微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征相关性的实验研究

目的:研究微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征的相关性。方法:收集骨肉瘤组织和肉瘤旁正常组织,检测miRNA-203的表达量;培养骨肉瘤细胞株MG63和成骨细胞细胞株hFOB1.19,检测细胞中miRNA-203的表达量;转染miRNA-203的模拟物后6h、12h、18h、24h时,检测细胞增殖、侵袭能力以及相关基因的表达量。结果:骨肉瘤组织中miRNA-203的表达量低于肉瘤旁正常组织,骨肉瘤细胞株MG63中miRNA-203的表达量低于成骨细胞细胞株hFOB1.19;在骨肉瘤细胞株MG63中,miRNA-203的模拟物能够以时间依赖性的方式降低细胞活力、减少侵袭细胞的数目,抑制Bcl-2、cMet、Notch-3、MMP-9的表达。结论:骨肉瘤组织中微小RNA-203的表达量显著降低,增加微小RNA-203的表达能够抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,其靶基因为Bcl-2、cMet、Notch-3、MMP-9。     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。     

膜转铁蛋白1在成骨细胞上表达的初步研究

目的观察膜转铁蛋白1（FP1）基因在人成骨细胞株（hFOB1.19）内的表达情况。方法 hFOB1.19在34℃、5%CO2条件下培养,添加细胞生长营养液,细胞培养3～4d后用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测FP1在成骨细胞内的表达情况。结果在成骨细胞株hFOB1.19内,FP1基因呈阳性表达。结论 FP1基因成功表达对＂铁调素与成骨细胞内铁离子关系＂有十分重要的解释作用。     

miR-132通过降低HMGA2的表达抑制骨肉瘤细胞迁移、侵袭及上皮间质转化

目的：研究微小RNA-132（miR-132）对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法：利用实时定量PCR（qRT-PCR）检测骨肉瘤细胞系U2OS和HOS及人成骨细胞系hFOB1.19中miR-132的表达水平。分别向HOS及U2OS细胞转染miR-132模拟物和抑制物,以过表达或敲低细胞内miR-132的表达,利用qRT-PCR验证转染效率。采用Transwell实验、qRT-PCR及Western blot检测过表达和敲低miR-132对骨肉瘤细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的影响。通过对Targetscan网站进行检索并利用荧光素酶报告基因实验探究HMGA2为miR-132的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测miR-132对HMGA2表达的调控作用。结果：与人成骨细胞系hFOB1.19相比,miR-132在骨肉瘤细胞中的表达水平显著降低（P＜0.05）;向U2OS细胞转染miR-132模拟物后,细胞miR-132的表达水平显著增加（P＜0.01）;过表达miR-132后,U2OS细胞的迁移和侵袭能力显著降低,E-cadherin表达增加,Vimentin表达降低（P＜0.05）;向HOS细胞转染miR-132抑制物后,细胞miR-132的表达水平显著降低（P＜0.01）;敲低miR-132后,HOS细胞的迁移和侵袭能力显著增强,E-cadherin表达降低,Vimentin表达增加（P＜0.05）;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明HMGA2基因为miR-132的靶基因。过表达miR-132可明显降低骨肉瘤细胞中HMGA2的表达,而敲低miR-132可明显增加骨肉瘤细胞中HMGA2的表达（P＜0.05）。结论：miR-132在骨肉瘤细胞中低表达,miR-132可通过抑制HMGA2的表达抑制骨肉瘤细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化。     

BCSG1、c-erbB-2、VEGF表达与乳腺癌临床病理因素相关性研究

目的研究乳腺癌组织中乳腺癌特异基因1(BCSG1)、人表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)、血管内皮生长因子(VEGF)分别及联合表达情况与临床病理学特征的关系。方法随机抽取316份临床病理资料完整的乳腺癌标本,采用免疫组化S-P法检测BCSG1、c-erbB-2、VEGF的表达情况,并结合临床病理特征进行分析。结果乳腺癌组织BCSG1、VEGF阳性表达率分别为67.1%、61.0%,均与组织学分级、淋巴结转移、临床分期呈正相关(分别为r=0.152、r=0.510、r=0.460及r=0.166、r=0.142、r=0.142,P<0.05,P<0.01),与ER、PR、肿瘤大小、月经状况、病理类型无关(P>0.05);c-erbB.2阳性表达率32.2%,与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移、临床分期呈正相关(r=0.173、r=0.157、r=0.365、r=0.306,P<0.01);与ER、PR呈负相关(r=-0.149,r=-0.154,P<0.05),与月经状况、病理类型无关(P>0.05);BCSG1、c-erbB-2、VEGF共同表达与淋巴结转移、临床分期、组织学分级呈正相关(r=0.457、r=0.377、r:0.228,P<0.05);BCSG1、c-erbB-2、VEGF之间两两表达呈正相关(P<0.01)。结论 BCSG1、c-erbB-2、VEGF的表达与乳腺癌发生、发展及侵袭转移有关,三者同时高表达提示肿瘤具有更高的侵袭转移能力。     

沉默MAT1基因通过SDF1-CXCR4信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨沉默MAT1基因表达对骨肉瘤细胞增殖与迁移的影响,以及对SDF1-CXCR4信号通路的作用。方法qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19与骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS、143B中MAT1 mRNA的表达水平。将对数生长期143B 细胞分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染阴性对照 siRNA-NC)和 siRNA-MAT1 组(转染 siRNA-MAT1),通过 CCK-8、流式细胞术及 Transwell 小室法分别检测各组143B细胞增殖活力、细胞周期和迁移能力,Western blot法检测各组143B细胞中SDF1和CXCR4蛋白表达情况。结果 与hFOB1.19 细胞比较,骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS中MAT1 mRNA的表达水平明显升高(P<0.01),143B细胞中MAT1 mRNA的表达水平显著升高(P=0.000);siRNA-MAT1组143B细胞中MAT1 mRNA的表达水平较空白对照组(Blank组)和siRNA-NC组明显下降(P<0.01);与Blank组和siRNA-NC组比较,siRNA-MAT1组143B细胞增殖力明显降低,G₁期比例升高而 S 期比例降低,细胞迁移能力受到抑制,SDF1和CXCR4蛋白表达水平也明显下降(P<0.01)。结论 沉默 FOSL2 基因的表达可抑制骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移能力,机制可能与下调SDF1和CXCR4表达有关。     

miR-505对骨肉瘤细胞增殖、侵袭的影响及相关机制研究

目的:探讨miR-505对骨肉瘤细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法:采用q-PCR测定人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中的miR-505水平。分别设置miR-505 mimics组与阴性对照(miR-NC)组,采用Lipofectamine TM 2000将miR-505 mimics及miR-NC转染至MG63细胞中,比较2组细胞增殖速率及侵袭细胞数,进一步采用Western blot及q-PCR考察转染mi R-505的MG63细胞中MMP-9、CDK4、Cyclin-D1、HMGB-1及β-联蛋白(β-catenin)、磷酸糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白及mRNA水平。结果:骨肉瘤细胞MG63中miR-505水平为0.57±0.06,明显低于人成骨细胞hFOB1.19的1.03±0.12(P<0.01)。转染miR-505后,miR-505 mimics组的表达量为3.59±0.37,明显高于miR-NC组的1.09±0.12(P<0.01)。miR-505 mimics组转染48 h和72 h后的OD450 nm值分别为0.84±0.09...     

miR-4306通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭

目的: 研究miR-4306在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法: 选取人成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞Saos-2、MNNG/HOS CI #5,采用qRT-PCR检测miR-4306表达水平。将miR-4306 mimics和阴性对照分别转染至骨肉瘤细胞Saos-2和MNNG/HOS CI #5,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭,蛋白质免疫印迹检测细胞内上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）标志蛋白表达水平。通过在线靶基因预测网站Targetscan、Starbase预测miR-4306靶基因可能为富含AT序列特异性结合蛋白2（special AT rich sequence binding protein 2, SATB2）,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR 4306 mimics、LV SATB2共转染至骨肉瘤细胞中,检测细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT标志蛋白表达水平变化。结果: 与人成骨细胞hFOB 1.19比较,骨肉瘤细胞Saos 2、MNNG/HOS CI #5中miR-4306表达明显降低（P均＜0.01）。转染miR-4306 mimics后,骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,N-钙黏蛋白、血管内皮生长因子表达水平显著降低,E 钙黏蛋白表达水平显著升高（P＜0.05或＜0.01）。SATB2是miR-4306下游的直接靶标;与miR-4306 mimics+LV-NC组比较,miR-4306 mimics+LV-SATB2组部分逆转miR-4306对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的影响。结论: miR-4306在骨肉瘤细胞中呈低表达,其可通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。     

葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1/SLC7A11抑制铁死亡对骨肉瘤发生发展的影响

目的 探讨葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1(SND1)对骨肉瘤细胞生物学功能的影响,及其通过SLC7A11调控骨肉瘤细胞铁死亡的作用机制。方法 检测人成骨细胞hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1的表达水平。采用小干扰RNA敲减骨肉瘤细胞HOS和143B中SND1的表达(si-SND1),采用CCK8法、细胞克隆形成实验、细胞迁移和侵袭实验探究SND1的表达对骨肉瘤细胞生物学功能的影响;调控骨肉瘤细胞中SND1以及SLC7A11基因的表达,探究SND1通过SLC7A1基因对骨肉瘤铁死亡介导的肿瘤细胞凋亡的影响。结果 骨肉瘤细胞Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于人成骨细胞hFOB1.19(P均<0.01)。与对照组比较,si-SND1转染显著降低HOS和143B细胞中SND1的表达水平(P均<0.01),且细胞活性显著降低,克隆形成数量显著减少,细胞迁移和侵袭能力显著降低(P均<0.001)。铁死亡诱导剂Erastin促进骨肉瘤HOS和143B细胞凋亡,而抑制剂Ferrostatin...     

骨肉瘤细胞中端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

目的研究不同骨肉瘤细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA成分的表达情况。方法用全基因组芯片检测人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOB1．19中hTERTmRNA表达;用逆转录PCR、实时定量PCR法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOBl．19中hTERTmRNA表达。结果全基因组芯片法显示MG-63、SAOS-2、U2-OS、hFOB1．19细胞系中hTERTmRNA表达强度分别为0．9、-0．1、-0．8、11．4,各细胞系均处于相对低表达水平;荧光实时定量PCR法显示MG-63、Hela细胞系中hTERTmRNA相对表达水平分别为1．00±0．08和2．13±0．11,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论hTERTmRNA在骨肉瘤各细胞系中表达率较低,端粒延伸替代机制可能在骨肉瘤端粒维持方面发挥重要作用。     

神经营养因子酪氨酸激酶受体B对人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化细胞体外侵袭力的影响

目的研究神经营养因子酪氨酸激酶受体B(neurotrophic tyrosine kinase receptor B,TrKB)对恶性转化人永生化成骨细胞hFOB1.19体外侵袭力的影响,探讨TrKB在骨肉瘤侵袭和转移机制中发挥的作用。方法RT-PCR和免疫荧光细胞染色检测hFOB1.19恶性转化细胞和SaOS-2骨肉瘤细胞中TrKB的mRNA和蛋白表达水平;进一步研究hFOB1.19恶性转化细胞中TrKB的功能,处理组hFOB1.19恶性转化细胞加入特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a处理24h,非处理组加入DMSO作对照,倒置相差显微镜下观察细胞形态;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;actin免疫荧光细胞染色检测细胞微丝骨架。结果TrKB在hFOB1.19恶性转化细胞中mRNA和蛋白表达水平均明显高于SaOS-2骨肉瘤细胞(P0.05);K252a处理组hFOB1.19恶性转化细胞和未处理组相比,细胞变圆、聚集甚至发生融合,侵袭能力明显减弱(P0.01),微丝回缩变短,排列紊乱。结论人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化细胞中TrKB的高表达可促进该细胞的体外高侵袭力;该受体被阻断后,可能通过改变细胞微丝骨架结构从而降低细胞的体外侵袭力;TrKB可能在骨肉瘤侵袭和转移机制中起着促进作用。     

Let-7d通过靶向调控Rhotekin基因抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨let-7d在骨肉瘤组织中的表达,并研究let-7d及其靶基因对人骨肉瘤细胞U2OS增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2010年至2015年于我科行手术切除的25例骨肉瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织（距肿瘤组织边缘>5 cm）,并用qPCR检测let-7d的表达情况。构建稳定过表达let-7d的U2OS细胞,用qPCR验证let-7d过表达情况,以转染pCDH空病毒载体的U2OS细胞作为对照组细胞,并分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测过表达let-7d对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验明确let-7d的下游靶基因,检测过表达let-7d的U2OS细胞中靶基因的表达水平,并通过小干扰RNA技术研究抑制靶基因表达对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 骨肉瘤组织中let-7d表达水平低于癌旁组织（P<0.01）。与人成骨细胞hFOB1.19相比,U2OS细胞中let-7d表达水平下调（P<0.01）。与对照组相比,过表达let-7d能抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验结果显示,Rhotekin（RTKN）基因是let-7d的直接靶基因,且过表达let-7d导致U2OS细胞中RTKN mRNA表达水平较对照组降低（P<0.01）。干扰RTKN表达能抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。结论 Let-7d通过靶向调控RTKN抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为骨肉瘤治疗一个新的靶点。     

转化生长因子TGF-β诱导成骨细胞自噬活性的实验研究

目的:探讨转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)对成骨细胞自噬活性的调控作用?方法:应用TGF-β 处理成骨细胞系hFOB1.19细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测hFOB1.19细胞自噬相关基因Beclin 1及微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)在mRNA及蛋白水平的表达变化;透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察TGF-β 处理后成骨细胞自噬小体的形成;SPSS19.0统计软件进行数据分析?结果:与对照组相比,TGF-β处理hFOB1.19细胞3 h后,Beclin 1 mRNA的表达开始下调(P < 0.05),同时LC3 mRNA开始升高,在6 h达到最高(P < 0.05),随后依作用时间的延长不断下降;在TGF-β 作用后3 h,Beclin 1蛋白的表达水平升高,随后6?12?24 h表达量下降(P < 0.05),而LC3-Ⅱ的蛋白表达自TGF-β作用后6 h开始升高,12 h蛋白表达达到最高(P < 0.01);TGF-β 作用后12 h,TEM可观察到细胞中自噬小体形成?结论:TGF-β 能够上调成骨细胞hFOB1.19的自噬活性?     

UHRF1调控雌激素受体表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

  目的  观察泛素样含PDH和环指域1 (UHRF1)对雌激素受体（ER）α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。  方法  应用Western blot、实时荧光定量（qRT）-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。  结果  与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调（P<0.05）,而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调（P<0.05）。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERα mRNA表达降低（P<0.05）,ERβ mRNA表达升高（P<0.05）;转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低（P<0.05）。  结论  UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA AC131056.3通过调控miR-21-5p对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)AC131056.3对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的作用及可能机制。方法 采用GEPIA数据库分析骨肉瘤患者总生存期和AC131056.3表达的相关性。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞(Saos2、U-2OS、MG-63、143B、HOS)及正常成骨细胞hFOB1.19中AC131056.3的表达。将HOS细胞分为对照组和AC131056.3组,分别转染pcDNA质粒和pcDNA-AC131056.3质粒。CCK-8法检测HOS细胞增殖活力,Transwell实验检测HOS细胞侵袭活力,qRT-PCR检测两组HOS细胞中miR-21-5p表达,Western blot检测两组HOS细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白p-Akt、p-mTOR、p-PI3K、GSK-3、PDK-1表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因法验证AC131056.3与miR-21-5p的互补关系。结果 与AC131056.3低表达的骨肉瘤患者相比,AC131056.3高表达的患者总生存期较长(P<0.01)。与hFOB1.19...     

子宫内膜样腺癌中胰岛素样生长因子的基因表达与雌激素受体相关性探讨

目的胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)是多肽类生长激素中的一类,是细胞增生、分化过程中的促有丝分裂因子。有研究表明IGF在肿瘤细胞的增生分裂中起很重要的作用。文中探讨IGF-1和2及其受体基因在子宫内膜样腺癌中的表达模式,分析它们与雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型α、β间的关系以及临床病理意义。方法选取58例患者临床不同期的子宫内膜样腺癌组织标本(内膜癌组),同时选取癌旁组织31例(癌旁组)、正常内膜组织42例(对照组),采用TRizol一步法提取总RNA。TaqMan荧光实时定量PCR检测3组患者的IGF-1、IGF-2、IGF-1受体(insulin-likegrowth factor-1 receptor,IGF-1R)、IGF-2R、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)、ERα、ERβ的mRNA表达,分析3组标本中的表达差异以及在内膜癌组织中的表达模式和相关关系。结果 IGF-1、IGF-1R、IGF-2、IGF-2R、IGFBP-3的mRNA表达量在内膜癌组中分别为1.19±0.79、6.23±3.98、2.44±2.32、4.32±2.98、14.47±12.31,在癌旁组中分别为2.66±1.73、35.34±22.02、8.59±7.13、0.39±0.36、8.28±4.57,均明显高于对照组中0.58±0.30、0.54±0.32、0.33±0.19、0.04±0.03、4.58±3.35,差异均有统计学意义(P<0.05)。癌旁组与内膜癌组比较,IGF-1、IGF-1R、IGF-2的mRNA量明显升高,而IGF-2R、IGFBP-3的mRNA则下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。ERα、ERβ-mRNA表达水平在内膜癌组分别为10.67±7.63、31.44±25.22;对照组中分别为16.24±10.10、50.10±21.60(P<0.05),癌旁组中分别为45.54±33.58、529.62±296.70,较对照组及内膜癌组均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组中,ER与IGF之间无相关性。内膜癌组中ERα与IGF-1、IGF-2呈高度正相关,r分别为0.6439、0.5228;与IGF-2R呈轻度正相关,r为0.297 0;ERβ与IGF-1、IGF-2、IGF-2R呈轻度正相关,r分别为0.415 5、0.355 5、0.275 6;癌旁组中,ERα与IGF-1R、ERα与IGF-2、ERβ与IGF-2呈高度正相关,r分别为0.554 5、0.850 2、0.932 7,均有统计学意义(P<0.05),其他均显示无相关性。在内膜癌组织中IGF-1、IGF-2、IGF-2R、ERα、ERβ-mRNA表达量随着分期、分级以及浸润深度的增加呈下降趋势,而IGF-1R、IGFBP-3-mRNA表达量变化不明显;IGF-1、IGF-2、ERα、ERβ-mRNA与内膜癌分期、分级以及肌层浸润深度呈高度负相关,IGF-2R与分期、分级、浸润深度呈轻度负相关(P<0.05),IGF-1R和IGFBP-3与上述临床病理特征间相关性分析无统计学意义。结论癌旁组织和癌组织中IGF-1、IGF-2、IGF-1R的基因呈明显高表达,尤以癌旁组织中更明显;癌旁组织中ERα、ERβ的基因活性亦明显高于癌组织,癌组织中ERα、ERβ与IGF-1及IGF-2呈高度正相关,提示IGF-1和IGF-2可能激活ERα/ERβ,是正常内膜发生癌变的重要机制之一。IGF-1、IGF-2、IGF-2R、ERα、ERβ-mRNA高表达可能提示子宫内膜样腺癌预后良好。     

ERα、ERβ和EGFR在人肺癌组织芯片中的表达和意义

目的 探讨雌激素受体α(ERα)和β(ERβ)及表皮生长因子受体(EGFR)在肺癌患者肿瘤组织中的表达及意义.方法 选取癌前病变组(不典型腺瘤样增生)12例,原发肺癌组77例,淋巴结转移性肺癌组12例构建成进展组织芯片.应用免疫组化方法检测ERα、ERβ和EGFR在此芯片中的表达,并探讨其相互关系.结果 在进展组织芯片癌前病变组、原发肺癌组及淋巴结转移性肺癌组中ERα的表达阳性率分别为91.67%、62.34%和25.00%,不同组间比较差异有统计学意义(P<0.01);ERβ的表达阳性率分别为91.67%、55.84%和16.67%,不同组间比较差异有统计学意义(P<0.01);EGFR的表达阳性率分别为25.00%、59.74%和91.67%,不同组间比较差异有统计学意义(P<0.01).在原发肺癌中,ERα表达与性别、组织学分型、肿瘤分化程度及P-TNM分期有关(P<0.05),ERβ表达与性别、组织学分型、肿瘤分化程度、P-TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),EGFR表达与淋巴结转移及肿瘤的P-TNM分期有关(P<0.05).ERβ和EGFR的表达呈正相关(r=0.612,P<0.01).结论 ERα、ERβ及EGFR均与肺癌的发生发展有关,且ERβ和EGFR的表达相关,这种潜在的机制及关联性为将来的进一步研究提供了基础.     

趋化因子CXCL14在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系

目的研究趋化因子CXCL14在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与患者预后的关系。方法利用RT-PCR、酶联免疫吸附
法（ELISA）和荧光定量PCR技术检测4种骨肉瘤细胞株及40对骨肉瘤及癌旁肌肉中CXCL14的表达,CCK8细胞增殖实验、克
隆形成实验观察CXCL14对U2OS细胞增殖的影响,免疫组化检测CXCL14在骨肉瘤组织中的表达,并运用Kaplan-Meier 法进
行生存分析。结果CXCL14在骨肉瘤细胞株中的表达均高于正常成骨细胞,而且其在骨肉瘤组织的表达也显著高于癌旁肌肉
组织（P<0.01）。干扰CXCL14表达能抑制U2OS的生长（P<0.05）,经两条CXCL14干扰RNA处理后U2OS克隆形成率分别为
（4.93±0.25）%和（5.03±0.0.31）%,均显著低于阴性对照组（8.03±1.16）%,差异有统计学意义（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析
显示,CXCL14高表达的患者预后比低表达组差（P=0.02）。结论CXCL14在骨肉瘤中高表达,它能促进骨肉瘤细胞的增殖并与
患者不良预后相关,提示其可能成为潜在的治疗靶点。
     

STIP1基因沉默对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨磷酸化应激诱导蛋白1基因沉默(si-STIP1)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人成骨细胞(hFOB1.19细胞)和人骨肉瘤细胞系(U2OS、MG63和SaoS-2细胞),采用实时定量PCR和蛋白印迹法测定磷酸化应激诱导蛋白1(STIP1)在各细胞中的表达水平。si-STIP1及阴性对照(si-NC)转染U2OS细胞48 h,采用CCK-8法测定细胞增殖,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,采用蛋白印迹测定细胞MMP2和MMP9及IGF1R/PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。结果与hFOB1.19细胞相比,U2OS、MG63和SaoS-2细胞的STIP1基因和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。与si-NC组相比,si-STIP1组U2OS细胞的增殖活性、迁移率、侵袭率均显著降低(均P<0.05),MMP2、MMP9、p-IGF1R、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论 STIP1基因沉默抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其可能机制是通过调控IGF1R/PI3K/AKT信号通路实现。     

miR-99a抑制物对骨肉瘤细胞生物行为学的影响

目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响。方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较。培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99ainhibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06)(P<0.01)。3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P<0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P<0.05)。miR-99ainhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P>0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调。结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/MMP-2蛋白表达而实现的。