TNF-α反义寡核苷酸对马桑内酯刺激的星形胶质细胞的影响

为进一步探讨TNF-α在星形胶质细胞激活中的作用，用TNF－α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯（coriaria lactone,CL)诱导的星形胶质细胞TNF－α的产生，观察NFκBq65核转位和IkBa降解的变化。在应用TNF－α反义寡核苷酸后，由CL刺激引起的TNFα生成在2、4、12、24h均显著减少，NFkBp65核转位在相同的4个时间点也均受到明显抑制，相应胞浆蛋白的IkBa降解也低于对照组。实验结果表明：由CL诱导产生的TNF－α在星形胶质细胞的激活过程中发挥重要作用。     

大鼠星形胶质细胞体外分泌雌激素的检测

目的　测定大鼠星形胶质细胞 (astrocyte ,AST)培养液中雌激素的浓度。方法　取新生 2d大鼠大脑皮层进行AST原代及传代培养 ,分别于传代培养的第 0、7、14、2 1天进行细胞计数 ,同时ELISA方法测定培养液中雌二醇 (E2 )浓度。结果　细胞数量分别为 1× 10 4/ml、1.1× 10 6/ml、1.4× 10 6/ml、1.5× 10 6/ml;培养液中雌激素 (E2 )浓度分别为 (pg/ml) :0、( 117 0 3± 2 1 3 2 )、( 2 66 91± 2 2 0 3 )、( 2 5 2 62± 2 7 99)。第 0天 (换液当天 )培养液中未检测出雌激素 ,随着培养时间的延长雌激素浓度迅速增加 ,14d左右达到高峰 ,以后逐渐降低 ,但 2 1d时培养液中雌激素仍然保持较高的浓度。结论　体外培养新生大鼠大脑皮层AST可以分泌雌激素。     

氟西汀对体外培养星形胶质细胞活性及脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的 通过体外培养星形胶质细胞,观察氟西汀对星形胶质细胞的活性及对脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞释放肿瘤坏死因子-α( TNF-α)的影响.方法 体外分离、纯化大鼠星形胶质细胞.星形胶质细胞接种到96孔板中,以浓度为(5,10,20,40)μM的氟西汀孵育24h,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测星形胶质细胞增殖活性;星形胶质细胞接种至48孔板,经(5,10,20,40) μM氟西汀预处理后再用1μg/ml LPS刺激,酶联免疫吸附(Elisa)法检测各组上清TNF-α的水平.结果 氟西汀浓度为20 μM,40μM时星形胶质细胞的增殖活性(OD值:0.23±0.014,0.24 ±0.012)与对照组(OD值:0.20±0.017)相比明显增加(P＜0.05),经LPS刺激24h星形胶质细胞释放TNF-α水平(53.84±24.84) pg/ml与对照组(8.00±10.87) pg/ml相比明显增加(P＜0.01),氟西汀浓度为10μM明显抑制LPS刺激星形胶质细胞释放TNF-α(28.85±3.36) pg/ml(P＜0.05).结论 氟西汀在一定浓度范围内可促进星形胶质细胞的增殖活性,氟西汀浓度为10μM时可抑制LPS诱导的星形胶质细胞对TNF-α的释放.     

吗啡、纳洛酮对肿瘤坏死因子α刺激后的星形胶质细胞释放氨基酸的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激离体脊髓星形胶质细胞后兴奋性氨基酸(谷氨酸、天冬氨酸)的变化以及吗啡、纳洛酮干预后的影响.方法 体外培养星形胶质细胞,待细胞进入融合状态后随机分为8组:组1(不加任何药物);组2(10μg/L TNF-α);组3(10μg/L TNF-α 0.5μmol/L 吗啡);组4(10μg/LTNF-α 1.0 μmol/L 吗啡);组5(10μg/L TNF-α 2.0 μmol/L 吗啡);组6(10μg/L TNF-α 0.5μmol/L 纳洛酮);组7(10μg/L TNF-α 1.0μmol/L 纳洛酮);组8(10μg/L TNF-α 2.0μmol/L 纳洛酮).各组用新鲜Neurobasal/B27无血清培养液培养细胞,在相应组中加入上述终浓度的TNF-α、吗啡和纳洛酮,继续孵育30 min.用反相高效液相色谱分析方法测定各组上清液中兴奋性氨基酸含量.结果 组2兴奋性氨基酸含量明显高于组1,其差异有极显著性(P＜0.01).组3、组4和组5中兴奋性氨基酸的含量均低于组2,并且随着吗啡用量的增加而逐渐降低,组3与组2相比差异无显著性(P＞0.05),组4与组2相比差异有显著性(P＜0.05),组5与组2相比差异有极显著性(P＜0.01).组6和组7内兴奋性氨基酸的含量均低于组2,其差异有显著性(P＜0.05),组8兴奋性氨基酸含量明显低于组2,其差异有极显著性(P＜0.01).结论 TNF-α可明显促进脊髓星形胶质细胞释放谷氨酸和天冬氨酸;吗啡、纳洛酮能减少TNF-α刺激后脊髓星形胶质细胞释放谷氨酸、天冬氨酸.     

激活的星形胶质细胞分泌TNF-α对大鼠GABA表达的影响

目的 为进一步探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用。方法 选用肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactot-α，TNF-α)刺激及TNF-α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯(coriaria lactone，CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞，将上述两种条件培养基提取液(astrocytic conditioned medium，ACM)10μl分别注入正常Sprague-Dawley(SD)大鼠侧脑室，观察动物行为与脑电图的变化；用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid，GABA)表达水平的改变，并做显微图像分析。结果 ①侧脑室注射TNF-α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘-慢波癫痫样脑电图表现，大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值均明显低于对照组；②侧脑室注射TNF-α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液，大鼠无癫痫样行为发生，大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值与对照组无显著性差异。结论 ①激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α可诱导大鼠癫痫发作。②GABA表达的变化可能与癫痫发作有关。     

大鼠脊髓星形胶质细胞的体外培养与鉴定

目的:探讨大鼠脊髓组织星形胶质细胞体外培养、纯化和鉴定的方法。方法:于无菌条件下取新生1~2 d的SD大鼠脊髓组织,采用机械吹打及胰酶消化法制成细胞悬液,通过差速贴壁和恒温摇床震荡去除杂细胞,进行培养。用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色对所培养的细胞进行鉴定。结果:分离培养的细胞具有典型的星形胶质细胞的形态,传至第3代细胞纯度达95%以上。结论:成功建立了大鼠脊髓星形胶质细胞体外培养方法,为脊髓星形胶质细胞的实验研究奠定基础。     

丙泊酚对大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸的影响

目的研究被肿瘤坏死因子（TNF-α）刺激的大鼠脊髓星形胶质细胞（AST）在丙泊酚作用下兴奋性氨基酸（EAA）的释放情况。方法体外纯化培养大鼠脊髓星形胶质细胞，分为TNF-α终浓度为1ug／L及丙泊酚终浓度为25umol／L（TP组），TNF-α终浓度为1ug／L（T组），乳剂对照组（Intralipid，0．2ml／L、L组），空白对照组（C组）。用高效液相色谱仪测定各组培养细胞在0、30、60、120min时谷氨酸（Glu），天门冬氨酸（Asp）的释放量。结果与C组相比，L组的Glu、Asp释放量无明显差异（P〉0．05）；T、TP组Glu、Asp释放量随着时间的延长而增加；与T组相比，60、120man时，TP组Glu、Asp释放量明显减少（P〈0．05）。结论TNF-α刺激AST释放EAA，而丙泊酚对此有抑制作用。     

脊髓减压病对大鼠TNF-α、NGF及TrkA表达的影响

潜水医学中,发生在中枢神经系统的减压病以脊髓减压病较为多见.在失事潜艇的艇员脱险时,往往由于没有立即救治的条件,使脊髓减压病成为减员的重要原因之一[1].本实验通过对脊髓减压病大鼠NGF、TrkA和TNF-α蛋白表达的观察,分析减压病致脊髓损伤的自身保护因素与加重损伤的因素,及其时间分布的特点,认识脊髓减压病的发病规律,为治疗脊髓减压病提供理论依据.     

电针对脊髓损伤后星形胶质细胞增生的影响

目的 :探讨督脉电针对成年大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞增生的影响。方法 :选用成年雌性wistar大鼠 ,Allen氏法制作脊髓损伤模型 ,分别应用督脉电针治疗不同时间 ,以激素组和损伤不治疗组作对照。观察星形胶质细胞的形态、数量的变化 ;应用RT-PCR法检测GFAP表达变化。结果 :脊髓损伤后星形胶质细胞反应性增生 ,灰质强于白质 ,尾侧强于头侧 ,电针治疗组胶质反应较轻 ;电针组星形胶质细胞线粒体、核糖体增多 ,吞噬变性髓鞘增强 ;培养观察 ,电针组GFAP表达减少。结论 :电针可抑制脊髓损伤后星形胶质细胞反应性增生 ,防止胶质瘢痕形成     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 观察异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞的凋亡和相关基因bcl-2、bax蛋白表达变化的影响。方法 取新生2～3d Wistar大鼠T12～L5脊髓背角星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（C组）、乳剂对照组（L组）、谷氨酸对照组（G组）、异丙酚对照组（P组）、谷氨酸和异丙酚合用组（GP1、GP2、GP3组）。加药后培养24h免疫细胞化学法观察bcl-2和bax蛋白平均吸光度（A）值及细胞形态学变化，流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。结果 与C组比较，G组、GP。组细胞发生大量凋亡（均P〈0.01），bax蛋白阳性表达，bax蛋白A值升高（均P〈0.01），bcl-2蛋白阴性表达，bcl-2蛋白A值降低（均P〈0.01）。与G组比较，GP2组、GP3组凋亡降低（P〈0.05，P〈0.01），bcl-2蛋白阳性表达，bcl-2蛋白A值升高（P〈0.05，P〈0.01），bax蛋白阴性表达，bax蛋白A值降低（P〈0．05，P〈0.01）。结论 异丙酚通过增强bcl-2蛋白表达，显著抑制谷氨酸诱导的星形胶质细胞凋亡，其抑制程度与剂量有关。     

糖尿病神经性疼痛对大鼠脊髓星形胶质细胞的影响

目的:观察糖尿病神经性疼痛对大鼠脊髓星形胶质细胞活化状态的影响.方法:Wistar大鼠30只,随机分为对照组(n=10).其余腹腔单次注射链脲佐菌素(80mg/kg),对照组腹腔注射生理盐水.2周后采眼眶内眦取血测定血糖值,血糖值大于16.7mmol/L大鼠作为糖尿病模型.4周后测定大鼠热板反应潜伏时间作为痛阈指标,选...     

皮质酮促进大鼠脊髓背角星形胶质细胞糖皮质激素受体表达

目的观察皮质酮(CORT)对培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞糖皮质激素受体(GR)表达的影响。方法培养纯化新生SD大鼠脊髓背角星形胶质细胞,免疫荧光标记、免疫印迹技术检测星形胶质细胞GR表达的变化。结果培养的脊髓背角星形胶质细胞均表达GR,CORT可升高星形胶质细胞GR表达。结论药理剂量的CORT可促进脊髓背角星形胶质细胞GR表达。     

复方丹参注射液对人外周血单个核细胞体外分泌TNF-α的影响

[摘要] 目的 探讨复方丹参注射液治疗强直性脊柱炎可能的作用机制。方法 将分离的正常人外周血单个核细胞分成5组,分别给予生理盐水、大剂量复方丹参、中剂量复方丹参、小剂量复方丹参和地塞米松;孵育48h后,提取细胞培养液上清夜,用放免法检测肿瘤坏死因子α的含量。 结果 大剂量复方丹参组和地塞米松组细胞培养液的上清液TNF-α含量明显低于生理盐水组(P<0.05),大剂量复方丹参组的TNF-α的含量水平明显低于中、小剂量复方丹参组(P<0.05)。 结论 抑制人PBMC分泌TNF-α可能是复方丹参注射液治疗AS的途径之一。     

TRPC对脂多糖诱导的星形胶质细胞TNF-α和NO分泌的影响

目的 探讨TRPC对脂多糖诱导的星形胶质细胞TNF-α和NO分泌的影响.方法 通过摇床筛选法纯化大鼠大脑皮层星形胶质细胞,用免疫荧光法鉴定其纯度.细胞培养至80%左右融合时加入0.5 μg/mL 脂多糖(LPS)后用维持液分别培养0、2、6、12、24和48 h,检测TNF-α和NO分泌情况,观察TRPC阻断剂 2-A...     

氯胺酮对NMDA诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响

目的:观察氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体过度激活诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡、Bc l-2及白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)变化的影响。方法:取新生2~3天W istar大鼠T11-L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养、鉴定。将细胞随机分6组:对照组(C组),NMDA组(N组),氯胺酮组(K组),及NMDA+不同浓度氯胺酮组(0.1、1.0、10mmol/L,标记为NK1~NK3组),检测各组IL-1β和TNFα浓度及Bc l-2平均光密度(OD)值,并观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:N组和NK1组细胞发生大量凋亡(p<0.01),Bc l-2表达阴性,其OD值较低(P<0.01),IL-1β和TNF-α浓度明显上升(p<0.01),两组间比较无显著差异(P>0.05)。NK2组细胞凋亡显著减少(p<0.01),Bc l-2强阳性表达,其OD值升高(p<0.01),IL-1β和TNFα浓度低(p<0.01);NK3组细胞几乎全部死亡,未能上机检测凋亡,IL-1β和TNF-α浓度升高(p<0.05)。结论:1 mmol/L氯胺酮可增强Bc l-2蛋白表达,显著抑制NMDA受体激活诱导星形胶质细胞的凋亡,并抑制IL-1β和TNF-α的分泌。     

星形胶质细胞在脊髓损伤修复中的作用

中枢神经系统损伤后的修复一直是科研人员和临床工作者关注的重点.虽然关于中枢神经系统损伤修复的研究已经很多,比如嗅鞘细胞、神经干细胞移植以及各种细胞因子等在损伤修复方面的积极作用[1-4],但目前在该领域的研究却没有实质性进展.星形胶质细胞(astrocyte,AST)是神经系统中数目众多的细胞之一,以往认为它仅是被动的辅助角色,只是起支持、提供营养及协助代谢等作用,而且胶质细胞过度增生形成的胶质瘢痕对哺乳动物神经系统损伤后轴突再生起障碍作用.     

P物质对脊髓星形胶质细胞活化和炎性因子IL-1β、TNF-α分泌的影响

目的探讨P物质(P substance,SP)对脊髓星形胶质细胞活化和分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法 体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激后分别应用RT-PCR和Western blot测定胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA和蛋白的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)分泌的变化.结果10-7mol/L SP的作用下,星形胶质细胞GFAP mRNA和蛋白的表达在0～72 h逐渐升高,与正常对照组相比差异显著(P＜0.01);SP在10-9～10-6mol/L浓度范围内呈浓度依赖性促进星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β(12 h),与对照组有显著差异(P＜0.01,P＜0.05),但IL-1β在SP 10-6mol/L作用组下降,与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 SP刺激下脊髓星形胶质细胞明显活化,分泌炎性致痛因子TNF-α、IL-1β增多,表明周围慢性疼痛可能通过致痛递质SP介导下星形胶质细胞的活化引起脊髓中枢神经炎性痛.     

地塞米松抑制星形胶质细胞P2Y_1受体表达及TNF-α分泌

目的观察不同浓度地塞米松对大鼠体外培养脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达及TNF-α分泌的影响。方法培养并纯化大鼠脊髓背角星形胶质细胞,地塞米松(终浓度分别为0.1、1、10μmol/L)处理24 h后,采用免疫组织化学染色观察P2Y1受体的表达,双抗夹心间接酶联免疫吸附法测定上清液中TNF-α含量。结果地塞米松(0.1、1、10μmol/L)作用24 h后,与对照组比较,脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达下调,并呈剂量依赖性(P<0.01),TNF-α分泌量亦呈剂量依赖性下降(P<0.01)。结论地塞米松能抑制体外培养大鼠脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达及TNF-α的分泌。     

雄性大鼠脊髓损伤对生殖系细菌感染及IL-1、TNF-α、SOD表达的影响

目的:了解脊髓损伤后雄性大鼠前列腺、附睾、睾丸细菌感染及IL-1、TNF-α、SOD蛋白的表达情况.方法:80只SD大鼠采用随机数字法分为对照组(n=40)和实验组(n=40),采用改良Allen法建立脊髓损伤动物模型,分别喂养1、2、4、8、16 d,2组均于每个时间点摘取8只大鼠的前列腺、附睾、睾丸组织进行细菌培养...     

川芎嗪对大鼠腹膜粘连及TNF-α表达的影响

目的探讨川芎嗪在TNF-α蛋白表达及大鼠腹膜粘连形成中的作用。方法采用盲肠刮擦及切除右侧壁腹膜和腹膜下一层肌肉的方法制作S-D大鼠腹膜粘连模型;关腹前注射川芎嗪注射液(约为50mg/kg)和生理盐水;术后7d行二次开腹手术,取粘连组织,光镜下观察粘连组织病理变化。链霉亲和素免疫组化法(SABC法)检测粘连组织中TNF-α蛋白的表达量。放免法检测血液中TNF-α的浓度。结果川芎嗪组粘连面积明显减少,川芎嗪组粘连评分结果(2.10±0.99)明显低于模型组(3.80±0.42)和生理盐水组(3.60±0.70)(P<0.05),模型组和生理盐水组的TNF-α呈较一致的阳性反应,川芎嗪组的TNF-α呈现较弱阳性的反应或不表达,其染色强度评分(0.08±0.14)明显低于模型组(1.39±0.61)和生理盐水组(1.32±0.55)(P<0.05)。血液中的TNF-α浓度值在模型组(2.24±0.47)、生理盐水组(2.58±0.38)和川芎嗪组(2.51±0.42)三组之间差异无显著性(P>0.05)。结论川芎嗪通过抑制粘连组织中TNF-α的表达来减低大鼠腹膜粘连的程度,但对血液中的TNF-α含量无影响。