Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的：探讨SurvivinsiRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。方法：肺癌A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA转染＋吉西他滨组和正常对照组;噻唑蓝比色法（MTT法）检测各组细胞增殖率的变化,流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率。结果：SurvivinsiRNA＋吉西他滨组细胞的增殖率和存活率均明显低于siRNA转染组和吉西他滨组（P〈0．01）;且siRNA＋吉西他滨组与siRNA转染组、吉西他滨组比较,更高比率的A549细胞被阻滞于S期（P〈0．01）。结论：siRNA沉默Survivin表达,增加了肺癌A549细胞对吉西他滨的化疗敏感性。     

人表皮生长因子受体-2 siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞株的抑制作用

目的：应用人表皮生长因子受体-2（C-erbB-2）基因的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）联合卡铂作用于肺腺癌A549细胞株,探讨siRNA敲除c—erbB-2基因联合卡铂对A549细胞的抑制作用,为开拓肺腺癌患者治疗的新途径提供实验依据。方法：应用CCK-8比色法检测不同浓度的卡铂在不同时间点对A549细胞的抑制率。设计并合成3对C—erbB-2siRNA（2621组、1724组、1491组）,分别转染肺腺癌A549细胞,应用实时荧光定量RT—PCR检测该基因的mRNA水平,筛选出最佳siRNA。再应用CCK-8比色法检测卡铂与c—erbB-2 siRNA联合应用时A549细胞的抑制率。结果：卡铂对A549细胞的生长有显著抑制作用。随着浓度的升高（r=0．415,P〈0．001）、作用时间的延长（r=0．689,P〈0．001）,细胞的抑制率升高。48h的IC50为25．99mg／L。3对sLRNA中2621组和1724组干扰效果最佳（F=11．854,P〈0．05）。CCK-8比色法检测显示,A549细胞的抑制率分别为：siRNA干扰组（28．68±1．98）％、卡铂组（45．63±2．14）％、siRNA＋卡铂组（59．62±1．35）％,其中siRNA＋卡铂组抑制率最高,与其它各组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：C—erbB-2 siRNA与卡铂具有协同作用,能抑制A549细胞增殖。     

RyR1基因沉默对人肺癌细胞生物学活性的影响

目的：利用针对兰尼碱受体1（Ryanodinereceptor1,RyRl）的小干扰RNA（siRNA）,研究沉默RyRl基因表达对人肺癌细胞株A549细胞生物学活性的影响。方法：（1）设计并合成针对RyRl基因的siRNA及阴性对照片段（不针对任何已知人的mRNA）和阳性对照片段（沉默GAPDH内参基因）,转染肺癌细胞A549;（2）实时荧光定量一PCR（Real—timefluorogenticquanti—tativePCR,FQ-PCR）和蛋白质印迹（Westernblot）分别检测转染后RyRImRNA表达及RyRl蛋白表达的变化;（3）MTT实验检测转染前后细胞增殖能力的变化;（4）流式细胞术检测转染前后细胞周期及细胞凋亡的状态。结果：（1）FQ-PCR结果显示RyRlsiRNA-1969可下调RyRlmRNA的表达,相对表达量与阳性对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;（2）转染RyRlsiRNA后RyRl蛋白表达下调;（3）MTT实验显示RyRl表达沉然后的A549细胞生长缓慢,与对照组相比较差异有统计学意义（P〈0.05）;（4）转染后细胞凋亡率较空白对照组（正常培养的A549细胞）和阴性对照组（转染阴性对照小RNA片段的A549细胞株）显著增高（P〈0.001）,处于G0~G1期的细胞明显增多（P〈0．001）。结论：RyR1基因可能为肺癌的基因治疗提供新策略。     

碱基切除修复基因HOGG1特异性锤头状核酶表达载体的构建及其功能的初步研究

目的阿霉素是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物,但其治疗作用的发挥受到耐药性的限制。目前研究显示阿霉索主要通过诱导活性氧自由基的产生而杀死肿瘤细胞。人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶（HOGG1）是一种DNA氧化损伤的修复酶,可特异性的切除由活性氧产生的8-羟基鸟嘌呤。针对这一机制,设计并合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因,构建其真核表达载体并初步探讨在该基因作用下,人肺腺癌A549细胞株对阿霉素的药物敏感性的影响。方法人工设计并合成核酶基因（RZ）,将其克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中,阳性重组子由BamH Ⅰ和EcoRⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE6的介导下引人A549细胞株,RT-PCR（逆转录多聚酶链反应）法鉴定转染,并半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。MTT法检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化;彗星试验检测细胞转染前后DNA氧化损伤修复能力的改变。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列成功克隆入pcDNA3．1（＋）中,命名为pcDNA3．1（＋）．RZ。经RT-PCR法鉴定质粒成功导入靶细胞中,并检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降36％,与空白细胞组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。MTT法检测显示转染细胞组对阿霉素的药物敏感性增加,与未转染细胞组之间差异具有统计学意义（P〈0．05）;彗星试验表明在1．0μg／mL阿霉素作用下,转染细胞组较未转染细胞组DNA损伤程度增加（P〈0．05）,但无时效关系。结论成功构建HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体。核酶在A549细胞内有效抑制靶基因HOGG1的表达。增加了该细胞对抗肿瘤药物阿霉素的敏感性。为进一步研究HOGG1基因的功能莫定了基础。     

TCF21基因对肺腺癌 A549细胞DDP化疗及放疗敏感性的影响

目的：为探讨转录因子21（TCF21）基因对人肺癌A549细胞放化疗敏感性的影响。方法利用慢病毒转染技术在肺癌A549细胞中高表达TCF21基因,以荧光定量PCR、Westernblot分析目的基因的表达,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测高表达TCF21肺腺癌A549细胞对顺铂（DDP）化疗敏感性的影响,平板克隆实验检测高表达TCF21肺腺癌A549细胞对放疗敏感性的影响。结果在72h时,随着DDP浓度的增高（0、0．625、1．250、2．500、5．000、10．000mg／L）,各组细胞的抑制率相应增高,高表达组各个药物浓度时的抑制率明显高于空载体组与未转染组（P＜0．05）,而后两者之间无明显差异;过表达TCF21组随着药物浓度及时间及的增加,高表达组抑制率相应增高（P＜0．05）;接受X照射后,未转染组、未转染＋放疗组、空载体组、空载体＋放疗组、高表达组及高表达＋放疗组克隆形成率分别为：95．17％±2．85％、88．20％±2．03％、93．80％±4．17％、85．60％±2．42％、71．67％±3．21％、56．00％±2．65％。结论TCF21基因高表达能显著增强肺癌A549细胞对放疗及DDP化疗敏感性。     

YAP对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨长链非编码RNA （lncRNA） MALAT1在YAP调控的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移中的作用,并阐明其作用机制。方法：选择A549和H1299细胞系分为Scramble siRNA组（转染Scramble siRNA）、siYAP-1组（转染siYAP-1）和siYAP-2组（转染siYAP-2）。RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中YAP和MALAT1mRNA及YAP蛋白表达水平;在A549和H1299细胞中分别转染pcDNA3.1-YAP质粒（pcDNA3.1-YAP组）、共转染pcDNA3.1-YAP质粒和siMALAT1-2（pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组）及对照质粒（pcDNA3.1-YAP+Scramble siRNA组）,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果：siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中YAP mRNA及蛋白表达水平均明显低于Scramble siRNA组（P<0.05）,siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中MALAT1mRNA表达水平低于Scramble siRNA组（P<0.05）;与pcDNA3.1-YAP组比较,pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组A549和H1299细胞增殖能力降低（P<0.05）,H1299细胞迁移能力降低（P<0.05）。结论：在NSCLC细胞中,YAP通过调控lncRNA MALAT1的表达促进细胞的增殖和迁移。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

人肺泡上皮细胞A549中细胞间粘附分子1的siRNA构建探讨

【摘要】〓目的〓构建A549细胞中细胞间粘附分子 1（ICAM 1）的小干扰RNA,探讨ICAM 1特异性siRNA能否抑制LPS诱导A549细胞ICAM 1的表达。方法〓采用化学合成法构建A549细胞ICAM 1的小干扰RNA。LPS诱导A549细胞ICAM 1表达,用RT PCR和流式细胞仪分别从mRNA和蛋白水平检测ICAM 1的表达。使用阳离子脂质体Lipofectamin2000转染 ICAM 1siRNA到A549细胞,再用LPS刺激A549细胞,RT PCR和流式细胞仪分别检测RNA干扰A549细胞后ICAM 1的mRNA和蛋白表达。结果〓LPS可以诱导A549细胞ICAM 1的表达,但LPS浓度过大损伤细胞。10 ng/ml的LPS组和100 ng/ml的LPS组OD值相比,两组OD值之间差异有显著性(P ＜0001)。10 ng/ml的LPS作用A549细胞8 h左右,细胞无明显损伤;10 ng/ml LPS作用A549细胞1h后,ICAM 1 mRNA的表达上调（P ＜005）,而ICAM 1蛋白水平增加不明显;10 ng/ml LPS作用A549细胞4h后,ICAM 1 mRNA表达水平明显增加（P ＜005）,ICAM 1蛋白水平也增加明显。通过化学合成法构建ICAM 1的siRNA,筛选出最优siRNA。转染 ICAM 1siRNA后,LPS刺激A549细胞的ICAM 1的mRNA和蛋白表达水平增加不明显。结论〓通过化学合成法构建的ICAM 1siRNA,可以有效地干扰ICAM 1的表达,ICAM 1siRNA降低了LPS诱导的ICAM 1的表达。     

miRNA-34c对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应

目的研究肺腺癌A549细胞中miRNA-34e的辐射增敏效应。方法单独转染miRNA．34e序列或单独照射或转染和照射联合处理细胞后,采用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,藻红B染色法观察细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白的表达。结果转染联合照射处理组的抑制率及凋亡率都较单独转染或单独照射组明显增高（均P〈0．05）,且随miR-34e转染浓度的增加而增高（均P〈0．05）。细胞周期检测结果显示,细胞明显阻滞于G1／G0期（P〈0．05）。联合处理的细胞p53蛋白表达量较单独照射组增加,且呈miRNA．34c浓度依赖性增加（P〈0．05）。结论miRNA-34c对肺腺癌细胞A549有辐射增敏效应,可强化p53蛋白的表达,诱导细胞G1／G0期阻滞和凋亡。     

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

目的：探讨高迁移率蛋白 A1（HMGA1）siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素（E-cadherin）基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的 HMGA1 siRNA 转染人肝星状细胞 LX-2（LX-2）后沉默 HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量 PCR（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 LX-2细胞中HMGA1、α-SMA 和 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测 LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA 序列1组沉默效果最好。 TGF-β1刺激组与 TGF-β1＋ NC-siRNA 组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 、E-cad-herin 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义（P ＞0．05）,细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组（P ＜0．05）,E-cadherin 表达显著低于正常对照组（P＜0．05）;TGF-β1＋ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的 mR-NA 及蛋白表达水平较另外3组均显著下降（P＜0．05）,E-cadherin 表达水平显著增高（P＜0．05）。结论靶向 HMGA1的 siRNA能够沉默 LX-2中 HMGA1的表达;抑制 TGF-β1诱导的 LX-2增殖水平,提示 HMGA1参与了 TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。     

Rap2c基因真核表达质粒的构建与表达

目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系,克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA,构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2c,酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞,Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建,Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒,为后续研究奠定了基础。     

RNAi cyclin E对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨RNAi cyclin E对肝癌细胞生长的影响。方法:肝癌细胞系HepG2采用体外培养,选取siRNA合成双链发卡样DNA;将其重组入pGFP-V-RS得到重组子pGFP-V-RS-siCE951和pGFP-V-RSsiCE1122;两重组子分别进行DNA序列测定、同源性比较;将两重组子和pGFP-V-Con分别转入人肝癌HepG2细胞中,同时设空白对照组(不转染任何质粒,仅加转染试剂)。检测4组HepG2细胞cyclin E mRNA表达情况及细胞的增殖情况。结果:经过同源性检索和优选确定cyclin E基因的siRNA载体pGFP-V-RSsiCE951和pGFP-V-RS-siCE1122;干扰1组(转染pGFP-V-RS-siCE951)和干扰2组(转染pGFP-V-RSsiCE1122)细胞cyclin E mRNA的相对表达量显著低于空白对照组和无关siRNA对照组(P<0.05);干扰1组和干扰2组与空白对照组和无关siRNA对照组比较,在3、4、5 d细胞孔内的吸光度值显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:siRNA载体pGFP-V-RS-siCE951和pGFP-V-RS-siCE1122转染人肝癌HepG2细胞能显著降低细胞cyclin E基因的表达,是理想的siRNA靶区段。抑制肝癌HepG2细胞cyclin E基因表达,可以降低肝癌HepG2细胞的生长速度。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

纳米载体PEI介导IGF1R-siRNA对A549肺癌细胞增殖活性影响的初步研究

目的 以纳米载体聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）介导人胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R）小干扰（small interfering RNA,siRNA）质粒转染A549肺癌细胞,并初步观察沉默IGF1R基因对A549肺癌细胞体外增殖活性的影响.方法 设计IGF1R小干扰序列,构建PSUPER-IGF1R-siRNA质粒,PEI介导转染A549肺癌细胞,台盼蓝染色法和MTT法测定细胞存活率.结果 测序结果显示构建质粒与基因库IGF1R基因序列一致.PEI介导PSUPER-IGF1R-siRNA质粒转染A549肺癌细胞后,台盼蓝染色法和MTT 法检测结果显示细胞存活率降低,与生理盐水组和pSUPER-EGFR质粒对照组间的差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 pSUPER-IGF1R-siRNA质粒构建成功,PEI介导其转染A549肺癌细胞后对细胞有生长抑制作用.     

丙型肝炎病毒NS3基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达。方法:以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因,将其插入克隆载体pMD18-T中,鉴定后与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,用脂质体介导法转染HeLa细胞,间接免疫荧光法及Western blot鉴定转染后HCVNS3蛋白的表达。结果:PCR扩增的NS3序列正确,构建的真核表达载体成功转染HeLa细胞,表达的NS3蛋白相对分子量为70kD。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/NS3,并在HeLa细胞中获得表达。     

c-myc RNA干扰增强肺腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的：探讨c-mycRNA干扰后肺腺癌细胞A549对吉西他滨敏感性的改变。方法：构建c-myc特异RNA小干扰（siRNA）的表达载体,转染A549细胞,G418筛选出稳定表达c-myc特异siRNA的细胞株,荧光实时定量RT-PCR和免疫印迹检测c-myc基因表达水平。吉西他滨作用于干扰有效A549细胞,分为GE＋siRNA组、GE组、siRNA组和空白对照组。每组12例,四甲基偶氮唑蓝法检测吸光度,流式细胞仪测凋亡率。结果：成功构建c-myc-siRNA表达载体。c-myc基因mRNA和蛋白表达下降71.9%和85.6%。吉西他滨作用于c-myc-siRNA细胞其吸光度在各时间点较单用吉西他滨组、单用c-myc-siRNA组以及对照组均下降（P＜0.01）,凋亡率增加（P＜0.01）。结论：c-mycRNA干扰后A549细胞的增殖减慢,对吉西他滨的敏感性增加。     

应用荧光定量PCR和Western—blot检测RNA干扰肺腺癌A549细胞STAT3基因表达水平的实验研究

目的：研究RNAi技术对人肺腺癌A549细胞系中STAT3基因的阻断效应,探讨STAT3在肺癌中的重要作用,为肺癌的基因治疗寻找新的靶点。方法：将化学合成siRNA用脂质体介导法转染肺腺癌A549细胞,应用荧光定量PCR法检测RNA干扰后STAT3 mRNA表达量,得出抑制率。应用Western-blot检测RNA干扰后对STAT3蛋白表达的影响。结果：成功将siRNA转染肺腺癌A549细胞,荧光定量PCR结果显示,在转染24h、48h、72h后,各干扰组与阴性组比较STAT3基因表达量明显下调（P〈0.05）,Western blot显示转染前后STAT3蛋白的表达水平明显受到抑制,干扰组与阴性组空白组相比具有显著差异（P〈0.05）,内参基因在各组的表达量无明显差异。结论：将合成的STAT3 siRNA能有效抑制STAT3蛋白的表达、降低STAT3 mRNA水平,对STAT3有高效和特异的沉默作用,以STAT3为靶点的RNA干扰技术可望成为肺癌基因治疗的新策略。     

靶向siRNA沉默Akt1基因表达及其对肺癌培养基促内皮细胞迁移的抑制作用

目的:研究小干扰RNA(siRNA)对血管内皮细胞Akt1基因表达的沉默作用及其对肺癌A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞为靶细胞,设计针对Akt1基因mRNA的siRNA(siAkt1),利用阳离子脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞,采用半定量PCR技术(RT-PCR)检测Akt1mRNA的表达,用Western blotting技术检测Akt总蛋白表达。同时用体外"伤口愈合"实验观察细胞迁移。结果:筛选出的siAkt1能显著抑制内皮细胞Akt1mRNA(P<0.01)和Akt总蛋白的表达(P<0.05),A549细胞条件培养基显著促进人脐静脉内皮细胞迁移(P<0.05),但对转染siAkt1的人脐静脉内皮细胞迁移没有促进作用(P>0.05)。结论:特异性siRNA通过有效抑制Akt1基因的表达而抑制A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的作用,这为肺癌血管生成干预治疗提供了新的理论基础。     

siRNA靶向沉默HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭的影响

目的:探讨质粒介导RNA干扰抑制HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭能力的影响。方法:利用基因工程方法构建HIF-1α的干扰表达载体,并将其转染至肺腺癌A549细胞;分别用RT-PCR方法、Western blot方法检测细胞转染前后HIF-1α以及MMP-2的mRNA及蛋白表达的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测转染前后肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:转染后肺腺癌A549细胞中HIF-1α和MMP-2的mRNA表达分别下降86%和64%(P<0.05)。转染后细胞蛋白表达明显下降。转染前后穿膜细胞数分别为(135.2±13.2)、(63.7±10.5),差异具有统计学意义(P<0.05)。转染前后划痕宽度分别为(0.48±0.14)、(1.04±0.15)mm,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RNAi可有效抑制HIF-1α的表达,同时可结合MMP-2启动子下调MMP-2基因和蛋白的表达,降低肺癌A549细胞的转移和侵袭能力。     

上调NDRG1基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响

［摘要］目的: 建立稳定转染N myc下游调节基因1（N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1）的A549细胞株,探讨NDRG1对A549细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制。方法: 经脂质体介导将含有NDRG1的重组表达质粒转染人肺腺癌A549细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆并进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白质印迹鉴定;qRT-PCR和蛋白质印迹检测阳性细胞克隆P21及鼠双微体基因2（murine doubleminute 2,MDM2）的表达;MTT比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测阳性细胞克隆凋亡率。结果: 成功建立高表达NDRG1的阳性A549细胞克隆（N11）;N11细胞P21表达及细胞凋亡率显著增高（P<0.05）,而MDM2表达及细胞增殖显著降低（P<0.05）。结论: 上调A549细胞NDRG1表达后,细胞凋亡增加而细胞增殖降低,其作用机制可能与P21表达增高而MDM2表达降低有关。