抗B细胞抗体在自身免疫性疾病治疗中的应用

B淋巴细胞是介导获得免疫应答的重要组分,起源于胎肝,妊娠12～16周迁移至骨髓,在骨髓基质细胞和细胞因子辅助下分化成熟。分化成熟过程如下所示:前B(Pre-B)→不成熟B→处女型B→成熟B→记忆B→产生抗体的浆细胞。表面抗原CD20表达干除浆细胞以外各个分化阶段,充当B细胞表面跨膜Ca~(2+)离子通道,在B细胞活化过程中发挥关键作用。因此,针对CD20的靶向治疗对于主要由B细胞介导的疾病的作用受到关注。大多实验研究证实,抗CD20单克隆抗体可与B细胞表面CD20高亲和力结合,通过多种机制选择性删除B细胞,其机制包括抗体依赖性细胞毒作用、补体介导的细胞毒作用,抑制细胞增殖和直接诱导B细胞凋亡。因此,抗CD20单克隆抗体在自身免疫性疾病的治疗中起到了重要的作用。     

白血病细胞表面分子抗原的靶向治疗

靶向药物治疗是当今肿瘤治疗的一次革命。造血细胞癌变后其细胞表面表达特征性抗原分子,依此作为“靶点”,应用特异性单克隆抗体(单抗)与其结合,通过抗体介导的细胞毒作用(ADCC)或补体介导的细胞毒作用(CDC)及诱导细胞调亡的机制杀灭肿瘤细胞,产生“生物导弹”样效应。近年来,抗CD20单抗(美罗华、Zevalin)治疗B细胞非霍杰金淋巴瘤的成功经验引发了应用单抗治疗白血病的研究热潮。     

慢性HCV感染者血清B细胞激活因子水平的检测及其意义

B淋巴细胞刺激因子（B lymphocyte stimulator,BLys）主要作用是刺激B淋巴细胞增殖、分化和分泌抗体,其正常表达对维持依赖和不依赖T细胞抗原刺激的B细胞活化和增殖至关重要。但BLys的过度表达可促使B淋巴细胞不断增殖并分泌自身抗体增多，从而导致一系列自身免疫性疾病BAFF及相关疾病。本研究旨在探讨BLys血清水平与HCV感染者自身免疫的关系。     

吸烟对T,B淋巴细胞的影响

目的 探讨长期吸烟对免疫系统影响的机制。方法 分析于3mo和9mo对吸烟组及对照组大鼠行抗体形成细胞（AFC）试验和抗CD3抗体诱导的T细胞增殖试验以测定其体液和细胞免疫。结果 9mo后，吸烟组大鼠对绵羊红细胞的抗体形成细胞反应及抗CD3抗体诱导的增殖反应均较对照组显降低，而3mo时无显差异。结论 长期吸烟所引起的免疫抑制是与抗原刺激T细胞后，T细胞不能有效地活化、增殖和分化有关，T细胞自身的细胞免疫受到损伤，也使得它不能有效地辅助B细胞进行增殖及产生抗体，从而使体液免疫也变得无能。     

系统性红斑狼疮/狼疮性肾炎以B细胞为靶点的免疫抑制治疗

系统性红斑狼疮/狼疮性肾炎（SLE/LN）发病与B细胞异常活化相关,其活化可导致病理性自身抗体和炎性细胞因子产生增加。因此,阻断B细胞活化、清除活化B细胞是SLE/LN治疗的新思路。以B细胞为靶点的免疫抑制治疗包括抗CD20+、CD22+B细胞靶向治疗,蛋白酶体抑制剂,B细胞激活因子和增殖诱导配体靶点抑制剂,B-T细胞相互作用的抑制剂,雷帕霉素靶点抑制剂等。本文就以B细胞为靶点的免疫抑制治疗在SLE/LN中的研究进展作一综述。     

病原体抗原刺激的正常人外周血CD4^＋T细胞对γδT细胞的影响

CD4 T辅助（Th）细胞和γδT细胞在抗微生物感染中发挥着重要作用，两者相互作用有待阐明。本文报道以胞内感染体结核杆菌、人类VI型疱疹病毒及胞外寄生虫阴道毛滴虫刺激活化从正常人外周血经洗淘法分离纯化的CD4 T细胞，结果各组活化的细胞均表现明显增殖和产生以白介素-2（IL－2）、γ干扰素（IFN－γ）显著升高为主的Th1型细胞因子分泌谱。利用细胞隔离渗透性共培养体系，将抗原活化的CD4 T细胞和γδT细胞共培养，结果显示γδT细胞的增殖和细胞毒作用均可为CD4 T细胞产生的可溶性因子所显著增强。这提示在抗感染免疫中，CD4 Th1细胞可通过Th1型细胞因子促进γδT细胞功能。     

MRL-lpr狼疮小鼠B细胞表面FcγRⅡB的表达及其意义

目的：探讨MRL-lpr狼疮小鼠模型中B细胞表面Fcγ受体ⅡB（FcγRⅡB）的表达情况及其病理意义。方法：构建MRL-lpr狼疮小鼠模型,在4、8、12、20周龄时检测外周血总IgG、抗dsDNA抗体、抗ribosomal P0抗体、抗smRNP抗体含量,分析狼疮小鼠的疾病活动度;流式检测20周龄的MRL-lpr狼疮小鼠外周血及脾脏B细胞表面FcγRⅡB及CD69表达情况,分析FcγRⅡB的表达情况与B细胞活化的关系。结果：随着周龄的增加,MRL-lpr狼疮小鼠外周血总IgG及抗dsDNA抗体、抗ribosomal P0抗体、抗smRNP抗体含量逐渐升高;MRL-lpr狼疮小鼠外周血及脾脏B细胞表面FcγRⅡB表达丰度明显降低（均有P＜0.05）,CD69表达水平明显升高（P＜0.05）,且正常C57BL/6小鼠脾脏CD69+的活化B细胞FcγRⅡB表达上调,但MRL-lpr狼疮小鼠脾脏CD69+的活化B细胞FcγRⅡB表达无明显变化。结论：MRL-lpr狼疮小鼠B细胞表面FcγRⅡB的表达与B细胞的活化有关,FcγRⅡB的表达异常可能是MRL-lpr狼疮小鼠B细胞异常活化的分子机制之一。     

去B细胞治疗在系统性红斑狼疮治疗中的研究进展

B细胞在系统性红斑狼疮(SLE)的发病过程中具有重要作用。目前临床应用的主要的去B细胞生物治疗包括抗CD20单抗、抗CD22单抗、抗B细胞活化因子单抗。多数研究显示去B细胞治疗可以改善常规治疗无效的SLE患者的病情,对狼疮肾损害及中枢神经系统损害有治疗作用,多数患者耐受性较好,治疗失败的原因与实验设计、抗体产生等有关。     

应用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统研究B细胞中转录因子T-bet的调控作用

目的·通过优化后的CRISPR/Cas9基因编辑系统,研究原代B细胞中转录因子T-bet对抗体类别转换的调控作用。方法·系统性分析GEO公共数据库中体外诱导分化的B细胞转录组测序结果,探索转录因子T-bet对抗体类别转换的调控。构建靶向基因为Tbx21 (T-box 21,编码T-bet)的小向导RNA (small guide RNA,sgRNA)反转录病毒表达载体,使用Plat-E细胞系作为病毒包装细胞系获得装有sg-Tbx21质粒的反转录病毒并对其浓缩。使用B细胞受体抗体、抗CD40抗体和Toll样受体激动剂体外协同刺激Cas9转基因小鼠的脾脏B细胞,感染高滴度反转录病毒颗粒实现基因编辑。流式细胞术分选感染细胞,提取基因组DNA进行PCR扩增后对靶向序列进行测序,利用ICE CRISPR分析工具计算基因敲除效率。体外诱导B细胞分化为浆细胞,采用ELISA检测基因编辑后B细胞培养上清液中IgM、IgG2c、IgG3抗体类别的丰度,通过独立样本t检验比较sg-NC组与sg-Tbx21组细胞上清液中抗体水平的差异。结果·(1)经分析GEO数据库发现,γ干扰素可以诱导B细胞中Tbx21基...     

移植免疫耐受中调节性B细胞与调节性T细胞的依赖性关系研究

目的 探讨在联合抗Tim-1/抗CD45RB抗体诱导的移植耐受中调节性B细胞(Bregs)与调节性T细胞(Tregs)的关系.方法 建立BALB/c小鼠到C57BL/6小鼠的同种胰岛移植长期耐受模型,将长期耐受小鼠(LTS)的B细胞过继输注至接受胰岛移植的B细胞缺陷小鼠(μMT-/-)体内,或加用抗CD25抗体(PC61)去除CD25+ Treg细胞,观察移植物的存活时间,用流式细胞仪检测Foxp3+ Treg数量变化.将CD4+ Foxp3-GFP-T细胞与Bregs细胞联合过继输注RAG小鼠体内,检测Foxp3+GFP+T细胞的扩增情况.建立小鼠皮肤移植模型,在双抗体治疗的同时加用抗CD20抗体祛除B细胞,观察对Tregs数量的影响.结果 继承性转移长期耐受小鼠的Bregs可诱导83.3％的小鼠长期耐受,但加用抗CD25单抗后,胰岛移植物在较短时间(MST=20 d)内全部被排斥;继承性转移长期耐受小鼠Bregs可使Tregs数量明显增加(P＜0.01),并且可诱导CD4+ Foxp-T细胞表达Foxp3;用抗CD20抗体祛除B细胞后,双抗体诱导的皮肤移植受体小鼠体内Tregs数量明显减少(P＜0.01).结论 在双抗体诱导的移植耐受中,Bregs可能通过促进Tregs生成而延长移植物的存活.     

Measurement of the activation of IL-2 on bone marrow by flow cytometry

In1989,Agah,forthe'firsttime,putforwardtheconceptofactivationofbonemarrow,whichmeanstoactivatethemononuclearcells(MNCs)frombonemar-rowbyIL-2invitro.Theactivatedcellscouldkilltheresidualleukemiccellsmoreeffectivelywithoutaffectinghematopoiesisandimmunity.Thetechniqueprovidesanewwaytoimprovethecurativeeffectofbonemarrowtransplantation(BMT)andreducetherateofrelapse.1MATERIALSANDMETHODS1'1SamplesBonemarrowsampleswereobtainedfrom32normaldonorsincluding19malesandl3females,withtheirageran…     

Production and usefulness of monoclonal antibodies against B cells

We have described new monoclonal antibodies (FUN-1, -2, FK61, FB1, FB21) which recognize B cells in the peripheral blood and lymphoid tissues. In preliminary reports FB1 and FUN-1 were described previously as anti-CD20 and -CD86 antibodies, respectively. FB1 and FB21 recognize an intracytoplasmic epitope (35, 38 kD) and a sialic acid-dependent carbohydrate epitope, respectively. FB1 reacts with pan B cells and FB21 with a subpopulation of B cells. In addition, FB21 shows relatively specific reaction with papillary or follicular carcinoma of the thyroid gland, but not with normal thyroid follicules and most benign thyroid gland tumors. Since FB1 and FB21 can be used with formalin-fixed paraffin-embedded tissue sections, they are useful for diagnosis of B cell lymphoma or thyroid carcinoma. FUN-1 recognizes surface antigen (CD86) on activated B cells, monocytes in peripheral blood and germinal center B cells in lymphoid tissues. CD86 has an important role in T cell activation and the antigen-specific T-cell dependent immune response.     

CD40培养体系的建立及B淋巴细胞的体外培养

采用自行研制成的功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体、转导ＣＤ３２的Ｌ细胞（ＬＣＤ３２）和细胞因子建立体外研究人Ｂ淋巴细胞增殖、生长和分化的ＣＤ４０系统。方法：①流式细胞仪分析ＣＤ４０分子的表达;②在ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１）与ＬＣＤ３２共培养中,加入ＩＬ－４及其它细胞因子,组成ＣＤ４０培养系统,观察人扁桃体来源Ｂ细胞的体外生存和增殖等生物学效应。结果：①ＣＤ４０分子表达于人外周血、扁桃体来源的Ｂ细胞及人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ２和人Ｂ淋巴瘤细胞株Ｄａｕｄｉ;②用ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１和２Ｇ１１）与ＬＣＤ３２细胞联合ＩＬ－４能使静止期Ｂ细胞体外长期生存和增殖。表明用激发型ＣＤ４０单抗５Ｃ１１和２Ｇ１１建立的ＣＤ４０培养体系,能使Ｂ细胞长期生存和增殖,为体外研究Ｂ细胞提供了有效的手段。     

激发型抗CD40单抗介导恶性肿瘤细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨激发型CD40单克隆抗体对人B淋巴细胞恶性肿瘤的生物学效应及其机制。方法 将激发型CD40单克隆抗体5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系，采用细胞计数，流式细胞仪等方法分析单克隆抗体5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果 5C11能引起CD40表达的多发性骨髓瘤（MM）细胞株XG2和恶性淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集，抑制其生长并介导凋亡；CD40分子介导的XG2和Daudi细胞凋亡作用与可溶性TNF产生无关。结论 激发型CD40单克隆抗体通过诱导B细胞恶性肿瘤细胞的凋亡。抑制肿瘤细胞的体外生长。     

人CD5+B细胞的研究进展

CD5 + B细胞由早期的前体细胞发育而来 ,不依赖骨髓 ,是一类具有重要功能的 B细胞亚群。在多种自身免疫性疾病和 B淋巴细胞系恶性肿瘤患者体内均有 CD5 + B细胞数量和 (或 )功能的异常。在艾滋病、肝炎、精神分裂症及肝损伤后再生过程中也有 CD5 + B细胞的异常改变 ,提示 CD5 + B细胞可能具有广泛的临床意义     

CD14在B1细胞的表达研究

目的：比较分析小鼠B1细胞和B2细胞CD14的表达,探索B1细胞在天然免疫中的作用.方法：取正常C57BL/6小鼠的腹腔和脾细胞,anti-IgM免疫磁珠分选B1和B2细胞,提取总RNA后用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测CD14 mRNA的表达,以anti-CD14抗体、anti-CD19抗体流式细胞仪分析CD14分子在B1和B2细胞表面的表达;进一步给予小鼠腹腔内注射脂多糖（LPS）,于不同时间点分选B1细胞,RT-PCR检测CD14 mRNA表达水平的变化.结果：RT-PCR及流式细胞仪检测结果显示CD14在正常小鼠B1细胞有较低水平的表达,而B2细胞几乎没有表达,LPS刺激后B1细胞的CD14表达水平明显升高.结论：CD14表达于正常小鼠B1细胞,并且可能在B1细胞对LPS的应答中具有重要作用.     

CD40配体刺激人外周血来源B细胞的长期培养及增殖活化

目的 建立外周血来源B细胞体外长期培养体系,观察培养过程中B细胞的增殖活化及抗原提呈功能.方法 利用重组人可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养过程中,流式细胞技术检测B细胞DNA周期及B细胞表面CD80、CD86、主要组织相容复合物(MHC)Ⅰ类及Ⅱ分子的表达状况;观察B细胞增殖情况及B细胞活化后表面分子的表达.采用乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)-异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗原多肽与B细胞共孵育,检测B细胞对抗原多肽的负载能力.结果 人外周血B细胞在sCD40L培养体系中可长期培养达50 d,在此期间,B细胞绝对计数增加近10倍,外周血B细胞比例由8.21%增高到70.67%,活化的B细胞高表达CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ,并可负载HBV核心抗原肽.结论 sCD40L培养体系可在体外长期培养人外周血B细胞,并使B细胞增殖活化,具有抗原提呈细胞的特征.     

共刺激分子CD28/CTLA-4:B7在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达

目的 探讨CD28、CTLA-4（CD152）、B7—1（CD80）及B7—2（CD86）共刺激分子在强直性脊柱炎（AS）患者的外周血淋巴细胞上的表达异常与免疫功能紊乱的关系。方法 采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者CD28和CTLA-4在外周血CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的表达及CD80和CD86在CD19^＋B细胞上的表达。用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果 AS患者CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的CD28和CTLA-4，CD19^＋B细胞上CD80和CD86的表达较正常对照组显著增高（P〈0．05）；AS患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高（P〈0．01）。结论 AS患者T细胞上表达过量的CD28，与B细胞的B7结合，激活T、B细胞，产生大量免疫球蛋白，同时刺激激活的T细胞表达CTLA-4，使T细胞不能充分表现效应功能。     

全人源化PD-L1单抗功能活性及其对人肺腺癌HCC827细胞毒性作用的研究

目的 初步探索自行研制的全人源化PD-L1单抗的功能活性及其对人肺腺癌HCC827细胞毒性作用的影响.方法 利用十二烷基硫酸钠聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定阿特朱单抗及自研PD-L1单抗的纯度;以阿特朱单抗为阳性对照,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测该自研PD-L1单抗的结合活性和竞争性阻断活性;细胞阻断试验分别测定两抗体的细胞阻断活性;流式细胞术(FACS)测定人肺腺癌 HCC827细胞表面PD-L1的表达;检测两抗体的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)效应.结果 SDS-PAGE鉴定出高纯度阿特朱单抗及自研PD-L1单抗;ELISA法检测结果显示自研PD-L1单抗、阿特朱单抗均可与人PD-L1结合并且阻断PD-L1与PD-1结合;自研PD-L1单抗及阿特朱单抗均可以阻断两细胞表面分子PD-L1与PD-1的结合,其EC50分别为0. 208 5,0. 154 8 μg/ml,在一定浓度上两者差异无统计学意义;FACS结果显示人肺腺癌HCC827细胞高表达PD-L1分子;细胞毒性实验结果表明当效应细胞与靶细胞比值一定时,自研PD-L1单抗与阿特朱单抗对人肺腺癌HCC827细胞都有强的毒性作用.结论 该自研全人源化PD-L1单抗有一定的功能活性,可通过阻断细胞表面的PD-L1与PD-1的结合而减弱T细胞受体信号,并可通过ADCC效应发挥一定的抗肿瘤作用.