外周血单个核细胞DNA提取方法的研究进展

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件.外周血作为一种常用的临床检测材料,如何从外周血单个核细胞中快速、高效的分离提取基因组DNA,对于临床血液检验与分析非常重要.目前,DNA的抽提方法有很多,如酚-氯仿法、盐析法、离心吸附柱法等人工方法,以及磁珠法等半自动方法及试剂盒法.本文就从外周血血液中提取DNA方法的原理、具体操作步骤及方法评估等给予简要的综述.     

丙肝患者外周血单个核细胞分离方法的改进

据陈良标等报道 ,丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)可感染慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞并在其中复制。但从外周血中提取单个核细胞 (ＰＢＭＣ)进行免疫组化染色时 ,常有血小板的干扰 ,影响观察结果 ;另外 ,在检测ＨＣＶ抗原 (ＨＣＶ Ａｇ)过程中 ,还存在血浆中ＨＣＶ对ＰＢＭＣ的污染问题。为此 ,我们对分离方法进行了改进取得了满意的效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1 1　材料　选抗 ＨＣＶ抗体和ＨＣＶ ＲＮＡ均阳性的丙肝患者血清共 96例 ,均来自本院肝病研究所门诊及住院患者。肝素由山东省莱阳生物化学制药厂生产 ,12 5Ｕ/支 ;淋巴细胞分…     

介绍一种外周血单个核细胞RNA提取方法

分子生物学实验中RNA提取纯化影响因素较多 ,由于RNA核糖残基 2 / 和 3/ 位上的羟基存在 ,使其更易受自然界中广泛存在的RNA酶降解。目前常用的RNA提取方法有酸性酚 硫氰酸胍 氯仿提取法、oligo 纤维素层析法等[1] 。组织和细胞单相裂解液也有商品化供应 ,如Trizol、Isogen、RN     

大黄素对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响

目的探讨大黄素对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响.方法选取32例非胰岛素依赖型糖尿病伴肾损害患者和健康对照24例,PBMC提取采用Ficoll梯度密度离心法,细胞被分成4组,观察4种不同浓度的大黄素(0、10、50、100μg/ml)对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响,MCP-1测定采用ELISA法.结果糖尿病肾病外周血单个核细胞MCP-1水平高于正常对照(78.40±35.67vs 29.30±17.31pg/ml,P＜0.05),且与24h尿蛋白定量、尿白蛋白水平呈正相关关系(r=0.633,P＜0.05;r=0.701,P＜0.05;).大黄素(30～100μg/ml)均明显降低了糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1水平(78.40±35.67 vs 61.00±28.90,P＜0.05;78.40±35.67 vs 41.00±18.00,P＜0.01;78.40±35.67vs 21.00±6.90,P＜0.01),大黄素浓度越大,抑制效应越明显(P＜0.01).结论糖尿病肾病尿MCP-1水平是增高的,大黄素能抑制糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1水平,大黄素下调MCP-1的表达可能是其降低蛋白尿、改善肾功能的重要环节.     

外周血单个核细胞在精神分裂症中的作用

精神分裂症是一种复杂且病因未明的慢性精神疾病,目前诊断主要依据患者的临床表现、医生对症状的观察及评估,缺乏客观的生物学指标,导致临床诊断存在一定困难。近年来,有研究发现免疫炎症反应在精神分裂症的发病机制中发挥作用,通过抗炎治疗后部分患者的精神分裂症症状可在一定程度上缓解,免疫细胞在精神疾病诊疗中的作用逐渐受到重视。本文主要综述外周血单个核细胞作为探索精神分裂症生物标志物的载体在疾病发病机制中的作用及潜在的诊断意义,以期增加对精神分裂症免疫表型理解。     

利用外周血单个核细胞生产成熟红细胞

体外制备红细胞的方法大多使用脐血、骨髓或外周动员的CD34＋细胞或胚胎干细胞作为起始材料.本研究利用外周血单个核细胞为原料在体外生产成熟红细胞.以血液滤涂白细胞后剩余的白膜层为原料,从中分离出单个核细胞,然后通过4步培养法制备成熟的红细胞.结果表明：经过不同细胞因子组合的诱导以及小鼠基质细胞系MS-5的支持培养,外周血单个核细胞的扩增倍数达到约1 000倍,其中约90％的细胞是与正常红细胞形态相似的无核成熟红细胞.集落形成能力分析显示,本研究培养体系可使单个核细胞中的祖细胞增殖并且只向红系方向分化.结构和功能分析结果表明,体外培养出的红细胞的平均细胞体积（MCV）为118±4fl,比正常红细胞（80-100 fl）稍大.平均血红蛋白含量（MCH）为36±1.2 pg,比正常的红细胞水平（27-31 pg）稍高.红细胞的最大变形指数（DImax）为0.46,接近正常红细胞水平.葡萄糖6磷酸脱氢酶及丙酮酸激酶的含量与年轻红细胞的特性一致.结论：利用外周血白膜层中含有的造血干祖细胞,通过体外培养能够生产出成熟红细胞,它是一种取材方便、成本低廉的红细胞生产原料,本研究培养体系适于利用单个核细胞生产成熟红细胞.     

FQ-PCR技术对慢性乙肝患者血清与外周血单个核细胞HBV-DNA定量的对比分析

目的探讨慢性乙肝患者血清和外周血PBMC的HBV-DNA定量间的关系。方法采用FQ-DNA技术检测90例慢性乙肝患者血清和外周血单个核细胞的HBV-DNA含量。结果HBeAg阳性时,血清和PBMC的HBV-DNA阳性率均为100%,HBeAg阴性时,血清HBV-DNA阳性率为60.9%,PBMC阳性率为66.7%。另外当HBeAg( )、HBV-DNA( )时,PBMC阳性率为100%,HBeAg(-),HBV-DNA( )时,PBMC阳性率为85.7%,HBeAg(-),HBV-DNA(-)时,PBMC阳性率为48.1%。结论同时进行HBV-DNA的血清学以及PBMC内检测十分重要,其检测结果在临床上对慢性乙肝患者的病情判断,治疗措施以及治疗效果的评价具有举足轻重的作用。     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞p170和CD38的表达及意义

我们检测了17例多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单个核细胞p170和CD(38)的表达,以期探讨二者表达的相关性及其意义。材料和方法1 研究对象1.1 实验组:17例MM住院患者,根据Durie和Salm-on标准诊断,无急性感染,形态学未发现外周血中有浆细胞,其中男性14例,女性3例,初治9例,复发8例,年龄40～73岁,平均年龄60岁,Ⅱ期5例,Ⅲ期12例。1.2 对照组:11名健康献血员,男性9名,女性2名,年龄31～48岁,平均年龄39岁。1.3 化疗方案:检测患者p170和CD_(38)后,无论初治和     

肝癌患者外周血单个核细胞HLA-G表达研究

目的了解肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）人类白细胞抗原G（HLA—G）的表达水平。方法收集38例HCC患者、25例肝硬化患者和40名健康查体者的PBMC,分别用逆转录一聚合酶链反应（PCR）和流式细胞术（FCM）检测其HLA—GmRNA和HLA—G蛋白表达水平。结果HCC组、肝硬化组和健康对照组PBMCHLA—GmRNA表达率分别为94．7％、84．0％和87．5％,差异无统计学意义（P=0．359）;HCC组HLA—G蛋白表达率高于肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义（P=0．002）。HCC组PBMCHLA—G蛋白主要表达于CD4^＋细胞上。结论HCC患者PBMCHLA—G蛋白表达率升高,其机制与临床意义尚待进一步研究。     

不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化

目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义(P0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g时,存活细胞数显著减少。结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离。     

费森尤斯卡比血细胞分离机采集外周血单个核细胞的护理

目的总结使用费森尤斯卡比血细胞分离机进行单个核细胞采集的配合及护理,探讨安全有效的采集流程和不良反应的处理方法。方法通过对71例患者共96例次使用费森尤斯卡比血细胞分离机进行单个核细胞采集过程总结,分析护理关键点、不良反应及应对措施等情况,并进行效果评价。结果采集中,总循环血量为7～10L,全血流速45～55m1／min,每个循环血量为450-520mL,平均500ml,每次采集时间170-200min,平均180min;本组采集过程顺利。本组3例出现低钙血症,无其它不良反应的发生;单个核细胞采集效率为53．3±14．5％。结论使用费森尤斯卡比血细胞分离机可采集到临床要求量的单个核细胞;采集过程中采用分次预防性补钙方法,掌握了补钙大致时间点。仅有3例仍出现低钙血症,增加了补钙次数,并减少循环血量,症状消失。采集过程中未出现其他不良反应。同时,通过手动控制收集终产品,将PLJ下降率控制在21．69±10．84％。     

慢性乙型肝炎患者 HBV 感染外周血单个核细胞的研究进展?

乙型肝炎(简称乙肝)病毒(HBV)感染是一个全球性的公共卫生问题,全世界约3.5亿人受该病毒感染影响。近年来,国内外研究发现,HBV 不仅存在于肝细胞中,也可以存在于外周血单个核细胞(PBMC)。由于 PBMC 在机体免疫过程中发挥非常重要的作用,HBV 在 PBMC 中的发现,以及 HBV 对PBMC 免疫功能的影响越来越受到国内外学者的关注。本文就慢性乙肝(CHB)患者中 PBMC 相关的研究进展作简要的综述。     

不同定量PCR法测定血清和外周血单个核细胞HBV DNA的评价

目的探讨乙肝患者外周血单个核细胞和血清中HBV-DNA含量及其与HBVM之间的关系。方法62例乙肝患者为检测对象,20例健康献血者为对照组,分别用FQ-PCR定量测定,内对照法定量测定血清HBV-DNA,免疫荧光定量测定HBVM。结果外周血单个核细胞HBV-DNA检出阳性率为72.6%(45/62),与血清的符合率为87.1%,但慢性乙肝患者外周血单个核细胞HBV-DNA检出率高于血清,且与病情呈正相关。结论三个指标的联合检测有助于反映肝细胞病毒复制情况,对进一步指导抗病毒治疗有一定意义。     

B细胞成熟抗原在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的检测B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平,探讨BCMA在SLE发病中的意义。方法纳入2006年1-11月收治的36例SLE患者,同期17例健康志愿者作为对照组,采用半定量RT-PCR法检测外周血单个核细胞中BCMA mRNA的表达,并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者组BCMA mRNA表达水平（0.598±0.230）均明显高于正常对照组（0.411±0.309）（P〈0.05）。SLE患者BCMA mRNA表达水平与SLEDAI评分无相关性（P=0.590）。结论 SLE患者BCMA mRNA表达水平的增高,可能在SLE的发病机制中具有一定的作用。     

人初乳对不同个体外周血单个核细胞体外增殖的影响

利用ＭＴＴ法就人初乳对不同个体外周轿单个核细胞体外增殖的影响进行了初步探讨。结果显示,人初乳对培养细胞有明显的保增殖作用,且有浓度的依赖性。不同个体的细胞对人初乳反应结果相差无统计学意义,恶性病患者反应略差。     

肿瘤细胞生物治疗中单个核细胞采集的影响因素分析

目的:探讨在肿瘤细胞生物治疗单个核细胞采集中,影响终产品单个核细胞计数(mononuclear cell,MNC)和采集效率(collection efficiency,CE)的因素。方法:对共计142例肿瘤患者和健康供者的采集数据进行分析,包括年龄、性别、身高、体重、身体质量指数(body mass index,BMI)、全身血容量、诊断类别、血管通路、操作者、终产品量、ACD抗凝剂用量、流速、循环次数、采前血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(Plt)、白细胞计数(WBC)、淋巴细胞计数、单核细胞计数、中性粒细胞计数、去掉抗凝剂的循环血量、终产品单个核细胞计数和单个核细胞的采集效率。其中单个核细胞CE(%)=终产品MNC×100/(采前MNC×去掉抗凝剂的循环血量)。采用T检验和多元线性回归分析研究影响终产品MNC和CE的因素。结果:肿瘤患者的CE高于健康供者(24.41±1.91,20.01±0.99,P=0.043),不同操作者之间CE不同(P=0.01,H=18.59)。终产品MNC与终产品容量、ACD抗凝剂用量、采前淋巴细胞计数呈正相关(P=0.00,P=0.01,P=0.00,r=0.811);MNC的CE与流速、采前RBC计数呈负相关,与操作者工作年限、ACD抗凝剂用量呈正相关(P=0.01,P=0.04,P=0.03,P=0.00,r=0.495)。结论:采前淋巴细胞计数越高、ACD抗凝剂用量和终产品容量越多,终产品MNC越多;ACD抗凝剂用量越多,操作者资历越高单个核细胞CE越高;采前RBC越高、采集流速越快,单个核细胞CE越低。     

慢性肝病患者外周血单个核细胞白蛋白基因表达的临床意义

目的：探讨慢性肝病患者外周血单个核细胞（PBMC）白蛋白mRNA表达的临床意义。方法：50例慢性乙型病毒性肝炎患者（CHB组）、40例肝炎后肝硬化患者（肝硬化组）和40名肝功能正常的健康人（健康对照组）予荧光定量PCR检测血清HBVDNA,采用逆转录巢式荧光定量PCR检测PBMC白蛋白mRNA表达。结果：CHB组50例患者中,血清HBVDNA阳性30例（60％）;PBMC白蛋白mRNA阳性19例（38％）。肝硬化组40例患者中,血清HBVDNA阳性31例（78％）;PBMC白蛋白mRNA阳性14例（35％）。健康对照组PBMC白蛋白mRNA阳性2例（5％）。CHB组及肝硬化组的HBVDNA及PBMC白蛋白mRNA阳性率均明显高于健康对照组（P〈0．01）。CHB组活动期和肝硬化组失代偿期患者PBMC白蛋白mRNA阳性率明显升高。结论：PBMC白蛋白mRNA的阳性表达与肝细胞的损害程度有关,且具无创性,可考虑作为慢性肝病进展的辅助参考指标之一。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞mIL—2R的检测

用生物素－链霉亲和素免疫细胞化学法检测慢性乙型肝炎（ＣＨ－Ｂ）患者外周血单个细胞（ＰＢＭＣ）静息状态及ＰＨＡ诱导后膜白介素－２受体表达水平，结果显示ＣＨ－Ｂ患者Ｔ淋巴细胞处于部分激活状态，其对ＰＨＡ的应答能力未见明显低下。ＣＨ－Ｂ患者ＰＨ诱导后ｍＩＬ－２Ｒ的表达水平可作为评价病情和考核疗效的指标之一。