红曲促进实验大鼠骨折愈合的骨组织形态计量学观察

[目的]探讨红曲治疗实验大鼠骨折的疗效。[方法]将64只Wistar大鼠制成前臂单骨折模型,随机分为红曲治疗组与生理盐水对照组。并于骨折后21d与42d,行骨组织形态学定性观察及骨组织形态计量学观察。[结果]红曲治疗后,明显加速了大鼠骨折愈合,骨组织形态计量学诸指标优于对照组,两组间差异具有统计学意义。红曲能促进骨折愈合后期骨痂的改建,促进板层骨的提早出现和髓腔提前再通。红曲组矿化骨痂面积、提高成骨细胞指数及促进基质的钙化明显大于对照组,P<0.05。[结论]中药红曲可以促进骨痂生长、提高成骨细胞指数、促进基质的钙化、加速骨痂改建从而促进骨折愈合。     

去势对雌性大鼠骨折愈合影响的实验研究

目的　了解去势对骨折愈合的影响。方法　选用 6月龄雌性 SD大鼠 ,试验分为假手术 (SHAM)组、去势 (OVX)组 ,OVX组切除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松动物模型 ,去势 8周后行右股骨中段骨折建立骨折模型 ,两组均在骨折后第 2、4、6、8周处死动物 ,放射学观察骨痂变化 ,骨痂 HE染色 ,光镜观察骨痂的组织学变化并计算骨小梁面积 ,骨折后第 8周右股骨的三点弯曲实验以检测骨折后骨的生物力学性能。结果　 1放射学 :OVX组骨痂密度影低 ,第 8周 OVX组骨折线仍然存在 ,而 SHAM组骨折线模糊。 2组织学 :OVX组软骨骨痂较多 ,新生骨小梁表面成骨细胞体积小 ,破骨细胞明显增多 ,第 8周明显出现骨小梁变细、中断 ;SHAM组软骨骨痂形成稍落后 ,但新生骨小梁表面成骨细胞体积大 ,排列紧密 ,随骨折的愈合骨小梁逐渐增加并逐步成熟 ,小梁骨粗大 ,紧密排列。SHAM组骨小梁面积在第 6、8周明显高于 OVX组。3生物力学实验 :SHAM组弯曲弹性模量高于 OVX组 ,其余各项均无显著性差异。结论　去势后骨吸收大于骨形成 ,出现疏松化表现 ,骨折的愈合质量差     

谷慷太林注射液促进大鼠骨折愈合的实验研究

目的：探讨骨组织提取的可溶性多肽片段药物谷慷太林注射液对大鼠骨折愈合的影响。方法：将48只SD大鼠制成双侧桡骨闭合性骨折模型，随机分为谷慷太林组和模型对照组，术后24h开始给药。分别于给药后第7、14、28、42天处死，对其桡骨骨折端行X线摄片观察、骨密度（BMD）测定及组织学观察。结果：X线片示谷慷太林组骨缺损骨小梁多，桥接骨缺损多。谷慷太林组各时段骨密度均高于模型对照组。组织学检查显示谷慷太林组骨性骨痂多，软骨性骨痂少，骨痂改建塑形和临床愈合快，优于模型对照组。结论：谷慷太林注射液具有明显促进骨折愈合的作用。     

中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的研究

目的探讨中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植促进骨折愈合过程中骨折端骨痂的生长情况。方法制备中药骨康含药血清并进行脂肪干细胞培养,移植脂肪干细胞到骨折部位,用x线观察骨折部位骨痂生长情况。结果第3代脂肪干细胞流式鉴定CD90阳性,CD34、CD49低表达。第1、2周各组骨折愈合情况差异无统计学意义。第4周干预组的骨折已完全愈合,断端边缘消失,骨折线局部密度增高,断端的塑形改造较其他各组明显提前;对照组骨折有较多骨痂形成,但断端边缘仍可见,骨折线局部密度稍淡;空白组骨折线模糊,可见骨痂形成,断端边缘清晰可见,整体愈合情况不如干预组和对照组。干预组、对照组DR片评分与空白组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,干预组与对照组差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植可促进骨质疏松性骨折愈合。     

三七总皂甙对实验性骨折愈合过程中低氧诱导因子-1αmRNA表达的影响

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在骨折愈合过程中的表达及三七总皂甙(total saponins of panax notoginseng,PNS)的干预作用。方法:在36只雄性SD大鼠左桡骨形成骨折模型,后随机分成对照组和PNS组,予以PNS100mg/kg/d腹腔内注射,对照组予以等量盐水。在骨折后7,14,21天X线观察骨折愈合及骨痂形成情况;HE染色了解骨痂形成情况;RT-PCR方法检测骨痂组织HIF-1αmRNA的表达。结果:X线显示PNS组骨痂形成明显加快,HE染色显示骨折断端成骨细胞数目及骨痂增多;对照组HIF-1αmRNA7天表达较低、14天达峰值、21天下降;PNS组7天、14天时点表达高于对照组(P0.05),21天低于对照组P0.05)。结论:PNS可上调骨折愈合过程中骨痂组织HIF-1α的表达,改善骨折部位的血供,促进骨折愈合。     

跌创散加用透皮剂外敷促进家兔骨折模型愈合的实验研究

目的通过观察跌创散加用透皮剂外敷促进家兔骨折愈合过程中ALP,Ca2＋,P3＋浓度变化,不同时期X线的变化及骨痂病理组织学改变,研究跌创散加透皮剂对闭合性骨折愈合作用的影响。方法取兔龄为6个月左右的雄性新西兰大耳白兔,造成左胫骨中下段闭合性骨折模型,骨折处连续给予跌创散加用透皮剂外敷,分别于2,4,8周观察兔左胫骨骨折愈合过程中血清ALP,Ca2＋,P3＋浓度变化,不同时期X射线的变化,骨痂病理组织学改变。结果跌创散加用透皮剂外敷能明显提高血清中ALP浓度及钙磷乘积;提高骨折断端愈合的X评分;增加骨痂中毛细血管和成骨细胞的数量;与模型组比较差异显著。结论跌创散加用透皮剂外敷具有明显促进家兔闭合性骨折愈合的作用,缩短骨折愈合时间。     

小鼠胫骨稳定性骨折模型制作及评价

目的 建立稳定的小鼠稳定性胫骨骨折模型.方法 通过骨髓穿钢针的方法,建立了小鼠稳定性胫骨骨折模型,取建模后7、14、21 d3个时间点小鼠,其中每个时间点6只,分别通过X线片、Micro CT以及病理切片来分析骨折愈合中骨痂大小变化及骨痂中细胞类型以评估骨折愈合过程.结果 本实验建立的小鼠胫骨稳定性骨折模型愈合,骨折后7d骨折断端存在极少量软骨痂,基本由未分化间充质细胞构成;第14天软骨痂开始钙化,骨痂中存在大量肥大软骨细胞;第21天骨折已基本愈合,新生骨形成,含有大量成骨细胞及骨细胞.结论 通过本方法所制作的骨折模型愈合过程良好,与临床的骨折愈合过程类似,能更客观地观察骨折愈合过程.     

倍美力对去势大鼠骨折愈合Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨倍关力在绝经后骨质疏松性骨折愈合中的作用及可能机制。方法选用6个月龄雌性sD大鼠,分为倍美力组、SHAM组（假手术组）和OVX组（去势组）。除SHAM组外其余两组均切除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松动物模型。去势后第8周各组行右股骨骨折建立骨折模型,同时倍美力组开始服药,按0．065rag／（kg·d）灌胃。三组均在骨折后第2、4、6、8周处死大鼠后行放射学观察骨痂变化;光镜观察骨痂苏木精一伊红染色及MASSON染色,Ⅰ型胶原的免疫组织化学染色及平均灰度值测定。结果①放射学：OVX组骨痂密度在骨折后2、4、6、8周时均低于其他两组,在8周时OVX组骨折线仍然存在,SHAM组和倍美力组骨折线模糊甚至消失;②骨痂组织学：OVX组与倍美力组和SHAM组相比,软骨成分较多,骨小梁表面破骨细胞明显增多,成骨细胞较小、梭形。第8周骨小梁变细、中断,SHAM组和倍关力组骨小梁表面成骨细胞体积大,胞浆丰富,破骨细胞少,随骨折愈合骨小梁逐渐增加,小梁骨粗大,排列紧密;③Ⅰ型胶原的MASSON染色和免疫组化：OVX组胶原稀疏、排列紊乱;其他两组胶原排列紧密、方向基本一致。Ⅰ型胶原的表达早期主要在软骨细胞及其周围基质,随后相继出现成骨细胞及细胞间质、骨痂周边组织、骨小梁。经图像分析测定在4周时各组的Ⅰ型胶原阳性表达均较2、6、8周强,倍关力组和SHAM组的Ⅰ型胶原阳性表达间无差异,但在各周均较OVX组表达明显增强。结论倍美力使Ⅰ型胶原合成增多,胶原形成紧密、排列一致,有利于骨质疏松性骨折的愈合。     

Feasibility and therapeutic effect of porcine-derived artificial bone in reconstruction of chest wall in dogs

目的 探讨用猪源生物材料骨进行骨性胸壁修复重建的方法及疗效.方法 对6只中国杂种犬进行右侧开胸,切除第5～7肋及肋间肌,胸壁缺损9 cm×8 cm,用人工骨替移植替代第5、6肋.术后1周及1、3、6、12个月分别行X线照片检查,观察人工骨有无发生移位、脱落、变形及植入骨溶解变薄.术后6、12个月各解剖2只动物,分别进行大体检查,观察人工骨与犬自体骨连接处有无骨痂形成,对位、对线是否良好,犬胸壁内外表面弧度与犬胸壁是否一致;进行组织学检查,观察植入骨与犬自身骨交界处组织结构及植入骨周围有无排异反应.余下2只进行长期观察,以预测人工骨长期置入体内的可能性及转归.结果 6例动物全部长期存活,X线检查人工骨无移位、脱落、变形及植入骨溶解变薄等.大体观察犬骨性胸壁内外表面塑形良好,人工骨与犬自体骨连接处有明显的骨组织及软骨组织和明显骨痂形成,移植骨对位、对线均良好;组织学观察植入骨与犬自身骨交界处由骨组织和软骨组织组成,外层为骨膜组织,有成骨细胞和破骨细胞存在,未见炎细胞浸润等排异反应,移植骨中段为纤维结缔组织包绕,内有新生血管形成.结论 猪源生物型人工肋骨是一种优质骨性胸壁重建材料,置入机体后具有逐渐溶解破坏并向自体骨转化倾向.     

谷慷太林注射液对骨折大鼠脑垂体中GH和TSH表达的实验研究

目的探讨骨组织提取液谷慷太林对大鼠骨折愈合的影响、垂体功能的调节作用及其促进骨折愈合的机制。方法取54只健康成年雌性SD大鼠(200±20)g,6只为空白对照组(B组),其余48只用定点手法折骨术造成大鼠双侧桡骨中段闭合性骨折,随机分为谷慷太林治疗组(G组)和骨折模型对照组(M组),每组24只。分别于第7、14、28、42天后各组随机处死6只大鼠,运用X线观察骨折愈合情况,利用骨密度测量仪检测骨折端骨密度值(BMD),并采用HE染色光镜下观察骨折处骨痂,运用免疫组化技术观察大鼠垂体中促甲状腺激素(TSH)和生长激素(GH)的阳性细胞数。结果 X线平片检查显示第14、28、42天时G组骨痂形成较M组明显;BMD结果显示骨密度值在各时间段G组均比M组高(P<0.05);骨痂组织学检查显示G组相对于M组断端周围的骨小梁数量增多,宽度较大,排列整齐,其形成的骨痂成熟。大鼠垂体中GH与TSH阳性细胞数的峰值在时间上G组均早于M组出现,尤其以第14、28天为明显(P<0.01)。结论骨组织提取液谷慷太林注射液具有促进骨折愈合的作用,其促进骨折愈合的途径之一可能与促进垂体合成与分泌生长激素、促甲状腺激素有关。     

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清，并与空白组对照，分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用，可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

芪芎健肾颗粒对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的疗效研究

[目的]验证中药芪芎健肾颗粒对大鼠系膜增生性肾炎的治疗作用。[方法]建立大鼠系膜增生性肾炎模型,观察大鼠24h尿蛋白定量、肾功能和肾脏病理形态学的改变。[结果]芪芎健肾颗粒低剂量组、芪芎健肾颗粒高剂量组与模型组比较,可降低尿蛋白(pro)、血肌酐(CR)、尿素氮(BUN)的含量,抑制系膜细胞增生和系膜基质增多。[结论]芪芎健肾颗粒对系膜增生性肾小球肾炎有治疗作用。     

补肾方含药血清处理的大鼠成骨细胞miRNA差异表达

目的 筛选补肾方含药血清干预的大鼠成骨细胞中差异表达的miRNA,为补肾方治疗骨质疏松症提供可供选择的目标miRNA,以探讨其通过调控靶基因表达发挥治疗效应的机制。方法 经细胞性状鉴定的原代大鼠成骨细胞用含药血清干预,采用miRNA芯片检测补肾方含药血清干预3 d与干预1 d的成骨细胞miRNA表达水平,并挑选差异表达2倍以上的miRNA进行定量PCR验证。结果 培养的原代细胞具有典型的成骨细胞性状特征。与对照血清相比,补肾方含药血清干预3 d的成骨细胞共有24个2倍以上表达差异的miRNA,其中上调的16个,下调的8个。差异表达2倍以上的miRNA定量PCR结果与芯片数据一致。结论 补肾方通过成骨细胞中差异表达的miRNA调控靶基因改善骨质疏松症。     

成人成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石的体外生物相容性

目的：研究成人骨髓成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石（carolline hydroxyapatite,CHA)在体外培养条件下的生物相容性。方法：抽取健康成人骨髓组织，置于含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养，分为CHA复合细胞组和单纯细胞组，不同时间用倒置相关显微镜，HE染色光镜及扫描电镜观察，MTT法进行细胞增殖测定，并进行细胞微量蛋白含量和碱性磷酸酶的定量检测，结果：成人骨髓成骨细胞体外培养时复合或不复合CHA均生长良好，表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性，CHA利于细胞的贴附，生长与增殖，并对细胞的功能无不良影响，结论：CHA是较理想的骨组织工程支架材料，成骨细胞复合CHA用于骨缺损的修复，具有广阔的临床应用前景。     

降钙素基因相关肽通过ERK途径促进成骨细胞增殖及单核细胞趋化蛋白-1的表达

降钙素基因相关肽(CGRP)是一种神经肽,它可以影响成骨细胞的增殖和骨形成,但其作用机制尚未明了。单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）是一种细胞因子,它可以促进单核巨噬细胞迁移,并在调节骨折后骨重建过程中发挥重要作用。本实验研究了降钙素基因相关肽对原代培养的成骨细胞增殖及表达单核细胞趋化蛋白-1的作用及机制。结果显示,CGRP可以通过ERK途径明显促进原代大鼠成骨细胞的增殖并在转录和蛋白水平明显促进MCP-1的表达,其作用呈时间和剂量依赖性。     

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法 取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果 加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论 补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。      

基因修饰的成骨细胞经髓芯减压移植治疗早期股骨头缺血性坏死的实验观察

目的 评价重组人肝细胞生长因子(hHGF)基因修饰的成骨细胞经髓芯减压移植促进早期股骨头缺血坏死的血管新生及局部骨修复的效果.方法 二步酶消化法和差速贴壁法分离培养胎兔成骨细胞,利用脂质体介导hHGF基因转染成骨细胞,然后通过髓芯减压移植于兔缺血坏死的股骨头内,同时设置单纯细胞移植组和髓芯减压组,于术后第2、4、8周通过CT、组织学和微血管墨汁灌注等观察血管形成及成骨情况.结果 分离培养的胎兔成骨细胞经Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶鉴定纯度较高.hHGF基因转染成骨细胞体外及体内检测均有hHGF蛋白的表达.通过髓芯减压移植细胞8周后转基因组和单纯成骨细胞组的新生骨小梁与单纯髓芯减压组比较有差异性,而术后2、4周转基因组的新生血管数(29.5±1.6)和(34.0±1.7)较对照组(20.6±1.9)和(25.6±2.2)差异有统计学意义(P＜0.01).结论 转染hHGF基因的成骨细胞移植于缺血坏死的股骨头后,早期可促进血管新生,并增加骨形成,显著促进坏死骨修复.     

PTH敲除小鼠体内血管形成因素对骨折愈合的影响

目的:探究内源性甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)缺失是否通过降低血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,导致骨折愈合过程中血管再生减弱,延迟骨折愈合?方法:构建PTH基因敲除(PTHKO)小鼠的骨折模型,摄X线片观察骨折愈合情况,用免疫组化方式检测骨合成代谢以及血管形成指标?结果:PTHKO小鼠VEGF表达量下降,血小板内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhension molecule,PEGAM)免疫组化阳性减少,骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)活性下降,骨折愈合延迟?结论:内源性PTH缺失可能通过减少间充质干细胞或成骨细胞释放VEGF,导致骨折端血管减少,成骨活性受到抑制,从而影响软骨内成骨,最终导致骨折愈合延迟?