展卵巢肿瘤MDR逆转研究提供重要基础。     

多药耐药基因MDR1在Ph(+)急性淋巴细胞白血病伊马替尼耐药细胞株SUP-B15/RI耐药形成中的作用

目的研究多药耐药基因MDR1在Ph(+)急性淋巴细胞白血病〔Ph(+)ALL〕伊马替尼(IM)耐药细胞株SUP-B15/RI耐药机制中的作用。方法 RT-PCR技术检测敏感细胞株SUP-B15和IM耐药细胞株SUP-B15/RI MDR1mRNA表达,改良MTT法测定IM、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊甙(VP-16)单药及联合维拉帕米作用于SUP-B15细胞和SUP-B15/RI细胞72h后增殖活性的改变,计算抑制率为50%时的药物浓度(IC50),DNR药物外排实验检测MDR1表达产物P-gp功能。结果 MDR1基因在SUP-B15/RI中的表达是敏感细胞SUP-B15的(2.02±0.04)倍(P<0.05)。IM、DNR、VCR、VP-16单药作用于SUP-B15/RI细胞的IC50值较SUP-B15细胞增高(P<0.05),相对耐药倍数(RF)分别为(20.52±2.34)、(10.33±1.88)、(9.78±1.27)、(3.84±0.69)倍。IM、DNR、VCR、VP-16与维拉帕米联合作用于SUP-B15/RI细胞后IC50值较单药时降低(P<0.05),耐药逆转倍数分别为(1.44±0.43)、(3.20±0.17)、(1.44±0.12)、(1.33±0.14)。P-gp蛋白功能在SUP-B15/RI细胞强于SUP-B15细胞,DNR泵出率分别为10.27%、3.43%。结论 MDR1基因在SUP-B15/RI细胞中表达增加,其表达产物P-gp功能增强,P-gp抑制剂维拉帕米可以部分逆转IM耐药。说明MDR1参与SUP-B15/RI细胞IM耐药机制的形成。     

Reversal of multidrug resistance in renal cell carcinoma by short hairpin RNA targeting MDR1 gene

目的 研究RNA干扰（RNA interference,RNAi）对肾癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对化疗药物敏感性的变化。方法 根据MDRl基因设计3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT-PCR法分析转染前后MDR1 mRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT-PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Western bolt法检测MDR1蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后多种化疗药物对细胞半抑制浓度（IC50）的变化;相关数据统计通过SPSS10.0软件进行。结果 3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDR1基因的表达,其中siRNA-1序列能更有效地封闭MDRl基因,使MDRl mRNA表达水平下降;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比,MDR1蛋白表达量明显下降,并使多种化疗药物对细胞的IC50明显降低。结论 RNAi技术可有效抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达,并可显著增加其对多种化疗药物的敏感性,从而使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。     

靶向MDR1基因siRNA逆转HepG2/ADM细胞耐药性的研究

目的 采用RNA干扰技术逆转人类肝癌细胞系/阿霉素(human hepatocellular liver carcinoma cell line/adriamycin,HepG2/ADM)细胞中多耐药基因,探讨该基因能否有效地抑制多耐药基因(multidrug resistance gene,MDR1)及其编码的糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,并检测对HepG2/ADM耐药表型的逆转效果.方法 采用药物大剂量冲击法建立HepG2/ADM耐药模型,构建靶向MDR1的小干扰RNA表达载体,并转染到HepG2/ADM细胞中,应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测基因转染前后MDR1 mRNA表达水平的变化,Western-blot检测各组细胞P-gp蛋白表达的变化,用噻唑蓝法检测各组细胞对阿霉素、顺铂、长春新碱和氟尿嘧啶等药物的敏感性.结果 HepG2/ADM细胞系不仅对阿霉素耐药,而且对其他化疗药也有抗性,呈现多药耐药特性;重组质粒鉴定结果表明针对MDR1的小干扰RNA表达载体成功构建;与对照组比较,转入细胞后MDR1 mRNA水平明显下降,P-gp蛋白表达明显降低;转入细胞后HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性明显提高,部分逆转其耐药性.结论 靶向MDR1的小干扰RNA可显著抑制HepG2/ADM细胞中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,逆转P-gp介导的HepG2/ADM细胞的耐药性.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。