RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的 评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法 以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果 经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论 RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。     

RT-PCR法检测肾癌组织中MN／CAⅨ基因表达

目的评价RT-PCR法检测MN／CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象，提取总RNA，两步法进行RT-PCR反应，用MN／CAⅨ的特异性引物扩增，2％琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN／CAⅨ条带．而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN／CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN／CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。     

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的 评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法 以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果 经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论 RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。     

RT—PCR法检测肾癌组织中MN／CAⅨ基因表达

目的 评价RT—PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN／CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法 以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象，提取总RNA，两步法进行RT-PCR反应，用MN／CAⅨ的特异性引物扩增，2％琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果 经过测序证实5例肾癌组织的RT—PCR产物中有4例可见特异的MN／CAⅨ条带，而正常肾组织的RT—PCR产物均无相应的MN／CAⅨ条带。结论 RT-PCR法检测MN／CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。     

MN/CAⅨ在肾细胞癌诊断中的价值

目的探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照。采用免疫组化技术检测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本。结果 RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨmRNA阳性率在癌组织中为82.3%(51/62),在外周血中为54.8%(34/62),显著高于对照组(P<0.05),在肾透明细胞癌患者癌组织和外周血中MN/CAⅨmRNA阳性率分别为98%(49/50)和66%(33/50),显著高于其它类型肾癌结果(P<0.05)。免疫组化结果显示MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2%(35/36),明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织(P<0.05)。结论 MN/CAⅨ在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值。     

MN/CAⅨ在肾细胞癌诊断中的价值

摘要：目的探讨MN/CAⅨ在肾细胞癌组织和血液中的表达情况和诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测62例肾细胞癌患
者肿瘤组织和外周血液中MN/CA IX mRNA的表达,以32例正常肾组织和非肾癌患者外周血作为对照。采用免疫组化技术检
测36例肾透明细胞癌,17例其它肾肿瘤,16例正常肾组织标本。结果RT-PCR结果显示62例肾细胞癌患者MN/CAⅨ mRNA
阳性率在癌组织中为82.3%（51/62）,在外周血中为54.8%（34/62）,显著高于对照组（P<0.05）,在肾透明细胞癌患者癌组织和外
周血中MN/CAⅨ mRNA阳性率分别为98%（49/50）和66%（33/50）,显著高于其它类型肾癌结果（P<0.05）。免疫组化结果显示
MN/CAⅨ在肾透明细胞癌中表达阳性率为97.2%（35/36）,明显高于其它类型肾肿瘤和正常肾组织（P<0.05）。结论MN/CAⅨ
在肾细胞癌尤其是透明细胞癌中有特异性的高表达,可以用于肾癌的诊断,尤其在预后和个体化治疗判断上有潜在价值。
     

肾癌G250/MN/CAIX 抗原基因在酿酒酵母中的 诱导表达及意义

 【目的】 观察G250 抗原基因编码区cDNA 全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义。【方法】 应用基因重组技术将人G250 cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NT C,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NT C-G250并转化酿酒酵母菌株INVSc1,筛选阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Western blot检测。【结果】 成功构建pYES2/NT C-G250 重组酿酒酵母诱导表达质粒,证实其能够在酿酒酵母中诱导表达,表达量随诱导时间而变化,8 ~ 12 h 达高峰。【结论】 人G250基因片段能够在酿酒酵母中表达,为进一步探讨基因重组酿酒酵母G250 疫苗抗肿瘤效应及其安全性打下基础.     

肾癌G250/MN/CAIX抗原基因在酿酒酵母中的诱导表达及意义

【目的】观察G250抗原基因编码区cDNA全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义。【方法】应用基因重组技术将人G250cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NTC,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NTC-G250并转化酿酒酵母菌株INVSc1,筛选阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Westernblot检测。【结果】成功构建pYES2/NTC-G250重组酿酒酵母诱导表达质粒,证实其能够在酿酒酵母中诱导表达,表达量随诱导时间而变化,8～12h达高峰。【结论】人G250基因片段能够在酿酒酵母中表达,为进一步探讨基因重组酿酒酵母G250疫苗抗肿瘤效应及其安全性打下基础。     

MN/CA9基因检测与肾细胞癌的诊断

目的 探讨MN／CA9基因的检测在诊断肾细胞癌(RCC)中的价值。方法 本组共有70例病人(无临床转移的RCC病人42例，有转移的RCC病人3例，其他肾脏疾病病人25例)，采用腓PCR方法检测癌组织、正常肾组织及血液和尿液中MN／CA9基因的表达。结果 42例RCC病人的癌组织中38例检测到MN／CA9基因的表达，其中16例外周血中有MN／CA9基因表达，6例尿液中检测到该基因，3例已有转移病人中2例血液有该基因表达，1例尿液中有表达，而其他肾脏疾病的25例肾组织中仅1例有MN／CA9的表达，外周血及尿液中未检测到该基因。结论 MN／CA9基因是RCC病人的一个有诊断意义的生物指标，可了解微转移及评价预后。     

肾癌G250 MN/CAIX重组质粒DNA免疫效应的初步研究

[目的]观察PCDNA3.0-G250重组质粒在小鼠中诱导产生DNA免疫应答的特点及抑瘤效应。[方法] PCDNA3.0-G250质粒每隔2周肌注射Balb/c小鼠共3次,对照组同法肌注PCDNA3.0质粒。每次免疫10 d后眶后取血,间接免疫荧光法检测血清抗体。6周后取脾细胞观察体外细胞毒效应。同法免疫Balb/c小鼠,第3次免疫时皮下种植sp2/0- PCDNA3.0-G250细胞,观察肿瘤大小及小鼠生存期。[结果]DNA免疫后可检测到特异性抗体,抗体滴度随免疫次数增加逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01)。体外CTL杀伤率与对照组差别有统计学意义。体内实验发现治疗组与对照组抑瘤效应无明显差异(P>0.05)。[结论]G250重组质粒DNA免疫能在小鼠巾诱导产生特异性细胞免疫及体液免疫,无明显体内抑瘤效应。     

RT－PCR法检测胃癌组织mdr－1基因的表达及临床意义

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了３０例胃腺癌的ｍｄｒ－１基因的表达，结果发现：术前化疗的胃腺癌ｍｄｒ－１表达阳性率为９１％，明显高于术前非化疗组的阳性率（４７％）（Ｐ＜０．０１）。在术前非化疗组中，中分化胃癌的阳性率高于低分化胃癌的阳性率（Ｐ＜０．０５），ｍｄｒ－１基因的表达与胃癌转移的发生率没有明显的关系。临床上检测胃癌的ｍｄｒ－１基因的表达，可以帮助选择术后的化疗方案。     

肾透明细胞癌肿瘤相关基因的研究

目的 研究肾透明细胞癌组织与癌旁正常肾组织的基因表达谱差异,揭示和发现肾透明细胞癌的肿瘤相关基因。方法 应用Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片,检测3例肾透明细胞癌患者的癌组织和1例肾透明细胞癌的癌旁正常肾组织的基因表达谱差异。结果 在检测的20 173个基因中,共筛选出差异表达基因204个,其中共同上调基因31个,共同下调基因173 个,包括6个尚未被GenBank收录的人类新基因。结论 肾透明细胞癌的发生与染色体基因结构异常相关,异常基因有相对集中区域,如3p、14q和5q等。     

阿霉素诱导肝细胞黏附分子基因下调肾癌细胞细胞分裂周期基因2的表达

目的:研究阿霉素联合hepaCAM基因对肾癌细胞786-0生物学的影响.方法:阿霉素处理后,用腺病毒向肾癌786-0导入肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM),以噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)测抑制率,流式细胞术(Flow cytometer,FCM)测细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、Western blot检测hepaCAM和细胞分裂周期基因2(Cell divisio     

肾癌组织中CD40/p53/PCNA表达的研究

目的 研究肾癌组织中CD40分子的表达与癌发生浸润转移的关系,以及其与p53、PCNA等因素之间的相关性.方法 用免疫组织化学二步法对福尔马林固定、石蜡包埋的肾细胞癌组织(32例)和癌旁组织(10例)中CD40、p53和PCNA的表达情况进行回顾性研究,分析CD40分子表达水平高低与肾癌临床分期、病理分级和发生淋巴结转移的相关性,以及其与p53、PCNA等因素之间的相关性.结果 CD40、p53和PCNA在肾细胞癌组织中表达的阳性率分别为87.5%、9.4%和59.4%,与肾癌癌旁组织组相比,差异有统计学意义(P<0.01);CD40的阳性过度表达与肿瘤临床分期、病理组织学分级和淋巴结转移显著相关(P<0.05);p53和PCNA与淋巴结转移显著相关(P<0.01);CD40在肾癌的过度表达与p53不存在相关性(P>0.05),但与PCNA显著相关(P<0.05).结论 CD40分子在肾癌中的异常表达可为肾癌的诊断、治疗及指导预后提供可靠依据,并为进一步研究肿瘤生物学,尤其是抑制FAS和TNFR介导的细胞凋亡与基因治疗肾细胞癌打下基础.     

肾细胞癌中DACT2基因启动子区甲基化状态与mRNA表达的研究

目的 探讨DACT2基因在肾细胞癌(RCC)发生、发展中的作用.方法 收集该院2014年8月至2015年8月59例住院RCC患者肾癌根治术后RCC及相应癌旁组织、正常组织标本,分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测其DACT2基因甲基化状态、mRNA表达情况,应用免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素(SP)法检测其细胞质内β-catenin蛋白的表达,并分析RCC组织DACT2基因甲基化状态及mRNA表达与临床病理特征的关系,以及DACT2基因甲基化与mRNA及β-catenin表达的关系.结果 RCC组织中DACT2 mRNA相对表达水平(0.427±0.025)明显低于癌旁组织(0.801±0.047)和正常组织(0.872±0.022),RCC组织中DACT2基因甲基化阳性率(45.76%)明显高于癌旁组织(6.78%)及正常组织(5.08%),差异均有统计学意义(P<0.05),而癌旁组织与正常组织比较差异均无统计学意义(P>0.05).在RCC组织中DACT2基因mRNA相对表达水平及启动子区甲基化发生率与患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、Fuhrman分级等临床资料间均无明显相关性(P>0.05).甲基化组中DACT2基因的mRNA相对表达水平低于非甲基化组,差异有统计学意义(P<0.05).RCC组织中β-catenin蛋白在细胞质中的表达率高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),且DACT2基因甲基化与β-catenin蛋白表达呈正相关(r=0.324,P=0.012).结论 DACT2基因启动子区甲基化及其mRNA相对表达水平降低可能参与RCC的发生,但与RCC的临床进展无关,DACT2基因启动子区发生甲基化可能是引起其mRNA相对表达降低的原因之一,且肾癌组织DACT2基因甲基化的发生可能与β-catenin的高表达有关.