大劣按蚊和斯氏按蚊核糖体基因内转录第二间隔区序列分析

目的分析对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊核糖体基因内转录第二间隔区（rDNAITS2）的基因特征。方法对大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2基因进行PCR扩增，PCR产物进行限制性片断长度多态性分析（RFLP）和基因测序，并采用相关在线程序及软件进行序列分析。测序结果与GenBank数据库中其它传疟按蚊的ITS2序列进行多序列比对，构建分子系统树。结果大劣按蚊和斯氏按蚊的ITS2基因PCR产物经限制性内切酶Xho I消化，产生不同的酶切图谱；测序结果表明大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2序列分别为715bp和466bp，且两种按蚊ITS2序列的GC含量和简单重复序列等特征存在明显差异，两者碱基差异水平为53．5％；分子进化树显示，大劣按蚊和斯氏按蚊形成单独的支系。结论大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2基因具有不同的基因特征，其遗传多态性可能与产生对约氏疟原虫的易感性不同有关，为进一步研究按蚊与疟原虫之间的相互作用奠定了基础。     

赫坎按蚊种群近缘种核糖体基因内转录第二间隔区序列分析

目的　分析赫坎按蚊种群内4个近缘种核糖体基因内转录第二间隔区(rDNAITS2)特征。　方法　采用特异性ITS2引物对中华按蚊和嗜人按蚊江苏实验株、辽宁省沈阳市和朝鲜开城现场捕获的嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2进行PCR扩增、基因测序和限制性内切酶酶切位点图谱分析。　结果与结论　赫坎按蚊种群近缘种中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2分别为472、452、456和456bp,各基因序列存在明显差异并存在不同的限制性内切酶酶切位点     

利什曼原虫核糖体基因及其间隔区的研究

杜氏利什曼原虫是一种专营寄生生活的单细胞低等真核生物。其生活史包括寄生于媒介昆虫白蛉消化道内的前鞭毛体期和寄生于脊椎动物单核吞噬细胞内的无鞭毛体期。近年来，我国局部地区黑热病患者人数在增加，四川、甘肃、新疆等疫区新发病例由１９８１～１９８４年的４４３例，上升为１９８５～１９８８年１０６９例。且犬的自然感染率（传染率）较前升高７倍（５－２６％，１９９１；３６－８％，１９９７），控制和消灭黑热病的目标正面临严重挑战［１，２］。利什曼原虫的快速鉴定和利什曼病的早期诊断对利什曼病的防治极为重要。以前利什…     

弗氏按蚊和赫氏按蚊rDNA内含转录间隔序列的种鉴别性差异

近似种的分类是个难题。前文报告了弗氏按蚊(A.freeborni)和赫氏按蚊(A.hermsi)的核糖体DNA(rDNA)的第二个内含转录间隔序列(ITS2)限制酶切位点不同,赫氏按蚊缺少Pst I位点。本研究用与5.8S rDNA和28S rDNA高度保守编码序列互补的寡聚核苷酸引物作聚合酶链反应(PCR),扩增了弗氏按蚊4个系(9个个体)、赫氏按蚊2个系(4个个体)及近缘种西方按蚊(A.occidentalis)1个个体的整     

一种简便的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别新技术

目的 建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内不同近缘种按蚊的基因鉴别技术。方法 依据赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊ITS2区段的基因序列特征设计特异性引物，建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊的简便的PCR基因鉴别技术，并采用传统的形态学分类方法和新建立的基因鉴别技术对从辽宁、河南省以及在朝鲜现场捕获的按蚊分别进行了形态学和基因鉴别及比较。结果与结论 新建立的基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊。具有比传统的形态学分类方法准确，比已有的PCR-RFLP蚊种基因鉴别技术更简便、价廉和省时的特点。适用于不同的复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测。     

山丘疫区杜氏利什曼原虫核糖体基因内转录间隔区的克隆及序列分析

目的　构建我国山丘疫区杜氏利什曼原虫分离株前鞭体核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)片段克隆,并进行测序及同源性分析。　方法　提取杜氏利什曼原虫前鞭毛体DNA进行PCR扩增,将扩增出rDNAITS片段克隆入pMD18 Tvector上,双脱氧链末端终止法测序。　结果　扩增出约 1000bp的rDNAITS片段。测序结果表明山丘疫区的2株利什曼原虫L.d.SC10和L.d.6分别为1027bp和1028bp。序列分析结果表明,L.d.SC10和L.d .6有一定差异。　结论　获得了我国山丘疫区杜氏利什曼原虫分离株L.d.SC10和L.d.6的前鞭体rDNAITS序列。     

微小按蚊种团mtDNA-COII基因变异的研究

目的　研究我国微小按蚊种团成员 (微小按蚊A/C、乌头按蚊、瓦容按蚊及杰普尔按蚊 )的线粒体DNA(mtDNA)COII基因的分子变异和种系发生关系。　方法　单蚊提取DNA ;mtDNA COII基因的扩增和测序 ;用最大似然法DNAML构建种系发生树。　结果与结论　我国存在微小按蚊A、C两个亲缘种 ,两者COII基因 1 6个位点存在碱基置换 ,突变频率为 2 .3 % ,变异小于其它种团成员     

基于核糖体 DNA 第二内转录间隔区基因的 9 种蚊虫分子鉴定

目的 分析常见 9 种蚊虫核糖体 DNA 第二内转录间隔区( rDNA-ITS2 )基因序列特征,为蚊虫种类分 子鉴定方法探讨提供依据。 方法 在山东省济宁市采集淡色库蚊、三带喙库蚊、二带喙库蚊、白纹伊蚊、刺扰伊蚊、中 华按蚊、骚扰阿蚊、常型曼蚊和黄色柯蚊成蚊,形态学种类鉴定后,提取上述 9 种蚊虫 DNA,PCR 扩增 rDNA-ITS2 基 因并测序;在 GenBank 中进行同源性比对,采用 Bioedit 7. 0 软件及 DNAMAN 软件对测序结果进行比对分析,通过 DNASTAR、ClustalX 1. 81 和 Mega6 软件分析列特征并构建系统进化树探讨系统发生关系。 结果 9 种蚊虫的 rDNA- ITS2 长度在 343 bp 与 577 bp 之间,共有 59 个保守位点、449 个变异位点、235 个简约信息位点和 191 个单态位点,9 种蚊虫种间序列同源性为 28. 21% ~ 53. 76%;所有蚊虫的 rDNA-ITS2 基因分子鉴定与形态学鉴定吻合率 100%,库 蚊属的淡色库蚊、三带喙库蚊和二带喙库蚊聚成一类,伊纹属的白纹伊蚊和刺扰伊蚊聚成一类,不同种蚊虫为独立 分支。 结论 核糖体 DNA 第二内转录间隔( rDNA-ITS2 )基因可用于蚊虫属和种的鉴定。     

应用rRNA基因探针鉴别冈比亚按蚊复合体中的蚊种

作者应用由冈比亚按蚊的核糖体DNA(rDNA)顺反子克隆化的0.59Kb DNA片段作探针,鉴别冈比亚按蚊复合体中形态相同的3个亲缘种冈比亚按蚊、阿拉伯按蚊和美拉按蚊(An.melas)。从冈比亚按蚊G-3株的成蚊提取DNA,在琼脂糖凝胶板上电泳洗脱提取13～20Kb     

rDNA-ITS2区PCR区分溪流按蚊近缘种

溪流按蚊(Anopheles fluviatilis)是印度的东部和北部、尼泊尔、中国、伊朗南部及泰国等国家山林地区疟疾的主要传播媒介。根据多线染色体的带型,溪流按蚊复合体已记述3种,分别为S、T和U。本研究旨在利用PCR扩增种特异性片段以区分该复合体的两近缘种。     

一个含重复序列的区域与杜氏利什曼原虫婴儿亚种核糖体RNA基因的转录终止相关

多数真核生物的核糖体RNA(rRNA)基因的构成相似,即多个头-尾重复序列由非转录间隔区(NTS)将前体编码区域隔开而组成。已发现,基因的间隔区或NTS中的重复序列与前体核糖体RNA(pre-rRNA)转录的调节有关。 作者以利什曼原虫总DNA为探针,对     

库蠓核糖体DNA内转录间隔区1序列的测定与分析

目的 测定核糖体DNA内转录间隔区1(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer 1, rDNA-ITS1)序列进行库蠓种类鉴别与系统发育分析,以探究rDNA-ITS1序列在库蠓分子鉴定和系统发育研究方面的适用性。方法 采用DNA扩增、纯化、克隆及测序的方法获得荒川库蠓Culicoides arakawai、凹缘库蠓C. holcus、连斑库蠓C. jacobsoni、印度库蠓C. indianus、霍飞库蠓C. huffi和肩宏库蠓C. humeralis等6种库蠓的rDNA-ITS1序列,基于Kimura 2-parameter公式计算种内和种间遗传距离,应用MEGA 6.06软件分析DNA序列碱基组成并以环纹埃蠓Allohelea annulata为外群构建系统发育树(邻接法和最大似然法)。结果 上述6种库蠓的rDNA-ITS1序列经过Clustal W比对及人工校对和编辑后的长度为352 bp,其中T、C、A、G 4种碱基的含量分别为36.8%、13.0%、30.0%和20.1%,A+T的含量(66.8%)高于C+G的含量(33.1%);K-2p遗传距离在种内和种间具显著差异(t=32.430,P<0.05);系统发育树中不同种类库蠓各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支,其与形态学鉴定结果一致。结论 本研究证实了rDNA-ITS1序列可用于进行库蠓及其近似种的分子鉴定和系统发育分析。     

华支睾吸虫病患者粪便虫卵核糖体DNA内转录间隔区序列分析

目的 通过PCR方法扩增华支睾吸虫病患者粪便虫卵核糖体DNA （ribosomal DNA,rDNA）内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列进行分析,探讨其用于华支睾吸虫感染检测的价值. 方法 提取2例华支睾吸虫患者粪便中的虫卵DNA作模板,以rDNA ITS基因片段为目的片段进行PCR扩增,对扩增片段进行测序分析. 结果 从2例患者粪便虫卵样本中均扩增出1 123 bp的条带,经序列比对确定患者粪便中的虫卵为华支睾吸虫卵.测序分析发现本研究的两个样本与中国黑龙江分离株（KF740425）相似性为100％. 结论 本研究从2例华支睾吸虫病患者粪便虫卵中成功扩增出rDNA ITS基因,为从分子生物学角度检测华支睾吸虫病提供了资料.     

应用核糖体及其内转录间隔区基因同源性分析鉴定致病性真菌

近年来随着广谱抗生素、免疫抑制剂的广泛应用,以及肿瘤、器官移植等免疫低下人群的不断增多,念珠菌、隐球菌等深部真菌感染的发生率呈现明显上升趋势。一些新的致病性真菌或真菌的新特性也在不断地被认识,而对致病性真菌的鉴定则是其认识的基础与关键[1] 。我们应用真菌核糖体保守区及其内转录第2间隔区基因(ITS2 )序列同源性分析,为致病性真菌的分子鉴定提供一个客观依据。材料与方法一、菌株来源及其鉴定临床菌株(念珠菌、新生隐球菌、曲霉、耐热红色毛癣菌)均来源于我院真菌室保藏菌株;标准菌株(念珠菌、新生隐球菌、曲霉)均系美国菌…     

四斑按蚊A种特异性DNA探针的序列

四斑按蚊(An.quadrimaculatus)复合体至少有A,B,C1,C2和D五个种。曾报告克隆探针Arp2能与A种强杂交,与B种弱杂交。本研究对Arp2克隆作进一步鉴定。Arp2是一含12kb插入片段的噬菌体克隆。酶切分析发现,Arp2每隔数百个碱基就有一个HinfI,HpaII或NsiI位点,提示Arp2由重复子组成,与Arp2同源的蚊基因组     

大劣按蚊前酚氧化酶基因部分序列的克隆与序列分析

目的 克隆大劣按蚊(Anopheles dirus)前酚氧化酶(Prophenoloxidase，PPO)基因部分序列。方法 根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物，以大劣按蚊总RNA为模板进行RT—PCR扩增，目的片段经TA克隆后测定其核酸序列，然后进行序列查询与比对。结果 大劣按蚊PPO基因(AdPPO)部分序列长598bp，编码199个氨基酸；AdPPO与冈比亚按蚊PPO5基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达84．23％和88．89％。结论 成功克隆出AdPPO部分序列，其与冈比亚按蚊PPO基因序列具有很高同源性。     

白踝按蚊种团、巴拉巴按蚊复合体研究的现状

白踝按蚊(Anopheles Zeucosphycus Donitz,1901)最早采集于苏门答腊,以后东南亚各国和地区陆续发现了形态相似的蚊虫都沿用白踝按蚊的名称。Christophers综合前人的资料将该蚊种的形态学、生物学和地理分布写入《不列颠印度按蚊相(Vol.Ⅳ)》一书中,并且提到由于地理分布不同这种按蚊的形态上存在一些变异。近年来随着疟疾防治科研的不断发展,有关白踝按蚊在疟疾流行病学上重要性的知识日益增多,证明它是孳生于东南亚很多地区的丛林山区的常见按蚊,具有嗜吸人血、强野栖性、对人体疟原虫极敏感的特点,是该类地形区重要的传疟媒     

大劣按蚊前酚氧化酶基因部分序列的克隆与序列分析

目的　克隆大劣按蚊 (Anophelesdirus)前酚氧化酶 (Prophenoloxidase,PPO)基因部分序列。　方法　根据已报道的多种昆虫 PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总 RNA为模板进行 RT- PCR扩增 ,目的片段经 TA克隆后测定其核酸序列 ,然后进行序列查询与比对。　结果　大劣按蚊 PPO基因 (Ad PPO)部分序列长 5 98bp,编码 199个氨基酸 ;Ad PPO与冈比亚按蚊 PPO5基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达 84 .2 3%和 88.89%。　结论　成功克隆出Ad PPO部分序列 ,其与冈比亚按蚊 PPO基因序列具有很高同源性。