二氧化硫对大鼠肝和肺细胞色素P4502B1和2E1 mRNA表达及活性的影响

目的探讨二氧化硫(SO2)对肝、肺微粒体细胞色素P450两种亚型CYP2B1和CYP2E1mRNA表达及活性的影响。方法采用SO2动式染毒技术使雄性Wistar大鼠染毒7天,每天6h,SO2的染毒剂量分别为14、28和56mg/m3。采用分光光度法测定大鼠肝、肺微粒体CYP2E1活性,采用荧光分光光度法测定肝、肺微粒体CYP2B1活性,采用RT-PCR方法测定各组大鼠肝、肺组织中CYP2B1和CYP2E1mRNA表达水平。结果在肝中,较高剂量的SO2(28和56mg/m3)可使CYP2B1活性及mRNA水平降低,肝微粒体CYP2E1活性及mRNA在各剂量组均未发生显著改变。肺组织中CYP2B1活性在56mg/m3剂量组显著降低,但其mRNA水平在28及56mg/m3剂量组均显著降低;肺微粒体CYP2E1活性及mRNA水平在28及56mg/m3SO2处理组均降低显著。结论SO2可降低大鼠肝中CYP2B1和2E1及肺中CYP2B1和CYP2E1的活性及mRNA水平。     

饮水型砷暴露地区人群血液CYP1A1mRNA表达对砷中毒患病情况的影响

目的:通过分析饮水型砷暴露人群血液中CYP1A1mRNA的表达情况,探讨CYP1A1mRNA的表达与高砷暴露地区砷中毒患病情况之间的关系。方法:选取内蒙古自治区巴彦淖尔市的砷暴露地区作为调查点,将在此居住10年以上的居民作为调查对象。按饮水砷浓度将233名居民分为4组:对照组(饮水砷浓度10.0μg/L),低剂量组(饮水砷浓度10.0～99.9μg/L),中剂量组(饮水砷浓度100～199.9μg/L),高剂量组(饮水砷浓度≥200.0μg/L)。采用流行病学调查结合实时荧光定量PCR检测技术,测定血液CYP1A1 mRNA的表达水平,分析基因表达与砷中毒患病情况之间的关系。结果:(1)砷中毒的患病率随水砷浓度升高逐渐升高,与对照组相比,各剂量组人群砷中毒患病存在上升趋势,差异有统计学意义(χ~2=16.97,P0.05),经线性趋势卡方检验发现随着水砷浓度的升高,砷中毒的病情逐渐加重(χ~2=2.371,P0.05);(2)长期砷暴露会导致CYP1A1mRNA的表达水平升高,高浓度组CYP1A1mRNA表达水平升高具有统计学意义(P0.05);(3)随着砷中毒的病情加重,各组之间的CYP1A1mRNA的表达水平没有显著性差异(P0.05)。结论:长期慢性砷暴露会导致CYP1A1mRNA的表达水平升高,这可能是影响地方性砷中毒患病的重要因素,但CYP1A1mRNA的表达与砷中毒病情严重程度无关。     

苯并[a]芘诱导内皮细胞细胞色素P4501A1表达的研究

目的：探讨苯并[a]芘(BaP)诱导猪主动脉内皮细胞细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达及活性的影响。方法：离体培养猪主动脉内皮细胞，不同浓度BaP(0、0．5、1．0、5．0、10．0μmol／L)染毒24h，分别以Western-blot法和免疫组化方法检测不同浓度BaP诱导内皮细胞合成CYP1A1的影响，同时还探讨了乙氧基异吩噁唑-o-去乙氧基酶(EROD)活力的变化规律。结果：Western-blot法未能检测出对照组CYP1A1的表达，而各染毒组均检出了CYP1A1的表达；免疫组化结果显示染毒组仅在部分内皮细胞呈阳性反应；EROD活力诱导高峰的BaP浓度为0．5～1.0μmol／L。结论：BaP可诱导部分猪主动脉内皮细胞合成CYP1A1；EROD活力诱导高峰的BaP浓度为0．5～1．0μmol／L。     

氯乙烯染毒对大鼠肝细胞色素P4502E1活力和mRNA表达的影响

目的　研究氯乙烯染毒大鼠肝微粒细胞色素P4502E1(CYP2E1)活力和mRNA表达随染毒时间和剂量的变化, 探讨两者可能的关系。方法　大鼠染毒12 周, 低、中、高剂量组的染毒剂量分别为5,10, 20 mg/kg, 分别在第3, 6, 9 和12 周处死动物, 代谢酶CYP2E1 活力测定采用分光光度法, 其mRNA表达用一步法RT PCR测定。结果　低剂量组CYP2E1活力随染毒时间增加而增强(P<0 05);中、高剂量组CYP2E1活力出现先升高后降低的趋势。染毒结束时,中、高剂量组大鼠肝细胞mRNA表达明显高于对照组(P<0 01)和低剂量组(P<0 05)。结论　低剂量组CYP2E1 的活力随染毒时间增加而增强, 而CYP2E1 mRNA的相对表达在本次实验中未出现时间趋势, 但在染毒结束时有明显的剂量-效应关系, 两者变化水平不一致。     

三氯乙烯对肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达水平的影响

目的研究三氯乙烯（TCE）对人肝细胞凋亡基因（Caspase-3、Caspase-8、BAX、Bcl-2）和肝代谢酶基因(CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4) mRNA表达水平的影响。方法用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养肝细胞,DMSO作为溶剂对照,采用不同浓度TCE（0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mmol/L）染毒L02肝细胞24 h,另外用TCE 1.0 mmol/L染毒细胞不同时间（2 h, 4h, 8h, 16h, 32h）,采用Real-time 荧光定量PCR技术检测肝细胞中凋亡基因和CYP基因mRNA表达水平。结果不同剂量TCE染毒后,凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、BAX表达水平比对照组升高21%~145%,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）, Bcl-2表达水平下降20%~35%。TCE染毒引起CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的 mRNA表达明显上升,比对照组升高30%~550%,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）。用TCE 1.0 mmol/L染毒2 h~32 h,同样发现凋亡基因和肝代谢酶基因表达增加,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05,或P<0.01）。结论TCE可引起肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达变化,凋亡基因和肝代谢酶基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。     

CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.     

2,3,7,8-四氯二苯并二噁(口英)对大鼠肝脏芳烃受体和细胞色素P4501A1 mRNA的诱导

目的　研究 2 ,3,7,8 四氯二苯并二口恶 口英 (TCDD)对于SD大鼠肝脏CYP1A1,芳烃受体(AHR)mRNA的诱导 ,探讨其毒作用机制。方法　 30只雌性SD大鼠随机分为对照组和 5个染毒组 ,每组 5只 ,染毒剂量为 0 .0 1、0 .10、1.0 0、10 .0 0、5 0 .0 0 μgTCDD/kg体重 ,用腹腔注射的方式一次染毒 ,2 4h后 ,用RT PCR方法测定肝脏中CYP1A1、AHRmRNA的诱导情况。结果　除 0 .0 1μgTCDD/kg体重外 ,各染毒组AHR和CYP1A1mRNA表达均有所增加 ,其中 ,AHRmRNA在 5 0 μgTCDD/kg体重组明显增加 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,CYP1A1mRNA在除 0 .0 1μgTCDD/kg体重组外的各染毒组明显增加 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,且染毒剂量与AHR、CYP1A1mRNA诱导之间存在剂量 -效应关系。结论　染毒后 2 4h ,TCDD能诱导SD大鼠肝脏AHR、CYP1A1基因表达 ,CYP1A1基因比AHR基因更容易被诱导。     

微囊藻毒素-LR对活性氧产生及细胞色素P450各亚型表达的影响

[目的]探讨低剂量微囊藻毒素-LR（MCLR）诱导细胞内活性氧（ROS）产生的潜在来源。[方法]采用转染有机阴离子转运多肽OATP1B3的人胚肾细胞株HEK293-OATPIB3,设3个浓度的MCLR处理组（10、20、50nmol／L）和未处理对照组（0．1％二甲基亚砜）。染毒4、24h后,测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,用荧光探针法检测细胞内ROS水平,采用实时荧光定量聚合酯链反应检测细胞色素P4501A1（CYP1A1）、1A2、2E1 mRNA的表达水平。[结果]低浓度（10-50nmol／L）的MCLR作用HEK293-OATP1B3细胞4h未产生明显细胞毒性;24h后,LDH漏出率随着处理浓度的增加而增加。50nmol／LMCLR处理细胞4h后引起ROS水平明显升高（P〈0．01）。同时,MCLR还上调了CYP2E1的mRNA表达水平（P〈0．01）;但未影响CYP1A1 mRNA的表达;对照组和MCLR处理组的CYP1A2 mRNA表达水平均非常低。[结论]低剂量MCLR可诱导细胞内ROS产生和上调CYP2E1 mRNA表达,提示CYP2E1可能是MCLR诱导ROS产生的一个潜在来源。     

烟焦油对小鼠肺多环芳烃受体和细胞色素P4501 A1基因mRNA水平的影响

目的研究烟焦油对小鼠肺多环芳烃化合物受体(AHR)、细胞色素P4501A1(CYP1A1)基因表达的影响.方法以5.29、10.58、15.87 mg/kg的烟焦油腹腔注射分别染毒小鼠,用提纯RNA试剂盒提取小鼠肺脏的RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AHR和CYP1A1基因的表达,以β-actin作为内对照,分析不同处理剂量和不同处理时间后AHR和CYP1A1基因表达情况.结果以5.29 mg/kg烟焦油染毒小鼠72 h,AHR基因表达量的相对值为0.554±0.023,与吐温-80组(0.484±0.045)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).以10.58、15.87 mg/kg的烟焦油染毒小鼠48和72 h,AHR基因表达量的相对值分别为0.555±0.014、0.606±0.051和0.566±0.014、0.684±0.069,分别与吐温-80组(0.486±0.060、0.484±0.045)比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).CYP1A1基因表达量的相对值分别为1.535±0.021、1.643±0.046和1.624±0.056、1.739±0.038,分别与吐温-80组(1.436±0.016、1.404±0.036)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论烟焦油在一定的浓度和时间内可使AHR和CYP1A1基因的表达增加,烟焦油对AHR基因表达的调控早于CYP1A1基因.     

氯化消毒饮用水有机提取物对大鼠肝脏芳香烃受体和相关基因表达的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对大鼠肝脏芳香烃受体(aryl hydrcarbon receptor,AhR)和相关基因表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将40只清洁级SD大鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组,每组10只,雌雄各半。采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒12周。采用实时荧光定量PCR法检测肝脏中Ah R、热休克蛋白(HSP90)、芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)和细胞色素1A2(CYP1A2)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测肝脏中AhR、HSP90、ARNT与CYP1A2蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组大鼠肝脏中HSP90的mRNA和蛋白表达水平均增高,20、80 L/kg组大鼠肝脏中AhR、ARNT与CYP1A2 mRNA和蛋白的表达水平均增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,氯化消毒饮用水有机提取物暴露可活化AhR通路。     

二氧化硫吸入致大鼠肺组织基因表达谱改变

目的 研究短期吸入二氧化硫（SO2）毒理作用的分子机制。方法 采用Affymetrix基因芯片（RAE230A）技术，研究SO2短期（56mg／m^3，6h／d，共7d）吸入后大鼠肺组织基因表达谱的改变。结果 与其相应的对照组相比，SO2短期吸入后表达上调的基因有31个，其中包括18个已知基因和13个新基因，而表达下调的基因有30个，其中包括19个已知基因和儿个新基因。结论 （1）短期吸入SO2的大鼠肺基因表达谱与其对照组相比，氧化磷酸化相关的一些基因发生了变化，表明高剂量短期吸入SO2可能导致线粒体功能损伤；（2）与甲状腺激素有关的几个基因表达也发生了变化，表明SO2可能会造成甲状腺激素在体内生理过程的改变；（3）SO2可引起多种基因的表达发生改变，这意味着多种基因的表达是易变且不稳定的，在肺组织中可能存在着SO2诱发的表达不稳定型基因组。     

维生素Ｅ对1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿保护作用的研究

目的探讨维生素E (vitamin E,Vit E)对1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒性脑水肿的保护作用。方法将雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、Vit E对照组、1,2-DCE单纯染毒组及Vit E低、中和高剂量干预组。连续给予药物灌胃4 d后,采取静式吸入方式染毒3. 5 h/d,持续3 d。结果与空白对照组相比,单纯染毒组小鼠脑组织呈现明显脑水肿病理改变,脑含水量、脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白和mRNA表达水平显著升高,脑组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase assay kit,CAT)活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin 5蛋白表达水平显著降低。与单纯染毒组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平显著降低,GSH含量、Occludin蛋白及mRNA水平显著升高;中和高剂量干预组的小鼠脑组织中SOD和CAT活性及Claudin 5蛋白表达水平亦显著升高(P0. 05)。结论单纯1,2-DCE染毒可引起小鼠脑水肿,诱导脑组织中CYP2E1的表达,诱发脑组织氧化损伤,破坏紧密连接蛋白,并抑制Occludin和Claudin 5的表达;而Vit E干预可显著抑制CYP2E1的表达,缓解CYP2E1介导的氧化损伤,有效预防1,2-DCE引起的中毒性脑水肿。     

基因多态性与血清p53蛋白过表达的关系

目的　探讨细胞色素P4 5 0 1A1(cytochromeP4 5 0 1A1,CYP1A1)和谷胱甘肽转硫酶M1(GlutathioneS -trans ferasesM1,GSTM1)基因多态性与血清p5 3蛋白过表达之间的关系。方法　以 12 7名血清p5 3蛋白过表达阳性者为病例组 ,以 12 7名血清p5 3蛋白阴性者为对照组 ,分别采用多重差异PCR(multi-differentialPolymerasechainreaction ,MD -PCR)检测外周血淋巴细胞GSTM1的缺失和采用等位特异PCR(allele -specificPoly -merasechainreaction ,AS -PCR)检测外周血淋巴细胞CYP1A1基因的等位变异 ,采用 χ2 检验来比较GSTM1和CYP1A1的多态性的差异。结果　单独分析CYP1A1和GSTM1基因多态性在 2组中的分布没有显著性差异 (P >0 0 5 ) ,但GSTM1基因缺失型即GSTM1(- )和CYP1A1基因纯合突变型即CYP1A1Val/Val基因型联合增加了血清p5 3蛋白过表达的危险性 (P <0 0 5 ) ,OR及 95 %CI为 3 86 (0 95～ 15 5 9)。结论　CYP1A1和GSTM1的等位变异联合增加了血清p5 3蛋白过表达的危险性。     

煤烟型氟中毒模拟实验及二氧化硫对氟中毒的影响

模拟煤烟型氟中毒地区农民燃煤方式,设高氟高硫组(氟化物与SO_2浓度分别为0.631和40.97 mg/m~3)、高氟低硫组(氟化物与SO_2浓度分别为0.583和5.086 mg/m~3),以及无燃煤污染的对照组(氟化物与SO_2浓度分别为0.008和0.191 mg/m~3), SD大鼠自然吸入中毒5个月。实验结果表明,中毒组大鼠均发生了氟斑牙,对照组牙齿无变化;实验组大鼠血清氟、尿氟、骨氟与牙齿氟均非常显著高于对照组。高氟高硫组大鼠的氟斑牙发生率高于高氟低硫组,牙齿病变表现严重,显示SO_2对大鼠的氟斑牙病变有加强作用。     

CYP2E1在大蒜油拮抗正己烷神经损伤中的作用

目的 研究CYP2E1在大蒜油(garlic oil,GO)阻止正己烷(n-hexane)致大鼠周围神经损伤的作用及其机制.方法 雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常对照组、GO对照组、正己烷模型组、GO低剂量加正己烷组和高剂量加正己烷组(n=10).模型组及GO低、高剂量组大鼠分别给予2000 mg/kg正己烷灌胃;GO低、高剂量组大鼠在正己烷灌胃前1h分别给予40、80 mg/kg GO灌胃,GO对照组给予80 mg/kg,每周6次,持续10周.每2周测步态评分,监测大鼠周围神经损伤情况.于第10周末,断头处死大鼠,检测肝组织中CYP2E1表达及活力的改变,以及血清中2,5-己二酮(2,5-HD)含量的变化.结果 与正常对照组相比,GO对照组大鼠肝脏中CYP2E1含量及活力分别下降83.1％和48.3％,且差异均有统计学意义(P＜0.01);与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中CYP2E1含量及活力分别升高122.5％和72.2％,且差异均有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比,GO低、高剂量组大鼠肝脏中CYP2E1含量分别降低32.9％和39.1％,且CYP2E1活力分别降低27.4％和44.5％,差异均有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比,GO低、高剂量组大鼠血清中2,5-HD含量分别下降47.7％和78.7％,且差异均有统计学意义(P＜0.01).各组步态评分显示,模型组及GO低、高剂量组均明显高于对照组,但GO低、高剂量组低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GO能够有效拮抗正己烷的外周神经损伤,其机制可能与肝脏中CYP2E1含量及活力降低,使正己烷代谢为2,5-HD减少有关.     

气态甲醛所致大鼠肺部VR1-mRNA 表达的初步研究

目的 从分子水平研究中等浓度气态甲醛环境暴露对呼吸系统中类香草素受体（vanilloid receptor subtype1,VR1）基因表达的影响。方法用WH-2型环境气候舱释放的甲醛和净空气,分别通入2只各放有5只幼年大鼠的染毒缸中连续灌流72h后,迅速取肺,用RT—PCR方法检测大鼠在中等浓度甲醛环境暴露下肺VR1和管家基因G3PD表达水平。结果中等浓度甲醛3．0mg／m^3灌流比清洁空气灌流导致幼年大鼠肺VR1-mRNA表达增加。结论中等浓度甲醛灌流导致幼年大鼠肺部VR1-mRNA表达量增加。