NR3亚单位的研究进展

NMDA受体属于配体门控阳离子通道。传统NMDA受体主要由NR1亚单位和不同的NR2亚单位组成。NR1是形成NMDA受体的基本亚单位,NR2为调节亚单位。NR1亚单位上有甘氨酸结合位点,NR2亚单位上有谷氨酸结合位点。     

NMDA受体亚基的研究进展

NMDA受体是包含谷氨酸和甘氨酸结合位点的配体门控性离子通道,在中枢神经系统的突触传递和突触可塑性调节中起着重要的作用。已证实的3种NMDA受体亚基,在体内有着不同的分布和功能,通过基因的选择性剪切可产生多种亚单位,组成不同构成的异聚体。NMDA受体是具有多个不同结合位点的大分子复合物,其生理特性同异聚体通道的装配密切相关。神经元中NMDA受体不同亚单位的构成及分布将会影响通道的活性和信号转导。     

离体培养神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2B的表达

目的研究离体培养的大鼠神经干细胞（NSCs）中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18～19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs，用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18～19天胎鼠海马的NSCs，即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。     

血管性痴呆大鼠NMDA受体与学习记忆的研究

N-甲基天疼氨酸（NMDA）受体是中枢神经系统中一类重要的兴奋性氨基酸受体,具有配体、电压双重门控特性,并对Ca^2＋有高通透性,但静息状态下Mg^2＋结合在通道内,阻止Ca^2＋内流。其至少存在7个亚单位,即NR1亚单位、4种NR2亚单位（分为NR2A、NR2B、NR2C和NR2D）以及两种NR3亚单位（NR3A和NR3B）。NRl为功能性亚基,是组成NMDA受体通道的必需配件;NR2是修饰蛋白,与NRl构成异寡聚体,形成有高度功能活性的NMDA受体通道;NR3主要发挥抑制作用。由不同亚单位组成的受体往往表现出不同的生理学和药理学特性,从而参与机体各种状态下的病理生理过程。NMDA受体广泛分布于哺乳动物的大脑皮层到脊髓等中枢部位,尤以在与学习记忆有关的大脑皮层和海马结构等的密度最高,奠定了NMDA受体参与学习记忆的物质基础。     

NMDA受体在培养神经元突触内和突触外发育中的变化

目的 观察培养大鼠海马神经元NMDA受体在突触内和突触外发育中的变化.方法 采用膜片钳的全细胞模式和外面向外模式分别记录突触内和突触外NMDA受体通道电流.结果 培养2周海马神经元突触内NMDA受体通道介导的微小兴奋性突触后电流(mEPSCNMDA)幅度比培养1周神经元小,对NMDA受体亚单位NR2B的特异拮抗剂ifnprodil的敏感性远低于培养1周神经元;培养2周神经元突触外NMDA受体的单通道电流幅度和开放概率比培养1周神经元增大,但两者的电导和翻转电位无显著差异.ifenprodil降低培养1周和2周神经元突触外NNDA受体单通道电流的电导和开放概率,且对培养2周神经元开放概率的抑制作用更显著.结论 NMDA受体通道电流在培养海马神经元突触内和突触外有发育变化,提示NMDA受体NR2亚单位在培养1周的神经元突触内和突触外均主要为NR2B亚单位;而神经元培养到2周时,突触内NR2B亚单位逐渐被NR2A亚单位取代,突触外仍主要为NR2B亚单位.     

高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

目的：分析高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响。方法研究时间2015年7月—2016年4月,将36只SD大鼠随机分为模型组(皮下注射用生理盐水配成的蛋氨酸溶液)和对照组(相应体积的生理盐水),检测不同时间点大鼠血浆同型半胱氨酸含量及脑内NMDA受体亚单位(NR1、NR2A、NR2B)的蛋白含量。结果模型组中第3小组大鼠的Hcy、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B分别为(21.46±1.37)、(0.99±0.13)、(0.95±0.18)、(1.47±0.25),均高于第2小组和第1小组(P<0.05),第1小组大鼠上述指标含量均为最低,分别为(10.14±1.13)、(0.74±0.11)、(0.70±0.23)、(0.68±0.13)。模型组3个小组大鼠的脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B含量均高于对照组中对应小组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高同型半胱氨酸血症会导致大鼠脑内NMDA受体亚单位的蛋白表达上升,加重大鼠脑神经损伤。     

实时荧光定量PCR检测大鼠耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体亚单位的基因表达

目的了解大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)中NMDA受体亚单位的基因表达水平,为进一步探讨SGN中NMDA受体的功能提供依据。方法利用倍比稀释的出生3 d的大鼠正常脑组织CDNA构建NMDA受体亚单位NR1、NR2(A～D),NR3(A～B)与甘油醛-3磷-酸脱氢酶(GAP-DH)基因的相对标准曲线,通过实验验证NR1、NR2(A～D),NR3(A～B)分别和内参基因GAPDH是否有一致的扩增效率,应用△Ct法对NMDA受体各亚单位的表达进行相对定量。结果 NMDA受体亚单位中由高到低依次为NR2B、NR3A、NR1、NR2D、NR3B、R2A、NR2C;除NR2D与NR3B外,其余各亚单位之间比较均有统计学意义(P<0.01)。结论实时荧光定量PCR可以对SGN中NMDA受体亚单位的表达进行全面定量分析,进一步证实了NMDA受体各亚单位在耳蜗SGN中的表达水平。     

疼痛与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体

已有证据表明NMDA受体对诱发和维持疼痛状态中的中枢敏感性具有重要性。其亚单位NR1、NR2(A、B、C、D)及NR3(A、B)可决定NMDA受体的功能特性，其中NR2B对感受伤害尤为重要，因而NR2B选择性拮抗剂有可能用以治疗慢性疼痛。     

大鼠海马NMDA受体NR1亚单位蛋白的基础表达量与学习记忆相关

目的 :探讨大鼠海马 N-甲基 - D-门冬氨酸 (NMDA)受体 NR1亚单位蛋白表达水平与学习记忆的关系。方法 :用新事物识别模型 (novel object recognize model)和 Morris水迷宫 ,分析 SD大鼠的新事物探究能力和空间学习能力 ,根据指标最强的 2 0 %和最弱的 2 0 % ,分别选取新事物探究能力强和弱 2组 ,以及空间学习能力强和弱 2组。分离制备上述各组大鼠海马的膜蛋白 ,用 NR1亚单位特异性抗体作免疫印迹分析 ,测定 NR1亚单位蛋白的含量。结果 :新事物探究能力强组大鼠海马的 NR1亚单位蛋白含量比弱组高 6 0 % (P<0 .0 1) ,空间学习能力强组大鼠海马 NR1亚单位蛋白含量比弱组高 4 5 .4 % (P<0 .0 5 )。结论 :大鼠海马 NMDA受体 NR1亚单位蛋白的基础表达量与新事物探究能力和空间学习能力相关。     

C末端缺失NR2B亚单位表达载体的构建及其在NMDA受体装配研究中的应用

目的：研究NMDA受体NR2B亚单位细胞内C末端，在NR1—1a／NR2B亚型NMDA受体装配和表面表达中的作用。方法：构建C末端不同缺失和GFP标记的NR2B亚单位表达载体，单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞，用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果：成功构建了8个C末端不同缺失的GFP—NR2B表达质粒(GFP—NR2B△1～△8)。将GFP—NR1—1a，GFP—NR2B及GFP—NR2B△1～△8分别单独转染HEK293细胞，不能获得迭细胞膜表面的表达。而将这些质粒分别与NR1—1a共转染293细胞，发现GFP—NR2B及C末端部分缺失的GFP—NR2B△1～△6，均能与NR1—1a一起表达于细胞膜表面，而仅留有PDZ结合基序的GFP—NR2B△7和C末端全长缺失的GFP—NR2B△8，则不能与NR1—1a一起表达于细胞膜表面。结论：NR1—1a与NR2B的共表达和装配，是形成NR1—1a／NR2B亚型NMDA受体并表达于细胞表面的必要条件。NR2B与NR1—1a装配时，NR2B对NR1—1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用，并不依赖于NR2BC末端某一特定的区域，相反可能仅要求有一定长度的NR2BC末端。     

大鼠海马脑片长期培养中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达变化

目的 研究在长期培养大鼠海马脑片各区中N-甲基-D-门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚单位NR2A，NR2B表达的变化规律。方法 400μm厚大鼠海马脑片，体外培养1，2，3，4，5周，再作20μm厚冰冻切片，行NR2A，NR2B免疫组织化学反应和图像分析。结果 NR2A，NR2B在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞体均有表达，NR2B还在CA1区锥体细胞顶树突明显着色。1周时，NR2A的表达较弱；4周时升至高峰，在CA3区，NR2B的表达1周时即达高峰；但在CA1区其表达至3周时始达高峰。结论 长期培养大鼠海马脑片各区中NR2A，NR2B的表达有时空变化，且二者的表达模式不同，提示此间NMDA受体的结构和功能可能也有改变。     

突触内NMDAR通道电流在培养神经元发育中的变化

[目的]观察培养大鼠海马神经元突触内NMDA受体（NMDAR）通道电流在发育中的变化。[方法]取新生1dSD大鼠海马制成细胞悬液,接种在培养板上进行培养。培养到1周和2周时,采用膜片钳全细胞模式记录神经元突触内自发的微小兴奋性突触后电流（mEPSC）。[结果]培养2周海马神经元突触内NMDA受体介导的mEPSC（mEPSCNMDA）幅度比培养1周神经元小,对NR2B的特异拮抗剂ifenprodil的敏感性降低。Ifenprodil对培养1周神经元mEPSCNMDA的抑制作用达到（80.47±6.12）%,却只抑制（12.27±2.02）%培养2周神经元的mEPSCNMDA。[结论]培养海马神经元突触内NMDA受体通道电流有发育变化,提示培养1周神经元突触内NMDA受体NR2亚单位主要为NR2B;而神经元培养到2周时,突触内NR2B亚单位逐渐被NR2A取代。     

突触内NMDAR通道电流在培养神经元发育中的变化

 [目的]观察培养大鼠海马神经元突触内NMDA受体（NMDAR）通道电流在发育中的变化。[方法]取新生1dSD大鼠海马制成细胞悬液,接种在培养板上进行培养。培养到1周和2周时,采用膜片钳全细胞模式记录神经元突触内自发的微小兴奋性突触后电流（mEPSC）。[结果]培养2周海马神经元突触内NMDA受体介导的mEPSC（mEPSCNMDA）幅度比培养1周神经元小,对NR2B的特异拮抗剂ifenprodil的敏感性降低。Ifenprodil对培养1周神经元mEPSCNMDA的抑制作用达到（80.47±6.12）%,却只抑制（12.27±2.02）%培养2周神经元的mEPSCNMDA。[结论]培养海马神经元突触内NMDA受体通道电流有发育变化,提示培养1周神经元突触内NMDA受体NR2亚单位主要为NR2B;而神经元培养到2周时,突触内NR2B亚单位逐渐被NR2A取代。     

NMDA受体NR2A亚单位C末端突变体在HEK293细胞的共表达研究

目的：研究N—甲基—D—天冬氨酸(NMDA)受体NR2A亚单位的细胞内羧基端在受体装配和表面表达中的作用。方法：构建N末端GFP标记、C末端不同区域缺失的NR2A亚单位表达载体GFP—NR2A△C1～GFP—NR2A△C5，其C末端缺失区依次分别为897L—1017S、1024D—1142P、1149D—1347G、1354S—1464V和897L—1464V。将它们单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞，用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果：成功构建了5个C末端不同区域缺失的GFP—NR2A表达质粒GFP—NR2A△C1～GFP—NR2A△C5。将这些载体分别单独转染HEK293细胞，均不能获得达细胞膜表面表达。而将这些质粒分别与NR1—1a共转染HEK293细胞，发现它们均能与NR1—1a表达于细胞膜表面。结论：NR1—1a与NR2A的共表达是形成NR1—1a／NR2A亚型NMDA受体并获得细胞表面表达的必要条件。NR2AC末端897L下游并未找到直接与NR1—1a C1盒中内质网滞留基序相互作用的某一特定区域，也不含有决定NR2A亚单位本身细胞内滞留的区域。     

惊厥和亚惊厥剂量戊四唑对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

目的:研究不同剂量戊四唑刺激对大脑皮层内N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1、NR2A和NR2B 3种亚单位表达量的影响.方法:腹腔注射亚惊厥剂量(35 mg/kg)和惊厥剂量(50 mg/kg)的戊四唑,注射后不同时间点分离大脑皮层,用免疫印迹法检测NMDA受体NR1、NR2A、NR2B 3种亚单位的蛋白含量.结果:注射戊四唑亚惊厥剂量和惊厥剂量组大鼠的行为学差异非常显著(P＜0.001),但NMDA受体3种亚单位仅NR2A亚单位在1 h点有显著性增高,且惊厥剂量组NR2A的表达量比亚惊厥剂量组高(P＜0.05).惊厥剂量组NR2A和NR2B表达有先增加再降低然后恢复至正常水平的趋势,而NR1亚单位改变不明显.结论:戊四唑引起惊厥的机制可能与戊四唑首先影响NR2亚单位蛋白的表达,以调节NMDA受体的功能有关.     

谷氨酸NMDA受体激活双重作用的教学体会（摘要）

为了培养研究生在文献中抓住有用信息并进行分析的能力,我们以NMDA受体激活在LTP和LTD以及NMDA 受体激活引起神经毒性和神经保护相反作用为例进行探讨.我们收集相关资料,根据研究发展线索进行分析,如NMDA受体激活引起LTP和LTD首先是通过高频电刺激引起LTP、低频电刺激引起LTD观察到的现象,随后发现是由同样的NMDA、AMPA受体引起的,进一步研究表明,不同的NMDA受体亚单位是确定极性的关键因素,含NR2B亚单位的NMDA受体引起LTD,含NR2A亚单位的NMDA受体引起LTP,分析细胞内信息传递过程,发现CaMKII介导了增强过程而钙调神经磷酸酶介导了抑制过程;又如激活NMDA受体引起神经毒性和神经保护相反作用现象是通过给予不同剂量的谷氨酸和NMDA观察到的,因为这有重要的临床意义,激起众多学者探讨其机制.     

NMDA受体亚单位NR1在离体人神经干细胞中的表达

目的研究离体培养的人海马神经干细胞（NSCs）中NMDA受体亚单位NR1的表达。方法分离培养胎龄8-12周人胚脑海马神经干细胞,对NSCs进行Nestin和分化鉴定。用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹和RT—PCR等方法检测原代、传代1次、传代2次的人胚胎海马NSCs中NR1蛋白和mRNA的表达。结果在孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs中,NMDA受体亚单位NRI免疫细胞化学反应呈阳性,该受体亚单位的蛋白和mRNA均被检测钊。结论体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1。     

缺氧对大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位磷酸化的影响

目的 观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化.方法 成年大鼠置于模拟海拔5 500 m高度的低压氧舱内,每天缺氧8 h,分别缺氧3、7、14 d和21 d.采用免疫组化、Western blot 免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸磷酸化的变化.结果 免疫组化显示缺氧皮层、海马NR1表达都明显高于对照组(P《0.01).Western blot检测进一步证明NR1的表达显著高于对照组(P《0.01),且随着缺氧时间的延长而增加.缺氧各组酪氨酸磷酸化水平亦显著高于对照组(P《0.01),缺氧14 d后酪氨酸磷酸化达到最高峰,而后开始下降,21 d时仍显著高于对照组(P《0.01).结论 高原缺氧条件下大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位表达及酪氨酸磷酸化水平显著增加,酪氨酸磷酸化的变化可能是影响NMDA受体功能的主要原因.     

AMPA受体与癫痫的关系

癫痫是一种常见的神经系统疾病,严重危害人类健康。α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AM-PA)受体是一种游离型兴奋性谷氨酸受体,由GluR1~GluR4 4个亚单位组成,GluR2亚单位对Ca2+不通透。由于GluR2亚单位的表达天然AMPA受体通道对Ca2+不通透。在AMPA受体激活时,大量Ca2+内流导致神经损伤。AMPA受体对于癫痫发病机制的研究和治疗均有重要作用。     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达

目的 研究NMDA受体亚单位（NR1，NR2A和NR2B）mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点。方法 原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析。结果 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达，其中NR1mRNA的表达最强，NR2AmRNA的表达最弱，NR1mRNA在齿状回（DG）的表达水平明显强于CA1区和CA3区；NR2AmRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG；NR2BmRNA在海马各区的表达水平基本相同。结论 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同，其中NR2AmRNA在海马CA1区以及NR1mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习，记忆等生理功能以及选择性易损现象有关。