盐析纯化包虫囊液抗原及其应用价值的评价

本文评价了半饱和硫酸铵盐析纯化包虫囊液抗原方法及其在诊断包虫病中的应用价值。虽盐析方法简单,但其提纯的包虫囊液经免疫印迹证实,去除了不少非包虫抗原性蛋白组分(由粗囊液20条带减为14条带)及保留了较多的抗原信息(剩余蛋白带大多与包虫病人血清呈阳性反应)。用两剂量抗原诊断(ELISA)40例包虫病人,盐析纯囊液比粗囊液无论是阳性符合率(1μg/ml时:85％对70％;0.3μg/ml时:75％对55％)或免疫比值(1μg/ml时:12.33±8.58对5.01±3.59;0.3μg/ml时:9.34±8.15对4.48±5.79)都有所提高。盐析纯囊液用于IHA中,也使52例正常人与46例包虫病人的凝集滴度拉开距离,阳性、阴性模式界线分明。     

夹心ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原的评价

本文评价了夹心ABC-ELISA对包虫病人体内循环抗原(HcAg)的检测方法。 用夹心法测HcAg,首先要制备一针对HcAg较强而特异的免疫抗体,其关键又在于用什么质量的抗原免疫动物。我们用半饱和硫酸铵盐析纯化羊源细粒棘球蚴囊液(EgCF),它去除了包括白蛋白在内的大部分宿主成分。用该抗原免疫家兔,产生兔抗细粒棘球蚴囊液抗体(RA-EgCFG)。以此种抗体对各种来源的     

以包虫液和头节作为抗原的间接血凝试验诊断人体包虫病

为了选出敏感性和特异性都很高的抗原用以诊断人体包虫病。作者以有生育力的包虫液和头节不同组分制备的抗原进行了比较试验。试验的抗原有下列5种(不同组分):从绵羊包虫囊中取出头节,用生理盐水稀释,经过冻融,超声粉碎,透析,离心,取上清液,加硫酸铵到0.8M浓度盐析,再离心,取沉淀物透析,即为“0.8M头节抗原”;而对其上清液,则再加硫酸铵到1.6M盐析,离心后的沉淀物即为“1.6M头节抗原”;从羊肝内的包虫囊中取出包虫液,经超滤浓缩500倍,然后加硫酸铵到0.8M盐析,离心,透析,其沉淀物即为“0.8M包虫液抗原”;取包虫液,加硫酸铵到     

SPA-ELISA评价三种不同纯度牛源细粒棘球蚴囊液抗原在包虫病免疫诊断中的价值

本文采用SPA-ELISA法评价了三种不同纯度牛源细粒棘球蚴囊液抗原在包虫病免疫诊断中的价值,用三种抗原检测了41例包虫病患者血清中特异IgG抗体的水平,它们的阳性率分别为:牛源细粒棘球蚴液粗抗原86.0％,半饱和硫酸铵法纯化抗原91.4％,氯化镁—磷钨酸法纯化抗原92.3％,两种纯化抗原与粗抗原的阳性检出率相比,经统计学处理具有显著差异,认为西北地区牦牛体内寄生的细粒棘球蚴囊液抗原不乏抗原活性;氯化镁—磷钨酸法和半饱和硫酸铵法是两种简便易行,纯化效果理想的抗原纯化方法,宜于在基层推广应用。     

包虫和猪囊虫抗原免疫化学性质及酶联免疫印斑技术临床应用研究

用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶联免疫印斑技术分别对人源细粒棘球蚴囊液、棘球蚴砂、猪囊尾蚴囊液抗原组分进行分析研究,并对两种病血清学交叉反应进行了试验。结果显示包虫囊液抗原有29条蛋白区带,有两条糖蛋白带。猪囊虫囊液抗原显示36条蛋白带谱,两条糖蛋白带。棘球蚴砂显示23条蛋白带谱。包虫病人血清与印有包虫囊液抗原的硝酸纤维膜反应显示23条反应带,其中特异带为6条。包虫病人、猪囊虫病人血清与此膜反应显示4条共同反应带。包虫病人血清与棘球蚴砂抗原膜反应显示4条主要特异反应带,包虫病人血清、猪囊虫病人血清与此膜反应显示1条共同反应带。猪囊虫病人血清与猪囊虫囊液抗原膜反应显示22条反应带,其中有5条特异反应带;包虫病人和囊虫病人血清与此膜反应显示3条共同反应带。     

蚯蚓与日本血吸虫交叉反应抗原的初步探讨

为探讨饱和硫酸铵梯度盐析法提取蚯蚓与日本血吸虫交叉反应抗原的效果,依次采用30％、40％、50％、60％、70％饱和硫酸铵溶液梯度盐析沉淀蚯蚓可溶性蛋白,并将其沉淀以及70％饱和硫酸铵溶液盐析后的上清液分别以SDS-PAGE和Western-blot检测分析该蛋白组分与日本血吸虫病患者血清的免疫反应性,取得了比较理想的结果,现予以报道。     

包虫病免疫诊断学研究进展

本文综述了近年来包虫病免疫诊断学研究概况。包虫抗原的质量直接影响了免疫诊断的效果,国外近年来在这方面的研究已深入到对包虫抗原中大分子多肽的免疫原性及与相近蠕虫的交叉反应领域,由此证实了包虫不同部位(囊液、在头蚴、胚层)的蛋白免疫原性不同,并发现不同地区、不同宿主中包虫囊液的免疫原性亦不同。近年来受推崇的包虫抗原提纯方法是 pH5. 0等电点沉淀、0. 8M 硫酸铵盐析及免疫亲和层析等。对包虫病人的免疫球蛋白目前着重于研究 IgM(据认为可反映抗原正在刺激宿主之指征)及 IgE(可能反映抗虫免疫)。在肯尼亚,发现了大量缺少特异性抗体的包虫病病人,由此提出了抗原刺激的量太少或太多均不能产生易检出的抗体,从而把循环抗原的检测推向新阶段(解离法和 ELISA 的结合)。包虫单克隆抗体的研究尽管起步较晚,但在包虫病免疫诊断中发挥了作用,尤其是抗细粒棘球绦虫六钩蚴的单抗的筛出,使用血清流行瘸学调查传染源和环境污染成为可能。     

炭疽杆菌水肿因子的纯化及其性质

将炭疽杆菌Sterne株芽孢液注入小鼠腹部皮下引起水肿,收集水肿渗出液,经硫酸铵分段盐析、离子交换纤维素层析、葡聚糖凝胶-G6200层析,可将水肿因子纯化131～178倍;经硫酸铵分段盐析、离子交换纤维素层析、高效液相层析,可纯化269倍。其中纯化178倍及269倍的EF在聚丙烯酰胺凝胶电泳时只见1条蛋白带。EF在pH7.0,-30℃或4℃保存较稳定,在37℃及偏酸、偏碱条件下均易失活;EF的生物学活性对炭疽保护性抗原有依赖性。     

鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白的分离纯化与质谱分析

目的建立一种从鼠疫耶尔森氏菌疫苗株EV76中分离纯化纤维蛋白酶原激活因子（Pla）的方法。方法采用超声破碎与硫酸铵盐析结合的方法初步提取Pla,经CHT陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化,所获取的Pla进行质谱分析及Western blot实验。结果菌悬液超声破碎后上清以0~10%饱和硫酸铵沉淀,获得含有相对分子质量（Mr）约为31 000、35 000、37 000的3条Pla蛋白带,约占蛋白总量33%;CHT柱层析后,3条带约占蛋白总量80%。经质谱分析,在Mr约为31 000、35 000的条带中含有Pla,Pla单克隆抗体能特异性地识别该蛋白。结论采用超声破碎结合硫酸铵盐析的方法可从鼠疫菌中提取Pla,CHT柱层析可达到基本纯化,获得的样品经质谱分析和Western blot实验证实为Pla蛋白。     

采用分子筛层析法分离纯化细粒棘球蚴囊液粗抗原

目的分离纯化细粒棘球蚴囊液抗原,去除其中的非特异性反应蛋白,探索优化囊液抗原制备方法。方法采用超滤法浓缩羊肝细粒棘球蚴囊液制备成粗抗原,并采用免疫印迹实验对囊液抗原进行分析,发现非特异性反应的主要蛋白条带。随后采用Superdex凝胶柱通过分子筛层析法对囊液抗原进行纯化。用44份细粒棘球蚴病患者、17份健康人和10份囊尾蚴患者血清进行酶联免疫实验,评估纯化后囊液抗原的检测能力。结果免疫印迹实验发现,非特异性反应的主要条带的相对分子质量(M_r)约为55 000,纯化后去除了该非特异性反应蛋白。纯化后的囊液抗原ELISA检测灵敏度为93.2%(41/44),特异性为94.1%(16/17),约登指数为0.87,与囊尾蚴病交叉反应性为30%(3/10)。未纯化前的灵敏度为90.9%(40/44),特异性为88.2%(15/17),约登指数0.79,与囊尾蚴病交叉反应性为60%(6/10)。纯化前后ELISA检测的灵敏度存在显著性差异。结论本研究采用分子筛层析法对羊源细粒棘球蚴的囊液抗原进行纯化,去除了引起非特异性反应的主要蛋白(M_r 55 000),为后续进行囊液抗原标准化、提高检测能力提供了依据。     

猪肉绦虫、细粒棘球绦虫及微小膜壳绦虫的种特异性和交叉反应性组分在诊断中的意义

作者用猪囊尾蚴的粗制抗原、10％硫酸铵纯化抗原(TSASP)及糖蛋白纯化抗原三种抗原、棘球蚴粗制抗原及微小膜壳绦虫粗制抗原对秘鲁的22例经组织病理学确诊的猪囊尾蚴病人、59例粪检阳性微小膜壳绦虫病人及18例通过活检或手术证实的肝、肺棘球蚴病人用间接ELISA和酶联免疫印渍试验(EITB)进行了比较研究。ELISA显示三种虫的粗制抗原间均有较高的交叉反应,交     

在细粒棘球蚴感染小鼠中抗独特型抗体的调节

此项工作的目的是研究用抗独特型抗体(Ab_2)免疫后能否调节抗寄生虫的抗体反应。为此,作者比较观察了经Ab_2和人包虫囊液抗原免疫的小鼠对感染的抗体反应。 将具有高抗体滴度和能识别多抗原组分的一包虫病病人的血清(Ab_1)用包虫囊液抗原(HCFA)亲和纯化,作为独特型抗原免疫兔。经吸附去除非抗独特型抗体及类风湿因子后的兔免疫血清即为抗独特型抗体Ab_2。作者分析了通过Ab_2处理后对细粒棘球绦虫抗原的抗体应答的调节。     

棘球蚴感染绵羊并诱发休克期间特异性IgG、IgE抗体对特异性抗原的识别

目的 探讨细粒棘球蚴(E.g.)囊液粗制抗原和B抗原(EgB)识别绵羊感染E.g.后及诱发过敏性休克期间特异性IgG和IgE抗体的特异性反应,并对抗原特性及分子量进行描述。 方法 制备E.g.囊液粗制抗原及EgB,应用免疫印迹技术检测经剖杀证实感染E.g.并诱发过敏性休克的20只绵羊血清特异性IgG和IgE抗体对两种抗原的抗体反应性,并对抗原特性和分子量进行描述。 结果 特异性IgE抗体与耐热、低分子量的EgB(8、12和16 kDa)抗原未见明显的反应条带,而与E.g.囊液粗制抗原在43 kDa处可见明显的反应条带。IgG抗体与E.g.囊液粗制抗原未见明显的反应条带,但与EgB抗原反应后在31、43和66.2 kDa处可见较为明显的反应条带。 结论 EgB可能不是特异性IgE抗体的特异性抗原,而是IgG抗体的特异性抗原。E.g.粗制囊液抗原中含有特异性IgE抗体的特异性抗原组分,其分子量大于43 kDa,可能是导致棘球蚴病患者过敏性休克的主要致敏原。     

细粒棘球蚴囊液抗原的研究 Ⅰ.抗原的纯化及其免疫诊断价值

依次用硫酸铵分段盐析、超滤、凝胶过滤及等电聚焦电泳方法,从棘球蚴囊液中分离出一组抗原,用PPA—ELIsA法对包虫病患者进行检测,阳性率为81.1%,对其它寄生虫病患者、非寄生虫病患者、健康者检测,结果均为阴性。表明该组抗原有较高的特异性,而灵敏度比粗抗原(91.9%)仅略有降低。     

鼠疫菌纤溶酶原激活因子的分离纯化

目的 建立从人工培养的鼠疫菌中分离和纯化纤溶酶原激活因子(Plasminogen activator,Pla)的方法.方法 分别用超声破碎、尿素提取与硫酸铵盐析相结合的方法(简称超声法、尿素法)提取Pla,并分别用离子交换、凝胶过滤两步层析相结合的高效液相色谱和制备电泳纯化Pla,对提取、纯化的Pla进行纤溶酶原激活剂活性检测.结果 鼠疫菌超声破碎上清50%～60%饱和硫酸铵沉淀和尿素浸渍菌粉上清0～10%饱和硫酸铵沉淀,均获得了3条蛋白带[相对分子质量(Mr)约31×103、35×103、37×103].纤溶酶原激活剂活性检测两种方法获得蛋白的溶圈直径分别为6.5、7.2 mm.用高效液相色谱纯化的Pla主要由Mr约31×103、35×1033、37×103的3条蛋白带组成,纤溶酶原激活剂活性检测溶圈直径为5.0 mm.制备电泳纯化的Pla主要由Mr约31×103、35×103、37×103的3条蛋白带组成.条带所在位置还有其他一些低浓度蛋白存在,纤溶酶原激活剂活性检测无溶圈出现.结论 超声法和尿素法可以提取到Pla,后者经高效液相色谱和制备电泳可以达到基本纯化.     

不同浓度包虫囊液抗原皮试阳性符合情况观察

新疆生产建设兵团农九师位于新疆包虫病重点病区,1986年在全师范围内进行以包虫囊液皮试(ID)筛检为主的包虫病流行病学调查时,全师包虫液皮试平均阳性率为25.19％,平均患病率为1.78‰,为进一步探讨皮试抗原液的浓度对阳性率的影响,我们在自然人群中随机选择了8205人作为观察对象,以不同浓度的囊液抗原进行了皮试阳性符合情况的同体自身对照研究。     

包虫与囊虫间共同抗原的实验探讨

本文用E.gCF和C.cCF致敏血球检测了四种抗原(E.gCF、E.gPS、C.cCF和C.cSCW)免疫的小白鼠。结果发现:囊虫头节及囊壁不仅是囊虫特异性抗原的载体而且是与包虫发生交叉反应的共同抗原的主要来源;原头节共同抗原较少。包虫囊液特异性抗原性比囊虫囊液要强。     

用于人包虫病免疫诊断的单克隆抗体

被棘球蚴感染后,人体血清中可测到特异性的IgM、IgG、IgA 和 IgE 抗体。人包虫病血清学诊断中最广泛应用的抗原是羊和马等中间宿主的包虫囊液,后者含有10多种寄生虫源抗原和宿主的多种血清成分。自从 Capron 等发现用包虫囊液中的抗原5检     

鼠疫菌耐热抗原用于血凝试验的研究

鼠疫被动血凝试验(简称血凝试验)已被国内外广泛应用。Amies曾用乙醇沉淀获得鼠疫菌荚膜抗原,Baker用饱和硫酸铵分段盐析获得特异性水溶性抗原。目前,国内外多用水溶性抗原进行鼠疫血凝试验。但该抗原提取方法较复     

分泌抗包虫囊液抗原McAb杂交瘤细胞株的建立

应用Oriel法制备的包虫囊液抗原经腹腔注入供实验的小鼠,作为脾细胞供体。此脾细胞与不能分泌的骨髓瘤细胞株SP2/0和P3u_1相融合,以生成杂交瘤细胞株。用ELISA法从这些混合细胞培养基中筛选出上清液,用稀释法将上清液克隆,再克隆化之后,生成能分泌单克隆抗体、抗包虫囊液活性的杂交瘤,其染色体数目在80～100范围之内。单克隆抗体类及亚类13Fs和31G_(12)分别是IgG_1和IgA。DD和ELISA用于鉴定它们的敏感性和特异性。应用ELISA法比较杂交瘤和绦虫囊尾蚴液等其它寄生虫抗原制备物,包虫囊液和Pf抗原,表明单克隆抗体对包虫囊寄生虫有很高的特异性。