高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定柴胡药材中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),A lltim a C18色谱柱,流动相甲醇-水(80∶20),速度0.8 m l.m in-1;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度40℃,气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.908~19.08μg(r=0.999 6)和1.804~18.04μg(r=0.999 2)范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.35%(RSD=1.26%)和97.64%(RSD=1.58%)。结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好,可作为柴胡药材的质量控制方法。     

HPLC-UV-ELSD法测定益肝乐颗粒中槲皮素、山柰素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d

目的采用HPLC-UV-ELSD法测定益肝乐颗粒(垂盆草、柴胡、板蓝根等)中槲皮素、山柰素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的量。方法 Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);体积流量0.8 mL/min;槲皮素和山柰素的检测流动相为甲醇-水-三氟乙酸(40∶60∶0.05),检测波长360 nm。柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的检测流动相为甲醇-乙腈-水(25∶45∶30),ELSD漂移管温度95℃,载气(N2)体积流量2.4 SLPM/min。结果槲皮素和山柰素分别在0.071 3¹.426μg(r=0.999 7)、0.056 81.426μg(r=0.999 7)、0.056 8¹.136μg(r=0.999 3)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.73%、96.97%,RSD(n=6)分别为1.63%、1.52%。柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在0.041 61.136μg(r=0.999 3)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.73%、96.97%,RSD(n=6)分别为1.63%、1.52%。柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在0.041 6⁰.832 0μg(r=0.999 2)、0.026 70.832 0μg(r=0.999 2)、0.026 7⁰.534 0μg(r=0.999 5)进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.35%、98.04%,RSD(n=6)分别为0.81%、1.16%。结论该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。     

HPLC-ELSD同时测定柴胡消瘿颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、阿魏酸及橙皮苷的含量

目的:建立采用高效液相-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法同时测定柴胡消瘿颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、阿魏酸、橙皮苷的含量测定方法。方法:色谱柱为Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.01%甲酸水溶液,梯度洗脱;流速为1.0 m L·min-1;柱温为25℃;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度为60℃,雾化气体为高纯氮气,氮气压力为3.0 MPa,Gain 6。结果:5种活性成分实现良好分离,柴胡皂苷a在0.21~1.64μg线性关系良好,r=0.999 3,平均回收率为102.2%,RSD为1.5%;柴胡皂苷d在0.355~2.840μg线性关系良好,r=0.999 0,平均回收率为101.9%,RSD为1.5%;芍药苷在1.20~9.60μg线性关系良好,r=0.999 5,平均回收率为97.93%,RSD为2.2%;阿魏酸在0.140~1.120μg线性关系良好,r=0.999 2,平均回收率为98.79%,RSD为2.7%;橙皮苷在1.00~8.00μg线性关系良好,r=0.999 2,平均回收率为99.9%,RSD为2.6%。结论:该方法简便、准确,重复性好,可为控制柴胡消瘿颗粒的质量提供参考。     

HPLC法测定柴胡疏肝胶囊中柴胡皂苷a、d的含量

目的建立同时测定柴胡疏肝胶囊中柴胡皂苷a、d含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent C18柱(250 mm x 4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0mL/mi n,柱温为30℃,检测波长为210nm,进样量为10μL。结果柴胡皂苷a、d检测浓度分别在2.958~19.72μg/μL(r=0.999 8),3.09~20.6μg/μL(r=0.999 7)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为99.33%、99.53%,RSD分别为0.84%、0.64%(n=6)。结论本方法简便、准确、重复性好,可用于柴胡疏肝胶囊的质量控制。     

春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定

目的测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。方法应用高效液相色谱（HPLC）法,色谱柱为DiamonsilC18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1mL·min-1,检测波长210 nm。结果柴胡皂苷a在0.4018~6.027μg（r=0.9990）范围内线性关系良好,平均回收率为91.19%,RSD为1.83%（n=6）;柴胡皂苷d在0.5238~7.857μg（r=0.9992）范围内线性关系良好,平均回收率为92.76%,RSD为1.43%（n=6）。结论本研究建立的柴胡皂苷a、d的含量测定方法简便、结果准确。     

HPLC法测定不同产地竹叶柴胡中柴胡皂苷a、d

目的建立HPLC法同时测定竹叶柴胡中柴胡皂苷a和d并对不同产地的品种进行比较。方法 Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水;检测波长204 nm;柱温40℃;体积流量1.0 mL/min;进样量10μL。结果竹叶柴胡中柴胡皂苷a、d的进样量分别在0.147～4.41μg(r=0.999 9)、0.091～2.73μg(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好线性关系,加样回收率分别为101.6%(RSD为2.9%)、100.4%(RSD为2.3%)。结论对10个产地竹叶柴胡中柴胡皂苷a的平均含有量为0.12%,柴胡皂苷d为0.07%,其中以云南禄丰产的含有量最高。     

HPLC测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量

目的:建立同时测定柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的高效液相色谱法。方法:色谱柱:Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm 5μm),柱温:25℃。波长:210 nm,流速:1 mL.m in,流动相:乙腈∶水=50∶50。结果:柴胡皂苷a的线形范围12.5 ng/μL~500 ng/μL,回归方程为:A=6.328C 135.355,r=0.9983,回收率为103.97%;柴胡皂d的线形范围16.25 ng/μL~650 ng/μL,回归方程为:A=6.712C 117.175,r=0.9993,回收率为99.42%。结论:该方法简便、快捷、准确,重复性好,适合于普通实验室。     

RP-HPLC法测定保康北柴胡中柴胡皂苷a、d的含量

目的采用RP-HPLC法测定保康北柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。方法色谱柱:BonChrom C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0 mL.min-1,检测波长:204 nm。结果柴胡皂苷a:Y=7.131 4X+2.011 8,r=0.999 7,线性范围:2.136~21.360μg;柴胡皂苷d:Y=9.032 3X+3.739 2,r=0.999 0,线性范围:2.656~26.560μg。平均回收率:柴胡皂苷a 99.3%(RSD=0.73%),柴胡皂苷d99.4%(RSD=0.82%)。结论本法简便快捷,结果准确,重复性好,GAP基地的柴胡皂苷含量较高。     

高效液相色谱-蒸发光散射测定柴芩清肝方提取物中柴胡皂苷a的含量

目的:建立柴芩清肝方提取物中柴胡皂苷a的含量测定方法。方法:采用Diamonsil C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,蒸发光散射检测器进行检测,漂移管温度105℃,氮气流速2.0L·min-1。结果:柴胡皂苷a进样量在1.7～8.5μg与峰面积对数线性关系良好(r=0.999 4),平均回收率为96.6%,RSD1.8%(n=5)。结论:方法专属性强、准确、快速,适用于柴芩清肝方提取物中柴胡皂苷a的含量测定。     

HPLC-ELSD测定柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d的含量

目的:应用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d的含量。方法:柴胡以碱性乙醇进行提取,AB-8大孔吸附树脂分离纯化,得到柴胡总皂苷,用HPLC-ELSD法测定柴胡皂苷a、d的含量。结果:柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d的含量分别为4.31%,12.86%,柴胡皂苷a、d分别在0.09～0.72μg、0.16～1.08μg范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为102.39%、102.00%,RSD分别为1.95%、2.21%。结论:HPLC-ELSD测定柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d含量,方法简便,结果可靠,可作为柴胡提取物质量控制的检测方法。     

生长期不同施肥方法对柴胡中柴胡皂苷a、d含量的影响

目的:通过采用HPLC-ELSD法测定不同施肥柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,为优选施肥方案提供一定的依据。方法:采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,以水-乙腈(50∶50)为流动相,检测器为蒸发光散射检测器,飘移管温度93℃;空气流速2.5 L.min-1;柱温20℃。结果:确定了柴胡的施肥方案。结论:此方法简单、准确、重复性好,通过柴胡皂苷a、d的变化为优选柴胡施肥方法提供依据。     

毛细管电泳法测定逍遥丸中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量

目的 建立测定逍遥丸中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量的毛细管电泳法.方法以对硝基苯甲酸为内标,采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(65 cm×50 μm ID,有效长度57 cm),以20 mmol· L-1 Iris+ 20 mmol· L-1磺丁基-β-环糊精+ 25 mmol·L-1β-环糊精(pH 9.93)为运行缓冲液,分离电压10 kV,重力进样10 s(高度15cm),检测波长210 nm.结果柴胡皂苷a、柴胡皂苷d浓度分别在20.16～201.60 μg·mL-1(r =0.9971)、10.20～102.00 μg·mL-1(r=0.9947)间具有良好的线性关系;柴胡皂苷a的平均回收率为99.4％,方法精密度(RSD)为2.46％(n=6);柴胡皂苷d的平均回收率为98.7％,方法精密度(RSD)为1.07％(n=6).结论该法专属性强,结果准确可靠,重现性好,可用于逍遥丸的质量控制.     

丹柴解郁片质量标准的研究

目的:建立丹柴解郁片的质量标准。方法:采用TLC法对处方中白术、牡丹皮、白芍、栀子进行定性鉴别研究;采用HPLC法测定柴胡皂苷a、d的含量,选用Dikma ODS C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(44∶56)为流动相,检测波长210nm,流速1.0mL/min。结果:TLC法可鉴别出白术、牡丹皮、白芍、栀子的特征斑点,且专属性强,分离度好;柴胡皂苷a在45.28～226.4μg/mL(r=0.999 5)范围内、柴胡皂苷d在48.16～240.8μg/mL(r=0.999 3)范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为96.41%(RSD=1.28%)、99.52%(RSD=0.74%)。结论:该方法简便可行,可用于丹柴解郁片的质量控制。     

反相高效液相色谱法测定安乐片中柴胡皂苷a含量

目的建立安乐片中柴胡皂苷a的含量测定方法。方法色谱柱:kromasil C18柱;流动相乙腈-水(55:45);检测波长:210nm;流速:1.0ml·min-1。结果柴胡皂苷a线性范围为24.28～194.24μg·ml-1,相关系数r为0.9997,回收率为99.15%,RSD为1.67%。结论本方法简便、可靠、重现性较好,能起到控制安乐片中柴胡皂苷a含量的作用。     

河北道地药材北柴胡HPLC-UV指纹图谱研究

目的:建立河北道地药材北柴胡的HPLC-UV指纹图谱分析方法,并与不同产地柴胡药材指纹特征相比较,为科学评价与有效控制柴胡质量提供新方法。方法:采用HPLC-UV法测定了道地北柴胡等21个不同来源的柴胡样品。色谱条件:C18柱,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长203 nm,流速1.0 m l/m in,柱温30℃。结果:建立了北柴胡HPLC-UV指纹图谱共有模式,并对不同产地柴胡药材进行了相似度比较。结论:色谱指纹图谱分析法能简便、快速鉴别和区分不同来源的柴胡药材,为全面控制柴胡药材的质量提供了依据。     

Effects of Bupleurum scorzoneraefolium, Bupleurum falcatum, and saponins on nephrotoxic serum nephritis in mice

ETHNOPHARMACOLOGICAL SIGNIFICANCE: Bupleuri radix is a commonly prescribed Oriental herbal medicine containing extracts of different Bupleuri species. We wished to determine whether two of these species, Bupleurum scorzoneraefolium and Bupleurum falcatum, or their active ingredients, saikosaponins a, c, and d, could prevent the development of immune-complex nephritis in nephrotoxic serum treated mice. MATERIALS AND METHODS: Immune-complex nephritis was created in C57BL/6 mice by administration of nephrotoxic serum containing anti-basement membrane antibodies. Mice were next given one of five treatments: Bupleurum scorzoneraefolium, Bupleurum falcatum, saikosaponin a, saikosaponin c, or saikosaponin d. Proteinuria, blood urea nitrogen, creatinine, and renal histological changes were then examined. RESULTS: Saikosaponin c almost completely prevented the development of nephritis, although immune-complex deposition was not affected. Bupleurum falcatum and saikosaponin d had a significant, although lesser effect, and Bupleurum falcatum and saikosaponin a showed no effect. CONCLUSIONS: The mechanism of action of saikosaponin c and the reasons for the difference between the two bupleuri species should be investigated further in order to find the best way to utilize the therapeutic effect of Bupleuri radix on nephritis.     

HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷的含量及皂苷类成分指纹图谱初步研究

目的 测定柴胡中柴胡皂苷的含量。方法采用HPLC法。结果柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的平均回收率为101．6％和98．05％，RSD分别为1.51％和1．60％。结论方法准确、快速、可靠；用本文的指纹图谱难以控制商品柴胡药材的质量。     

柴胡皂苷D对慢性应激诱导小鼠焦虑症的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对慢性应激诱导焦虑模型小鼠的影响及其作用机制。方法:选取50只雄性ICR小鼠,按照随机数字表法分为五组,分别为正常组、慢性应激组、氟西汀组(20 mg/kg)、柴胡皂苷D低剂量组(20 mg/kg)和柴胡皂苷D高剂量组(40 mg/kg)。除正常组外,其余四组予慢性应激诱导小鼠建立焦虑症模型。通过蔗糖偏好实验、旷场试验、强迫游泳试验和悬尾试验检测小鼠行为学。采用酶联免疫技术检测IL-6、IL-β、TNF-α; 采用Western blot技术检测小鼠海马组织RIP140、p-NF-κB-p65、p-IκBα、p-IKKα和p-IKKβ蛋白表达; 采用免疫组化法检测小鼠海马组织RIP140蛋白表达。结果:柴胡皂苷D低剂量组、柴胡皂苷D高剂量组均能改善焦虑症模型小鼠行为学,并能降低血清IL-6、IL-β和TNF-α水平。柴胡皂苷D低剂量组、柴胡皂苷D高剂量组可降低小鼠海马组织RIP140、p-NF-κB-p65、p-IκBα、p-IKKα和p-IKKβ蛋白的表达。结论:柴胡皂苷D可以缓解慢性应激焦虑模型小鼠症状,其机制与调控RIP140/NF-κB信号通路相关。     

柴胡皂苷A诱导鼻咽癌细胞凋亡及其机制研究

目的：初步研究不同浓度的柴胡皂苷A（ saikosaponin A, SSA）对鼻咽癌细胞凋亡诱导作用及其机制。方法体外常规培养人鼻咽癌5-8F细胞,将 SSA溶解于含0.2％二甲基亚砜（ dimethyl sulfoxide, DMSO）的Dulbecco改良Eagle培养基（ dulbecco＇s modified eagle medium, DMEM）高糖培养基中,分别以0（对照组）、5、10和20μmol/L SSA作用于鼻咽癌细胞48小时,之后用免疫印迹法检测不同浓度的SSA对鼻咽癌细胞总的细胞外调节蛋白激酶（ total extrallular signal regulated protein kinase, t-ERK）及磷酸化的细胞外调节蛋白激酶（ phosphorylated extrallular signal regulated pro-tein kinase, p-ERK）蛋白表达量的影响,并通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平的变化。结果与对照组相比,10-20μmol/L SSA作用48小时,鼻咽癌细胞中ERK蛋白磷酸化水平明显降低,差异有统计学意义;而与对照组相比,10-20μmol/L SSA处理的鼻咽癌细胞凋亡细胞数明显增加,差异有统计学意义,且随着SSA浓度的增加,凋亡细胞数也相应增多。结论一定浓度的SSA可引起鼻咽癌细胞凋亡率的上升,其机制可能与抑制ERK蛋白磷酸化表达有关。