pGE．GmIL-12／脂质体对变应性鼻炎小鼠嗜酸性粒细胞的影响

目的探讨鼻腔局部应用脂质体包裹的EB病毒（epstein-barr virus,EBV）质粒载体介导白细胞介素12（interleukin-12,IL-12）基因治疗对变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜、外周血和骨髓中嗜酸性粒细胞（eosinophils,Eos）的调节作用。方法采用6N8周雄性BALB／C小鼠,随机分成变应性鼻炎组、基因治疗组和正常对照组,每组各12只。以卵清蛋白致敏激发建立变应性鼻炎组模型,治疗组用阳离子脂质体包裹EBV质粒载体介导的IL-12表达质粒（pGEG.mlL-12）形成混合物EBV／lipoplex,于激发前鼻腔局部滴入。分别用HE染色计数鼻黏膜中Eos数量,用瑞氏染色计数骨髓涂片中Eos比例,以流式细胞仪检测外周血中Eos占粒细胞比例。结果小鼠基因治疗组鼻黏膜Eos显著低于变应性鼻炎模型（P〈0．01）;骨髓涂片中EosLB例显著低于变应性鼻炎模型（P〈0．01）：基因治疗组外周血中Eos显著低于变应性鼻炎模型（P〈0．05）。结论经鼻局部给予脂质体包裹的pGEG-mlL-12能够减少骨髓、外周血和鼻黏膜中Eos数量,可能为呼吸道变应性炎症开辟新的治疗方法。     

EBV/lipoplex介导IL-12基因在体外及小鼠鼻黏膜内的表达

目的体外扩增鉴定EBV质粒-pGEG.mIL-12,与阳离子脂质体混合物形成EBV/lipoplex。用EBV/lipoplex转染COS-7细胞和小鼠鼻黏膜后检测mIL-12的表达。方法体外扩增鉴定pGEG.mIL-12;EBV/lipoplex转染COS-7细胞,用SYBRGreenI核酸荧光染色观察质粒转染情况,ELISA法检测培养上清液mIL-12p70表达。经鼻滴入EBV/lipoplex,原位杂交和免疫组化方法分别观察小鼠鼻黏膜内IL-12mRNA和p70蛋白的表达情况。结果EBV/lipoplex能够高效转染COS-7细胞,分泌IL-12活性蛋白。EBV/lipoplex转染细胞的培养上清液中IL-12含量明显高于对照组细胞培养上清液,上清液中IL-12含量明显高于细胞裂解液。EBV/lipoplex经鼻滴入后能够在小鼠鼻黏膜内高效表达IL-12mRNA和p70活性蛋白。结论鼻腔给药系统-EBV/lipoplex能够成功转染COS-7细胞和小鼠鼻黏膜上皮细胞,并且高效率表达IL-12分泌性蛋白,是变应性鼻炎基因治疗的一个高效基因转移方法。     

白介素12基因治疗对变应性鼻炎小鼠嗜酸粒细胞及白介素5的影响

目的 探讨经鼻局部给予脂质体包裹的白细胞介素(interleukin,IL)12基因治疗对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠模型鼻黏膜、外周血和骨髓中嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)的调节作用及相关因子IL-5的影响.方法 采用6～8周雄性BALB/C小鼠,随机分成AR组、基因治疗组和健康对照组,每组12只.卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立AR模型,治疗组激发前经鼻给予脂质体包裹的pGEG.m IL-12,对照组用生理盐水代替.三组分别用HE染色计数鼻黏膜中EOS的数量,用瑞氏染色计数骨髓涂片中EOS数,以流式细胞仪检测外周血中的EOS数;免疫组化染色检测鼻黏膜和骨髓中IL-5的表达,以ELISA方法检测血清中的IL-5含量.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 三组小鼠中,各检测指标在各组之间的差异均有统计学意义(P值均<0.01).两两比较发现,基因治疗组鼻黏膜EOS数为(4.6±2.6)个/高倍镜视野,低于AR组的(26.5±9.8)个/高倍镜视野,差异有统计学意义(P<0.05);IL-5阳性细胞数[(3.0±1.3)个/高倍镜视野]也低于AR组[(17.6±6.4)个/高倍镜视野],差异有统计学意义(P<0.05);骨髓涂片中EOS(0.040±0.029)低于AR组(0.086±0.014),差异有统计学意义(P<0.05),IL-5阳性细胞数(0.035±0.012)也低于AR组(0.083±0.025),差异有统计学意义(P<0.05).基因治疗组外周血中EOS(0.124±0.031)低于AR组(0.184±0.079),差异有统计学意义(P<0.05),IL-5[(29.51±6.68)pg/ml]也低于AR组[(56.58±16.80)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.05).结论 经鼻局部给予脂质体包裹的pGEG.m IL-12能够通过降低骨髓、外周血和鼻黏膜中IL-5的表达,进而减少骨髓、外周血和鼻黏膜中EOS的数量,IL-12基因治疗可能为呼吸道变应性炎症开辟一种新的治疗途径.     

白细胞介素22治疗变应性鼻炎小鼠的实验研究

目的：探讨鼻腔局部给予重组小鼠白细胞介素22（IL-22）对小鼠变应性鼻炎免疫应答的调节作用。方法将24只6～8周的雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组8只,分别为对照组、模型组和IL-22组。以卵白蛋白（ovalbumin/OVA）为致敏原,氢氧化铝凝胶为佐剂制备变应性鼻炎小鼠模型,于激发前给予小鼠鼻腔局部滴注重组小鼠IL-22。观察小鼠变应性鼻炎症状改善情况,并检测三组小鼠鼻黏膜局部嗜酸性粒细胞侵袭情况、外周血清中OVA-特异性IgE（OVA-sIgE）浓度及Th1、Th2细胞因子的表达情况。结果重组小鼠IL-22干预的变应性鼻炎小鼠症状较模型组缓解,鼻腔黏膜局部嗜酸性粒细胞侵袭减少, OVA-sIgE浓度降低,Th2型细胞因子IL-4和IL-5浓度下降。差异均具有统计学意义（P〈0.05）。Th1型细胞因子IFN-γ浓度在IL-22治疗组和模型组间差异无统计学意义。结论鼻腔局部给予重组小鼠IL-22可以抑制变应性鼻炎小鼠的免疫反应,它有望成为治疗变应性鼻炎的一种新方法。     

青藤碱对变应性鼻炎小鼠的治疗作用及机制研究

目的:研究青藤碱对变应性鼻炎的治疗作用并初步探究其相关机制。方法:用卵清蛋白(OVA)致敏BALB/c小鼠制作变应性鼻炎小鼠模型,对照组用生理盐水替代,青藤碱治疗组于鼻部激发时开始换用含青藤碱的饲料喂养。末次激发24h后,各组小鼠取鼻部组织固定,苏木精-伊红染色;ELISA检测血清中特异性抗OVA-IgE、IL-4和IFN-γ浓度;Western Blot检测转录因子T-bet和GATA3表达水平。结果:青藤碱治疗组的小鼠鼻黏膜无明显腺体增生及嗜酸粒细胞浸润。血清中特异性抗OVA-IgE、IL-4和IFN-γ浓度,T-bet和GATA3表达水平均较变应性鼻炎组降低。结论:青藤碱对变应性鼻炎小鼠模型具有一定的治疗作用,其机制可能是通过改善Th1/Th2细胞失衡发挥作用。     

转录因子GATA-3对变应性鼻炎患者IL-12表达的影响

目的:探讨变应性鼻炎患者转录因子GATA-3和IL-12的表达及关系。方法:通过RT-PCR和ELISA检测37例变应性鼻炎患者和12例对照鼻黏膜组织中GATA-3和IL-12的表达。结果:PCR反应后变应性鼻炎患者和对照鼻黏膜组织中GATA-3相对密度分别为0.579±0.102和0.128±0.021;IL-12的含量分别为(53.7±12.3)ng/g和(121.9±20.4)ng/g;GATA-3与IL-12的表达呈负相关关系(r=-0.9324,P<0.05)。结论:变应性鼻炎患者鼻黏膜GATA-3表达增高与IL-12的异常表达有关。恢复或提高局部组织IL-12的表达,能抑制GATA-3表达的增高,改善变应性鼻炎的症状。     

脾气虚型变应性鼻炎大鼠鼻黏膜IL-3mRNA的活性表达

目的 观察脾气虚型变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织白细胞介素-3(IL-3)mRNA的表达,探讨脾气虚与变应性鼻炎的病理相关性.方法 以卵清蛋白法和卵清蛋白加饮食不节法分别建立大鼠变应性鼻炎模型(AR组)和脾气虚变应性鼻炎模型(脾气虚AR组),分别取鼻黏膜组织,RT-PCR检测IL-3 mRNA表达水平,进行组间比较.结果 AR组鼻黏膜IL-3 mRNA表达水平11.85±0.82,显著高于健康对照组的6.85±0.49(P＜0.01);脾气虚AR组鼻黏膜IL-3 mRNA表达水平14.21±2.10,显著高于AR组(P＜0.01).结论 变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织IL-3 mRNA的表达增加, 脾气虚型变应性鼻炎大鼠者IL-3 mRNA表达活性进一步升高,IL-3活性表达水平可能是脾气虚型变应性鼻炎病情加重的一个重要因素.     

变应性鼻炎动物模型白细胞介素12与嗜酸性粒细胞的变化

目的 本文观察白细胞介素12（interleukin-12,IL-12）在变应性鼻炎动物模型中的变化及其与嗜酸性粒细胞的相关性。方法 39只6～8周雄性BALB／c小鼠,随机分成自然对照组、变应性鼻炎（allergic rhinitis。AR）组和布地奈德治疗组,用卵清蛋白致敏激发制备实验性变应性鼻炎动物模型。取鼻黏膜制备石蜡切片后进行HE常规染色和IL-12免疫组化染色并显微镜观察计数。结果 AR组嗜酸性粒细胞计数极显著性地大干自然对照组,P〈0．01。布地奈德治疗后组织中嗜酸性粒细胞少见,极显著性地低于AR组,P〈0．01：而IL-12的表达显著性地高于AR组。P〈0．05,但与自然对照组相比无明显差别,P〉0．05：组织中IL-12的表达与嗜酸性粒细胞浸润有一定的负相关性。R=0．9252。结论 鼻黏膜组织中IL-12的异常表达。在变应性鼻炎的发病机制中起重要作用,恢复或提高局部组织中IL-12的表达。能抑制嗜酸性粒细胞在鼻黏膜中的浸润。改善变应性疾病的症状。     

Rho激酶-1在变应性鼻炎小鼠上下呼吸道表达特点及布地奈德的干预作用

目的：观察Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道表达特点及布地奈德对其表达影响,探讨Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应中的作用。方法应用卵清蛋白致敏建立小鼠变应性鼻炎模型,30只小鼠随机分为：变应性鼻炎组,布地奈德组和正常对照组。所有小鼠于末次激发后24小时处死,收集鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液查炎症细胞计数,应用免疫组化方法检测鼻黏膜和肺组织中Rho激酶-1蛋白表达。结果变应性鼻炎组鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达水平显著高于正常对照组（P〈0.05）。变应性鼻炎组小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞增加明显（P〈0.05）。应用布地奈德干预治疗后,小鼠鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达较变应性鼻炎组水平降低,小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞数较变应性鼻炎组减少。Rho激酶-1蛋白表达与炎症细胞和嗜酸性粒细胞数呈正相关（P〈0.01）。结论 Rho激酶-1蛋白参与变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应过程,布地奈德可通过调节Rho激酶-1的表达减轻炎症反应。     

肺表面活性蛋白D与IL-16在变应性鼻炎及鼻息肉中的表达和意义

目的:检测肺表面活性蛋白D(SP-D)及IL-16在变应性鼻炎鼻黏膜组织和鼻息肉组织中的表达情况,探讨SP-D及IL-16在变应性鼻炎和鼻息肉发病中的作用及意义。方法:采用免疫组织化学方法分别检测15例鼻中隔偏曲伴变应性鼻炎患者下鼻甲黏膜组织(变应性鼻炎组)、15例鼻息肉组织(鼻息肉组)和15例下鼻甲黏膜组织(对照组)中SP-D及IL-16表达。结果:SP-D、IL-16在3组中均有表达,但在变应性鼻炎组和鼻息肉组的表达均明显高于对照组(均P<0.01);SP-D和IL-16在变应性鼻炎组和鼻息肉组中的表达相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SP-D及IL-16在正常组织和病变组织中均有表达。SP-D可能参与了变应性鼻炎和鼻息肉的炎症反应过程。IL-16是变应性鼻炎和鼻息肉病变中重要的嗜酸粒细胞趋化因子,并增强了嗜酸粒细胞的局部作用,参与了变应性鼻炎和鼻息肉的病变过程。     

白细胞介素-12在变应性鼻炎鼻粘膜中的表达

目的 :探讨白细胞介素 12 (IL 12 )在变应性鼻炎鼻粘膜中的表达。方法 :以卵清蛋白为变应原建立豚鼠变应性鼻炎模型 (模型组 )。取该模型和健康豚鼠鼻粘膜行常规HE染色 (对照组 ) ,并采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测方法 ,对两组动物鼻粘膜组织中IL 12mRNA表达水平进行相对定量比较。结果 :IL 12mR NA在两组鼻粘膜中均有表达 ,模型组的表达水平为 0 .6 6 7± 0 .10 4显著低于正常对照组 0 .84 7± 0 .0 71(P <0 .0 1)。结论 :在变应性鼻炎鼻粘膜组织中IL 12的表达下降 ,提示应用IL 12替代疗法治疗变应性鼻炎的可能性。     

Th2细胞因子和粘附分子在变应性鼻炎和变应性哮喘发病机制中的作用

目的探讨白细胞介素13(interleukin13,IL-13)、白细胞介素5(interleukin-5,IL-5)和血管细胞粘附分子-1(vascular cellular adhesion mo-lecular-1,VCAM-1)在上下呼吸道变应性炎症一致性中的作用。方法采用6-8周雄性SD大鼠,随机分成变应性鼻炎组10只,鼻炎对照组10只,哮喘组10只和哮喘对照组10只,以卵清蛋白致敏激发制成变应性鼻炎和变应性哮喘模型。HE染色和甲苯胺蓝染色分别检测变应性鼻炎模型鼻粘膜和哮喘模型鼻粘膜及肺组织中嗜酸粒细胞、肥大细胞,免疫组化检测上述组织中IL13、IL-5和VCAM-1的表达。结果变应性鼻炎模型鼻粘膜和变应性哮喘模型肺组织中嗜酸粒细胞、肥大细胞数、VCAM-1和IL-13阳性血管数以及IL-13和IL-5阳性炎症细胞数明显多于相应对照组。结论Th2细胞因子和粘附分子的表达是变应性鼻炎和变应性哮喘共同的机制。     

鼻炎冲剂治疗变应性鼻炎的临床观察与实验研究

目的 对常年性变应性鼻炎８９例分鼻炎冲剂治疗组和辛芩冲剂治疗组进行治疗,并比较其疗效,观察鼻炎冲剂对变应性鼻炎的治疗作用。方法 鼻炎冲剂治疗组和辛芩冲剂治疗组有效率分别为８８％和５３％。疗效间有极显著差异（Ｐ〈０．０１）。观察鼻炎冲剂对实验性变应性鼻炎动物模型鼻粘膜的影响。在整个治疗过程中观察记录鼻喷嚏反射,鼻部抓痒症状,并观察各线鼻粘膜组织学改变。结果 鼻炎冲剂治疗组症状得分明显低于其他组。鼻粘     

Eotaxin基因和趋化因子受体3在变应性鼻炎大鼠模型鼻腔黏膜和骨髓中的表达及意义

目的：探讨Eotaxin（嗜酸粒细胞趋化因子）基因和趋化因子受体3（CCR3）在变应性鼻炎（AR）大鼠模型鼻腔黏膜和骨髓中的表达及其意义。方法：采用6～8周龄雄性SD大鼠20只,随机分成实验组（AR组）和对照组,每组10只,以卵清蛋白致敏激发制成AR模型,瑞特染色计数骨髓涂片和外周血涂片中白细胞比例,免疫组织化学技术检测骨髓中CCR3的表达;制备大鼠鼻腔黏膜组织病理标本,苏木精-伊红染色,原位分子杂交方法检测鼻腔黏膜中Eotaxin mRNA的表达,免疫组织化学技术检测Eotaxin在鼻腔黏膜中的表达。结果：AR组骨髓涂片中嗜酸粒细胞比例显著高于对照组（P〈0．01）,AR组外周血涂片中嗜酸粒细胞比例显著高于对照组（P〈0．01）;与对照组比较,AR组大鼠鼻腔黏膜中Eotaxin阳性细胞数与EotaxinmRNA表达明显增强（P〈0．01）,且二者呈正相关性（r=0．804,P〈0．01）。AR组Eotaxin的表达与鼻腔黏膜嗜酸粒细胞的数量呈显著正相关（r=0．795,P〈0．01）。AR组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例显著高于对照组（P〈0．01）,AR组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例和外周血嗜酸粒细胞比例呈显著正相关（r=0．736,P〈0．05）。结论：AR组中Eotaxin和CCR3表达增强,为嗜酸粒细胞从骨髓快速募集到鼻腔黏膜提供了可能。     

芦荟治疗大鼠实验性变应性鼻炎的分子生物学研究

目的 :探讨芦荟 (aloevera)治疗大鼠实验性变应性鼻炎的作用机制。方法 :用卵清蛋白致敏大鼠制成变应性鼻炎动物模型 ,将芦荟经鼻给药 ,观察其行为学差异 ;用组织病理学方法观察鼻粘膜改变 ;用逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)对鼻粘膜和脾组织IL 2 ,IL 4mRNA进行定量检测。结果 :行为学得分 ,阳性对照组[(8.4 2± 1.0 6 )分 ]明显高于实验组 [(2 .0 2± 0 .4 2 )分 ]和正常对照组 (0分 ) ,其差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;实验组鼻粘膜炎性反应明显轻于阳性对照组 ;实验组IL 2mRNA表达水平明显高于阳性对照组 ,其差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;实验组IL 4mRNA表达水平明显低于阳性对照组 ,其差异也有极显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :芦荟通过改变TH1和TH2细胞因子基因表达 ,调节CD4+ 淋巴细胞亚群分化而发挥治疗变应性鼻炎的作用     

变应性鼻炎小鼠鼻黏膜lL-25、lL-33 mRNA表达水平的研究

目的：探讨IL-25 mRNA及IL-33 mRNA在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达及其作用。方法利用Balb/c小鼠建立卵清蛋白致敏的变应性鼻炎小鼠模型,同时使用生理盐水作为对照组,取各组小鼠鼻黏膜组织,使用实时定量PCR法检测两组小鼠鼻黏膜中IL-25 mRNA和IL-33 mRNA的含量。结果IL-25 mRNA和IL-33 mRNA在对照组以及实验组中均有表达,且实验组明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 IL-25和IL-33参与到变应性鼻炎的发病机制中,该结果将有助于提高对变应性鼻炎发病机制的进一步了解,为变应性鼻炎潜在的靶向药物治疗提供了理论依据。     

鼻炎冲剂对变应性鼻炎鼻粘膜的影响

观察鼻炎冲剂对应性鼻炎患者鼻粘膜的影响,证实对ＡＲ的治疗,方法：选用健康豚鼠２９只,随机分成剂组,阳性对照组,阴性对照组和空白对照组,冲剂组采用鼻炎冲剂治疗。结果冲剂组鼻痒,喷嚏计分明显低于其他组。结论鼻炎冲剂可以改善ＡＲ患者鼻粘膜的炎症变状态,从组织学证明其对ＡＲ具有明显的治疗作用。