乳化异氟醚对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及对caspase-3表达的影响

目的 观察乳化异氟醚(8%体积比)对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞的保护作用并探讨其可能作用机制.方法 利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分正常培养组、H/R组、脂肪乳组、乳化异氟醚(终浓度0.28 mmol/L)组.各组心肌细胞作相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率;XTT法测定细胞活力;黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,并测定缺氧复氧后细胞培养液中乳酸脱氧酶(LDH)活性;Western blot法检测caspase-3蛋白表达.结果 与正常培养组比较H/R组细胞SOD下降,MDA、LDH及caspase-3蛋白表达升高(P<0.05).乳化异氟醚组与H/R组比较,心肌细胞SOD活性提高,MDA、LDH及caspase-3蛋白表达下降(P<0.05),且心肌细胞形态及超微结构改善.结论 乳化异氟醚具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌细胞的作用,其作用机制可能与抗自由基损伤及抑制caspase蛋白表达水平有关.     

乳化异氟醚对乳鼠原代培养缺氧/复氧损伤心肌细胞保护效应的最适浓度研究

目的 探讨乳化异氟醚(EI)对乳鼠原代培养缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞保护效应的最适浓度.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,建立体外心肌细胞H/R损伤模型,随机分为13组:正常组(N组),缺氧/复氧组(H/R组),脂肪乳组(F组),按0.28 mmol/L EI的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10倍分别分成EI1～ EI10组.各组取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,细胞匀浆后测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果 与N组比较,各组的LDH、MDA、cTnI均升高(P<0.05),SOD下降(P<0.05).与H/R组比较,EI各组的LDH、MDA、cTnI均降低(P<0.05),SOD升高(P<0.05).与EI6组比较,EI其余各组的LDH、MDA、cTnI均升高(P<0.05),SOD下降(P<0.05).随着EI浓度(倍数递增)的增加,EI1~EI6组的LDH、MDA、cTnI逐渐下降,SOD逐渐升高(P<0.05),EI7~EI10组的LDH、MDA、cTnI逐渐升高,SOD逐渐下降(P<0.05).结论 EI对乳鼠离体心肌细胞H/R损伤具有保护作用,其最佳心肌保护效应浓度为1.68 mmol/L,其机制可能与其抗氧化作用有关.     

乳化异氟醚对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及bcl-2、bar表达的影响

目的 观察乳化异氟醚(8%体积分数)对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA与蛋白水平表达的影响.方法 利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分正常培养组、模型组、脂肪乳组、乳化异氟醚(终浓度0.28 mmol/L).各组心肌细胞做相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率,并用透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2 mRNA、box mRNA的表达.Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 乳化异氟醚组和脂肪乳组均可显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),但乳化异氟醚组与脂肪乳组比较降低更明显(P＜0.05).乳化异氟醚可显著上调Bcl-2表达(P＜0.05)、下调Bax表达(P＜0.05);脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响(P>0.05).结论 乳化异氟醚及其其中的成分之一脂肪乳可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡;乳化异氟醚对缺氧复氧损伤的抗凋亡作用与其心肌细胞Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关.     

乳化异氟醚对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及bcl-2、bax表达的影响

目的观察乳化异氟醚（8％体积分数）对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA与蛋白水平表达的影响。方法利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型，分正常培养组、模型组、脂肪乳组、乳化异氟醚（终浓度0．28mmol／L）。各组心肌细胞做相应分组处理后，利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率，并用透射电镜观察细胞超微结构改变；流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率；RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2mRNA、bax mRNA的表达。Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果乳化异氟醚组和脂肪乳组均可显著降低细胞凋亡率（P〈0．05），但乳化异氟醚组与脂肪乳组比较降低更明显（P〈0．05）。乳化异氟醚可显著上调Bcl-2表达（P〈0．05）、下调Bax表达（P〈0．05）；脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响（P〉0．05）。结论乳化异氟醚及其其中的成分之一脂肪乳可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡；乳化异氟醚对缺氧复氧损伤的抗凋亡作用与其心肌细胞Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关。     

硫酸镁对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究硫酸镁对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法 采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧／复氧损伤模型,实验分为五组：正常对照组、缺氧／复氧损伤模型组、缺氧／复氧损伤＋MgSO4（2．2、4．0、7．2mmol／L）组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内SOD活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内MDA含量,MTT染色法测定心肌细胞活力并测定培养液中LDH含量的变化。结果 硫酸镁能显著提高细胞内SOD的活性,降低MDA、LDH的含量并可提高心肌细胞的活力。结论 硫酸镁具有明显的抗缺氧／复氧损伤、保护心肌细胞的作用。     

缺氧复氧对乳鼠心肌细胞的损伤的研究

目的 观察乳鼠心肌细胞的缺氧损伤以及缺氧复氧条件下不同复氧时间对乳鼠心肌细胞损伤的变化.方法 用MTT法检测缺氧损伤及不同复氧时间对乳鼠心肌细胞存活率的影响;LDH、T-SOD/GSH/GSSG试剂盒检测缺氧损伤及不同复氧时间下细胞损伤程度.结果 MTT及LDH、T-SOD、GSH/GSSG可检测到缺氧损伤及复氧损伤,且损伤于复氧1h后趋于稳定.结论 乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤于复氧1h后趋于稳定.     

七氟醚后处理通过调节FTO/KCNJ2对缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨七氟醚后处理对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法 从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)获取心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI)相关数据集GSE160516,将差异表达基因KCNJ2纳入本研究。采用qRT-PCR检测KCNJ2在H/R和七氟醚处理的心肌细胞中的表达。RIP实验验证KCNJ2和FTO的结合关系。分别采用MTT法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率,使用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定细胞的LDH释放量。结果 七氟醚后处理可抑制H/R诱导的心肌细胞损伤。相对于Control组,H/R心肌细胞中KNCJ2表达下调,而七氟醚可提高H/R心肌细胞中KCNJ2的表达(均P<0.01)。相对于H/R组,七氟醚组细胞增殖活力提高、LDH释放水平和凋亡率下降,但七氟醚对H/R心肌细胞的保护作用能够被敲减KCNJ2部分逆转(均P<0.05)。FTO能够通过抑制KCNJ2的m6A修饰进而增强...     

葛花总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察葛花总黄酮预处理对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 取0～2 d SD乳鼠原代心肌细胞培养,不同剂量葛花总黄酮预处理24 h后,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4 )诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,运用MTT法测定细胞存活率,同时测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)含量和乳酸脱氢酶(LDH)释放量.结果 心肌细胞经过缺氧/复氧损伤后心肌细胞的存活率明显降低,上清液中心肌酸激酶的释放显著增加.葛花总黄酮预处理能浓度依赖性地升高细胞的存活率,同时降低培养液中CK和LDH释放量.结论 葛花总黄酮预处理对缺氧/复氧损伤心肌细胞都具有明显的保护作用.     

巴戟天对培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的防护作用

目的：研究巴戟天对纯化培养心肌细胞缺血再灌注损伤的防护作用及机制。方法：采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型，实验分5组：正常细胞培养组，缺氧复氧损伤模型组，巴戟天大、中、小剂量组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力。硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量，测定LDH活性以及N0含量变化。结果：巴戟天正丁醇可溶部分可明显提高SOD、LDH活性，降低MDA含量、增加NO含量。结论：巴戟天具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌作用。     

神经再生素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨神经再生素(nerve regeneration factor,NRF)对缺氧/再复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞的保护作用。方法:取Winstar乳鼠心脏,制成心肌细胞悬液,贴壁法培养心肌细胞并进行缺氧/再复氧损伤,观察神经再生素对缺氧/再复氧心肌细胞形态及细胞内SOD、MDA及LDH水平的影响,采用流式细胞仪双标法检测心肌细胞凋亡百分率。结果:神经再生素能升高SOD活性,降低MDA含量和LDH活性,减少心肌细胞凋亡率。结论:神经再生素对缺氧/再复氧心肌细胞损伤具有一定的保护作用。     

静脉乳化异氟醚的研究进展

直接静脉注射挥发性吸入麻醉药可导致动物或人的组织器官严重损害甚至死亡,而乳化挥发性吸入麻醉药可产生良好的麻醉作用且不良反应小。乳化异氟醚作为一种新型的静脉全麻药,直接静脉注射可获得确切的可逆性麻醉作用,其MAC静脉相似文献   

AQP4在新生大鼠实验性星形胶质细胞缺氧损伤模型中的表达变化及意义

目的 探讨水通道蛋白4（AQP4）在原代培养新生大鼠星形胶质细胞（AC）缺氧和缺氧后再复氧损伤模型中的表达改变及其意义。方法 原代培养成熟的AC随机分成常氧培养组（对照组）、缺氧组和复氧组。缺氧组AC在缺氧条件下分别培养3h、6h、12h和24h,复氧组AC缺氧培养12h后更换为常氧培养,分别培养3h、6h、12h和24h。各组样品采用Real Time PCR和免疫荧光染色分别测定AQP4 mRNA和蛋白表达水平。结果 随着缺氧时间延长,AQP4 mRNA和蛋白表达水平进行性降低,复氧时则先降低,后回升。结论 AQP4表达下降可能与脑水肿的发生有关,AQP4可能对脑内渗透平衡重建起重要作用。     

缺氧再给氧损伤对人肝细胞MHCⅠ分子相关抗原表达变化的影响

目的 探讨缺氧再给氧(hypoxia／reoxygenation,H／R)损伤是否能介导入MICA、B(MHC class Ⅰ chain-related antigenA,B)的表达变化。方法 建立人正常肝细胞缺氧再给氧损伤模型,模拟移植器官缺血再灌注损伤过程,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光分别检测肝细胞MICA、B在mRNA和蛋白质水平的变化。结果 发现H／R损伤可以导致肝细胞中MICA和MICB表达上调．缺氧15h,再给氧2h、4h、6h、12h、24h后两者的表达逐步增多。结论 缺氧再给氧损伤能够诱导MICA、B表达上调。     

异氟醚诱导大鼠中枢神经系统c-fos基因的表达

目的 :观察异氟醚麻醉后大鼠中枢神经系统c-fos基因的表达 ,了解异氟醚在中枢神经系统的作用部位 ,探讨吸入全麻机理 .方法 :SD大鼠 4 0只 ,雌雄不拘 ,体重 (178 6± 18 0 )g ,日龄 (80± 15 )d ,随机分为对照组、 0 6 %异氟醚组 ,1 2 %异氟醚组和 1 8%异氟醚组 ,每组 10只 .实验组分别吸入 0 6 % ,1 2 %和 1 8%的异氟醚 1h ,对照组除不吸入异氟醚外 ,其余条件完全同实验组 .停止吸入后 ,每只动物腹腔注射 3%戊巴比妥钠 (4 0mg/kg)麻醉后开胸 ,经升主动脉灌注生理盐水 10 0mL洗去全身血液 ,继之灌注多聚甲醛液 (0 1mmol/L ,pH 7 4 ,含 4 %的多聚甲醛 ) 2 5 0mL ,固定 90min .取全脑石蜡包埋 ,切片 (片厚 5 μm) ,应用c-fos基因免疫组织化学方法 ,低倍显微镜 (× 10 )下观察染色阳性细胞的分布情况 ,高倍镜 (× 2 0 )下观察鉴别Fos染色免疫阳性细胞并作阳性细胞记数 .结果 :对照组中未发现Fos阳性细胞 ,实验组大鼠的皮质、丘脑、中脑、桥脑、延髓、小脑可观察到Fos蛋白阳性神经元 ,与对照组相比P <0 0 5和P <0 0 1,这些神经元的分布局限于某些区域 ;同时发现Fos蛋白阳性神经元随吸入异氟醚浓度的增加而增多 ,实验组间相比P <0 0 5和P <0 0 1.结论 :异氟醚能诱导大鼠皮质、丘脑、中脑、桥脑、延髓     

选择性外周神经给乳化异氟醚山羊模型的建立

目的 建立选择性山羊外周神经给乳化异氟醚模型,探索外周神经在异氟醚制动中的作用.方法 18只健康成年山羊随机平分为股动脉给乳化异氟醚组(动脉组),股动脉给脂肪乳组(动脉对照组,脂肪乳为乳化异氟醚溶剂)和耳静脉给乳化异氟醚组(静脉组).采用自身上下法,分别钳夹给药侧后肢悬蹄(动脉组,动脉对照组),后肢悬蹄(静脉组)作为伤害性刺激,测定异氟醚最低血液有效分压(minimum partial pressure, MPP).比较3组山羊不同MPP(根据取血部位不同,MPP分为颈静脉MPP、给药侧股静脉MPP和对照侧股静脉MPP).结果 在动脉对照组,血液中没有发现异氟醚,山羊对钳夹刺激具有正常的逃避反应.在动脉组和静脉组,对照侧股静脉MPP与颈静脉MPP比较差异均没有统计学意义.动脉组山羊给药侧股静脉MPP约为颈静脉MPP的7倍[(38.45±17.01) mmHg vs. (5.82±2.32) mmHg,1 mmHg=0.1333 kPa, P＜0.05],约为静脉组山羊颈静脉MPP的4倍[(9.41±1.61 ) mmHg, P＜0.05].颈静脉MPP动脉组山羊约为静脉组山羊的0.6倍(P＜0.05).结论 成功建立选择性山羊外周神经给乳化异氟醚模型,并提示高分压异氟醚(4倍临床麻醉深度)有外周神经阻滞作用.     

异氟烷对心肌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨异氟烷对心肌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的直接调节作用及其可能的细胞内信号转导途径,揭示异氟烷心肌保护的分子机制。方法:分离培养原代大鼠心肌细胞,随机分为:对照组(CON),细胞不经任何处理;异氟烷组(ISO),细胞分别经0.5、1、1.5MAC的异氟烷处理6h;PKC抑制剂组(CAL),细胞经calphostinC 50nM孵育6h;PKC抑制剂+异氟烷组(IC),细胞经calphostin C及异氟烷共同作用6h。实验结束采用E1isa法测定细胞培养液VEGF浓度。结果:异氟烷呈浓度依赖性增加心肌细胞VEGF分泌,与对照组(OMAC)比较,1MAC和1.5MAC组VEGF值均显著升高(P<0.01);PKC抑制剂calphostin C能抑制异氟烷处理引起的VEGF分泌(P<0.01),但calphostin C对心肌细胞VEGF分泌无显著影响(P>0.05)。结论:异氟烷诱导心肌细胞释放VEGF,有可能是异氟烷心肌保护机制之一,蛋白激酶C参与异氟烷诱导的VEGF表达。     

选择性脊髓给予乳化异氟醚模型建立及异氟醚制动机制探讨

目的建立并验证选择性脊髓给予乳化异氟醚的山羊模型,并初步探讨异氟醚的制动机制。方法18只成年山羊随机平分为选择性山羊脊髓给予乳化异氟醚组(动脉组)与乳化异氟醚全身麻醉组(静脉组)。动脉组和静脉组分别经降主动脉起始处和耳缘静脉以微量注射泵泵入乳化异氟醚。调节泵入乳化异氟醚速度至呼气末异氟醚浓度达到1个肺泡气最低有效浓度(MAC)后,维持平衡20 min。比较平衡后两组山羊不同取血部位(股动、静脉和颈动、静脉)血液中的异氟醚分压(Piso)。结果静脉组山羊各部位血液中Piso差异无统计学意义。动脉组山羊颈动、静脉血Piso比较,股动、静脉血Piso比较差异无统计学意义;但股动、静脉血中Piso〔分别为(11.15±6.06)mmHg、(9.28±5.07)mmHg,1 mmHg=0.1333 kPa〕约为颈动、静脉血中Piso〔分别为(6.07±3.60)mmHg、(5.36±2.99)mmHg〕的2倍(P<0.05)。静脉组山羊各部位血液中Piso与动脉组股动、静脉血中Piso比较差异均无统计学意义,但约为动脉组山羊颈动、静脉血中Piso的2倍(P<0.05)。结论成功建立选择性山羊脊髓给予乳化异氟醚模型,并提示脊髓可能是异氟醚制动作用的重要部位。     

黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的保护作用

目的;探讨黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的影响。方法：取SD乳鼠的心脏,经济化,分离及纯化制成心肌细胞悬液并接种至24孔培养板中,通过缺氧缺糖,建立心肌细胞“缺血性”损伤的实验病理模型,在此基础上观察黄芩苷对缺氧缺糖心肌细胞形态及细胞内SOD、MDA水平及NO分泌的影响。结果：0．1－10μg/ml的黄芩苷可显著提高缺氧化心肌细胞中SOD活性,10μg/ml的黄芩苷显著抑制MDA的生成,1μg/ml黄芩苷显著增加NO分泌,10μg/ml黄芩苷又抑制NO分泌。结论：黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞损伤具有一定的保护作用。     

芦荟多糖对脑缺血大鼠Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨芦荟多糖对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用机制。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO),制备局灶性脑缺血模型,观察芦荟多糖对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为变化,用免疫组化法检测大脑皮质细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果芦荟多糖能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白的表达。结论芦荟多糖对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机理与其影响、抑制Caspase-3的表达有关。