腺嘌呤诱导不育大鼠精子中精蛋白mRNA的研究

目的 :研究正常生育大鼠和腺嘌呤诱导的不育大鼠附睾精子中精蛋白及其 m RNA的含量以及它们的相关性。方法 :大鼠喂服腺嘌呤制备不育动物模型 ,收集对照组和不育组大鼠附睾精子 ,提取总碱性核蛋白 ( TNBP) ,电泳分析 ;提取总 RNA,用 RT- PCR分析精蛋白 m RNA相对含量。结果 :不育组大鼠附睾精子中精蛋白含量明显低于正常组 ( P<0 .0 1 ) ,对精蛋白 m RNA的分析也得到了相似结果 ,正常组和不育组相比较 ,有非常显著差异 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :精子中精蛋白 m RNA的相对含量能反映出精子中精蛋白的相对含量 ,为男性不育症的基因诊断提供了新思路     

人与大小鼠精子中精蛋白mRNA的分析

目的 :研究人与大小鼠精子中精蛋白 m RAN存在情况。方法 :应用 RT-PCR法分别从人、大鼠和小鼠精子总 RNA中扩增得到精蛋白 (protamine) c DNA片段。结果 :人、大鼠和小鼠精子中均存在精蛋白基因相应的 m RNA,并发现头部畸形率高的精子中精蛋白 m RNA明显减少。结论 :精子的 m RNA有可能代表精子发生过程中某些基因的表达情况     

P27，P73和CyelinD1蛋白在子宫内膜癌中表达的相关性

目的：探讨P27,P73和CyclinD1在子宫内膜癌组织中的表达及其相关性。方法：采用免疫组化SP法对14例正常增殖期子宫内膜、19例不典型增生内膜以及43例子宫内膜癌组织中P27,P73和CyciinD1蛋白的表达进行研究。结果：在子宫内膜癌中。P27表达降低或缺失,P73和CycJinD1表达明显增高,与正常增殖期子宫内膜和不典型增生内膜相比差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。P27的表达缺失、P73的过表达与组织学分级有关,CyclinD1的高表达与手术一病理分期有关。有肌层浸润者P27,P73和CyclinD1的表达与无肌层浸润者差异均有统计学意义（均P〈0．05）。有淋巴结转移者P73和CyclinD1均明显高表达。子宫内膜癌中,P27与CyclinD1呈负相关（R=-0．3627,P〈0．05）,P73与CyclinD1呈正相关（r=0．3923,P〈0．05）。结论：子宫内膜癌中P27表达缺失,P73和CyclinD1过度表达,联合检测可能成为子宫内膜癌高危人群早期筛查、判断内膜癌的生物学行为及评估预后的参考指标。     

层粘连蛋白受体基因表达与子宫内膜癌的关系

目的 探讨67ku层粘连蛋白受体(67LR)基因表达与子宫内膜癌的关系。方法 应用免疫组化SABC法检测1990～2001年收治的44例子宫内膜癌、15例子宫内膜增殖症、47例正常子宫内膜组织中67LR的表达;采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法定量检测2000～2001年收治的24例子宫内膜癌、16例子宫内膜增殖症、29例正常子宫内膜新鲜组织67LRmRNA水平。结果 67LR在子宫内膜癌、子宫内膜增殖症的表达较正常子宫内膜均明显增高(P<0.001),但前两组的表达差异无显著性(P>0.05)。高、中分化子宫内膜腺癌67LR表达较低分化者为高(P<0.05);但高、中、低分化组病例67LR mRNA水平差异无显著性(P>0.05)。67LR mRNA水平与免疫组化蛋白表达无明显相关(P>0.05)。结论 67LR蛋白过度表达可能与子宫内膜癌的发生、发展有关。67LR mRNA水平与蛋白表达水平无相关。     

P27,P73和CyclinD1蛋白在子宫内膜癌中表达的相关性

目的:探讨P27,P73和CyclinD1在子宫内膜癌组织中的表达及其相关性。方法:采用免疫组化SP法对14例正常增殖期子宫内膜、19例不典型增生内膜以及43例子宫内膜癌组织中P27,P73和CyclinD1蛋白的表达进行研究。结果:在子宫内膜癌中,P27表达降低或缺失,P73和CyclinD1表达明显增高,与正常增殖期子宫内膜和不典型增生内膜相比差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。P27的表达缺失、P73的过表达与组织学分级有关,CyclinD1的高表达与手术-病理分期有关。有肌层浸润者P27,P73和CyclinD1的表达与无肌层浸润者差异均有统计学意义(均P0.05)。有淋巴结转移者P73和CyclinD1均明显高表达。子宫内膜癌中,P27与CyclinD1呈负相关(r=-0.3627,P0.05),P73与CyclinD1呈正相关(r=0.3923,P0.05)。结论:子宫内膜癌中P27表达缺失,P73和CyclinD1过度表达,联合检测可能成为子宫内膜癌高危人群早期筛查、判断内膜癌的生物学行为及评估预后的参考指标。     

原发上皮性卵巢癌组织中多药耐药及其相关蛋白基因表达的研究

迄今,在mRNA水平上同时检测多药耐药（MDR）基因和多药耐药相关蛋白（MRP）基因在卵巢癌组织中表达的研究,国内尚未见报道。我们应用半定量、逆转录．聚会酶链反应（RT-PCR）技术,检测了对例原发上皮性卵巢癌（卵巢癌）组织中MDRI和MRP基因表达情况,并对其与癌细胞体外药物     

子宫内膜癌Cyclin D1 bc1—2基因表达及其与Ⅰ Ⅱ型关系的研究

目的 探讨Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、Ｂｃ１－２与子宫内膜癌发生、发展的关系以及与雌激素在致癌过程中有无内在联系。方法 采用免疫组化法检测了２５例正常子宫内膜、２６例子宫内膜增生、６９例子宫内膜癌组织中Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｂｃ１－２的表达情况。结果 增生期子宫内膜Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达明显高于分泌期,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达与子宫内膜癌的临床病理特征无关,但在Ⅰ型中的表达明显高于Ⅱ型。ｂｃ１－２在正常增生期、复合增生、非典型增生、癌组织中依次下降,ｂｃ１－２表达与子宫内膜癌的临床病理特征无关,与分型也无关。结论 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１可能是雌激素致癌的部分分子途径。ｂｃ１－２可能与子宫内膜癌的发生早期有关。     

正常人前列腺外周带和移行带成纤维细胞差异性基因表达与蛋白分泌的研究

目的:寻找正常人前列腺外周带和移行带细胞在基因表达水平及相关信号通路蛋白表达水平的差异.试图从机理上探求两者在不同前列腺疾病中所占比例不同的原因.方法:用Trizol一步法从外周带(PZ)和移行带(TZ)成纤维细胞中抽提总RNA.通过定量RT-PCR技术测定CXCL1、CXCL2、CXCL3、IGFBP2、IGFBP3、IL-8、TA GLN、MEST的基因表达水平.此外,从PZ、TZ 成纤维细胞条件培养基中收集、浓缩分泌的蛋白,通过Western blotting技术比较分析分泌蛋白的水平.结果:一些分泌蛋白的基因表达水平在PZ与TZ成纤维细胞存在显著差别,其中CXCL1、CXCL2、CXCL3与IL-8的mRNA在TZ成纤维细胞中的表达水平明显高于其在PZ成纤维细胞中的表达水平.而IGFBP2、IGFBP3与TAGLN的mRNA在PZ成纤维细胞中的表达水平明显高于其在TZ成纤维细胞中的表达水平.IGFBP3与TAGLN在PZ成纤维细胞中的蛋白分泌水平明显高于其在TZ成纤维细胞中的蛋白分泌水平.结论:PZ与TZ成纤维细胞中基因表达及蛋白分泌水平的差异可能参与导致前列腺癌与前列腺增生(BPH)发病率在前列腺不同区带的显著区别.     

37LRP基因表达载体构建及蛋白表达的研究

目的 研究克隆宫颈癌HeLa细胞层粘连蛋白受体前体(37-kDa laminin receptor precursor, 37LRP)并构建表达载体及成功表达该受体蛋白。 方法 采用RT-PCR从宫颈癌HeLa细胞总RNA中扩增人37LRP受体的cDNA序列,克隆到pGEM-T Easy载体上。经过序列测定后插入到表达载体pET22b(+),在大肠杆菌BL21(DE₃)中诱导表达。 结果 构建的表达载体经限制性内切酶分析和DNA测序并与GenBank比对,证明所构建的重组质粒含有37 LRP插入片段,经诱导后表达37 LRP蛋白。 结论 成功构建了重组人37 LRP表达载体,并获取重组人37 LRP蛋白,为临床肿瘤的研究奠定了基础。     

卵巢上皮性肿瘤中细胞周期素D1蛋白与p16蛋白的表达及其临床意义

目的　探讨细胞周期素D1蛋白 (cyclinD1)与 p16蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义。 方法　 1998年 1月至 2 0 0 0年 1月采用免疫组化SP法 ,检测恶性、交界性、良性卵巢上皮性肿瘤、正常卵巢组织中的cyclinD1蛋白和p16蛋白的表达。结果　cyclinD1蛋白、p16蛋白表达的阳性率分别为恶性 5 0 %和 4 0 %、交界性30 %和 5 0 %、良性卵巢上皮性肿瘤 0和 80 %、正常卵巢组织中 0和 90 %。恶性卵巢上皮性肿瘤与良性卵巢上皮性肿瘤及正常卵巢组织之间比较 ,cyclinD1蛋白的表达差异有显著性意义 (P <0 0 1) ,p16蛋白的表达差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。在恶性程度较高 ,组织分化差 ,晚期的恶性卵巢上皮性肿瘤中cyclinD1蛋白表达率高 ,p16蛋白的表达率低。相关性分析显示 ,cyclinD1蛋白与 p16蛋白的表达呈负相关。 结论　cyclinD1蛋白的过度表达与 p16蛋白表达的缺失在恶性卵巢上皮性肿瘤的发生、发展中起一定作用 ,二者可能存在相互抑制机制。     

人HoxA10基因真核表达载体构建和表达产物的鉴定

目的:克隆人子宫内膜容受性标志分子HoxA10基因的cDNA,转入真核细胞载体,并在293T细胞中进行表达和鉴定。方法:应用RT-PCR法从人子宫内膜组织中扩增HoxA10基因的cDNA编码区序列,将PCR产物克隆至pCMV-HA真核表达载体中,测序鉴定该载体。以LipofectamineTM2000将该载体转染入293T细胞中,Western blotting检测HoxA10蛋白的表达。结果:PCR扩增出的人HoxA10基因cDNA正确克隆到了pCMV-HA载体,成功构建了pCMV-HA-HoxA10重组载体;将其转染入293T细胞,用HoxA10和HA抗体进行Western blotting,均检测到了融合蛋白的表达。结论:携带有HA蛋白标签的人HoxA10基因的真核表达载体pCMV-HA-HoxA10克隆及表达成功,为进一步研究HoxA10与其它蛋白质的相互作用以及建立HoxA10的荧光素酶报告基因分析系统奠定了基础。     

子宫肌瘤发病相关基因表达研究

目的:筛选子宫肌瘤发病相关基因。方法:分别提取10对子宫肌瘤及肌层组织mRNA,用Cy5-dCTP和Cy3-dCTP逆转录标记cDNA探针,然后与含14000条cDNA的表达谱芯片进行杂交,洗片。将所得芯片进行扫描、聚类分析,获得差异基因表达信息。结果:共得到39条表达差异基因,5条表达上调,34条表达下调。表达下调的基因主要与细胞周期、增殖与凋亡、DNA合成与转录及细胞信号转导相关。结论:子宫肌瘤的发生与发展可能与这些基因的表达失调相关。     

原因不明月经过少雌激素受体α基因多态性及其表达的研究

目的:探讨原因不明月经过少雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)基因多态性及其与表达的关系。方法:选择100名原因不明月经过少患者为实验组,100名月经正常人群为对照组。应用分子生物学的方法分析ERa基因PvuⅡ,XbaⅠ限制性片段长度多态性。通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分析ERα表达。结果:P基因型频率实验组为47.5%,对照组为30.5%,OR=2.062。X基因型频率实验组为20.5%,对照组为30.5%,OR=0.588。PvuⅡ和XbaⅠ限制性片段长度多态性在两组中均呈多态性分布。实验组ERα的mRNA和蛋白质表达均比对照组低(P<0.05)。结论:ERα基因多态性与原因不明月经过少有关,P等位基因可能是其危险因素,X等位基因可能是其保护因素。ERα在子宫内膜中原因不明月经过少中的表达低于月经量正常子宫内膜,且可能与月经量多少有关。     

HOXA10基因在子宫内膜异位症不孕患者内膜组织中的表达及意义

目的:探讨HOXA10基因在子宫内膜异位症(EMs)不孕中的作用及作用机制。方法:以行腹腔镜手术并经病理确诊为EMs合并不孕症的患者为研究对象(18例,A组),以同期行腹腔镜手术的输卵管性不孕患者(18例,B组)、正常生育组(15例,C组)为对照。分别应用荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blotting等方法从mRNA及蛋白质水平检测HOXA10基因在EMs不孕症患者在位、异位子宫内膜以及对照组在位子宫内膜的表达。结果:HOXA10 mRNA及蛋白表达水平在C组的内膜较高;B组稍低于C组,但两者相比差异无统计学意义(P>0.05);A组的在位及异位内膜表达水平较C组明显降低(P<0.01);但A组的在位内膜与异位内膜基因和蛋白的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。结论:HOXA10基因在EMs不孕患者在位子宫内膜中的表达显著降低,可能是EMs不孕患者子宫内膜容受性降低,进而引起不孕的重要因素之一。     

脂多糖对子宫内膜细胞的炎症相关基因表达的影响

目的:探讨脂多糖(lipoppolysacchride,LPS)作用于人子宫内膜细胞引起的炎症相关基因表达谱的改变,为防治子宫异常出血提供靶基因。方法:收集增生期人正常子宫内膜3例进行传代培养,将收获的人子宫内膜细胞分LPS组与空白对照组,LPS组培养液中加入50μg/ml的LPS培养24h,应用基因芯片技术通过计算机扫描分析对照组和LPS组基因表达谱的差异情况。结果:与对照组比,LPS组出现表达差异的基因涉及很多方面的相关基因,其中与炎症相关的基因有IL-1β、IL-8等。结论:这些与炎症相关的基因可能与LPS诱导子宫异常出血有关。