HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的初步研究

目的检测HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的情况,为HBV宫内传播机制研究提供理论依据。方法用胰蛋白酶(0.25%)-DNase Ⅰ(0.15 U/ml)联合消化法,获取纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞。将状态良好的对数生长期人绒毛膜滋养层细胞分为6组,HBsAg-anti-HBs 复合物组(Ⅰ),热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清和高滴度anti-HBs阳性血清共同孵育物组(Ⅱ), 热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清组(Ⅲ),HBsAg组(Ⅳ),热灭活的正常人血清组(Ⅴ),及正常细胞培养液组(Ⅵ,空白对照组)。分别收集各组细胞铺片,免疫组化检测细胞的感染状况。结果所获人绒毛膜滋养层细胞纯度较高,符合后续实验要求。用鼠抗人anti-HBs免疫组化检测收集的细胞铺片,发现Ⅰ、Ⅱ组均有大量HBsAg阳性信号,Ⅲ组细胞亦有少量HBsAg阳性信号出现,其他各组细胞均未发现HBsAg阳性信号。结论体外培养的人胎盘滋养层细胞能将HBsAg-抗HBs复合物中的HBsAg,但不能将单独的HBsAg“摄入”胞内。     

免疫荧光双标记技术检测胎盘HBsAg-抗-HBs复合物

目的：探讨乙肝病毒（HBV）以保种形式感染胎盘滋养层细胞。方法：通过免疫荧光双标记技术检测12例血清HBsAg阳性母亲的胎盘滋养层细胞HBsAg-抗-HBs复合物。结果：血清学HBsAg阳性母亲胎盘滋养层细胞中存在HBsAg-抗-HBs复合物。结论：提示HBV可能通过HBsAg与抗-HBs结合成复合物的方式进入胞内，导致胎盘屏障的第一层细胞受到HBV感染。     

人早孕胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养

目的: 培养纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞, 为胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制研究提供细胞学基础.方法: 胰蛋白酶-DNase消化法培养人绒毛膜滋养层细胞,间接免疫染色进行细胞纯度检测,透射电镜观察细胞内部结构.结果: 倒置显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长.细胞角蛋白染色阳性,波型蛋白染色阴性,表明不含污染细胞.透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构.结论: 该法简便易行,可获得合乎试验要求的人绒毛膜滋养层细胞.     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及IgG FcγRⅢ在滋养层细胞的表达

目的：体外分离培养人胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，研究IgGFcγRⅢ（CD16）在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16，从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35%、45%两个Percoll密度梯度进行分离纯化，用ABC免疫组化染色法对足月分娩后的胎盘组织石蜡包埋切片及体外分离培养的胎盘滋养层细胞进行染色。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞（占90%以上，胎盘组织切片的滋养层细胞及体外分离培养的滋养层细胞抗CD16染色阳性，阳性信号定位于胞质，未见胞核着色，结论：改进后的分离方法可能得到较高纯度的滋养层细胞，胎盘组织的滋养层细胞和体外分离培养的滋养层细胞均有CD16表达。     

HBV的宫内传播与人绒毛膜滋养层细胞的HBV感染和凋亡关系的研究

目的检测HBV感染后人绒毛膜滋养层细胞的HBV标志物的表达和细胞的形态学变化,探讨HBV对滋养层细胞的感染与HBV宫内传播的关系。方法将HBV感染的血清与原代培养的人早孕绒毛膜滋养层细胞及传代细胞JEG-3共同孵育8～48h,通过倒置显微镜观察细胞的形态及细胞间连接,细胞免疫荧光方法检测滋养层细胞中HBsAg的表达,荧光定量PCR方法检测细胞中的HBVDNA,TUNEL方法检测滋养层细胞的凋亡。结果滋养层细胞与HBV感染的血清共同孵育后,滋养层细胞的形态及细胞间连接无明显变化;但通过免疫荧光方法检测到滋养层细胞中HBsAg的阳性表达,并通过荧光定量PCR方法检测到滋养层细胞中HBVDNA的存在;同时,细胞凋亡检测结果表明,与HBV感染的血清共同孵育后,滋养层细胞的凋亡数量明显增加。结论HBV可以感染体外培养的滋养层细胞;HBV感染可以诱导滋养层细胞凋亡,滋养层细胞的感染和凋亡可能与HBV的宫内传播机制有关。     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的：体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，探讨丙型肝炎病毒（HCV）经胎盘母婴传播的具体途径。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35％，45％两个Percoll密度梯度进行分离纯化。并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察。HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞，通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测，以观察HCV的感染及复制情况。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞）占90％以上，电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态。HCV感染细胞培养16d内培养上清中可间断检测出HCV RNA.结论：改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞，HCV感染胎盘滋养层细胞可能是HCV宫内母婴传播的途径之一。     

人胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养

目的 建立纯度较高的适于试验研究的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶-DNase联合消化法培养人绒毛膜滋养层细胞，间接免疫染色进行细胞鉴定。透射电镜观察细胞内部结构。结果 倒置显微镜下，可见细胞呈不规则多角形，核大卵圆形，胞质透明，呈片状铺展生长，角蛋白染色阳性率超过95%，未检测到波形蛋白阳性细胞，表明不含污染细胞。透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构。结论 该法简便易行，可获得合乎试验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

死胎胎盘组织中HBsAg表达及其意义

目的：观察乙型肝炎病毒在胎盘组织中的表达及其意义。方法：收集40只孕周为36－40岣，肝功能异常，娩下死胎的乙型肝炎产妇的胎盘组织，采用SP法检测HBsAg，行常规病理观察：检测产妇产前静脉血乙型肝炎病毒（HBV）标志物。结果：HBsAg阳性颗粒在死胎胎盘的蜕膜细胞（DC）、滋养层细胞（TC）、绒毛间质细胞（VSC）、绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）的细胞质、血管中呈点，灶状分布，这些细胞的核不着色。产妇HBV标志物呈单项阳性，小三阳，大三阳的死胎胎盘组织中HBsAg阳性率及DC，TC，VSC，VCEC细胞质中HBsAg阳性率均无显性差异（P＞0．05）。死胎胎盘绒毛发育迟缓，慢性绒毛炎，单脐动脉的发生率比较差异有显性（P＜0．05）。结论：HBV母婴传播可能还存在一种从胎盘母体面向胎儿的细胞转移的方式；HBV可以导致胎盘发育不良和屏障功能障碍；死胎胎盘组织中HBsAg阳性率与孕妇静脉血中HBV标志无关。     

乙肝表面抗原阳性孕妇胎盘组织中bcl-2、bax和HBcAg的表达

目的 通过检测乙肝表面抗原（HBsAg）阳性孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax基因及HBcAg的表达,探讨bcl-2、bax与HBcAg之间的关系。方法 46例HBsAg阳性孕妇足月产胎盘（排除其他疾病）为HBV组,25例HBsAg阴性（HBV-DNA阴性）足月产妇胎盘做为对照组。HBV组中根据HBcAg结果分为阳性组和阴性组。采用免疫组化法测定两组孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax、HBcAg的表达。结果 （1）HBV组和对照组比较bcl02基因表达无统计学意义（P〉0．05）,bax基斟表达阳性率明显高于对照组,两者比较有统计学意义（P〈0．05）;（2）胎盘组织细胞中HBcAg的表达：HBcAg阳性信号表达于胎盘各层细胞中,滋养层细胞感染率为41．3％,绒毛问质细胞感染率为15．2％,绒毛毛细血管内皮细胞感染率为6．5％;（3）HBcAg阳性组与HBcAg阴性组中bcl-2基因表达比较无统计学意义（P〉0．05）,bax基因表达在HBcAg阳性组明显高于HBcAg阴性组,有统计学意义（P〈0．05）。结论 HBV感染孕妇胎盘组织中bax表达明显升高,提示bax可能参与了胎盘组织细胞凋亡的过程;HBsAg阳性孕妇胎盘中HBcAg可能是逐层感染胎盘各型细胞,且胎盘组织中HBcAg阳性者bax表达与HBcAg关系密切。     

米非司酮对人胎盘滋养层细胞上Trophinin,tastin,bystin表达的影响

[摘要] 目的: 探讨Trophinin,tastin,bystin新型黏附分子复合体在不同发育阶段人绒毛滋养层细胞上的表达及米非司酮对其表达的影响。方法：运用特异性的单克隆抗体,采用免疫组化技术,对26份取自停经6周左右（42.69±2.53）d行负压吸引人工流产（14例）及服用米非司酮后行吸宫术（12例）所获得的绒毛、11例妊娠10周左右、9例妊娠12周左右、8例足月胎盘标本分别进行了trophinin, tastin, byatin 蛋白表达的检测。结果：trophinin,tastin,bystin蛋白主要表达于合体滋养层细胞（P<0.05）;同妊娠6周左右未用药组相比,妊娠10周左右组的绒毛滋养层细胞上三种蛋白的表达均显著减弱（P<0.001）,妊娠12周左右及足月分娩胎盘绒毛上均未见表达;服药组绒毛滋养层细胞上三种蛋白的表达显著减少（P<0.05）。结论：Trophinin,tastin,bystin可能参与了人胎盘的形成;米非司酮下调绒毛滋养层细胞上trophinin,tastin,bystin黏附分子复合体的表达,可能是其抗早孕的机制之一。 [关键词] Trophinin, tastin, bystin 黏附分子复合体 滋养层,胎盘 米非司酮     

低浓度HBsAg感染者乙肝5项标志物测定意义

目的 :观察低浓度 HBs Ag感染者乙肝 5项标志物的模式特征。方法 :采用 EL ISA法测定了 38例 HBs Ag浓度在5μg/ L以下血清中乙肝病毒表面抗体 (抗 - HBs)、乙肝病毒核心抗体 (抗 - HBc)、乙肝病毒 e抗原及其抗体 (HBe Ag、抗 - HBe)。结果 :低浓度 HBs Ag感染者血清 5项 HBV标志有 8种表现模式 ,以“HBs Ag、抗 - HBc、抗 - HBe阳性 ,抗 - HBs、HBe Ag阴性”模式为主(6 5 .79% ) ,其次为“HBs Ag、抗 - HBc、HBe Ag阳性 ,抗 - HBs、抗 - HBe阴性”和“HBs Ag、抗 - HBc阳性 ,抗 - HBs、HBe Ag、抗 - HBe阴性”模式 (分别为 10 .5 3%和 7.89% ) ,HBs Ag和抗 - HBc同时阳性者 92 .11%。结论 :低浓度 HBs Ag感染者具有特殊的流行病学特点 ,提高 HBs Ag测定灵敏度具有重要意义。     

湛江地区2487名体检者中乙肝病毒血清学标志物的检测结果

目的:了解湛江地区人群中乙肝病毒(HBV)感染情况。方法:对2 4 87名体检者应用酶联免疫吸附法(ELISA)法测定HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc。结果:HBsAg的阳性率为1 8.74 %。乙型肝炎病毒血清学标志物(HBVM)阳性情况主要为两种模式:即HBsAg、抗 HBe、抗HBc阳性;HBsAg、HBeAg阳性。结论:湛江地区体检者中HBsAg的阳性率较高,其中以2 0岁～4 0岁者HBsAg的阳性率最高,其人群分布与计划免疫、文化程度、卫生习惯、生活环境、性别和性格等因素有关。     

8181名体检者中HBV血清学标志物与ALT的检测分析

目的:了解东莞市体检人群中乙肝病毒(HBV)感染情况与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的异常率。方法:对8181名体检者应用酶联免疫吸附法(ELISA)法测定HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,用速率法测定ALT。结果:HBsAg的阳性率为13.14%,HBeAg的阳性率为4.89%,ALT的异常率为3.40%。乙型肝炎病毒血清学标志物主要以HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性和HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性的两种模式为主。结论:东莞市体检者中的HBsAg的阳性率高于全国的HBsAg的阳性率,其中HBsAg阳性率20岁以下相对低些,20岁~30岁的高达17.19%,HBeAg的阳性率在20岁~30岁的打工者中占较大比例。其人群分布与计划免疫、文化程度、卫生习惯、生活环境等因素有关。     

乙型肝炎血清流行病学研究——湖北省钟祥县官庄湖农场的调查

对钟祥县官庄湖农场972名居民用RPHA法检查HBsAg,PHA法检查抗HBs,ELISA法检查抗HBc,ELISA抗体夹心法检查HBeAg和ELISA竞争法检查抗HBe.结果:HBsAg、抗HBs、抗HBc阳性率分別为12.8%、13.4%、40.5%,HBsAg携带者中有63.6%HBeAg阳性,26.4%抗HBe阳性和81.4%抗HBc阳性。HBV总感染率51.3%。     

Hepatitis-B virus infection in rural and urban populations of eastern Nigeria: prevalence of serological markers

Hepatitis B virus markers were measured by radioimmunoassay in the sera of 804 rural and urban inhabitants and prisoners in Nigeria. Of these, 530 (66%) subjects had one or more serologic markers of HBV infection; 9.1% were HBsAg carriers, 47% had anti-HBs and 10.1% were positive for anti-HBc alone. Total HBV exposure rate, HBsAg carrier rate and previous exposure to hepatitis B virus measured by the frequency of anti-HBc alone were significantly higher in the rural population compared with the urban population (p less than 0.0001; p less than 0.03; p less than 0.01) respectively. It was observed that by the age of 40 years, 87% of the Nigerian population have at least one HBV seric marker. There was a higher incidence of HBsAg (p less than 0.0001) and anti-HBc alone (p less than 0.001) in prisoners than in any other group. HBeAg was present in 16.4% HBsAg positive individuals with no intersex difference. No positive correlation was found between the frequency of HBV markers in rural dwellers and the history of blood transfusions. These findings suggest that horizontal transmission aided by cultural or behavioural factors and clustering of carriers rather than transfusions is the main determinant of HBV prevalence in rural Nigeria.     

晚期原发性肝癌患者血清PCR－HBV DNA的意义

目的：为进一步研究ＨＢＶ感染与原发性肝细胞癌的关系．方法：ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ和抗－ＨＢｓ；ＰＣＲ检测血清ＨＢＶＤＮＡ．结果：３７例晚期原发性肝癌患者血清ＨＢ－ｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ阳性者分别为１７例（４５．９５％），４例（１０．８１％），１６例（４３．２４％）和９例（２４．３２％），而抗－ＨＢｓ全部阴性．聚合酶链式反应检测ＨＢＶＤＮＡ，１８例（４８．６９％）阳性，非常显著地高于ＨＢｅＡｇ检出率（Ｐ＜０．０１）．抗－ＨＢｅ阳性中有７例ＰＣＲ－ＨＢＶＤＮＡ阳性．ＨＢＶ总感染率８９．１９％．结论：提示原发性肝癌发生与ＨＢＶ感染有关．     

聚集性感染家族内乙型肝炎病毒标志物

目的:研究HBV 血清标志物及HBV DNA在聚集性感染家族内的流行模式.方法:以2002/2005在我院感染科就诊的来自偏远山区的HBsAg阳性者为先证者,询问其家族史,筛选具有3代或以上遗传信息的家系. 签署知情同意书后,对这家系中所有的人进行流行病学调查,收集血样. 用ELISA检测HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc;用Real-Time PCR 定量检测HBV DNA.结果:共收集27个家系237人;HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc,HBV DNA的总体阳性率分别为45.6%,5.9%,26.7%,11.8%,62.9%,28.3%;在HBV聚集性感染家族中,男性的HBsAg,HBeAg,HBV DNA的阳性率显著高于女性;HBsAg及HBV DNA相对年龄成双峰分布,主要集中在18岁和45岁.结论:在聚集性感染家族中,HBV的流行病学资料有其自身特点;家族聚集性感染者符合慢性HBV感染的自然病程,多为婴幼儿期感染所致,可能与宿主的遗传易感性有关.     

武汉地区乙型肝炎母婴传播的调查

340名孕妇产前HBsAg、抗—HBs、HBeAg、抗HBe、抗—HBc的阳性率分别为7.7％、4.7％、6.2％、2.9％、4.7％。25名HBsAg阳性产妇的婴儿中,7例HBsAg阳性(29.6％)。三大抗原系统阴性的婴儿无一例HBsAg阳性,13例e抗原阳性母亲的婴儿,5例HBs阳性,12例e抗原阴性、HBsAg阳性产妇之婴儿,2名HBsAg阳性。430份脐血,HBsAg全部阴性。     

某部乙型病毒性肝炎感染现况调查

目的调查某部乙型肝炎病毒（HBV）在新兵人群中的感染状况,为预防策略提供科学依据。方法根据分散选点、整群抽样的原则,确定某部的调查对象,通过专人询问并填写统一的流行病学调查表,采集调查对象静脉血3～5 ml,分离置于-20℃保存备用,统一采用SPRIA方法检测调查对象血清中HBsAg、抗-HBs、抗-HBc,ELISA方法检测调查对象血清中HBeAg、抗-HBe。结果所有受检人员HBsAg总阳性率为0.48%,抗HBs总阳性率为61.90%;城市新兵与农村新兵HBsAg总阳性率无统计学差异（P〉0.05）;不同年龄段的新兵HBsAg、抗HBs、抗HBe和（或）抗HBc阳性率差异无显著性（P〉0.05）。结论 部队预防HBV,应同等对待不同入伍年限和兵源地的入伍新兵,有近40%的新兵抗HBs阴性,故有必要广泛对新兵进行乙肝疫苗接种。     

2万外资企业员工健康体检ALT和两对半结果分析

目的 了解南京市外资企业员工乙型肝炎病毒感染状况与血清丙氨酸氨基转移酶的异常率。方法 对20000名体检者应用酶联免疫吸附法测定HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，用速率法测定ALT。结果 HBsAg的阳性率为3．5％，ALT的异常率为8．38％。乙型肝炎病毒血清学标志物主要以HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性（小三阳）和HBsAg．HBeAg、HBcAb阳性（大三阳）两种模式为主。结论 南京市外资企业员工体检者中的HBsAg的阳性率低于全国的HBsAg的阳性率，但员工中潜在着一定的乙肝病毒传播，仍要注意加强对乙肝的预防及治疗。