RNAi沉默Furin基因对人宫颈癌HeLa细胞增殖和转移的影响

目的研究Furin基因沉默对宫颈癌HeLa细胞株生长转移的影响。方法脂质体法将质粒Furin siRNA转染人宫颈癌HeLa细胞。MTT法检测细胞的增殖情况,Boyden细胞迁移和侵袭实验观察HeLa细胞的迁移和侵袭能力。Western blot检测Furin及产物MT1-MMP蛋白量的变化,ELISA法检测细胞上清中MMP2的浓度。结果细胞增殖实验中Furin siRNA处理后48h的HeLa细胞与空质粒转染组相比体外生长抑制38.6%,差异有统计学意义(P<0.01);细胞迁移和侵袭实验中,Furin siRNA处理后,HeLa细胞穿过滤膜和基质胶的细胞数量均明显少于空质粒转染(P<0.05);它可显著降低MT1-MMP蛋白表达及MMP2的分泌。结论 Furin siRNA可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长及肿瘤细胞转移,机制可能与降低Furin产物MT1-MMP的表达及MMP2合成有关。     

鞘氨醇-1磷酸盐对宫颈癌HeLa细胞生长及细胞侵袭的影响

目的探讨鞘氨醇-1磷酸盐（S1P）对宫颈癌HeLa细胞生长和侵袭能力的影响。方法分别应用S1P（实验组）和无脂肪型牛血清白蛋白（BSA）载体溶液（对照组）处理宫颈癌HeLa细胞,采用噻唑蓝和5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记法细胞增殖分析法检测肿瘤细胞活力和增殖变化,趋化小室和侵袭小室检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力变化。结果与对照组细胞相比,实验组HeLa细胞活力及细胞增殖、HeLa细胞迁移和侵袭能力显著增强（P〈0.05）。结论 S1P可以导致宫颈癌HeLa细胞生长和侵袭能力增强,提示S1P蛋白在宫颈癌进展中可能发挥重要作用。     

芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的探讨芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响。方法通过四甲基偶氮唑蓝法及平板克隆形成实验研究芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响。结果不同浓度的芹菜素(5、10、20 mg/L)对HeLa细胞的生长均有显著的抑制作用,随着芹菜素浓度的增加,抑制作用显著增强;平板克隆实验结果表明,芹菜素能使HeLa细胞的平板克隆形成能力减弱,不论从克隆的大小还是克隆的数目上,实验组均较对照组明显下降,芹菜素浓度越大,平板克隆形成能力越弱。结论芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞的生长有显著的抑制作用。     

MTA1基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的 探索MTA1基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1/MTA1转染HeLa细胞,应用Western blotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MTA1质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTA1蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组(P<0.05).结论 MTA1基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTA1基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点.     

宫颈癌HeLa细胞抗顺铂作用的Notch1机制研究

目的 利用宫颈癌HeLa细胞系探讨宫颈癌的抗化疗机制。 方法 利用球形成试验(sphere forming assay)和Western blot法检测顺铂对癌症干细胞形成的影响以及Notch1在HeLa细胞系的表达。基因沉默试验分析Notch1基因是否在宫颈癌HeLa癌症干细胞中发挥关键作用。 结果 顺铂能促进球结构(意味着癌症干细胞形成)的形成。5μmol/L顺铂较1μmol/L顺铂能促进更多球结构形成(P<0.05)。10μmol/L顺铂会抑制球结构形成。5μmol/L顺铂还能提高HeLa 中Notch1的表达(P<0.05),而沉默HeLa细胞的Notch1后,HeLa细胞中形成的球数量降低1.7倍(P<0.05)。 结论 宫颈癌HeLa细胞系具有抗顺铂治疗的特性,尤其是5μmol/L的顺铂,该抗化疗作用与宫颈癌HeLa细胞中的Notch1表达升高,最终促进癌症干细胞自我更新有关。     

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。     

MTAl基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的探索MTAl基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTAl全长基因的质粒pEGFP—C1／MTAl转染HeLa细胞,应用Westernblotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果MTAl质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTAl蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组（P〈0．05）.结论MTAl基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTAl基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点。     

紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞生长及其claudin-7表达的影响

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌HeLa细胞增殖及claudin-7蛋白表达水平的影响.方法 体外培养人宫颈癌 HeLa细胞,采用 MTT法观察不同浓度紫杉醇脂质体（0.01、0.1、1、10、100 μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测HeLa细胞claudin-7蛋白表达水平在不同浓度紫杉醇脂质体作用下的变化.结果 5个浓度的紫杉醇脂质体均能显著抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;Western blot显示HeLa细胞经不同浓度紫杉醇脂质体处理48 h后,随着紫杉醇脂质体浓度的增高,claudin-7蛋白表达逐渐减弱.结论 紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,HeLa细胞claudin-7蛋白的表达在紫杉醇脂质体影响下是下调的.     

蛞蝓有效提取物抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长

目的 观察蛞蝓有效提取物(EL-3)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法制备宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤模型,检查EL-3对瘤体积、瘤重及VEGF蛋白表达的影响,评估EL-3在体内治疗宫颈癌的有效性。结果EL-3(10、30和100 mg/kg)实验组的瘤体积显著低于生理盐水组(P<0.05),同时,其移植瘤的瘤重抑制率分别为42.0%、67.0%和83.0%,提示EL-3在体内抗宫颈癌作用较强,且呈剂量依赖性;采用免疫组化检测证实EL-3下调宫颈癌裸鼠移植瘤细胞VEGF蛋白表达。结论EL-3具有抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的作用,其机理可能与抑制肿瘤血管生成有关。     

iNOS抑制剂1400 W对宫颈癌HeLa细胞株生长的抑制作用

 目的 探讨诱导型一氧化氮合酶抑制剂1400 W单独或者联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞株生长及凋亡的影响。方法 培养宫颈癌HeLa细胞株,应用MTT法检测1400 W及顺铂对HeLa细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测1400 W及顺铂对HcLa细胞凋亡的影响;RT-PCR检测1400 W及顺铂对HeLa细胞E6,p53 mRNA表达的影响。结果 1400 W和顺铂均能抑制HeLa细胞生长,其抑制作用与剂量呈正相关。1400 W单药并不增加HeLa细胞凋亡,而1400 W联合顺铂后明显增加HeLa细胞凋亡（P＜0.05）,两者联合也使HeLa细胞E6,p53 mRNA表达明显下降（P＜0.05）。结论 1400 W及顺铂均可抑制HeLa细胞增殖。1400W联合顺铂明显增加宫颈癌HeLa细胞凋亡率,并且较单独使用顺铂时作用更显著。顺铂联合iNOS抑制剂抗肿瘤可能是一种更有希望的新辅助疗法。     

黄芩素对宫颈癌细胞凋亡的影响

目的：观察不同浓度的黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后细胞迁移及细胞周期的变化,观察细胞培养基中具有活性的金属基质蛋白酶－2（MMP －2）、金属基质蛋白酶9（MMP －9）的变化,及 MMP －2、MMP －9、金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP2）、细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）、B 细胞淋巴瘤／白血病－2（Bcl －2）相关 X 蛋白（Bax）、Bcl －2 mRNA 及蛋白水平表达的变化。方法体外黄芩素干预 Hela 细胞株24 h,分不含黄芩素的无血清DMEM 高糖培养基培养的细胞为空白对照组,无血清 DMEM 高糖细胞培养基中加入终浓度为100μmol／L 的黄芩素为100μmol／L 组,无血清 DMEM 高糖细胞培养基中加入终浓度为200μmol／L 的黄芩素为200μmol／L 组,共3组。镜下观察各组细胞形态及数量的变化、细胞迁移实验检测细胞迁移的改变、流式细胞技术法检测细胞周期发生的变化、RT －PCR 法及 Western blot 法检测 MMP －2、MMP －9、TIMP2、CyclinD1、Bax、Bcl －2 mRNA 及蛋白水平的表达变化。结果黄芩素干预24 h 后,与空白对照组比较,两干预组细胞周期 G1期受阻滞,阻滞程度与黄芩素干预浓度一致（P ＜0．05）,细胞迁移受抑制,随着黄芩素浓度逐渐增加,迁移距离逐渐减少（P ＜0．05）,MMP －2、MMP －9活性受到抑制,抑制程度与黄芩素浓度呈正相关（P ＜0．05）,MMP －2、MMP －9、CyclinD1、 Bcl －2的mRNA 及蛋白表达随黄芩素干预浓度增加,呈逐渐降低的趋势（P ＜0．05）,TIMP2、Bax 的 mRNA 及蛋白表达趋势随黄芩素浓度增加而逐渐增强（P ＜0．05）。结论黄芩素干预宫颈癌 HeLa 细胞,通过阻滞细胞周期 G1期,抑制 MMP －2、MMP －9活性,上调 TIMP2、Bax 的表达,下调 MMP －2、MMP －9、CyclinD1、Bcl －2的表达,促进 HeLa细胞的凋亡。     

TALENs介导的Nanog基因表达下调对宫颈癌HeLa 细胞恶性行为的影响

目的 研究Nanog表达下调对宫颈癌HeLa 细胞恶性行为的影响。方法 通过基因编辑工具转录激活样效应器核酸酶（TALENs）介导Nanog 下调表达,基因测序分析Nanog的突变情况;挑取单个细胞培养以筛选出Nanog明显下调表达的单克隆HeLa细胞;RT-PCR 检测mRNA 表达水平;Western blot 检测蛋白表达水平;HeLa细胞的集落形成能力、侵袭性及耐药性分别通过集落形成实验、 Transwell 侵袭实验及药物敏感性实验检测。 结果 TALENs成功介导Nanog 基因突变并导致其下调表达,Nanog突变的单克隆HeLa细胞Nanog mRNA和蛋白表达水平较野生型HeLa细胞均下调表达（P<0.05）。Nanog突变单克隆HeLa细胞相对于野生型HeLa细胞表现出明显减弱的侵袭、集落形成及化疗药物抵抗能力（P<0.05）。 结论 Nanog突变减弱HeLa 细胞的恶性行为,下调或沉默Nanog表达有望成为一种新型的治疗宫颈癌策略。     

卤夫酮对肝硬化大鼠Ⅰ型胶原、金属蛋白酶组织抑制剂-1和α-肌球蛋白基因表达的影响

目的 探讨卤夫酮预防大鼠肝硬化的效果和机制.方法 60只雌性SD大白鼠随机分为3组,每组20只,分别建立正常组、肝硬化组和卤夫酮组动物模型.采用RT-PCR法检测3组肝脏Ⅰ型胶原、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1和α-肌球蛋白(α-SMA)的mRNA表达.结果 RT-PCR检测显示肝硬化组Ⅰ型胶原、TMP-1和α-SMA分别较正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),而卤夫酮组较肝硬化组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);3项指标在正常组和卤夫酮组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 卤夫酮通过抑制Ⅰ型胶原、TIMP-1和α-SMA mRNA的转录,具有预防肝纤维化或肝硬化的作用.     

RNAi沉默HSP70基因对宫颈癌HeLa细胞的影响

目的:本研究初步探讨RNAi技术应用于宫颈癌基因治疗的特异性及其作用机理。方法:设计靶向HSP70基因siRNA序列,构建重组表达载体pTZU6+1-siRNA-HSP70,在脂质体介导下瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,在体外诱导RNAi沉默HSP70基因,同时设转染空载体pTZU6+1为阴性对照组和不加任何试剂的空白对照组。采用RT-PCR和Western blotting方法检测实验组和对照组中HSP70表达;MTT法检测细胞生长与增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果:与对照组相比,实验组转染HeLa细胞后,细胞的HSP70 mRNA和蛋白表达均明显下调(P<0.01);细胞生长抑制率增高(P<0.05);细胞周期相分布发生变化。结论:siRNA明显抑制HSP70的表达及宫颈癌HeLa细胞的增殖,并引起细胞凋亡和细胞周期改变,为进一步研究HSP70基因在宫颈癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础。     

PPI1对人宫颈癌HeLa细胞紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨PPI1野生型和活化型突变体的表达对宫颈癌细胞株紫杉醇敏感性的影响.方法 建立PPI1野生型和持续活化型突变体稳定表达的HeLa细胞株,用MTT实验、克隆形成实验、流式细胞术等方法观察转染PPI1的HeLa细胞对化疗药紫杉醇的敏感性,通过Western blot分析凋亡相关蛋白的表达及MAPK信号转导通路的活化情况.结果 经紫杉醇处理后,PPI1持续活化型突变体的表达明显抑制HeLa细胞的增殖和克隆形成能力;该组细胞凋亡率及G2/M期细胞所占比例明显升高;Western blot分析表明,该组细胞促凋亡分子Bax的表达、Caspaes-3和Caspaes-8的活化及Bcl-2和p38的磷酸化程度明显增强.结论 PPI1持续活化型突变体的表达可明显增强HeLa细胞对紫杉醇的敏感性,其中涉及到Bax表达和Bcl-2磷酸化增强,Caspaes-3、Caspaes-8的活化增强和p38信号转导通路的活化增强.     

紫杉醇与褪黑素联合使用对HeLa细胞的生长影响研究

目的；研究紫杉醇与褪黑素联合应用对ＨｅＬａ细胞的生长影响。方法；通过生长曲线，集落形成试验观察二者联合应用对ＨｅＬａ的影响作用。结果；单独应用紫杉醇和褪黑素对二者联合应用其生长曲线，集落形成试验的结果无明显差别。结论：紫杉醇与褪黑素联合应用对ＨｅＬａ细胞的生长影响与单独应用二者无明显判别。     

MMP-9与TIMP-1的表达及其与宫颈癌浸润、转移的关系

目的检测MMP-9和TIMP-1在宫颈癌中的表达,探讨其临床病理学意义。方法应用免疫组化SP法检测64例宫颈癌、27例宫颈非典型增生和16例正常宫颈组织中MMP-9和TIMP-1的表达,分析其与宫颈癌临床病理分期、分化、淋巴结转移的关系及两者的相关性。结果MMP-9和TIMP-1在正常宫颈黏膜、非典型增生、癌组织中的表达差异有统计学意义（P〈0.05）,在宫颈癌不同临床病理分期、有无淋巴转移组中的表达差异有统计学意义（P〈0.05）,在不同分化组的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;两者的表达呈负相关关系。结论MMP-9和TIMP-1在宫颈癌组织中的表达和临床分期、淋巴结转移有关,和分化无关,两者的表达具有相关性。     

SRB法检测4HPR对HeLa细胞生长的影响

目的；检测４ＨＰＲ对ＨｅＬａ细胞生长的影响。方法；采用ＳＲＢ实验法。结果：１０６４４ｇ／ｍｌ，２μｇ／ｍｌ，４μｇ／ｍｌ，８μｇ／ｍｌ，１６μｇ／ｍｌ，的４ＨＰＲ作用２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ后ＨｅＬａ细胞其ＯＤ值分别为１．７８，１．７７，１．７２，１．６８，１．６０，１．５９，１．５５，１．４０，１．３３，１．３２，１．１６，１．０３，０．７５，０．６９，０．５４。对照组为１．７０，１７１，１．７７     

dn HIF-1α对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用.方法 将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果 重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05).转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达.提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用.     

红甜菜提取物对HeLa细胞增殖和荷瘤鼠瘤体生长的影响

目的 研究红甜菜提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法 采用细胞计数法观察红甜菜提取物对HeLa细胞的抑制作用,在人宫颈癌荷瘤鼠模型上观察红甜菜提取物对肿瘤生长的抑制作用,并用病理切片观察瘤体细胞变化。结果 甜菜提取物对人宫颈癌HeLa细胞具有抑制作用,并具有剂量–时间依赖关系。荷瘤鼠动物实验表明,红甜菜提取物对裸鼠肿瘤生长也具有抑制作用,剂量为20 mg/d时抑瘤率为40%;摄入红甜菜提取物组的裸鼠瘤体细胞出现坏死。结论 红甜菜提取物对HeLa细胞的生长和对荷瘤裸鼠肿瘤生长具有抑制作用。