TIA-1通过影响肝细胞转录因子的活性调节HBV的e抗原和s抗原表达

目的证明TIA-1分子具有调节HBV基因表达的功能。方法TIA-1真核表达质粒pcDNA3-TIA-1，用脂质体转染HepG 2．2．15细胞后，ELISA检测e和s抗原的表达；RT-PCR检测与HBV复制有关的转录因子HNF1、HNF2、HNF3、HNF4、RXRα、PPARα、C／EBP的表达。结果与正常的HepG 2．2．15细胞相比，转染pcDNA3-TIA-1质粒的HepG 2．2．15细胞，其e抗原的表达量明显的增高，而s抗原表达量明显的降低。与正常的HepG 2．2．15细胞相比，转染pcDNA3-TIA-1质粒的HepG 2．2．15细胞中的HNF1、HNF2、RXRα mRNA含量有明显的下降。结论TIA-1蛋白能通过影响与HBV复制有关的转录因子活性，调节HBVe抗原和s抗原的表达。     

复方大黄对HBV抗原分泌的抑制作用研究

目的 观察复方大黄对HBV病毒复制的抑制作用.方法 用MTT法测定复方大黄在不同浓度下对HepG2.2.15细胞的细胞毒性,ELISA法检测复方大黄对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg颗粒的影响.结果 复方大黄对HepG2.2.15细胞4d和8d的半数毒性浓度(TD50)分别为1.73和1.06(P＜0.05);对HBeAg4d和8d的治疗指数(TI)分别为2.84和5.30(P＜0.01);对HBsAg4d和8 d的治疗指数分别为0.00和0.42(P＞0.05).结论 复方大黄可抑制HepG2.2.15细胞分泌HBeAg,具有体外抗乙型肝炎病毒的作用.     

乙型肝炎病毒及其抗原诱导肝癌细胞HepG2表达IL-8研究

目的 研究HBV及其抗原成分是否诱导HepG₂细胞表达IL-8及其相关机制。方法 以人肝胚瘤细胞株HepG₂和HepG₂.2.15细胞为研究对象,比较分析两种细胞株细胞上清液中IL-8的表达,并将能够表达完整HBV病毒颗粒或HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBx蛋白的质粒pSM2、pHBs-EGFP、pHBe-EGFP、pHBc-EGFP和pHBx-EGFP转染HepG₂细胞,以ELISA技术分析细胞上清液的IL-8表达情况。在转染pSM2、pHBx-EGFP质粒的HepG₂细胞中加入核转录因子NF-κB抑制剂SN50,以凝胶阻滞电泳和ELISA技术分析细胞中核转录因子NF-κB活性和细胞上清液中IL-8含量。结果 HepG₂.2.15细胞上清液中IL-8显著高于HepG₂细胞;转染HBV全基因组序列表达质粒pSM2和HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBx蛋白的质粒pSM2、pHBs-EGFP、pHBe-EGFP、pHBc-EGFP、pHBx-EGFP后,HepG₂细胞能够表达完整的HBV颗粒或HBV抗原,其中转染质粒pSM2和pHBx-EGFP的HepG₂细胞上清液中IL-8的含量显著高于空载体质粒pcDNA3.1和pEGFP-N1转染的HepG₂细胞。EMSA分析提示随着NF-κB抑制剂SN50抑制HepG₂细胞中NF-κB的活性,转染质粒pSM2和pHBx-EGFP的HepG₂细胞上清液中IL-8的含量逐渐减少。结论 在体外细胞模型中,HBV及其抗原成分很可能通过影响细胞核转录因子NF-κB活性进而诱导肝细胞表达IL-8。     

乙型肝炎病毒复制表达载体的构建与表达

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)复制表达载体,验证其在HepG2细胞系中的复制和表达。方法通过引物设计合成,以实验室构建的HBV C1亚型质粒通过PCR、酶切、克隆等分子生物学技术,构建HBV复制表达载体。利用转染试剂(Fugene HD Transfection Reagent)将载体质粒导入HepG2细胞,分别检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和HBV DNA在不同时间点的表达。结果酶切和测序结果均证实载体构建成功,通过瞬时转染细胞证实培养上清液中可检测到HBsAg、HBeAg和HBV DNA。结论利用分子克隆技术成功构建了HBV复制表达载体,可以在HepG2细胞系中复制表达。通过进一步改造,可以为HBV表型耐药以及复制活性研究提供支持。     

乙型肝炎病毒前S1抗原研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）通过血液、母婴密切接触和性传播感染他人。我国乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性率为7．18％（2008年中国CDC资料）,我国每年死于乙型肝炎相关疾病者约27万多人,对劳动人民的健康危害极大。目前,对乙型肝炎的诊断是检测血清乙肝两对半、HBV—DNA以及肝功能的情况,结合临床表现综合判断。建立一种简便、灵敏、重复性好的HBV检测试剂盒具有十分重要的意义。     

乙型肝炎病毒前S抗原的检测及临床意义

目的 :检测不同HBVM模式的Pre S1Ag ,Pre S2 Ag并与HBV DNA相比较 ,探讨二者不同的临床价值。方法 :用ELISA检测标本HBVM ,用ELISA方法检测Pre S1Ag ,用EIA方法检测Pre S2 Ag,用PCR方法检测HBV DNA。结果 :Pre S1Ag阳性率低于Pre S2 Ag,与HBV DNA及HBeAg更接近。在HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性模式中阳性占 87.2 9% ,而Pre S2 Ag在恢复期的模式中阳性率较高。结论 :Pre S1Ag比Pre S2 Ag更适合作为HBV复制活跃的指标 ,Pre S2 Ag与HBV也可作为病毒复制指标 ,同时与病毒清除有关。     

乙型肝炎病毒前S抗原的检测及临床意义

目的:检测不同HBVM模式的Pre-S1Ag,Pre-S2Ag并与HBV-DNA相比较,探讨二者不同的临床价值.方法:用ELISA检测标本HBVM,用ELISA方法检测Pre-S1Ag,用EIA方法检测Pre-S2Ag,用PCR方法检测HBV-DNA.结果:Pre-S1Ag阳性率低于Pre-S2Ag,与HBV-DNA及HBeAg更接近.在HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性模式中阳性占87.29%,而Pre-S2Ag在恢复期的模式中阳性率较高.结论:Pre-S1Ag比Pre-S2Ag更适合作为HBV复制活跃的指标,Pre-S2Ag与HBV也可作为病毒复制指标,同时与病毒清除有关.     

检测乙型肝炎病毒前S1抗原的临床意义

目的 探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1Ag)的检测及在临床的应用价值. 方法 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和荧光定量PCR测定100例乙型肝炎患者和30例健康体检者血清中Pre-S1Ag、HBeAg和HBV-DNA. 结果 以HBV-DNA≥103拷贝/ml为判断乙肝病毒复制的标准,Pre-S1Ag在HBV-DNA阳性组的检出率为84.71%,明显高于阴性组的56.47%;HBeAg阳性组Pre-S1Ag的阳性率81. 25%明显高于阴性组Pre-S1Ag的阳性率27.03%.结论 Pre-S1Ag是参与HBV感染与复制的重要指标,Pre-S1Ag作为乙型肝炎病毒复制的标志物优于HBeAg.     

乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究

目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和West-ernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗-HBs。结果:嵌和蛋白可与抗-HBs特异性结合,其ELISA检测抗-HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。     

探讨188例乙型肝炎病毒前S2抗原的检测及其临床意义

目的：探讨乙肝病毒前S2抗原（pre—S2 Ag）的检测及其临床意义。方法：对188例标本采用ELISA法进行乙型肝炎病毒标志物（HBVM）及pre—S2 Ag检测，并对其中162例标本应用荧光定量PCR法检测HBV—DNA。结果：162例血清标本同时检测HBV—DNA和pre—S2Ag，两者检出率差异无统计学意义（x^2=2．78，P〉O．05）。HBeAg（＋）与HBeAb（＋）组之间pre—S2 Ag阳性率的差异有统计学意义（x^2=28．03，P〈0．005）。HBeAg（＋）组、HBcIgM（＋）组pre—S2 Ag阳性率为100％，HBsAg（＋）的肝癌组pre—S2Ag阳性率达95．0％，结果明显高于HBV—DNA（-）组18．4％，P值均〈0．005。结论：pre—S2 Ag是反映病毒感染与复制的指标，与临床病情活动有关，可作为疗效和预后的观察指标，能完善和补充乙肝病毒血清标志物的检测。     

紫丁香叶提取物对HepG2.2.15细胞中HBeAg及HBsAg表达的影响

目的 :观察紫丁香叶提取物对 Hep G2 .2 .1 5细胞分泌 HBe Ag和 HBs Ag的影响。方法 :采用酶联免疫吸附法 ( ELISA)检测培养上清中 HBe Ag和 HBs Ag表达的变化并以抑制率来表示。结果 :紫丁香叶提取物对 HBe Ag和 HBs Ag的分泌具有抑制作用 ,该作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。结论 :紫丁香叶提取物对 HBe Ag和 HBs Ag分泌的抑制作用提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用     

丁香多总皂对HBV转染细胞表达功能的影响

目的：观察丁香多总皂对HepG2．2．15细胞分泌HBeAg和HBsAg的影响．方法：采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清中HBeAg和HBsAg表达的变化并以抑制率来表示．结果：丁香多总皂对HBeAg和HBsAg的分泌具有抑制作用，该作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。结论：丁香多总皂对HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。     

甘草甜素对HepG2.2.15细胞株HBeAg水平及TLR4表达的影响

目的 探讨甘草甜素(GL)时HepG2.2.15细胞上清HBeAg分泌,Toll样受体4(TLR 4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响.方法 实时荧光定量PCR检测TLR4表达;直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR4的阳性细胞率;ELASA检测HBV所分泌抗原;MTT检测细胞增殖活性,并与空白对照组比较.结果 给药后HBV e抗原(HBeAg)的分泌结果显示,总体均数间差异显著(P<0.05),但甘草甜素各组与对照组比较差异无统计学意义;GL各组TLR4 mRNA及流式细胞TLR4的表达总体均数间均有显著差异(P<0.01),分别与对照组相比差异有显著性(P<0.01),100μg/mL组尤其明显;MTT实验显示,200μg/mL缸以下三个剂量组均可促进细胞增殖,50μg/mL组与对照组间差异显著(P<0.05);400μg/mL、800μg/mL两组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);而MTT结果与HBeAg水平呈显著负相关(P<0.01),与TLR4表达无相关关系(P>0.05.结论 研究表明,甘草甜素对HepG2.2.15的e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活率与e抗原呈负相关;TLR4在HepG2.2.15细胞株低表达,GL可上调TLR 4表达,甘草甜素可影响先天免疫中的TLR4信号分子,有可能在体内通过免疫途径影响HBV复制和抗原分泌.     

茵兰益肝颗粒剂体外抑制乙型肝炎病毒复制的实验研究

[目的]验证含有茵兰益肝颗粒剂药效成分的药物血清对转染乙型肝炎病毒基因的人肝癌细胞系2.2.15(HepG2.2.15)细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原的(HBeAg)抑制作用。[方法]组织培养及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。[结果]药物血清第8天对HepG2.2.15细胞半数毒性浓度(TC₅₀)为11.48%,最大药物血清无毒浓度(TC₀)为6.0%。6.0%~3.0%、1.50%、0.75%4种药物血清浓度在HepG2.2.15细胞中第8天对HBsAg的抑制率分别为7.89%~5.8%、1.6%、1.6%,对HBeAg抑制率均为负值。[结论]茵兰益肝颗粒剂对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg有较低的抑制率,对HBeAg无抑制作用。     

天花粉提取物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的:探讨天花粉水提取物、醇提取物对HepG2.2.15细胞的增殖及培养细胞上清中HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:用MTT方法检测HepG2.2.15细胞的存活率,以酶联免疫法(ELISA)检测HepG2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的表达量。结果:天花粉水提取物和醇提取物处理HepG2.2.15细胞后HBsAg和HBeAg的表达均呈时间依赖性和浓度依赖性抑制,但天花粉水提物的治疗指数明显优于醇提物。结论:天花粉水提物较醇提物有更好的抗HBV活性。     

HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞中的转染与表达

目的 观察HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞株HepG2细胞内表达情况。方法 将构建的HBc与HBV多表位复合基因真核表达质粒pHBcMep以Lipofectamine介导转染HepG2细胞，通过间接免疫荧光、Western-blot检测表达产物。结果 经G418筛选的阳性转染细胞经间接免疫荧光染色后在紫外光激发时发出明显的荧光，而末转染质粒或转染pcDNA3．1的HepG2细胞则无明显荧光。Western-bot结果显示表达产物约为33kDa，并能与抗preS2多抗特异性结合。结论 HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞内获得正确表达。     

田基黄不同提取部位对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用

目的 探讨田基黄不同提取部位对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法 田基黄以不同极性的有机溶剂进行较系统的分级萃取得到不同的提取部位.体外培养人肝癌细胞HepG2细胞株,用倒王相差显微镜观察细胞在田基黄不同提取部位的作用后在形态学变化,用MTT法检测在不同的作用时间下,不同提取部位对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,计算细胞存活率.结果 一定浓度的石油醚提取部位,二氯甲烷提取部位,乙酸乙酯提取部位,正丁醇提取部位均会抑制肝癌细胞H叩G2的生长,且呈剂量依赖性.结论 四种田基黄提取部位能有效的抑制人肝癌细胞HepG2的生长.     

表达A3C的HBV载体质粒抑制HBV的研究

目的 观察表达人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3C(A3C)的复制缺损型HBV载体质粒抑制乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法 利用PCR技术和基因重组方法构建表达A3C和人绿色荧光蛋白(hrGFP)的FIBV载体质粒pcH-LJ3-A3C、pCH-LJ3-hrGFP.分别与野生型HBV质粒pCH-3093共转染HepG2细胞,提取细胞裂解液及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA进行Southern blot检测;提取细胞裂解液中核心蛋白相关的HBV DNA,PCR扩增,克隆,测序.结果 pCH-LJ3-A3C对细胞浆及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA具有抑制作用,使细胞浆内HBV DNA减少31%,使上清液中子代病毒颗粒HBV DNA减少40%;对HBV DNA具有编辑作用,50个克隆测定HBV DNA序列,36克隆出现G-A突变,G-A突变总数量982位点.结论 pCH-LJ3-A3C可以抑制HBV复制,pCH-LJ3-A3C对HBV DNA的编辑作用是其发挥作用的主要原因,pCH-LJ3-A3C可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗HBV感染.

Abstract：

Objective To observe the inhibitory effect of a replication-defective hepatitis B virus (HBV) vector plasmid expressing A3C on HBV replication in vitro. Methods The HBV vector plasmisd pCH-LJ3-A3C and pCH-LJ3-hrGFP expressing A3C and hrGFP were constructed using PCR and gene recombination technique. The two recombinant plasmids were separately cotranfected into HepG2 cells along with the wild-type HBV plasmid pCH-3093. The HBV DNA in the cell cytoplasmic lysates and in the cell culture supernatant was extracted for Southern blotting, and the nucleocapsid-associated HBV DNA were amplified by PCR, cloned and sequenced. Results pCH-LJ3-A3C showed obvious inhibitory effect on HBV DNA in the cytoplasmic lysates and cell culture supernatant, causing a reduction of the HBV DNA by 31% and 40%, respectively. The pCH-LJ3-A3C plasmid was capable of editing the HBV DNA. Among the 50 sequenced clones, 36 clones had G-A mutations, with a total of 982 such mutations. Conclusion pCH-LJ3-A3C can inhibit the replication of HBV primarily by editing HBV DNA. The pCH-LJ3-A3C plasmid may serve as a new antiviral agent against human HBV infection.     

白藜芦醇改善肝细胞脂肪变性的相关调控机制

目的：研究白藜芦醇改善肝细胞脂肪变性的相关调控机制。方法：实验分为对照、白藜芦醇、高脂及高脂＋白藜芦醇组。用逆转录-聚合酶链反应和Western blot检测固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）、叉头框转录因子1（FOXO1）以及去乙酰化酶Sirt1的表达情况,用免疫荧光法检测各组SREBP1的亚细胞定位。结果：与对照组比,高脂组SREBP1表达明显增加（P〈0.05）;高脂＋白藜芦醇组SREBP1表达比高脂组显著减少（P〈0.05）。与对照组比,白藜芦醇组Sirt1、FOXO1表达均明显增加（P〈0.05）;高脂＋白藜芦醇组Sirt1、FOXO1表达比高脂组显著增加（P〈0.05）。免疫荧光结果显示,高脂促进SREBP1从细胞浆移位于细胞核内,使SREBP1转录活性增强。白藜芦醇抑制SREBP1的活性。结论：白藜芦醇可增加Sirt1与FOXO1的表达,抑制SREBP1表达和活性,同时也可改善肝细胞内脂质堆积状态。