邯郸地区苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变的研究

目的探讨邯郸地区苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变情况及突变特征,为该地区苯丙酮尿症的产前诊断、治疗及干预措施的制定提供科学依据。方法选择15例PKU患儿及其父母为研究对象,利用Sanger测序技术,检测15例PKU患儿及其父母的PAH基因的突变,分析邯郸地区PKU患儿PAH基因突变特点。结果通过对15例PKU患儿全部外显子进行基因序列分析,15例患儿明确了30个突变基因,检出率高达100.0%。30个基因突变分为12种类型,其中包含有错义突变8种、剪接突变2种、无义突变1种、缺失突变1种。其中R243Q突变频率最高(23.3%),其次是V399V突变(13.3%)。结论邯郸地区PKU患者PAH基因突变具有明显的突变热点区域(外显子3、4、5、7、10、11、12)和热点突变(R243Q、V399V、IVS4),为深入研究邯郸地区苯丙酮尿症家系奠定了基础。     

北京地区苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的了解北京地区PKU患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变情况.方法运用多重等位基因特异PCR(MASPCR)、DNA单链构态多项性(SSCP)、DNA测序等方法,对有北京正式户口、经筛查诊治的40例PKU家系的苯丙氨酸羟化酶突变基因进行检测.结果发现突变基因10种,其中165T、R241fsdelG为两种新发现突变;而发生率最高的为R243Q、后依次为Y204C、Y356X、R111X、R413P、R252Q、Y161S、14nt(-1) g-＞a.结论北京地区PKU患者苯丙氨酸羟化酶基因存在多样性,外显子7是苯丙氨酸羟化酶基因突变最多的区域,其中R243Q突变点发生频率最高.     

北京地区苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的 :了解北京地区 PKU患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变情况。方法 :运用多重等位基因特异 PCR( MASPCR)、DNA单链构态多项性 ( SSCP)、DNA测序等方法 ,对有北京正式户口、经筛查诊治的 4 0例 PKU家系的苯丙氨酸羟化酶突变基因进行检测。结果 :发现突变基因 10种 ,其中 I6 5 T、R2 4 1fsdel G为两种新发现突变 ;而发生率最高的为 R2 4 3Q、后依次为 Y2 0 4 C、Y35 6 X、R111X、R4 13P、R2 5 2 Q、Y16 1S、I4 nt( - 1) g- >a。结论 :北京地区 PKU患者苯丙氨酸羟化酶基因存在多样性 ,外显子 7是苯丙氨酸羟化酶基因突变最多的区域 ,其中 R2 4 3Q突变点发生频率最高     

河南省苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因外显子7突变特点

目的:了解河南省苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子7突变类型和频率。方法:采用聚合酶链反应和基因测序的方法对河南省48例经典型PKU患者的PAH基因外显子7进行检测分析。结果:检出5种苯丙氨酸羟化酶基因突变,R243Q、G247R、G247V、R261X、L255S,其频率分别为18.8%(18/96),4.2%(4/96),3.0%(3/96),1.0%(1/96)和1.0%(1/96)。48例PKU患者有15例携带R243Q突变,其中纯合突变3例,杂合突变12例。结论:R243Q、G247R和G247V为河南省PKU患者常见的突变类型,R243Q是PKU患者的基因突变热点。     

江苏省苏州市苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变特点

目的探讨江苏省苏州市苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变特点。 方法选择2008－2011年,于上海新华医院通过串联质朴技术、苯丙氨酸负荷试验及尿蝶呤检测确诊分型的江苏省苏州市内25例PKU患儿及其父母为研究对象,通过SNaPShot基因分型技术和二代测序(NGS)技术,检测25例PKU患儿及其父母的PAH基因的突变。采用Sanger测序验证上述2种测序的结果,并分析苏州市PKU患儿PAH基因突变特点。本研究遵循的程序符合南京医科大学附属苏州医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与患儿监护人签署临床研究知情同意书。 结果SNaPShot基因分型技术、NGS技术检测本组受试者PAH基因突变结果与Sanger测序结果一致。25例PKU患儿中,运用SNaPShot基因分型技术,共检测出PAH基因的9种突变类型,分别为Exon7-R243Q、Exon6-Y204X、Exon7-R241C、Exon5-IVS4-1、Exon12-R413P、Exon3-R111X、Exon7-R261Q、Exon10-W326X及Exon11-Y356X,PAH基因突变检出率为58.0%(29/50)。其中10例患儿可通过SNaPShot基因分型技术检测到PAH基因纯合突变或复合杂合突变,家系分析可提供100%的基因诊断信息。对另15例不能提供100%基因诊断信息的PKU患儿运用NGS技术进行检测,在其中12例患儿中检测到PAH基因复合杂合突变,家系分析可提供100%的基因诊断信息;其余3例患儿仅检测到PAH基因单位点杂合突变。运用NGS技术发现了PAH基因的另外15种突变,包括突变频率为4%的A434D、V399V和Y325X 。上述2种方法对PAH基因总突变的检出率为94%(47/50)。 结论江苏省苏州市PKU患儿的PAH基因热点突变包括R243Q、Y204X、R241C、IVS4-1、R413P、R111X、A434D、V399V和Y325X。运用SNaPShot基因分型技术检测PAH基因突变,具有一定临床应用价值。     

新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因第6外显子突变研究

目的了解新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第6外显子的突变特征。方法应用PCR产物直接测序的方法对新疆南疆地区27例维吾尔族PKU患儿PAH基因进行序列分析,以确定其突变位点。结果在54条染色体中共检测到了3种,22个PAH基因突变位点,分别为:p.R176X(c526CT)无义突变;p.EX6-96AG(c.611AG)剪接突变;p.Q232Q(c.696AG)静默突变;其中p.Q232Q为此次检测的高检出突变位点。结论明确了新疆南疆地区维吾尔族苯丙酮尿症患儿PAH基因第6外显子的突变种类和特征,为深入研究奠定基础。     

宁夏汉族苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的 了解宁夏汉族苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因的突变构成及特点。方法 采用PCR产物直接测序的方法,测定12例汉族苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿PAH基因全部外显子及其启动子区域序列。结果 在24个PAH等位基因中共检出18个突变基因,突变检出率为75%(18/24),这些突变包含11种类型,其中错义突变9种、无义突变1种、剪切位点突变1种。 结论 研究结果显示宁夏地区汉族PAH基因突变表现出多样性、复杂性,呈现明显的地域特色。     

新疆南疆地区苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因第7，11，12外显子突变研究

目的探讨新疆南疆地区苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因第7,11,12外显子突变特征。 方法选择2009年3月至2013年12月在新疆南疆地区,经各级医疗机构确诊的42例PKU患儿(均于新生儿PKU筛查时即被确诊)为研究对象,采集其足跟血或静脉血,采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序法进行PAH基因第7,11,12外显子的基因突变分析。本研究遵循的程序符合新疆维吾尔自治区人民医院等各级医疗机构人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,征得受试对象或其监护人知情同意,并与监护人签署临床研究知情同意书。 结果在42例患儿的42对PAH等位基因中,检测出7种PAH基因突变类型,共计46个PAH基因突变位点,其分别为：23个第7外显子c.735G>A(p.Val245Val)静默突变位点;8个第7外显子c.728G>A(p.Arg243Gln)错义突变位点;2个第7外显子c.781C>T(p.Arg261X)无义突变位点;1个第7外显子c.782G>A(p.Arg261Gln)错义突变位点;6个第11外显子c.1155G>C(p.Leu385Leu)静默突变位点;5个第12外显子c.1238G>C(p.Arg413Pro)错义突变位点及1个第12外显子c.1252A>C(p.Thr418Pro)错义突变位点。其中,第7外显子c.735G>A(p.Val245Val)突变位点占此次检出突变位点比例最高,为50.00%(23/46),其突变频率为27.38%(23/84)。PAH基因的等位基因突变检出率为54.76%(46/84)。 结论新疆南疆地区PKU患儿PAH基因第7,11,12外显子的突变特征为：静默突变和错义突变为主要突变,第7外显子出现的突变类型和数量最多。     

新疆地区维吾尔族和回族苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的了解新疆地区维吾尔族和回族苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变特征,为该地区PKU的产前诊断和遗传咨询提供理论依据。方法应用PCR产物直接测序法、基因芯片捕获和二代高通量测序技术共对47例维吾尔族和回族PKU患儿及其父母的PAH基因启动子、第1~13外显子及其旁侧内含子等区域进行PAH基因突变分析。结果在新疆地区维吾尔族(33例)、回族(14例)PKU患者PAH等位基因中分别检测出27种、19种不同的突变基因,总检测率分别为89.4%(59/66)、89.3%(25/28),均以错义突变(51.9%、68.4%)、剪接位点突变和无义突变为主,两民族PAH基因大部分致病突变主要分布在第6、7、12外显子。维吾尔族PKU患者PAH基因最常见的致病突变是R413P(12.1%)、R243Q(9.1%)、EX6-96AG(7.6%)、F161S(7.6%)、IVS10-11GA(6.1%)、P281L(4.5%)和IVS11-2AC(4.5%);而回族最常见的致病突变是R413P、R243Q、R155H、R176X、R241C和A300S(均为7.1%),新疆维吾尔族PKU患者最常见的PAH基因致病突变是R413P,不同于中国汉族和韩国最常见突变是R243Q,也不同于欧洲最常见突变是R408W。IVS11-2AC和R155H可能分别是新疆维吾尔族、回族独有的PAH突变类型,新疆维吾尔族、回族PAH基因突变与中国北方类似,但显著区别于欧洲、拉丁美洲及中亚等国家及地区。新疆地区回族PKU患者中检出的M1I(c.3GT)是国际上未见报道的新的PAH基因突变,而T81N(c.242CA)、V230A(c.689TC)和L348V(c.1042CG)突变为国内首次报道。结论新疆地区维吾尔族和回族的PAH突变基因具有其自身独立保守的特性,而且还存在相互交叉、相互融合的特征,提示新疆多民族地区是研究基因突变多样性、PAH异质性以及人类起源、迁徙等的遗传资源宝库。     

青海地区两种苯丙氨酸羟化酶基因新突变报道

目的:研究青海地区苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变特点,为苯丙酮尿症(PKU)基因诊断和产前诊断提供参考。方法:应用聚合酶链反应(PCR)结合基因序列分析技术,对在青海地区确诊的41例经典型PKU患儿进行PAH基因启动子区和13个外显子及其旁侧内含子区域的全序列分析。结果:采用PCR技术分别扩增41例PKU患者PAH基因序列,然后对PCR产物直接测序,发现H64fsX9基因突变1例、N93fsX5基因突变2例,这2种PAH基因突变经逆向测序予以确认,证实其分别在第190位核苷酸发生了C缺失和第279-282核苷酸之间发生了CATC缺失突变。经查询PAH专业网站和国际PAH数据库,确证这2种基因突变为PAH基因新突变。此外,携带这2种基因突变的3例患儿年龄在1～4岁,其Phe浓度在942～1360μmol/L之间,且均表现出智力低下、头发发黄、全身鼠臭味等典型的PKU临床症状。结论:H64fsX9和N93fsX5为典型PKU患儿中的2种PAH基因新突变,这两种基因突变改变了PAH酶蛋白的一级结构,是导致PKU疾患的直接原因。新突变基因的发现,将为该地区PKU防治提供科学依据,也是对我国民族和地区资料的重要补充。     

母乳喂养对苯丙酮尿症患儿血苯丙氨酸的影响

目的 研究母乳对苯丙酮尿症患儿血苯丙氨酸值的影响,了解母乳喂养对苯丙酮尿症患儿治疗的影响。方法 选取2012年1-12月经西北妇女儿童医院新生儿疾病筛查中心确诊为苯丙酮尿症的患儿为研究对象,除立即采用低苯丙氨酸饮食治疗外,根据是否用母乳喂养分为母乳喂养组(n=68)和配方奶喂养组(n=20),定期检测两组患儿血苯丙氨酸值及生长发育。结果 母乳喂养组68例患儿中60例(88.24%)患儿平均血Phe值在正常范围,人工喂养组患儿平均血phe值正常的有13例(65.00%),两组正常率比较差异有统计学意义(χ²=4.372,P＜0.05)。两组患儿6月龄时的身高、体重比较差异无统计学意义(t=0.17和2.42,P＞0.05)。两组患儿智力发育比较差异无统计学意义(t=2.70,P＞0.05)。结论 两种喂养方法对苯丙酮尿症患儿血苯丙氨酸的影响无明显差异,母乳喂养更利于苯丙酮尿症患儿血phe值的控制。     

The determination of phenylalanine content of foods suitable for phenylketonuria

BACKGROUND: A low phenylalanine diet for people with phenylketonuria (PKU) is very restrictive. Natural foods allowed are based chiefly on fruits and vegetables but there is limited analysis on the phenylalanine content of newer and exotic fruit and vegetables. The assumption that 1 g protein yields 50 mg phenylalanine does not apply to fruits and vegetables. METHODS: The National Society for Phenylketonuria Medical Advisory Panel commissioned the phenylalanine analysis of 172 foods, which emphasis on fruit and vegetables. The foods were purchased from retail outlets and analysed by LGC Limited (67 foods) and the LFI (105 foods). RESULTS: There was a strong correlation between this phenylalanine and UK analyses published in 1980, but previous analysis included only a limited range of fruits and vegetables (r = 0.8746; P < 0.0001). There was also correlation between phenylalanine and UK protein analyses (r = 0.7976; P < 0.0001). CONCLUSION: This new phenylalanine data have enabled a wider range of fruits and vegetables to be safely incorporated into the diet of people with PKU.     

Changes in serum phenylalanine after overnight fasts in youngsters with phenylketonuria

Background and aims: In patients with phenylketonuria (PKU), overnight fasting is associated with rises in serum phenylalanine (PHE) concentration. This is thought to result from catabolism of endogenous protein, which can be reduced by a bedtime snack accompanied by a dose of PHE-free protein substitute (P/S). This study assessed the effectiveness of this strategy and whether any additional benefit was conferred by omitting PHE from the bedtime snack. Methods: Data are presented for 18 PKU children (aged 9–16 years), studied over a 48-h period whilst following diets of known composition. All the subjects had a bedtime snack accompanied by 25% of their P/S daily requirement. Half the subjects (Group X) had 25% of their daily PHE allowance in the bedtime snack, whilst the others (Group Z) ate only ‘PHE-free’ foods at this time. Results: Overnight changes in serum PHE levels were generally small for both groups; the mean serum PHE level changed very little overnight (Group X: 405 μmol L^?1 post snack, 389 μmol L^?1 prebreakfast; Group Z: 430 μmol L^?1 post snack, 426 μmol L^?1 pre breakfast). Conclusion: Overnight changes in serum PHE levels can be minimized by a bedtime snack accompanied by a proportion of the daily protein substitute. Omission of PHE from the snack confers no extra advantage.     

高苯丙氨酸血症苯丙氨酸羟化酶基因突变1例分析

目的 检测1例高苯丙氨酸血症患者及其父母的苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变,分析其基因型、表型和遗传学特征。方法 收集患者和父母外周血样本和临床资料,提取DNA,同时选取120人为正常对照组,扩增PAH基因编码区,并以直接测序法进行突变分析。结果 患者为PAH基因L367R/F392I复合杂合突变,父母分别为PAH基因F392I和L367R杂合突变。错义突变L367R属未见报道的新突变。结论 PAH基因突变L367R/F392I复合杂合突变引起患者高苯丙氨酸血症,其父母均为杂合突变的携带者。基因检查的结果为临床诊断和选择合适的治疗方案提供参考,并且可为进一步生育指导提供帮助。     

Does maternal knowledge and parent education affect blood phenylalanine control in phenylketonuria?

Background  Metabolic control in phenylketonuria (PKU) may be influenced by parental ability because dietary treatment involves complex food choices. This is an observational study to compare maternal carer (MC) knowledge and parental education with phenylalanine concentrations in children with PKU.
Methods  Children ( n  = 46; 26 boys) aged 1–10 years (median age 6 years) on dietary treatment were recruited. Their median lifetime and median phenylalanine concentrations in the year prior to study were estimated. MC completed a questionnaire to assess dietary knowledge.
Results  Overall maternal knowledge on most aspects of diet was good and there was a correlation between annual median blood phenylalanine concentrations, but at the age of 5–6 years of age only, and higher maternal carer scores on PKU knowledge ( r  = −0.646; P  < 0.0001). Three of only four children (12%) with median phenylalanine concentrations above 500 μmol L⁻¹ in the year prior to study had both parents leave school without educational qualifications. Children who had median phenylalanine concentrations ( n  = 3; 7%) over the recommended ranges at 3 years of age or earlier continued to have poor control.
Conclusions  Blood phenylalanine control within the first 3 years of age, poor parental educational achievement at school level, and unsatisfactory maternal dietary knowledge may all influence longer-term blood phenylalanine control in children.     

早期饮食治疗的苯丙酮尿症儿童生活质量现状分析

目的 通过对无锡市2~4岁苯丙酮尿症(PKU)儿童生活质量进行调查,并对其与苯丙氨酸(Phe)浓度的关系进行分析,以了解早期饮食治疗的PKU儿童生活质量现状,指导治疗方案。 方法 选取无锡市2011年6月-2015年6月出生经新生儿疾病筛查确诊的PKU患儿15 名,采用儿童生存质量量表(PedsQL^TM)比较其与正常儿童生活质量的差异,并进行生活质量与Phe浓度的相关分析。 结果 出生后即开始严格低苯丙氨酸饮食治疗的2~4岁儿童生活质量中,除了情感功能维度中的感到悲伤与沮丧项目低于正常儿童外(P<0.01),其余维度与正常儿童比较差异无统计学意义;治疗后的Phe水平高低与生活质量无显著相关关系(P＞0.05)。 结论 早期饮食治疗对PKU儿童的生活质量改善至关重要,将Phe控制在一定范围后,其生活质量将不受影响。     

甘肃省6万例新生儿苯丙酮尿症筛查和治疗分析

【目的】研究甘肃省新生儿苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)的发病情况,以便做到早确诊、早治疗。【方法】应用化学荧光分析法进行苯丙酮尿症检测,确诊患者给予低苯丙氨酸饮食治疗,定期检测血苯丙氨酸水平及体格和智能发育。【结果】自1999~2006年共筛查60 000例新生儿,确诊36例,检出率为1∶1 666,明显高于全国平均水平。【结论】新生儿PKU的筛查及早期治疗,是减少出生缺陷,提高人口素质的重要措施之一。     

The development of nonweighed pilot methods for estimating phenylalanine exchanges in non‐phenylketonuria volunteers

Background: In children with phenylketonuria (PKU), the daily weighing of the phenylalanine allowance from food is advocated. There is a need to develop nonweighed methods of measuring dietary phenylalanine, aiming to ease caregiver burden and possibly improve dietary adherence. The accuracy of three methods (household measures, digital photographs and weighing) for measuring 50‐mg phenylalanine exchanges for PKU was investigated in a randomised, controlled trial. Methods: There were 51 volunteers (32 females; 19 males; median age: 34 years, range 13–77 years), who were all unconnected with PKU. For three consecutive days, all volunteers attended a research centre and, each day, were randomly allocated a different method (household measures, digital photographs and weighing) for phenylalanine exchange measurement. On each day, they measured the amount of food equivalent to one 50‐mg phenylalanine exchange for 24 common foods. All phenylalanine exchange samples (3672 samples) were then reweighed by the investigators. Results: No method of measuring 50‐mg phenylalanine exchanges was accurate when used by volunteers. The median percentages (range) of all food samples within 10% of target were only 67% (41–98), 44% (4–96) and 41% (4–98) for weighing, household measures and photographs, respectively. The respective median (range) of samples within 20% of the target weights were: 96% (51–100) weighing, 82% (10–100) photographs and 80% (6–100) household measures. No noteworthy difference in accuracy was observed between household measures and photographs. Conclusions: Volunteers not associated with PKU could not measure 50‐mg phenylalanine exchanges accurately using weighing, household measurements or photographs. Therefore, it is important to consider developing methods for improving accuracy of measurement of 50‐mg phenylalanine exchanges in PKU.