磁流体热疗联合 IL-2对小鼠Lewis肺癌治疗作用的实验研究

目的通过观察磁流体热疗（MFH）联合IL-2对小鼠Lewis肺癌的生长、凋亡及小鼠免疫系统的影响,探讨MFH联合免疫治疗肺癌的可行性。方法建立小鼠浅表Lewis肺癌皮下移植瘤模型,瘤体直径增至0.8cm左右时,将其分为IL-2组、MFH组、MFH＋IL-2组及对照组。MFH组瘤体内部注射0.2ml水平约75mg/ml的磁流体,24h后在交变磁场下加温1次,通过控制磁场的强度,加温温度稳定在43.0℃左右30min。IL-2组瘤体内部注射0.2ml（5×10^4U）的IL-2。MFH＋IL-2组热疗后24h,按上述方法向肿瘤内部注射0.2ml（5×10^4U）的IL-2。对照组瘤体内部注射0.2ml的0.9%氯化钠溶液。采用流式细胞术检测MFH法、MFH＋IL-2后小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化。采用免疫组化法检测治疗后肿瘤组织HSP70、CD4^＋、CD8^＋等免疫因子的表达,比较MFH组、MFH＋IL-2组对肿瘤的治疗效果。结果 MFH组和MFH＋IL-2组注射磁流体后肿瘤内部温度迅速升高至43℃,肿瘤细胞呈凋亡和坏死样改变,小鼠外周血T淋巴细胞水平明显升高（P＜0.05）,HSP70、CD4^＋、CD8^＋水平也均明显升高,小鼠瘤体生长均受到抑制,MFH＋IL-2组小鼠瘤体生长抑制更明显。结论43℃、30min条件下的MFH能抑制Lewis肺癌的生长,诱导荷瘤小鼠机体产生抗肿瘤免疫。IL-2单独对荷瘤小鼠肿瘤生长无明显抑制作用,但可以提高外周血CD4^＋、CD8^＋水平,从而增强MFH对Lewis肺癌抑瘤效果。     

热疗对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响

目的:研究在不同温度、不同加热时间的条件下热疗对人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法:不同温度、不同时间加热后,采用流式细胞技术观察热疗对人肺腺癌A549细胞株细胞周期和凋亡的影响。结果:流式细胞技术检测显示A549细胞经热疗处理后,细胞生长相应的滞留于细胞生长周期的G1期,细胞凋亡明显,细胞减少。热疗在不同温度、不同时间加热时间的条件下,导致A549细胞出现凋亡和坏死的程度不同,其中加热至42℃维持2 h处理组中凋亡最为明显。结论:热疗可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G1期,并且在加热至42℃维持2 h时细胞凋亡最为明显。     

热疗对肺癌A549细胞P-糖蛋白表达影响的实验研究

目的研究不同温度、不同加热时间下热疗对肺癌A549细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,为肺癌的热疗和热化疗提供理论依据。方法体外复苏与培养肺癌A549细胞;对照组37℃下培养,实验组按不同时间、不同温度分组水浴加热肺癌A549细胞后培养24 h,采用流式细胞术(FCM)观察热处理后的肺癌A549细胞株P-gp表达的变化。结果流式细胞术显示各热疗组A549细胞的P-gp的表达率均较对照组下降,且P-gp的表达率与加热的时间和温度均呈负相关。结论热疗可以抑制P-gp的表达,可能是逆转肿瘤细胞多药耐药的一种手段。     

磁流体热疗治疗肿瘤研究进展

随着热生物学和热物理学的不断研究发展以及加温、测温、控温技术的不断改进,近年来,肿瘤热疗有了较快的发展,肿瘤热疗的方法和技术不断创新。其中磁流体热疗是近年来新兴的一种热疗方法,其特点是具有高度靶向性和特异性,笔者就磁流体热疗治疗肿瘤的研究进展作一简要介绍。     

MSC联合磁流体热疗治疗肺癌的实验研究

目的 探讨磁流体热疗与MSC对肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用。方法 体外制作FMNP-MSC;建立肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,等肿瘤直径长至约4mm时,将FMNP-MSC通过小鼠尾静脉注射到体内。注射后1周,在交变磁场下热疗,每周1次,时间30min,连续4周,光纤测温检测肿瘤温度的变化,每周测量瘤体的长径和短径变化。治疗4周后,球取血观察白细胞变化,离断法处死小鼠,取出肿瘤组织,称取瘤重;光镜观察各组肿瘤组织病理学变化,Western blot法检测FMNP-MSC热疗后凋亡蛋白（Bax、caspase-3）、抗凋亡蛋白（Bcl-2）的表达。结果 MSC可以将FMNP携带至肿瘤区域,小鼠的白细胞无明显变化,在交变磁场的作用下可以升温至53℃,荷瘤小鼠肿瘤体积和重量增长受到明显抑制。病理观察可见肿瘤细胞大片凋亡和坏死样改变。Western blot法检测证实Bax蛋白在两个治疗组明显表达。结论 MSC可以将FMNP携带到小鼠皮下移植肿瘤区域,在交变磁场作用下升温至有效温度,小鼠肿瘤的生长受到明显抑制,肿瘤组织呈凋亡和坏死样改变,可能是通过增加Bax的表达来实现的。     

Fe2O3 纳米磁流体热疗治疗小鼠结肠癌实验研究

目的研究Fe2O3纳米磁流体热疗对小鼠结肠癌的治疗效果。方法磁流体直接局部注射到小鼠皮下肿瘤组织,交变磁场下加热至43℃,计算瘤体积抑制率,肿瘤组织及各个脏器做病理检测。结果 Fe2O3纳米磁流体在交变磁场(alternatingmagnetic field,AMF)中升温迅速。热疗组相比磁流体对照组、磁场对照组、空白对照组,热疗6天后瘤体体积抑制率分别为50.87%、50.50%、76.57%,P<0.05,差异有统计学意义。病理检测证实肿瘤组织部分凋亡,而正常脏器无变化。结论 Fe2O3纳米磁流体热疗可抑制小鼠结肠癌的增长,对结肠癌的治疗有一定作用,但并不能完全抑制肿瘤的生长。实验证明热疗安全可靠。     

藤梨根提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法建立肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,观察藤梨根乙酸乙酯提取物的作用,设置对照组、治疗组(低剂量组、高剂量组)。通过测量移植瘤体积变化绘制生长曲线,根据终末瘤质量比较计算抑制率,采用TUNEL法检测移植瘤凋亡指数,采用免疫组化法检测移植瘤Survivin蛋白表达、增殖指数,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测移植瘤Survivin mRNA变化。结果各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组,高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为69.00%和45.09%。各治疗组移植瘤组织凋亡指数则明显高于对照组,而Survivin mRNA及蛋白表达较对照组明显减少,高剂量组尤其明显,各组间上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论藤梨根乙酸乙酯提取物在体内对肺癌A549细胞生长有抑制作用,可以诱导移植瘤细胞发生凋亡,促进癌细胞凋亡并下调瘤细胞Survivin蛋白和mRNA表达。     

ADFMChR对人肺癌A549细胞移植瘤的抑制作用

目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人肺癌A549细胞移植瘤生长的抑制作用.方法:建立人肺癌A549裸鼠移植瘤模型,测定荷人肺癌裸鼠的移植瘤大小;HE染色,光学显微镜下观察移植值组织形态学特征.结果:ADFMChR对肺癌移植瘤生长具有显著抑制作用.HE染色镜下观察,ADFMChR处理的人肺癌裸鼠移植瘤组织内细胞退形性变,核固缩,核碎裂.结论:ADFMChR显著抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长.呈剂量依赖性.     

热疗对中晚期肺癌放射治疗疗效的影响

目的 观察放疗结合热疗对中晚期非小细胞肺癌疗效的影响和安全性.方法 62例接受过4～6周期化疗的中晚期非小细胞肺癌患者,接受放疗结合同步热疗.胸部放疗采用根治性为目的的适形放疗( CRT).接受放射治疗结合热疗30例(治疗组);接受单纯放射治疗32例(对照组).放疗2周后,第3周放射治疗的第1、4天,放疗后1h内给予患者热疗,2次/周,共4次/2周,放射治疗60 Gy/6周(治疗组);单纯放射治疗60Gy/6周(对照组).接受热疗的患者,食管、肛门和外耳道内同时测温,体温达39.5～41.0℃后持续30～60 min,记录热疗患者的血常规、BUN、Cr和ALT,热疗中监测血压、脉搏、血氧饱和度指标、皮肤反应等,治疗前及治疗后1个月胸部CT扫描.结果 中期观察3个月,治疗组和对照组有效率(PR+CR)分别是70％和44％.热疗后患者的血生化指标均有不同程度地升高,但无统计学意义;热疗中血压、脉搏、血氧饱和度等指标均在正常范围内,无因以上指标异常而终止治疗.结论 放射治疗结合同步热疗可以提高中晚期肺癌的治疗疗效;热疗对肺癌患者的治疗也是安全的.     

射频热疗联合化疗对肺癌的疗效观察

目的 评价射频热疗联合化疗治疗肺癌的疗效,毒副反应及对生活质量的影响.方法 40例肺癌病人随机分为两组.治疗组20例采用射频热疗联合化疗药物,根据不同病种选择不同用药方案,TF,TB,CAP,NB.热疗5次/周,电脑实时测温温度控制在40℃～43℃,并维持45～60min.对照组20例采用化疗药物治疗,方法 同治疗组.结果 治疗组与对照组总有效率分别为75%和45%,两组比较差异有显著性(P＜0.05);治疗组KPS评分与对照组比较差异有显著性(P<0.05).急性毒性反应比较差异没有显著性,均可耐受.结论 射频热疗联合化疗药物能显著提高肺癌的治疗效果,改善了病人的生存质量,是一种安全有效的方法.     

二氯化钴诱导A549细胞凋亡及机制的研究

目的探讨二氯化钴(CoCl2)诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法应用不同浓度CoCl2作用A549细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导细胞凋亡的实验模型;应用MTT法检测细胞生长抑制率;应用AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡情况;应用Western blotting法检测总Akt(total-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和survivin蛋白表达情况。结果 300、400μmol/L CoCl2作用24、36、48h后A549细胞的生长受到不同程度的抑制,并呈现比较明显的剂量和时间依赖关系;通过荧光显微镜下能观察到细胞呈新月形、核质体绿色、染色质浓缩,呈现凋亡显著特征,200、300、400μmol/L CoCl2处理24、48h后的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Western blotting检测结果显示300、400μmol/L CoCl2作用48h后细胞内p-Akt、survivin蛋白表达量较对照组显著减少(P<0.01),300μmol/L CoCl2作用36、48h较对照组能显著下调p-Akt、survivin蛋白表达量(P<0.01),而总Akt蛋白表达量均无显著变化。结论 CoCl2可能是通过抑制p-Akt和survivin的蛋白表达,从而诱导A549细胞凋亡。     

hTR-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用

目的 探讨人端粒酶RNA(hTR)-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用及其机制.方法 将HeLa细胞注射到裸鼠的右腋皮下建立肿瘤模型,27 d后将荷瘤裸鼠随机分为4组,采用瘤体内多点注射方式,分别向各组荷瘤鼠注射0.1 mL的DMEM、Ad-NT-siRNA(1013 pfu/L)、Ad-hTR-siRNA (1013 pfu/L)或顺铂(1.20 g/L), 以后每隔3 d注射1次, 连续15 d.观察注射腺病毒后移植瘤的体积变化、毒副作用.治疗结束后间隔7 d处死动物,剥离出肿瘤组织称重.切取瘤组织做TUNEL染色测定组织的凋亡指数.结果 将HeLa细胞移植到裸鼠皮下,成瘤率为100%.与Ad-NT-siRNA处理组相比,Ad-hTR-siRNA处理组的裸鼠移植瘤的体积和质量分别降低45.48%和34.68%,TUNEL分析显示凋亡细胞量约11.8%;但是Ad-hTR-siRNA的抗肿瘤作用不及顺铂.结论 hTR-siRNA腺病毒能够明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、坏死有关.     

肺癌A549细胞条件培养基经Akt1途径抑制血管内皮细胞凋亡

目的研究肺癌A549细胞条件培养基对血管内皮细胞凋亡的影响及机制。方法以5%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）为对照,用人肺癌A549细胞株条件培养基孵育脐静脉内皮细胞（human umbilical veins endothelial cells,HUVECs）,Annexin V-FITC试剂盒染色,流式细胞仪进行细胞凋亡定量。设计针对蛋白激酶B（protein kinase B,Akt1）基因mRNA的siRNA（siAkt1）和非特异性对照序列（siSCR）转染HUVECs,用RT-PCR技术检测Akt亚型mRNA的表达,用Western blotting技术检测Akt总蛋白表达,并观察细胞凋亡的变化。结果 A549条件培养基明显抑制了HUVECs的凋亡（凋亡率3.03%,显著低于对照组的12.69%,P〈0.05）。筛选出的si Akt1能显著抑制HUVECs的Akt1 mRNA和Akt总蛋白表达（分别下调81%和62%）,转染si Akt1后的HUVECs再用A549条件培养基孵育凋亡明显增强（与siSCR组相比P〈0.01）。结论肺癌A549细胞条件培养基经Akt1途径抑制血管内皮细胞凋亡,这将为肺癌血管生成的机制研究和干预治疗提供新的分子靶点。     

酒石酸锑钾对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察酒石酸锑钾(PAT)对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑瘤及凋亡诱导作用。方法:60只裸鼠皮下注射结肠癌SW480细胞建立移植瘤模型,随机分为4组,每组15只,分别腹腔内注射生理盐水、5-Fu及不同剂量的PAT,给药15 d,末次给药24 h后处死裸鼠,计算抑瘤率并观察肿瘤细胞的凋亡。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞凋亡。结果:PAT对人结肠癌裸鼠移植瘤生长有显著性抑制作用,肿瘤细胞凋亡增加;高剂量PAT组、低剂量PAT组和5-Fu组的凋亡指数高于生理盐水组,差异有显著性(P<0.05),高剂量PAT组的凋亡指数高于5-Fu组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:酒石酸锑钾可通过诱导结肠癌SW480细胞凋亡抑制结肠癌裸鼠移植瘤生长。     

慢病毒介导lncRNA-AK058003过表达对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究上调SK-Hep1肝癌细胞中lncRNA-AK058003的表达对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用慢病毒转染的方法将lncRNA-AK058003的重组质粒和空质粒分别转入SK-Hep1肝癌细胞株中,经新霉素筛选出lncRNA-AK058003稳定过表达的细胞株,用定量PCR的方法检测lncRNA-AK058003在SK-Hep1肝癌细胞中的过表达,并且将稳定过表达lncRNA-AK058003的SK-Hep1肝癌细胞和含有空质粒的SK-Hep1肝癌细胞分别注射入裸鼠腋下皮下,定期测量裸鼠移植瘤的长径和短径,从而计算出移植瘤的体积,饲养35天后测量移植瘤的重量。结果 构建稳定过表达lncRNA-AK058003的肝癌细胞株,裸鼠皮下荷瘤实验结果显示,过表达组裸鼠移植瘤的体积（308.4±439.4mm³）、重量（0.464±0.518g）和生长速度均低于空质粒组（1410.0±973.0mm³ ,1.363±0.856g,P < 0.05）。结论 lncRNA-AK058003对肝癌裸鼠移植瘤的增殖具有抑制作用。     

磁性吉西他滨隐形纳米脂质体体内磁控靶向抑瘤作用研究

目的 研究制备磁性吉西他滨隐形纳米脂质体(MGSL)的最佳条件并考察其理化性质以及体内靶向治疗裸鼠乳腺癌的效果.方法 通过逆相蒸发法制备MGSL,采用扫描电镜和原子力显微镜对其形态进行观察;利用激光粒度分析仪测定MGSL粒径大小和粒度分布;通过反相高压液相色谱法检测药物的载药量和包封率;使用专业磁性测试仪进行体外磁响应性测定,并且对MGSL的稳定性进行了评价.另外以裸鼠作为实验对象,制成裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,通过对该模型尾静脉注射MGSL,移植瘤表面定时给予三维立体梯度磁场作用,观察MGSL靶向治疗裸鼠乳腺癌的效果.结果 MGSL为圆形或椭圆形,大小均匀一致,其平均粒径为206.6 nm,粒度分布窄,大小均匀.MGSL载药量为(10.4±0.7)%,包封率为(81.7±5.1)%.另外以乳腺癌荷瘤裸鼠为模型,MGSL在肿瘤部位磁场的作用下可以显著抑制裸鼠乳腺癌皮下移植瘤的生长,肿瘤体积从第2天开始,与其它组别相比均有显著性差异(P<0.05), 其肿瘤生长速度较其它各组明显降低.第11天处死动物后剥离瘤体称重,MGSL加磁场组瘤重明显低于其它各组(P<0.05),抑瘤率最高,可达87.3%.结论 该法制备的MGSL符合纳米磁控靶向给药系统的条件,其在动物体内可以显示良好的抑瘤作用,可望成为一种有效的抗肿瘤物质.     

蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响

目的：探讨蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响。方法：建立裸鼠人胰腺癌模型,随机分为4组：对照组（NS）、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）、蟾毒灵组（Bu）、蟾毒灵加5-氟尿嘧啶组（Bu／5-Fu）。分别腹腔注射生理盐水（NS）20ml／kg、5-Fu24mg／kg、Bu1mg/kg、Bu1mg／kg＋5-Fu24mg／kg。用药后第7天处死,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL法检测瘤体凋亡指数,免疫组化S-P法检测Survivin蛋白的表达,RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达。结果：与NS组相比,各药物干预组瘤体体积均显著缩小（P〈0．05）,凋亡指数明显增高（P〈0．01）,Survivin蛋白的表达显著降低（P〈0．01）。其中Bu／5-Fu组瘤体体积明显小于Bu组、5-Fu组（P〈0．05）;Bu／5-Fu组凋亡指数明显高于Bu组、5-Fu组（P〈0．01）;Bu／5-Fu组Survivin蛋白的表达明显低于Bu组、5-u组（P〈0．01）。结论：蟾毒灵能够抑制胰腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,联合5-Fu可起到增效的作用。其作用机制可能与抑制Survivin基因表达有关。     

罗格列酮诱导裸小鼠胃癌移植瘤细胞分化

目的研究罗格列酮（ROS）对人胃低分化黏液癌MGC-803细胞裸鼠移植瘤的诱导分化作用,初步探讨其可能机制。方法培养人胃癌MGC-803细胞,建立移植瘤模型,随机分为模型组、雏甲酸组、ROS25mg／kg组、ROS50mg／kg组和ROS100mg／kg组,用药后,观察移植瘤体积变化并计算抑瘤率;检测肿瘤细胞周期及胃粘蛋白（Mucin5AC）。结果ROS能缩小移植瘤体积,肿瘤细胞被阻滞于G0／G1期,S期细胞减少;Mucin5AC表达增强。结论ROS诱导胃癌裸小鼠移植瘤细胞分化,可能是通过抑制胃癌细胞从G1期向S期过渡,降低细胞的增殖能力实现的。