斑点免疫金渗滤法检测登革热病毒抗体

斑点免疫金渗滤法检测登革热病毒抗体姚海军①段馥琴＊曹虹（第一军医大学微生物学教研室，广州５１０５１５）关键词登革热病毒抗体（ＩｇＧ）斑点免疫金渗滤试验斑点免疫结合试验本文建立了用斑点免疫金渗滤试验（Ｄｏｔｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓａ...     

检测甲状腺微粒体抗体的斑点免疫金渗滤法的建立及临床应用

甲状腺微粒体抗体（TmAb）的检测，对桥本甲状腺炎的诊断有重要意义。本研究利用纯化的甲状腺微粒体作抗原，金标葡萄球菌A蛋白作显示系统，建立了简单、快速的斑点免疫金渗滤法（D。t－im－munnogoldflltratlonassay，DIGFA），并与RIA进行比较。材料和方法一、材料氯化金（上海化学试剂公司）、葡萄球菌A蛋白（SPA，上海生物制品研究所）、硝酸纤维素膜（浙江黄岩四青生化材料工厂，筛网孔径0．45＃m）、渗滤装置及吸水材料（自制）。二、方法l·里达里世哲典型封县人甲状腺组织去包膜，洗去血迹，切碎，加40～60ml生理盐水，匀浆…     

血清甲状腺球蛋白抗体的斑点免疫金渗滤法

血清甲状腺球蛋白抗体的斑点免疫金渗滤法冯修高唐玉钗朱忠勇叶大付杨丽珠①李珍儿＊兰小鹏黄俏佳（南京军区福州总医院全军医学检验中心，福州３５０００１）关键词斑点免疫金渗滤法抗体甲状腺球蛋白血清甲状腺球蛋白抗体（ＴｇＡｂ）的检测，对自身免疫性甲状腺疾病的诊...     

筛查抗核抗体的斑点金免疫渗滤法

根据免疫渗滤的原理 ,采用金标记ＳＰＡ ,建立了检测抗核抗体 (ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ ,ＡＮＡ)的斑点金免疫渗滤法 (ｄｏｔｉｍ ｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓａｙ,ＤＩＧＦＡ) ,并与间接免疫荧光法 (ｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ,ＩＩＦ)进行比较 ,以期建立一种简便、快速、可靠的、具有临床应用价值的检测血清ＡＮＡ的方法。1　材料与方法1 1　标本　 2 3 6例系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)病人外周静脉血清标本分别来自浙江大学医学院附属二院和杭州红十字会医院。其临床诊断参照美…     

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)。结果本法对系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为100%,对皮肌炎(DM)阳性率为100%,狼疮性肾炎(LN)阳性率为75%,本法与免疫印迹法(IBT)的符合率为94.1%。IBT法阴性的50例病人中,本法检出3例阳性病例(其ANA均为阳性);健康体检50例均为阴性。结论本法简便、快速、可靠,整个检测过程只需2min,不需其他特殊设备。     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的：研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法：用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫汉滤试验（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果：抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21％,与酶联免疫吸附试验（ELISA）的结果基本相符。结论：斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogoldfiltrationassay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21%,与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

新型自身抗体联合检测斑点免疫金渗滤法的建立及应用评价

目的:建立一种简便快速的联合检测自身抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA).方法:将多种人自身抗原SmD1、SSA、SSB、Jo-1,采用毕赤酵母重组表达后,纯化抗原点于硝酸纤维素膜上,用来检测血清中相应多种自身抗体,通过胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白直接显色,阳性者出现红色斑点.结果:DIGFA检测185份经欧蒙ENA酶斑点法检测为不同自身免疫痛患者血清和50份正常人血清,阳性符合率分别为抗SmD1 91.2%,抗SSA92.8%,抗SSB 96.9%,抗Jo-1 92.6%,阴性符合率为100%(50/50).与欧蒙ENA酶斑点法对比检测的总符合率为93.0%(172/185),差异无显著性(P>0.05).结论:DIGFA法简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的联合诊断.     

谷氨酸脱羧酶抗体检测及其应用

谷氨到脱羧枰是Ⅰ型糖尿病的关键始动靶抗原。谷氨酸脱羧酶抗体是Ⅰ型糖尿病及糖尿病前期个体的特异性免疫标志。谷氨酸脱羧酶抗体的测定方法主要有免疫沉淀酶活性分析法、放射免疫分析法、放射配体分析法、酶联免疫吸附分析法等。谷氨酸脱羧酶抗体的测定对Ⅰ型糖尿病的预测、鉴别诊断、指导预防和治疗及免疫预防的监测具有重要价值。     

利用酵母重组SSB抗原建立快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSB抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSB抗体的方法。方法将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,与待检血清中抗SSB抗体反应后,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(Staphy lococus protein A,SPA)作为显示剂,与截留的抗SSB抗体结合,出现肉眼可见的红色斑点。结果本法的敏感性和特异性分别为100%和98.75%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为99.01%。结论本法快速、简便、准确,具有很好的临床诊断应用前景。     

谷氨酸脱羧酶抗体ELISA法的建立与临床应用

人脑组织经过破碎离心、抽提，再经二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白质，收集有酶活性组份，即为纯化的谷氨酸脱羧酶，用以建立了测定相应抗体的ＥＬＩＳＡ法。临床检测结果表明，该抗体的阳性率在正常人为１．９６％，在胰岛素依赖性糖尿病为４６．８８％，在非胰岛素依赖性糖尿病为９．３１％。     

银加强技术在滴金免疫测定法中的应用

为了提高斑点金免疫渗滤试验（滴金法）的敏感度，进行了银加强滴金法的研究。通过最适条件的选择，建立了如下的方法。银染液的组成为乙酸银，阿拉伯树胶，对苯二酚，溶于ｐＨ３．８柠檬酸盐缓冲液中。洗涤液为含Ｔｗｅｅｎ－２０的ｐＨ８．２Ｔｒｉｓ缓冲盐水。在滴金法试验完成后，在渗滤装置的小孔中按滴金法操作依次加入洗涤液、双蒸水、ｐＨ３．８柠檬酸缓冲液，最后加入银染液。７分钟后观察结果，膜上出现棕黑色斑点者为阳性     

抗双链DNA抗体不同检测方法的对比分析及临床应用研究

目的探讨胶体金斑点法(DIGFA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的临床应用价值。方法采用DIGFA法和ELISA法同时检测系统性红斑狼疮(SLE)患者(n=80)及健康对照者(n=50)血清中抗dsDNA抗体。并将ELISA法的定量检测结果与SLE患者的临床指标进行相关分析。结果 ELISA法检测抗dsDNA抗体的特异性、阳性预测值均高于DIGFA法,但敏感性略低于后者。ELISA法检测的抗dsDNA抗体水平与SLE患者疾病活动性指数、血沉、血清C3及24小时尿蛋白定量结果呈明显相关性。结论 ELISA法检测抗dsDNA抗体水平较DIGFA法准确性更高,并且是监测SLE病情转归的重要实验室指标之一。     

2型糖尿病患者血清GAD-Ab、ICA、IAA与胰岛素释放功能的关系

目的：2型糖尿病患者血清谷氨酰脱羟酶抗体（GAD-Ab）、胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛素自身抗体（IAA）与胰岛素释放功能的关系。方法：对2型糖尿病患者和体检中心健康体检者进行5个时相点75g葡萄糖耐量试验和同步胰岛素释放试验,并对0min时相点的血清进行GAD-Ab、ICA、IAA检测。结果：（1）在筛查人群248例2型糖尿病患者中GAD-Ab阳性为95例,阳性率为38．3％;正常对照组阳性为1例,阳性率为2．3％,两组之间差异有统计学意义;糖尿病组ICA阳性有14例,阳性率为5．6％;对照组为0例,两组比较差异有统计学意义;糖尿病组IAA阳性有14例,阳性率为5．65％,对照组为1例,阳性率为2．3％,两组之间比较差异无统计学意义。（2）2型糖尿病不同抗体阳性的胰岛素释放水平,在GAD-Ab、ICA、IAA都是阳性时I0、Imax、M／Fi、Si都是最低的。在GAD-Ab阳性或GAD-Ab与ICA、IAA其中一个呈阳性时,与GAD-Ab为阴性的ICA或IAA阳性组比较其I0、Imax、M／Fi、Si都较低,差异无统计学意义,而单一ICA或IAA阳性之间的比较差异无统计学意义,但与三个抗体全阴性组比较,明显偏低,差异有统计学意义,发现抗体阳性的2型糖尿病患者,特别是GAD-Ab阳性的患者与I0、Imax、M／Fi、Si水平呈显著负相关。结论：2型糖尿病GAD-Ab、ICA和IAA抗体阳性与胰岛素释放指标水平呈负相关,检测抗体水平可一定程度地反映胰岛素释放功能。     

一种新的谷氨酸脱羧酶抗体阳性判断标准的建立

目的:建立一种新的谷氨酸脱羧酶自身抗体(glutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD鄄Ab)阳性判断标准,并应用于临床。方法:采用改良放射配体法检测GAD鄄Ab,结果用GAD鄄Ab指数表示,以109名正常人GAD鄄Ab指数的99.5%百分位点作为正常上限,检测43例1型和226例2型糖尿病患者血清GAD鄄Ab水平。结果:该方法批内变异系数(CV)为4.9%～8.3%,批间CV为7.1%～10.8%,阳性临界值为0.05,结果判断与国际标准化实验室的一致率为98.3%,Kappa值为0.971,结果判断重复性为100%(102例标本3次检测),优于传统的标准差判断标准。用该标准检测1型糖尿病患者阳性率为58.1%(25/43),2型糖尿病患者为10.2%(23/226),正常人为1.8%(2/109),差异有显著性(P<0.01)。结论:新建立的判断标准灵敏度高、特异度强,一致性和重复性好,可在临床推广应用。     

Serum lysophosphatidic acid concentrations measured by dot immunogold filtration assay in patients with acute myocardial infarction

In this study the relation between lysophosphatidic acid (LPA) and myocardial infarction was investigated, the typical and simplified methods for measuring serum LPA concentration by dot immunogold filtration assay (DIFA) based on a polyclonal antibody to LPA were developed, and serum LPA concentrations were measured in 31 patients with acute myocardial infarction (AMI) and 12 controls (blood donors) by DIFA. Serum LPA levels were raised more than twofold 8?h after the onset of AMI. Maximal elevation (10.43?mg/L) was found at 48–72?h following onset and remained higher than the control concentration (1.66?mg/L) 7 days after AMI. The rise in serum LPA concentration in AMI patients suggests that LPA might be involved in AMI‐related pathophysiology in the cardiovascular system. The simplified DIFA developed in the present study for measuring serum LPA concentration is convenient and highly sensitive.     

糖尿病患者血清ICA、IAA、GAD-Ab、IA-2-Ab的检测及临床意义

目的：探讨ICA、IAA、GAD—Ab、IA-2-Ab对糖尿病患者的检测及临床意义。方法：用ELISA法测定155例1型糖尿病患者和44例2型糖尿病患者以及32例正常人血清中的ICA、IAA、GAD—Ab、IA-2抗体。结果：1型糖尿病组和2型糖尿病组ICA的阳性率分别为36．8％和11．4％，IAA的阳性率分别为23．2％和16．0％，GAD—Ab的阳性率分别为58．7％和16．0％，IA-2-Ab的阳性率分别为20．0％和6．8％。结论：ICA、IAA、GAD—Ab、IA-2抗体对1型糖尿病的早期诊断及预测有重要的临床意义，且联合测定以上抗体能提高检出率，避免漏诊。     

检测血浆D-二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性

目的比较2种金标斑点渗滤法（DIGFA）试剂盒在测定D-二聚体浓度中的临床适用性。方法同时采用NycoCard公司与国产奥普D-二聚体检测试剂盒（D-DDOT）对234份血浆样本进行测试,比较2种方法的一致性。结果D．DDOT线性范围内相关系数（r）=0．998;总批内、批问变异系数（CV）分别为10．77％和12．81％;总回收率为101．3％。配对,检验、Kappa检验（0．95）及Spearman系数（0．87）均显示D—DDOT与NycoCard检测结果有良好的一致性。结论新的DIGFA D-二聚体检测试剂盒与进口NycoCard试剂盒有良好的一致性,能够满足临床需要。