异体羊膜复合神经生长因子桥接周围神经缺损的实验研究

目的 :探讨同种异体羊膜材料复合应用神经生长因子替代神经材料桥接周围神经缺损的可行性。方法 :4 8只健康SD大鼠制备坐骨神经缺损模型 ,随机分为 4组 ,即自体神经原位移植组 (A组 )、异体神经移植应用环孢菌素A(CSA) 5mg/(kg·d) 5周组 (B组 )、异体羊膜材料桥接缺损复合应用神经生长因子组 (C组 )、单纯异体神经移植组 (D组 )。 6只Wistar大鼠取双侧坐骨神经作为供体。于术后 12周取移植段神经行光镜、电镜形态学观察 ,测定神经运动诱发电位潜伏期、神经运动诱发电位峰值、神经传导速度和振幅积分、腓肠肌最大收缩力 ,再生轴突计数及髓鞘厚度测定。结果 :12周时A、B、C组的各项检测指标明显优于D组 (P <0 0 5 ) ,A、B、C 3组间差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,再生神经形态与功能恢复良好。结论 :对于长段周围神经缺损 ,应用异体羊膜复合神经生长因子进行桥接可以有效促进神经再生及功能恢复     

冷冻保存后不同直径异体神经移植的实验研究

目的 探讨经液态氮冷冻贮存后,不同直径同种异体神经移植的神经再生情况.方法 取40只Wistar大鼠,雌雄不限,取10只鼠分别切取正中神经、桡神经及坐骨神经,放于-196℃液态氮贮存3周备用;其余30只鼠随机分为A、B、C 3组,均造成右侧胫神经8mm的神经缺损模型,分别植入不同直径异体神经.A组:粗直径同种异体神经移植组;B组:等直径同种异体神经移植组;C组:细直径同种异体神经移植组.术后2、4周分别进行大体手术显微镜下观察、病理组织学及电生理学检查.结果 电生理学检查:2周时,传导速度(CV)及波幅(Amp)经统计学分析,A、B、C 3组之间无显著性差异(P>0.05);4周时,CV及Amp经统计学分析,3组之间存在显著性差异(P<0.05),并且C组明显优于A组.病理组织学检查:2周时,3组均见明显髓鞘、轴突崩解和空泡变性,基底膜管完整清晰,外周见较多新生血管及巨噬细胞、淋巴细胞浸润;4周时,各组吞噬现象消失,并见较多新生神经轴突.其中C组的再生轴突数量和直径均优于其余2组;结论不同直径同种异体神经移植,对神经再生效果有明显影响,其中细直径移植组神经再生效果最佳.     

聚乳酸复合NGF/TGF -β1对同种异体神经移植修复周围神经缺损影响的实验研究

目的 研究外消旋聚乳酸(PDLLA)—神经生长因子(NGF)—转化生长因子β1(TGFβ1)药物缓释系统对同种异体神经移植修复神经缺损的影响.方法 32只大鼠随机分成A、B、C、D4组,每组8只,所有大鼠左侧坐骨神经段性切除后,移植经过化学脱细胞处理后的同种异体神经段,A组在移植区域应用PDLLA- NGF -TGFβ1缓释膜,B、C两组分别应用PDLLA-NGF缓释膜、PDLLA-TGFβ1缓释膜,D组为空白对照组,术后观察各组大鼠的大体形态、步态、关节活动情况.术后12w进行电生理、组织学、免疫学等各项指标观测.结果 A组大鼠坐骨神经的复合肌肉动作电位波幅、运动神经传导速度及小腿三头肌湿重恢复率均高于对照组;光镜观察A组再生神经纤维数量和口径及髓鞘厚度均优于其他三组(P＜0.05).结论 PDLLA- NGF- TGFβ1药物缓释系统在同种异体神经移植修复周围神经段性缺损中,具有明显促神经再生作用.     

微囊化转NGF基因NIH3T3细胞填充静脉修复大鼠坐骨神经缺损的作用

目的：了解微囊化转NGF基因NIH3T3细胞在修复周围神经缺损中的作用。方法：SD雄性大白鼠30只,建立大鼠坐骨神经离断模型后随机分为3组,A组：异体静脉桥接神经缺损,形成神经再生室,其内填充微囊化转NGF基因NIH3T3细胞,修复大鼠坐骨神经10 mm缺失;B组：自体神经移植;C组：微囊化NIH3T3细胞。于术后4、8及12周进行足迹试验,术后12周进行电生理学测试及形态学观察。结果：术后4、8和12周不同时间点坐骨神经功能指数,术后12周神经传导速度、再生神经的组织学改变及再生神经纤维的成熟程度A组和B组比较,差异均无显著性(P>0.05), A 组和B组明显优于C组 (P<0.05)。结论：聚赖氨酸/海藻酸钠(APA) 微胶囊与外周神经组织有良好的生物相容性;辅加微囊化转NGF基因NIH3T3细胞对修复缺损的神经具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

聚乳酸复合NGF／TGF-β1对同种异体神经移植修复周围神经缺损影响的实验研究

目的研究外消旋聚乳酸（PDLLA）-神经生长因子（NGF）-转化生长因子β1（TGFβ1）药物缓释系统对同种异体神经移植修复神经缺损的影响。方法32只大鼠随机分成A、B、c、D4组,每组8只,所有大鼠左侧坐骨神经段性切除后,移植经过化学脱细胞处理后的同种异体神经段,A组在移植区域应用PDLLA-NGF-TGFβ1缓释膜,B、C两组分别应用PDLLA—NGF缓释膜、PDLLA-TGFβ1缓释膜,D组为空白对照组,术后观察备组大鼠的大体形态、步态、关节活动情况。     

神经生长因子复合缓释剂的制备与性质研究

目的：研制神经生长因子（nerve growth factor,NGF）复合缓释制剂,探讨其作为补充外源性NGF制剂的可行性。方法：采用NGF微球,与生物纤维蛋白胶混合形成NGF复合缓释制剂,分别进行体外、体内实验。体外实验包括药物释放曲线和释放药物的活性鉴定;体内实验为18只雄性Wistar大鼠,根据修改缺损材料不同,随机分成3组（n=6）：去细胞异体神经移植＋NGF复合缓释制剂组（A组）;化学去细胞异体神经移植组（B组）：去细胞异体神经移植＋纤维蛋白胶组（C组）,术后2周测量神经轴突生长距离。结果：体外实验证明,NGF复合缓释制剂可持续释放NGF达60d以上,释出的NGF可促进鸡胚背根神经节神经纤维突起生长,具有较强的生物学活性。术后2周,测量再生神经生长距离分别为：A组（7．46±1．75）mm,B组（4．62±1．06）mm,C组为（4．36±1．20）mm,A组明显高于B、C组（P〈0．05）。结论：制备的NGF复合缓释制剂,可长期释放NGF,并具有生物活性,可作为NGF良好的外源性补充制剂。     

玻璃化法保存异体肌腱移植的实验研究

目的评介玻璃化法保存的异体肌腱移植的可行性与有效性。方法家兔60只,其中24只切取双侧跟腱48条,分为2组,分别采用玻璃化法和程序冷冻法保存2周以上。其余36只平均分为3组:A组行新鲜肌腱自体移植,B组行玻璃化法保存肌腱异体移植,C组行程序冷冻法保存肌腱异体移植。术后3、8、12周后取材,行形态学、组织学观察及生物力学测试,并进行组间比较。结果玻璃化法保存肌腱完整率高于程序冷冻法,差异有显著性。A、B组移植后较C组粘连轻,光泽好。新生血管、腱细胞成熟早,愈合进程快。术前A、B、C组生物力学性能差异无显著性,术后12周差异有显著性。结论玻璃化法保存异体肌腱操作简单,能较好保存肌腱的组织结构,移植效果优于传统的程序冷冻法保存的异体肌腱。     

不同冷冻时间对异体神经移植后生理特性的影响

目的观察超深低温(-196℃)条件下不同冷冻时间对异体神经移植后生理特性的影响。方法将80只雌性Wis tar大鼠随机分为取材组(20只),对照组(A组:新鲜自体神经移植组;B组:新鲜异体神经移植组,每组10只)和实验组(按取材神经冷冻保存3、6、9、12周后移植分为C、D、E、F组,每组10只)。术后做大体、光镜、电镜观察,神经电生理测试。结果移植9周后,大体、光镜、电镜结果显示:B组生理特性影响最大,A组最小,C、D、E、F组次之;电生理结果显示:A与B、A与E、A与F之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论异体神经移植后的生理特性和冷冻时间存在依从关系。     

外源性神经生长因子对神经移植的影响

目的:探讨神经移植后在局部注入神经生长因子对神经再生的影响.方法:家兔30只,随机分为两组.A组:切除5mm面神经颊支,用等长的耳大神经移植.B组:神经移植同A组,并于术中、术后第1、2、3、4天分别在局部注入2 000U的神经生长因子(大连司威特制药有限公司制).术后饲养12周,对移植体进行神经电生理、组织学检测.结果:实验结果证明,再生神经纤维都可以通过移植神经的吻合端,A组神经传导速度为20.42±2.12m/s,B组神经传导速度为23.71±2.24m/s,两组神经传导速度差异有显著性(P<0.01).结论:神经移植后注入神经生长因子的效果明显优于单纯神经移植.     

冷冻保存神经后自体和异体移植的实验研究

目的：探讨冷冻保存神经自体和异体移植对神经再生的影响。方法：４０只ＳＤ大鼠用反复冷冻、复温的神经和未经任何处理的坐骨神经移植体,进行自体和异体移植。Ａ组为冷冻神经移植于自体原位中;Ｂ组为冷冻神经移植于异体中;Ｃ组为未冷冻神经移植于异体中;Ｄ组为未冷冻神经移植于自体原位中。术后６,１２周光镜、电镜下行组织学观察,检测各项电生理指标。结果：Ａ 组可见到较多的再生轴突通过移植体;Ｂ组可以看到炎性细胞侵润,但仍可见再生轴突通过移植体;Ｃ组可见到大量炎性细胞侵润,有极少量再生轴突通过移植体;Ｄ组可见到大量再生轴突通过移植体。电生理指标和伸趾长肌恢复率Ａ,Ｄ两组明显好于Ｂ,Ｃ两组。结论：神经冷冻处理可以降低抗原性,本实验为同种异体神经移植提供理论依据。     

雷帕霉素对大鼠坐骨神经再生作用的实验研究

目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)的不同给药时间对大鼠坐骨神经损伤后神经再生和功能恢复的影响。方法健康Wistar大鼠共24只,随机分为4组,制备大鼠右侧坐骨神经挤压伤模型。A组(早期对照组)注射生理盐水,B组(早期用药组)损伤后当即注射雷帕霉素[1mg(/kg.d)],连续应用7d,C组(晚期对照组)注射生理盐水,D组(晚期用药组)损伤后24h注射雷帕霉素[1mg(/kg.d)],连续应用7d,每组各6只。于术后6周进行坐骨神经功能检测(SFI),神经电生理检测及组织形态学观察。结果坐骨神经功能检测(SFI),B组明显优于A组、C组、D组(F=6.51,P0.01)。复合肌肉动作电位(CMAP)的潜伏期(LTP),B组明显慢于A组、C组、D组(F=12.56,P0.01);坐骨神经传导速度(F=20.30,P0.01)和复合肌肉动作电位波幅(F=8.07,P0.01)B组明显优于A组、C组、D组。结论①全身应用雷帕霉素具有神经保护作用,可以加速神经的修复和功能恢复。②早期应用雷帕霉素促进神经再生和功能恢复的效果优于晚期。     

NGF和bFGF联合治疗大鼠坐骨神经损伤的实验研究

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFCF)联合应用对大鼠坐骨神经损伤的治疗作用，为周围神经损伤的临床治疗提供实验依据。方法96只Wistar大鼠随机分为生理盐水组、NGF组、bFGF组和NGF bFGF组，将大鼠坐骨神经手术造成5mm缺损后用2．Omm内径、1．Ocm长的硅胶管桥接，术中硅胶管中局部滴加药物、术后大鼠小腿肌内注射药物1日1次(10ng/100g）体重)，术后3、6、9、12周行大体观察、坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index，SFI)、运动神经传导速度(motor nerve conduction velocity，MCV)，神经肌肉动作电位幅值(muscle evoked action potential，MAP)和再生轴突计数检查。结果各组大鼠硅胶管中3周时已有不同程度的神经组织再生。计量分析表明，NGF组、bFGF组SFI、MCV、MAP、再生轴突数优于NS组，NGF bFGF组SFI、MCV、MAP和再生轴突计数结果显高于其余各组，差异有显性。结论NGF。和bFGF联合应用对大鼠坐骨神经损伤的促修复作用优于单独使用NGF或bFGF。     

大鼠PDLLA／NGF套管模型与自体神经移植模型脊髓背角c-fos表达的比较研究

目的建立大鼠PDLLA／NGF（外消旋聚乳酸／神经生长因子）复合套管模型和大鼠外周神经自体神经移植神经再生模型。观察对比各模型神经恢复过程中机械痛觉超敏的变化及脊髓背角c-fos表达的改变,探讨两种神经再生模型中神经再生与神经性疼痛的联系。方法!雄性Wistar大鼠60只随机分成3组,A组为自体神经移植再生模型组;B组为PDLLA/NGF套管修复模型组;c组假手术组。分别制成模型后,术后18d起检测机械刺激阈值及c-fos表达计数。所有数据采用均值±标准差（^-x±s）表示,组间采用t检验,用SPSS11.0软件进行统计分析,P〈0.05为有统计学差异。结果A、B组各项指标与C组比较有显著差异;A组与B组比较c-Fos表达阳性细胞计数及机械痛阈无显著差异。结论两种模型再生神经生长进入去神经支配区域时,均出现支配区域的痛觉超敏和疼痛相关行为,神经性疼痛程度无差异。     

褪黑素对急性脊髓损伤大鼠血清及脊髓内神经生长因子表达的影响

目的研究褪黑素（MT）对脊髓损伤大鼠血清及脊髓内神经生长因子（NGF）表达水平的影响。方法84只健康成年雄性SD大鼠随机分为模型对照组（n=36）、模型MT组（n=36）及假手术组（n=12）。建立脊髓损伤模型后,模型对照组给予无水乙醇,模型MT组给予MT,均为腹腔注射。对比术后12h、3、5d大鼠血清及脊髓组织中NGF的表达及Tarlov评分。结果术后12h模型对照组及模型MT组Tarlov评分显著低于假手术组（P〈0．05）。模型MT组TarlOV评分稍高于模型对照组,但差异无统计学意义（P〉0．05）。术后3、5d模型MT组Tarlov评分均显著高于模型对照组（P〈0．05或P〈0．01）。术后12h、3、5d模型对照组和模型MT组血清NGF水平、脊髓组织NGF蛋白及NGFmRNA水平均较假手术组显著上升,模型MT组则显著高于模型对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论MT通过调高脊髓损伤大鼠体内NGF的表达起到减轻神经细胞损伤、促进神经细胞再生和神经功能恢复作用。     

人参皂甙Rg1与坐骨神经损伤后修复相关性研究

目的：探讨中药人参皂苷Rg1（GsRg1）对大鼠坐骨神经损伤后恢复作用以及是否有局部释放神经生长因子的参与。方法于2013年5月购买健康雄性Wistar大鼠,2月龄,共270只,随机均分为6组,每组45只。离断大鼠右侧坐骨神经后,立即在显微镜下缝合,左侧坐骨神经为空白对照,手术后,大鼠随机分为生理盐水组、GsRg12 mg 、4 mg、8 mg、12 mg组和甲钴胺组,分别腹腔内注射,手术2、4、8周后,通过称量大鼠双侧小腿三头肌计算其湿重比率,据此评价坐骨神经再生和功能恢复情况;采用免疫组织化学和Western blot技术检测大鼠坐骨神经NGF表达的变化。结果①小腿三头肌湿重比,各GsRg1剂量组及甲钴胺组也明显高于生理盐水组, GsRg1组中4 mg组、8 mg组高于GsRg1其它2组及甲钴胺组,GsRg12 mg组、12 mg组与甲钴胺组小腿三头肌湿重比恢复相似。②NGF免疫组化及Western blot结果显示,GsRg1各组及甲钴胺组NGF表达明显高于生理盐水组。GsRg14 mg和GsRg18 mg组NGF表达多于甲钴胺组、GsRg12 mg组、12 mg组。甲钴胺组与GsRg12 mg组、12 mg组NGF表达相似。结论①GsRg1剂量为4 mg、8 mg的促神经再生和功能恢复作用优于剂量为2 mg、12 mg组。提示GsRg1促神经再生作用的最佳用药剂量为4~8 mg·kg。②GsRg1的促进受损神经功能恢复的作用与NGF因子密切相关。     

对坐骨神经局部温度变化过程中氧自由基的研究

目的通过观察受冷周围神经局部氧自由基的水平及脂质过氧化产物丙二醛(malonic dialdenhyde,MDA)的含量,探讨缺血-再灌注损伤在低温所致的周围神经损伤中的作用。方法实验分为两个大组:持续低温组与间断低温组。持续低温组又分为持续低温2h组及持续低温2h后复温组(复温组又包括复温4g、复温1d组、复温3d组);间断低温组包括间断低温2h组、间断低温2h后复温组(此复温组又分为复温4h、复温1d及复温3d组)。设定坐骨神经局部低温的温度在4℃±0.5℃。采用电子顺磁(ESR)技术测定不同时间点取材的氧自由基含量;坐骨神经匀浆后,按照试剂盒的方法测定脂质过氧化产物MDA的含量。结果(1)持续低温组:低温2h后,即刻取材测定的氧自由基含量有增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);复温后含量增加(P<0.05),其中以复温1d组最明显(P<0.01);(2)间断低温组:间断低温2h,即刻取材的氧自由基含量与对照侧比较差异有统计学意义(P<0.01),复温后氧自由基含量也呈进一步增加的趋势,其中复温1d组最显著(P<0.01);(3)MDA结果持续低温组与间断低温组:在低温结束即刻测定的MDA与对照侧比较差异无统计学意义(P>0.05),各复温组的MDA测定结果均有统计学意义(P<0.05)。结论温度的变化可以产生坐骨神经的缺血-再灌注损伤,氧自由基参与了损伤的过程。     

神经生长因子对戊四氮致痫幼鼠海马细胞色素C表达的影响

目的：用戊四氮（PTZ）诱导建立的慢性癫痫（EP）幼鼠模型,研究神经生长因子（NGF）处理后幼鼠海马细胞色素C（Cyt C）的表达,探讨 NGF在 EP发病中的作用。方法50只SD幼鼠随机分为阴性对照组（A组）、阳性对照组（B组）、NGF低剂量组（C组）、NGF中剂量组（D组）、NGF高剂量组（E组）。NGF用药后3 d ,取海马组织用于免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法检测Cyt C的表达。结果与A组比较,B组Cyt C阳性细胞数及mRNA 表达量明显增多（P＜0．01）。与B组比较,C～ E组Cyt C阳性细胞数及 mRNA 表达量降低（P＜0．05）。结论 NGF可减少海马Cyt C的表达,促进EP幼鼠体质量增长。     

大鼠坐骨神经PDLLA／NGF套管模型脊髓背角c-fos表达的研究

目的建立大鼠外消旋聚乳酸／神经生长因子（PDLLA／NGF）复合套管模型,观察大鼠神经恢复过程中行为学改变和机械痛觉过敏的变化以及脊髓背角c-fos表达的改变,探讨外周神经损伤再生与痛觉过敏的关系。方法雄性Wistar大鼠40只,体重180～200g,随机分成2组,每组20只,A组为坐骨神经损伤PDLLA／NGF套管修复组;B组为假手术组。术后24日起检测行为学、机械刺激阈值、热缩足反射时间及c—fos表达计数。结果A组术后27天后机械痛阈和热缩足反射潜伏期与B组相差明显,有统计学意义。A组术侧L4～5脊髓背角与B组相比较,背角浅层c-fos计数增多,有统计学差异。A组c-fos、机械痛阈和热缩足反射潜伏期45日与27日均有统计学差异。结论大鼠PDLLA／NGF复合套管模型再生神经生长进入去神经支配区域后,触觉诱发疼痛和脊髓背角浅层c-fos表达,同时出现再生神经支配区域的痛觉过敏和疼痛相关行为。     

枸杞多糖对大鼠坐骨神经离断后神经生长因子表达的影响

目的研究枸杞多糖对大鼠坐骨神经离断后神经生长因子（NGF）表达的影响。方法雌性SD大鼠72只,随机分成空白对照组、模型组与枸杞多糖（LBP）组,每组24只,后两组切除右侧坐骨神经2cm,LBP组腹腔注射枸杞多糖10mg/（kg.d）,模型组给予相同剂量生理盐水,分别于给药后第7、14、21和28d取坐骨神经离断的近端神经及相连背根神经节和相对应的脊髓（每组6只）,应用免疫组织化学方法分析神经生长因子表达的变化。利用Image-proplus6.0图像分析系统进行半定量分析。结果模型组和LBP组的坐骨神经及相连背根神经节和相应的脊髓NGF免疫组化平均光密度高于空白对照组,LBP组坐骨神经、脊神经节及脊髓中的NGF免疫组化平均光密度在术后第7、14、21、28d均低于模型组组（P〈0.05）。结论枸杞多糖可抑制大鼠坐骨神经离断后近端及相应的节段神经节和脊髓组织中的神经生长因子量的表达。