β-catenin、DKK-1蛋白在出生前后双酚A暴露的子鼠雄性生殖细胞中的表达

目的：探讨 Wnt/β-catenin 信号通路主要蛋白(β-catenin、DKK-1)在出生前后双酚A(BPA)暴露的成年子鼠雄性生殖细胞中的表达及意义。方法自受孕第0天(PGD0),ICR孕鼠饮水BPA染毒,随机将孕鼠分为溶剂对照组、BPA低剂量(10 nmol/L )组、BPA中剂量(50 nmol/L)组、BPA高剂量(300 nmol/L)组,每组6只。雄性仔鼠出生后继续饮水染毒,剂量同上,6周(PGD42)处死,取睾丸组织,计算睾丸系数;免疫组化和Western blot法检测β-cate-nin、DKK-1蛋白的表达。结果 BPA暴露组较溶剂对照组仔鼠睾丸脏器系数降低,β-catenin、DKK-1蛋白表达明显增加;免疫组化显示,β-catenin、DKK-1蛋白多位于睾丸间质细胞和精原细胞中。结论β-catenin、DKK-1可能参与了出生前后BPA暴露对子鼠雄性生殖细胞发育的影响。     

哺乳期接触双酚A对子代雄鼠睾丸结构及雌激素受体β表达的影响

目的 研究哺乳期接触双酚A(BPA)对雄性小鼠睾丸结构及雌激素受体β(ERβ)表达的影响.方法 20只妊娠母鼠,待分娩后随机分为高、中、低剂量组,BPA染毒剂量为100、50、5 ms/(kg·d)和对照组,母鼠分娩后第2天开始每天灌服BPA,仔鼠通过乳汁暴露于BPA,一直持续到第22天断奶,研究其成年后睾丸组织形态学改变.并用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法研究BPA对其成年后睾丸内ERβ表达的影响.结果 睾丸形态学分析表明BPA处理组睾丸发育受到严重影响,生精细胞排列紊乱,支持细胞和各级生精细胞生长受到不同程度的抑制;免疫组化、RT-PCR及Western blot均显示,高、中、低剂量组雄鼠成年后睾丸组织中ERβ的表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 哺乳期接触BPA影响雄鼠睾丸发育,改变其成年后睾丸形态,提高睾丸组织内ERβ表达,提示BPA可能通过改变雌激素受体表达从而影响睾丸发育.     

Wnt/β-catenin信号通路在双酚A暴露对子鼠雄性生殖细胞表达

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路蛋白在出生前后双酚A（BPA）暴露对子鼠雄性生殖表达。方法 ICR孕鼠饮水染毒,自受孕0天随机分为：溶剂对照组、100 nmol/LBPA组、300 nmol/LBPA组;雄性仔鼠出生后6周处死,取睾丸组织,免疫组化检测β-catenin、DKK1蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,与溶剂对照组比较,BPA暴露组β-catenin、DKK1蛋白表达明显增加,多分布在精原细胞和睾丸间质细胞中,且间质细胞强阳性。结论 Wnt/β-catenin信号通路蛋白可能参与了BPA暴露对子鼠雄性生殖细胞表达影响。     

围生期高剂量双酚A暴露对仔鼠生命早期调节性T细胞的影响

目的研究围生期高剂量双酚A(BPA)暴露对仔鼠生命早期调节性T细胞(Treg)的影响,初步探讨BPA发育免疫毒性的机制。方法将确认妊娠的ICR母鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、BPA低剂量组(0.125 g/L)、BPA中剂量组(0.5 g/L)和BPA高剂量组(2 g/L);母鼠自妊娠第0天(GD 0)至仔鼠出生后第7天(PND 7)经饮水染毒。PND 7时处死仔鼠,无菌取胸腺,流式细胞仪(FCM)检测胸腺Treg细胞数量,RT-PCR检测Treg细胞特征性转录因子Foxp3 mRNA表达水平。结果与空白对照组及溶剂对照组比较,BPA高、中剂量组仔鼠体重在PND 1、PND 4和PND 7时明显降低(P<0.05);与空白对照组及溶剂对照组比较,BPA高、中、低3个剂量组仔鼠胸腺Treg细胞数量明显减少(P<0.01);与空白对照组及溶剂对照组相比较,3个BPA暴露组仔鼠Foxp3 mRNA表达水平明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论围生期高剂量BPA暴露可明显影响仔鼠生命早期体内Treg细胞,从而影响机体免疫功能。     

孕鼠双酚A染毒对雄性子鼠睾丸结构及MnSOD-SIRT3蛋白表达的影响

目的 探讨孕鼠双酚A(BPA)染毒对雄性子鼠睾丸结构及MnSOD-SIRT3蛋白表达的影响。方法 将ICR孕鼠随机分成4组,自受孕第一天始,用溶剂对照组、BPA低剂量(10 nmol/L)组、BPA中剂量(50 nmol/L)组、BPA高剂量(300 nmol/L)组,饮水染毒,待子鼠出生后第6周,处死雄性子鼠,取睾丸组织,HE染色、电镜观察染毒后子鼠睾丸结构改变,Hoechst染色观察细胞凋亡,Western blot法检测睾丸组织MnSOD、SIRT3蛋白的表达。结果 与溶剂对照组比较,HE染色显示,染毒组睾丸组织的形态有损伤,且中、高剂量组较为严重;电镜显示,中、高剂量组的间质细胞、精原细胞、支持细胞均有损伤;Hoechst 33258染色显示:染毒组较对照组睾丸组织内各细胞凋亡明显;Western blot检测显示:随染毒剂量增加,睾丸组织MnSOD、SIRT3蛋白表达呈下降趋势。结论 BPA可影响睾丸组织学结构,诱导生精细胞和间质细胞的凋亡,其机制可能与降低睾丸组织中MnSOD和SIRT3表达有关。     

双酚A对雄性仔鼠生殖功能的影响

目的：探讨双酚A对雄性仔鼠生殖功能的影响。方法：妊娠小鼠随机分成4组，从受孕第1天起实验组分别以30、120和360 mg•kg^-1•d^-1剂量溶于玉米油中的双酚A染毒至仔鼠出生，对照组用相同体积玉米油灌胃。仔鼠出生30 d后检测各组雄性仔鼠精子畸形率、睾丸乳酸脱氢酶(LDH)和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD)、脏体比及病理组织学改变。结果：实验组小鼠睾丸曲细精管上皮细胞排列紊乱、成熟精子数量减少，部分上皮与基底部分离，且随剂量增加而加重；与对照组比较，低、高剂量组脏器系数降低，中、高剂量组LDH活性、G-6-PD活性降低，低剂量组LDH活性升高；随剂量增加精子畸形率增高，差异均具有显著性(P<0.01)。结论：胚胎期接触双酚A对F1代雄性仔鼠的生殖功能产生影响。     

双酚A对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响及机制

目的观察双酚A(bisphenol A,BPA)对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响,探讨糖皮质激素受体(GR)、11β羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)及类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)蛋白表达的改变及意义。方法雄性SD大鼠24只,随机均分成4组:正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。低剂量组、中剂量组及高剂量组予出生后第21天起分别给予不同剂量[(2.4μg/(kg.d)、1mg/(kg.d)、200mg/(kg.d)]的双酚A灌胃至出生后第35天。正常对照组给予等容积的玉米油灌胃。实验结束时处死大鼠,测量大鼠体重、睾丸重量,光镜及电镜下观察睾丸Leydig细胞的形态学改变,酶联免疫吸附测定法检测血清睾酮浓度,Western-blotting法检测睾丸Leydig细胞GR、11β-HSD及StAR的蛋白表达。结果高剂量组Leydig细胞线粒体肿胀明显。低剂量组大鼠血清睾酮下降(P<0.05)。低剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达升高(P<0.05),中剂量和高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达明显降低(P<0.01),高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞11β-HSD蛋白及StAR蛋白表达降低(P<0.05)。结论双酚A可以干扰大鼠未成年Leydig细胞的睾酮合成,GR、11β-HSD及StAR的蛋白表达改变可能是其重要机制。     

围生期双酚A暴露对雄性子代大鼠中脑多巴胺神经细胞凋亡的影响

目的探讨围生期双酚A暴露对大鼠雄性子代腹侧中脑区多巴胺神经元凋亡及对酪氨酸羟化酶(tyros ine hydroxy lase,TH)蛋白表达的影响。方法孕鼠自妊娠第10 d起至哺乳期结束分别每日给予50(高)、5(中)、0.5(低)、0(对照)m g/kg.bw双酚A灌胃染毒,于子代出生后(postnata l day,PND)第21、30 d取雄性仔鼠脑,采用免疫组化方法检测腹侧中脑区C aspase-3、B cl-2和TH的表达,原位凋亡检测PND 21时腹侧中脑区神经细胞的凋亡。结果仔鼠出生后的两个检测时间点,高、中剂量染毒组的腹侧中脑区与对照组相比C aspase-3表达明显增加,B cl-2表达明显降低,PND 21时腹侧中脑区可见较多的凋亡细胞。PND 21及PND 30时腹侧中脑区TH表达降低。结论围生期双酚A高、中剂量暴露能导致断乳期雄性子代鼠脑多巴胺神经元的凋亡增加,使腹侧中脑多巴胺神经元富集区酪氨酸羟化酶减少,从而影响多巴胺神经系统的功能。     

母源性BDE-209暴露对仔鼠学习记忆能力的影响及剂量效应关系

目的 从剂量效应关系角度出发,研究大鼠在妊娠期及哺乳期暴露于不同剂量BDE-209对仔鼠空间学习记忆能力的影响.方法 通过胃灌的方法建立Wistar母鼠自妊娠期至哺乳期的不同剂量BDE-209(100、300、600、1200mg/kg·d)的暴露模型,分别为实验A、B、C、D组,对照组E胃灌等量花牛油.每组随机选取刚断乳第一代雄性仔鼠各20只为观察对象,通过Morris水迷宫法检测仔鼠的空间学习记忆能力,光镜下观察仔鼠海马组织结构的变化.结果 水迷宫第1～2天,各组逃避潜伏期无显著差异(P>0.05);第3～5天,与对照相比,B、C、D组潜伏期均延长(P<0.05);A组与对照组无显著差异(P>0.05).HE染色光镜下A、B组仔鼠海马组织结构与对照组比较无显著差异,但C、D组神经细胞数量显著减少,排列紊乱,细胞核固缩过半,细胞间质水肿.结论 母源性BDE-209可导致仔鼠空间学习记忆障碍,影响仔鼠海马组织结构,且具有剂量效应关系.     

出生前后双酚A暴露对小鼠不同时期血清白介素-17白介素-23的影响

目的研究出生前后高剂量双酚A（BPA）暴露对小鼠不同时期血清白介素-17（IL-17）和白介素-23（IL-23）水平的影响,初步探讨BPA发育免疫毒性机制。方法将确认妊娠的ICR母鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、BPA剂量组（高、中、低组分别为2.0、0.5和0.125 g/L BPA）;母鼠自妊娠第0 d（GD0）至仔鼠断乳（出生后第21 d,PND21）经饮水暴露于BPA。分别于PND7、PND21和PND42取仔鼠外周血用ELISA检测IL-17和IL-23含量。结果在PND7和PND21时,随母鼠BPA暴露剂量的增加,仔鼠血清IL-17和IL-23含量逐渐上升,2.0 g/L BPA组与空白对照组和溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P值均〈0.05）。在PND42时,各BPA暴露组仔鼠血清IL-17和IL-23含量与空白对照组和溶剂对照组差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论出生前后BPA暴露可能引起子代断乳前体内Th17细胞分泌的细胞因子含量升高。     

Kiss-1基因在双酚A诱导的雌性性早熟大鼠下丘脑中的表达

目的:探讨Kiss-1基因在环境内分泌干扰物双酚A诱导的雌性性早熟大鼠下丘脑中mRNA的表达.方法:正常21日龄清洁级SD雌性大鼠30只,随机分为3组:正常青春前期组(组1)、正常青春期组(组2)、双酚A组(组3).每天双酚A 400 mg/kg灌胃.RT-PCR法检测组1、组2和组3的Kiss-1 mRNA的表达.结果:与组1相比,组3下丘脑Kiss-1 mRNA水平增加了2.35倍,差异具有显著性(P＜0.05).组3与组2的Kiss-1 mRNA的表达差异无显著性(P＞0.05).结论:环境内分泌干扰物双酚A可导致雌性大鼠的性早熟,Kiss-1与双酚A诱发的性早熟中可能有关.     

钳夹子宫血管致宫内生长迟缓幼鼠小脑皮层神经生长因子改变的研究

目的　了解宫内发育迟缓 ( IUGR)幼鼠脑发育过程中神经生长因子 ( NGF)在不同阶段的变化 ,探讨 IU GR所致脑损伤的发生机理。方法　采用钳夹孕鼠子宫血管 30分钟的方法建立 IU GR幼鼠动物模型 ,用免疫组化染色检测 IUGR幼鼠出生时及生后第 6天小脑皮层 NGF蛋白变化。结果　 1IUGR幼鼠出生体重较正常对照组降低 16 .1% (小于 2个标准差 ,P<0 .0 0 0 1) ;2 IU GR幼鼠出生时脑重较正常对照组脑重降低 ( P<0 .0 5 ) ;3IU GR幼鼠生后第 6天体重与正常对照组无差异 ( P>0 .0 5 ) ,但脑重仍有差异 ( P<0 .0 5 ) ;4IU GR幼鼠出生时小脑皮层 NGF蛋白较正常对照组降低 ( P<0 .0 0 5 ) ,且在生后第 6天仍有差异 ( P<0 .0 5 ) ,此改变与脑重改变一致。结论　本方法成功建立了 IU GR动物模型 ,且该模型所致 IUGR幼鼠伴有脑发育迟缓。IU GR幼鼠脑发育落后的发生可能与脑内 NGF水平下降有关 ,且 NGF的降低持续时间长 ,影响持久。本研究还发现 :IU GR幼鼠体格发育存在追赶生长 ,而脑发育迟缓不易恢复     

钳夹子宫血管致宫内生长迟缓幼鼠小脑皮层神经生长因子改变的研究

OBJECTIVE: To understand the level of nerve growth factor (NGF) in the brain of rat pups in intrauterine growth retardation (IUGR), explore the mechanism of brain injury. METHODS: Animal models for IUGR pups were established by clamping the uterine vasculature of pregnant rats with 30 minutes in this study. NGF proteins were measured by immunohistochemistry in the cerebellar cortex of rat pups at birth (21 days of gestation), and on the sixth day after birth. RESULTS: 1. The body weight of the 21-day fetuses in IUGR group decreased 16.1% as compared to that in control group (P < 0.0001); 2. The brain weight of the 21-day fetuses in IUGR group decreased to that in control group (P < 0.05) development of their brain retardation during the intrauterine in IUGR fetus period in this model; 3. On the sixth day after birth, there was no statistical difference in body weight between the IUGR and the control groups. But the brain weight difference between these two groups was still there; 4. At birth and on the sixth day after birth, there were statistical differences in NGF proteins in cerebellum between the IUGR and the control groups, which got along with the decrease of their brain weights. CONCLUSION: A successful animal model of IUGR was established by clamping the uterine vasculature of pregnant rats with 30 minutes, and the development of their brain were retarded in IUGR fetus period in this model. Brain retardation in IUGR pups may relate with the decreased level of NGF in brain. This study discovered that quick "catch-up" growth in physical development and slow "catch-up" growth in brain development in IUGR pups.     

胎儿生长受限及出生后高脂饮食对雌性大鼠胰岛素抵抗及生殖的影响

目的 探讨胎儿生长受限（FGR）及出生后高脂饮食（HF）对雌性SD大鼠胰岛素抵抗（IR）发生的作用,以及对青春期发育和生殖功能的影响。方法 采用低蛋白饮食法建立FGR模型。FGR和正常组（C）新生雌鼠又各随机分为2组,每组16只,分别予高脂和常规饲料（N）喂养（即FGR／HF组,FGR／N组,C／HF组,C／N组）。出生后第30天始每组随机取10只观察阴道开口及动情周期变化;第13周每组随机取10只测定体重（Bw）、身长、肾周脂肪重量（Fw）;同时空腹采血测血糖（FPG）、胰岛素（FINS）、睾酮（T）水平,计算HOMA—IR及ISI;第13周始每组取6只雌鼠行合笼实验。结果 FGR／N组、FGR／HF组、C／HF组大鼠在成年期均出现了肥胖趋势及IR现象,表现为FINS水平升高（20±12,19±8,26±15VS7±7,均P〈0．05）及ISI（3．0±1．1,2．7±1．1,2．9±0．7 vs 4．8±2．0,均P〈0．05）降低;FGR／N组大鼠存在青春期延迟并且FGR／N组、FGR／HF组及C／HF组均存在稀发排卵现象,FGR／HF组生育能力明显降低;FGR／HF组存在最严重的肥胖趋势、IR和生殖功能紊乱。结论 FGR大鼠存在青春期延迟、稀发排卵及成年期IR,出生后高脂饮食加剧了FGR者的IR及生殖内分泌紊乱的严重程度。     

电磁辐射对子代大鼠学习记忆功能的影响

目的 研究电磁辐射对子代大鼠学习记忆能力的影响.方法 健康Wistar大鼠分为雌雄2组,每组又随机分为4组:对照组(CRT)、100s组(SI)、1000 s组(S10)和3000 s组(S30)组,分别接受0s、100s、1000 s和3000 s电磁辐射(场强100kV/m).辐照后2月将辐照时间相同的雌性和雄性动物合笼生育子代,子代雌雄2组根据其亲代的分组方式相应分为F-CTR、F-S1、F-S10、F-S30(F指子代),各4组,每组20只.通过行为学实验检测2月龄和6月龄子代大鼠的学习记忆能力.结果 (1)2月龄子代大鼠:穿梭实验中各辐照组与对照组比均差异无显著性.Y迷宫中雄性F-S10与雄性F-CTR比,学习总次数和错误次数都减少,学习总次数为(14.6±3.9)次vs(21.1±7.8)次,错误次数为(3.5±2.4)次vs(7.8±5.4)次(P<0.05).雌性F-S10与雌性F-CTR比,学习总次数和错误次数也都减少,分别为(13.4±3.0)次vs(25.8±8.8)次,(3.4±2.6)次vs(11.0±7.2)次(P<0.05).旷场实验中雌雄2组的F-S1与其对应的F-CTR,自发活动和探索能力都提高(P<0.05).(2)6月龄子代大鼠:Y迷宫中仅雄性组中的F-SI和F-S30与F-CTR比学习总次数增加,分别为(24.2±8.9)次vs(14.1±5.2)次,(30.7±12.4)次vs(14.1±5.2)次,(P<0.05).穿梭试验和旷场实验中各辐射组与对照组比均差异无显著性.结论 在该辐照条件下,100 kV/m的电磁辐射对2月子代大鼠记忆及对新事物的探索能力表现出刺激效应,成年后这种影响减弱.     

新生大鼠HIBD后海马增殖细胞分化和bFGF的相关性探讨

目的: 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马齿状回增殖细胞分化情况,及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 干预对其的影响,探讨实验大鼠的远期行为学变化.方法: 7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组和bFGF干预组,建立HIBD模型(假手术组不予缺氧处理),分别于术后5、10、14、21 d取脑,采用免疫荧光双标记观察大鼠海马齿状回BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP阳性细胞表达,并应用Y-迷宫法进行行为学测定.结果: 缺氧缺血组及bFGF干预组BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP阳性细胞于术后10、14 d较5 d时有所升高(P＜0.05),21 d下降至5 d时的水平.与假手术组及缺氧缺血组比较,bFGF干预组于HIBD后各个时间点BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP阳性细胞均有所增加(P＜0.05).Y-迷宫测试显示bFGF干预组学习记忆能力较缺氧缺血组有所提高(P＜0.05).结论: HIBD后海马齿状回增殖细胞存在分化为神经元及星形胶质细胞的现象,bFGF能够促进HIBD后海马齿状回增殖细胞向神经元及星形胶质细胞分化,并可以改善大鼠后期行为记忆能力.     

Mechanism of Retinoic Acid and Mitogen-activated Protein Kinases Regulating Hyperoxia Lung Injury

Acute and chroniclunginjury are major causesresponsible for the mortality and morbidityin bothpretermand termneonates .Prolonged exposure tohyperoxia inthe developinglungis believedto playcritical roles in the development of acute and chro-nic lung injury[1]. Recent studies demonstratedthat mitogen-activated protein kinases ( MAPKs)play an i mportant role in hyperoxia-induced lunginjury[2]. The processes of lung growth,develop-ment ,injury and repair are extremely complex,in-volving a multit…     

长期接触低剂量氯化甲基汞对发育阶段大鼠小脑蛋白激酶C活性的影响

目的：探讨氯化甲基汞(mthylmercury chloride,MMC)对发育大鼠小脑组织蛋白激酶C(PKC )活性的影响。方法：实验组母鼠从妊娠前90 d至仔鼠出生后30 d连续喂饲含有不同剂量MMC（0.75、1.50和3.00 mg·kg^-1）的普通饲料,取其生后(Postnatal day, PND)3、7、14、21和30 d仔鼠小脑组织提取胞浆和胞膜PKC。采用改良Takai法观察MMC对发育大鼠小脑PKC活性的影响。结果：实验组生后不同时间仔鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC活性均高于相应对照组,其中实验组Ⅰ（0.75 mg·kg^-1 MMC）PND　3、7和14 d,实验组Ⅱ (1.5 mg·kg^-1 MMC)和实验组Ⅲ (3.0 mg·kg^-1 MMC)仔鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC活性明显高于对照组（P<0.05)。结论：MMC可能通过影响大鼠脑发育过程中PKC活性介导其神经毒性作用。