儿童急性淋巴细胞性白血病IgH基因和TCR基因重排的研究

采用PCR或巢式PCR方法对71例未治疗的急性淋巴细胞性白血病（ALL）患儿骨髓样本的免疫球蛋白重链基因（IgH）和T细胞受体基因（TCR）进行了克隆性重排检测，结果显示在52例B系ALL及19例T系ALL中分别存在82．7％（43例）和15．8％（3例）的IgHCDRⅢ区域重排，而TCRVδ2Dδ3基因重排见于32．7％的B系ALL（17例）和63．2％的T系ALL（12例），二种基因重排在儿童ALL的覆盖面达到88．7％（63例），此结果提示IgHCDRⅢ和TCRVδ2Dδ3基因可作为监测儿童ALL的标志基因；采有相同方法对完全缓解期患儿的67份脑脊液标本进行了检测，结果显示9例存在IgHCDRⅢ基因重排，4例存在TCRVδ2Dδ3基因重排（与骨髓标本重排类型一致），提示采用PCR技术对ALL患儿CSF标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排的检测对早期诊断中枢神经系统白血病（CNSL）具有较大价值；采用有限稀释法对完全缓解期的儿童ALL病例骨髓样本进行上述二种基因重排的定量分析，结果提示对儿童ALL进行微小残留病（MRD）的持续追踪监测可指导化疗方法的选择，观察治疗效果并预测预后。     

降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的 以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排，探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法 盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA，TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增，检测降落式PCR的灵敏度。结果 琼脂糖电泳中，18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性。阳性标本经SSCP进一步分析，呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1％以上时可得到阳性扩增结果。结论 TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排，可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。     

降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的 以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法 盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增,检测降落式PCR的灵敏度。结果 琼脂糖电泳中,18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性,阳性标本经SSCP进一步分析,呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1%以上时可得到阳性扩增结果。结论 TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排,可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。     

老年人急性白血病T细胞受体VγI-Jγ基因重排分析

目的为研究老年人急性白血病分子生物学特点及临床意义。方法提取34例老年人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、9例老年人急性淋巴细胞白血病(ALL)及10名正常献血员DNA标本,应用PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排,对阳性的PCR产物进行SSCP分析。结果34例老年人ANLL中有16例(47.1%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,老年人ANLL TCRVγI-Jγ基因重排检测阳性率显著高于非老年人ANLL组(P<0.025)。9例老年人ALL中有7例(77.8%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,其中3例(33.3%)存在寡/亚克隆重排,老年人ALL寡/亚克隆重排阳性率显著高于非老年人ALL组(P<0.05)。10例正常献血员PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排均为阴性。TCRVγI-Jγ基因重排阳性老年人ANLL完全缓解率为25.0%(4/16),显著低于重排阴性老年人ANLL组(61.1%)(P<0.05)。结论应用PCR/SSCP方法分析老年人急性白血病TCRγ重排可作为疗效和预后判断的新指标。老年人急性白血病寡/亚克隆重排检测阳性率显著高于非老年人组可能是导致其疗效差的一个重要因素。     

PCR技术在中枢神经系统淋巴细胞白血病早期诊断中的意义

目的：探讨PCR技术对中枢神经系统白血病的早期诊断。方法：采用细胞分子生物学基因诊断技术－聚合酶链反应技术（PCR）检测脑脊液中白血病淋巴细胞的IgH和TCRγ基因重排。结果：确诊组15例脊液标本用PCR均检测到基因重排,检出率为100％,未确诊组10例脑脊液标本中有4例PCR检测出重排基因,该4例患者临床上均尚出现脑膜白血病的症状和体征。结论：PCR检测脑脊液中白血病淋巴细胞基因重排有利于CNLL的早期诊断,尤其是脑脊液中微小病变的监测。     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链基因重排及其临床意义

用多聚酶链反应技术扩增42例急、慢性白血病患骨髓白血病球蛋白重链（IgH)基因重排产生的第三互补决定区（CDR-Ⅲ）DNA序列。结果显示：35例淋巴细胞白血病中25例出现IgH基因单克隆性重排（71.4%)，其中急、慢性B淋巴细胞白血病各为80%（16/20）和87.5%(7/8)及2例T、B淋巴细胞双表型白血病，另外有1例急性未分化白敌国病也出现这种重排，而5例，急性T淋巴细胞白血病和6例急性髓细胞白血病均无重排，对3例CDR-Ⅲ阳性克隆的B-ALL病例在完全缓解期进行微小残留病变检测，其中2例PCR阳性病人先后复发，1例PCR阴性病人缓解持续时间明显长于阳性病人。     

PCR检测脑脊液白血病细胞IgH及TcRr基因重排意义初探

中枢神经系统白血病（CNSL）的诊断目前主要依据脑脊液穿刺细胞学检查和临床表现。由于细胞学检查的敏感性低，特异性差，当临床诊断为CNSL时，多已属疾病晚期，且常伴骨髓复发。脑脊液细胞免疫分型较上述方法敏感，但易产生假阴性，且为非特异性检查，为此，我们应用聚合酶链反应（peR）对脑脊液中白血病细胞k重链及TcRr基因重排进行了检测，并探讨其临床应用价值。1材料与方法1．l一般资料：根据全国小儿白血病诊疗方案，选择确诊急性淋巴细胞白血病患儿16例，其中男10例，女6例，年龄3－15岁，中位年龄7岁。共取脑脊液74份，5例初诊…     

分子双标记鉴别急性淋巴细胞白血病细胞克隆起源

采用多聚酶链反应（PCR）技术，检测30例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者IgH和TcRγ重排。结果显示：有23例至少可发现一种基因重排，其中，IgH重排11例，TcRγ重排4例，二者均重排8例。IgH重排多见于B－ALL，T－ALL则常见TcRγ重排，坦存在着系列交叉现象。结合免疫表型研究，有助于确定细胞克隆来源。采用PCR扩增、标记、制备的克隆探针进行分子杂交试验，可用于白血病缓解和复发或残留细胞克隆的检测。     

基因重排检测技术诊断脾脏淋巴瘤

目的:利用B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术,探讨1例原发性脾脏恶性淋巴瘤(PLS)基因重排检测结果.方法:从组织蜡块中切取组织片5～10张,提取基因组DNA,PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果.结果:脾脏淋巴瘤免疫组化证实为B细胞性滤泡性淋巴瘤.从24个不同部位取得的组织经PCR均扩增成功,所有部位组织T细胞受体基因重排阴性,22个部位组织B细胞单克隆性免疫球蛋白基因重排阳性,基因重排阳性率91.7%.结论:应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段,对脾脏淋巴瘤有较高的诊断价值.     

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法 采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果 63例ALL患者经PCR扩增发现41例(65.1%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%(14/15),77.8%(14/18),41.7%(5/12)和28.6%(4/14);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALLFLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL(41.7%,P<0.005);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者(28.6%,P<0.001)。63例ALL患者中仅有2例(3.2%)出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差。结论 B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。     

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：探讨初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排情况。方法：应用多聚酶链反应（PCR）检测19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果：19例标本中10例发生单一IgH基因重排，5例发生单-TCRγ基因重排，2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论：ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排，且存在着交叉重排现象。     

基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用

目的:建立基于克隆性分析技术的B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术,探讨B淋巴细胞免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排在恶性淋巴瘤临床诊断中的应用. 方法: 从组织蜡块中切取组织片5～10张,提取基因组DNA,PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果. 结果:20例良性淋巴组织反应性增生病例中, 淋巴细胞IgH及TCR基因重排均为阴性;18例T细胞非何杰金氏淋巴瘤中TCRγ基因重排12例, TCRβ基因重排3例,未见有IgH基因重排;32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性,有2例TCRγ和IgH基因重排均阳性;3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排;IgH及TCR基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义(P<0.05). 结论:应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段,且适用于石蜡标本以进行回顾性研究.     

干细胞白血病基因在急性淋巴细胞白血病的表达与预后

目的 探讨干细胞白血病（SCL）基因在急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达情况及临床意义。方法 采用RT－PCR技术检测SCL及其融合基因SIL－SCL在ALL细胞系和患者的表达情况，并观察其临床预后关系。结果 （1）SCL基因在ALL的表达率为51．2％，SIL－SCL基因仅在T－ALL中表达，占10．5％。（2）SCL阳性表达的ALL患者完全缓解率和生存率减低。结论 （1）SCL基因对ALL的发生有一定作用，其阳性表达是ALL预后不良因素之一。（2）SCL异常激活的方式以过量表达常见，基因重排较少见，染色体易位罕见。     

急淋患儿脑脊液中β2-微球蛋白和铁蛋白水平观察

目的观察急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿脑脊液β2-微球蛋白(β 2-MG)和铁蛋白(ferritin)水平的变化,了解其在急淋伴中枢神经系统性白血病(CNSL)中诊断及疗效观察的意义.方法用放射免疫分析法(RIA)与化学发光酶免疫分析法(CLEIA)分别检测31例急性淋巴细胞白血病患儿脑脊液中的β 2-MG和ferritin水平.结果 ALL伴CNSL组脑脊液中β 2-MG和ferritin分别为(2.37±0.84)ng/mL,(5.23±2.20)ng/mL,高于正常对照组和ALL不伴CNSL组(P＜0.05);ALL不伴CNSL组脑脊液中β 2-MG和ferritin分别为(1.17±0.42)ng/mL,(2.20±1.03)ng/mL,与正常对照组比较差异无显著性(P＞0.05);同时观察了3例CNSL患儿β 2-MG和ferritin水平的动态变化有2例患儿脑脊液中β 2-MG和fer-titin水平随病情好转而下降,1例患儿无明显变化.结论脑脊液β2-MG和ferritin的测定对急淋伴有CNSL的诊断起到一定的辅助作用,同时可用于疗效观察,而对不伴有CNSL时其临床意义不大.     

聚合酶链反应检测老年人急性白血病IgH基因重排的意义

目的为进一步了解老年人急性白血病的分子生物学特征。方法应用聚合酶链反应（PCR）检测28例老年人急性白血病免疫球蛋白重链（IgH）则基因重排结果66.7％（4／6）老年人急性淋巴细胞白血病（ALL）和40．9％（9／22）急性非淋巴细胞白血病（ANLL）存在IgH基因重排：IgH基因重排阳性老年人ANLL治疗缓解率（22．2％）显著低于IgH基因重排阴性老年人ANLL（66.7％）（P＜0.05）。结论应用PCR技术检测老年人急性白血病基因重排可帮助了解老年人白血病的分子生物学特征和预后,此方面尚需进一步研究。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理分析

目的按照WHO关于B细胞淋巴瘤的新分类,对我省部分弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)进行形态学、免疫学表型及基因重排的研究。探讨三结合方案在DLBCL中的诊断和鉴别诊断价值。方法收集28例弥漫性大B细胞淋巴瘤,进行组织形态学观察和免疫表型测定,同时采用PCR扩增对其进行免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体β基因(TCR-β)克隆性重排的研究。结果28例弥漫性大B细胞性淋巴瘤有四种变型,分别为中心母细胞型17例(60.7%),免疫母细胞型5例(17.8%),间变性大细胞型4例(14.3%),富于T细胞或组织细胞型2例(7.1%)。免疫组织化学标记:28例DLBCL肿瘤细胞CD20均阳性表达(100%);4例间变性大细胞型DLBCL肿瘤细胞CD30阳性表达(14.3%);1例中心母细胞型DLBCL肿瘤细胞CD5阳性表达(3.5%);1例富于T细胞或组织细胞型DLBCL肿瘤细胞Lysozyme阳性表达(3.5%)。PCR扩增检测结果:DLBCL中IgH重排9例(32.1%),TCR重排10例(35.7%),双阳性2例(7.1%),总的阳性率为75.0%。结论弥漫性大B细胞淋巴瘤的诊断和鉴别诊断,长期以来一直是病理工...     

多聚酶链反应检测白血病淋巴瘤TCRr基因重排的初探

现代医学分子生物学的发展证实,急性淋巴细胞白血病(ALL)和淋巴瘤等淋巴系恶性增殖性疾病,存在着特异的免疫球蛋白基因或T细胞抗原受体(TCR)基因的重排。用多聚酶链反应(PCR)将重排的基因片段放大100万倍,由此可检测出体内占细胞总数1/100000的恶性细胞,为疾病的早期诊断及治疗缓解后体内残留恶性细胞     

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义

目的研究急性淋巴细胞白血病（ALL）患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复（ITD）突变情况.方法采用多聚酶链反应（PCR）联合单链构象多态性（SSCP）方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变.结果63例ALL患者经PCR扩增发现41例（65.1%）FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%（14/15）,77.8%（14/18）,41.7%（5/12）和28.6%（4/14）;前前B细胞ALL和前B细胞患者ALL FLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL（41.7%,P＜0.005）;B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者（28.6%,P＜0.001）.63例ALL患者中仅有2例（3.2%）出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差.结论B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低.ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断.     

儿童急性淋巴细胞性白血病MRL与mdr 1基因表达动态监测

目的　探讨儿童急性淋巴细胞性白血病 (ALL)中 ,微小残留白血病 (MRL)与mdr 1基因表达动态监测的临床意义。方法　对 35例ALL患儿不同病期骨髓标本进行PCR或巢式PCR检测IgH和TCRVδ2 Dδ3 基因重排 ,同时应用半定量RT PCR检测mdr 1基因表达。结果　随着完全缓解期延续 ,IgH或 /和Vδ2 Dδ3 基因重排检出率逐渐下降 ,而mdr 1基因阳性表达检出率增加 ,IgH或 /和Vδ2 Dδ3 基因重排持续检测阳性或mdr 1表达水平增高者易复发。结论　动态监测MRL和mdr 1基因表达可判断疗效和预知复发 ,且较一次单独检测更为重要。当IgH或 /和Vδ2 Dδ3 转阴后检测mdr 1基因表达可作为预知复发的一个辅助指标     

急性白血病脑脊液β_2微球蛋白测定的临床意义

通过对15例急性白血病（AL）小儿脑育液β_2微球蛋白（β_2一MG）测定，观察AL脑脊液β_2一MG变化与中枢神经系统白血病（CNSL）的关系，并动态观察CNSL脑脊液β_2一MG与脑脊液细胞数的关系，以探讨其在CNSL早期诊断和早期治疗中的临床价值。1资料与方法三．及病例：15例中，男14例，女1例。年龄2－8岁。急性淋巴细胞白血病（ALL）10例（h9例人1例），急性非淋巴细胞白血病（ANIL）5例（MZ。2例、M5bl例。冰2例）。经治疗均完全缓解，肝肾功能告正常。豆．2脑脊液标本：AIL患儿在诱导缓解l－2周后进行药物鞘内注射预防CNSL…