异丙肾上腺素诱导的大鼠肥厚心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达

目的 探讨Ⅰ、Ⅲ型胶原在肥厚心肌组织中的变化特征.方法 SD大鼠60只,分为对照组和实验组,两组分别再分为1、4、8周组,每组10只.对照组背部皮下注射生理盐水4ml/(kg·d);实验组背部皮下注射异丙肾上腺素4mg/(kg·d).两组分别注射1、4、8周,然后测定各组大鼠体重(BW)、心脏湿重(HW)、左室湿重(LVW),计算出HW/BW、LVW/BW;心肌组织冷冻切片,利用图像分析软件,测量心肌细胞横径(TDM)和心肌细胞截面积(CA).免疫组织化学法检测各组心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达.Western blotting方法检测心肌肥厚大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达及其含量.结果 免疫组织化学结果显示,注射异丙肾上腺素1周后,Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达明显增加,4周后有所下降.Western blotting结果显示,实验各组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均多于对照组(P＜0.01);实验1周时Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达量最高,4周和8周均下降.实验4周和8周组与1周组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 心肌肥厚发生1周左右是Ⅰ、Ⅲ型胶原增加的高峰期,以后趋于稳定.心肌肥厚主要引起胶原量的变化,不破坏胶原纤维的网络结构.     

ILK在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚组织中的表达

目的探讨心肌肥厚发生发展过程中ILK的表达特征。方法在大鼠背部皮下分别注射7、28和56 d异丙肾上腺素(ISO),判定心肌肥厚指标,利用免疫组织化学和免疫印迹技术,观察ILK在肥厚左心室肌中的表达。结果 ILK主要表达于心肌细胞胞膜和内皮细胞。与对照组相比,ISO组ILK阳性表达明显增强。随着造模时间的延长,肥厚心肌中ILK的表达含量逐渐升高。Western blot图像分析结果显示:ISO各实验组大鼠左心室心肌组织中的ILK蛋白表达带均强于对照组(P<0.01),7、28和56 d组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ILK与心肌肥厚的发生和发展有关,心肌肥大越重,ILK含量增加越高。     

肾性高血压大鼠左心室整合素β1和黏着斑激酶的表达

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中整合素β1(integrinβ1)和黏着斑激酶(FAK)的表达变化。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,40只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、术后2周组、术后5周组和术后7周组,血压及左心室重量指数评价造模成功后,取左心室组织,采用HE染色观察心肌细胞的形态变化,免疫组织化学和Western blotting检测各组左心室肌组织integrinβ1和FAK的表达。结果 HE染色结果显示,实验组大鼠左心室组织的心肌纤维走向紊乱,心肌细胞间隙变大;integrinβ1和FAK蛋白分别表达于心肌细胞膜和心肌细胞质近膜区,呈线样或细颗粒状分布;integrinβ1的表达强度在术后随时间呈逐渐上升趋势,至5周组趋于平稳;FAK在2周组的表达强度相对于假手术组明显下降(P0.01),实验组随术后时间增加表达量增强;Western blotting结果显示,integrinβ1和FAK在各手术组的表达均明显高于假手术组(P0.01),5周组较2周组下降明显(P0.01),7周组和5周组差异不明显(P0.05)。结论 Integrinβ1和FAK在心室肌的表达变化可能是高血压心肌肥厚的重要原因。     

多胺在L-精氨酸抑制异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚中的作用

目的： 研究多胺在L-精氨酸抑制病理性心肌肥厚中的作用及机制。方法：异丙肾上腺素（ISO）皮下注射复制大鼠心肌肥厚模型,L-精氨酸作为干预因素,检测心脏肥大指数,心肌组织胶原染色,心房利钠肽（ANP）的转录水平,观察L-精氨酸对心肌肥大的影响;不同时段,应用高效液相色谱仪（HPLC）测定心肌组织内多胺含量,应用Western blotting结合图像分析系统,检测各组大鼠心肌组织鸟氨酸脱羧酶（ODC）和精眯/精胺乙酰转移酶（SSAT）的蛋白表达水平;检测血清NO含量和NOS活性。结果：皮下注射ISO7d后,心肌肥大指数增加,心肌纤维增粗、排列紊乱,ANP mRNA表达增加;L-精氨酸干预可抑制ISO诱导的心肌肥大,随着L-精氨酸作用时间延长,心肌组织多胺含量减少,血清NOS活性增强,NO含量增加。同时,ODC蛋白表达下调,SSAT蛋白表达上调。结论：L-精氨酸抑制ISO诱导的心肌肥大,其机制可能与下调L-精氨酸/多胺通路、上调L-精氨酸/NO通路有关。     

STAR蛋白QKI在去甲肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚时的表达变化

目的：探讨QKI mRNA及蛋白在SD大鼠病理性心肌肥厚时的表达。方法：采用去甲肾上腺素制备SD大鼠心肌肥厚模型，利用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠心肌肥厚时QKI mRNA和蛋白质的表达变化。结果：在SD大鼠心脏中有3种QKI异构体mRNA和QKI蛋白的表达；当去甲肾上腺素持续输注引起大鼠心肌肥厚时，心脏QKI-5 mRNA和QKI蛋白质表达水平均明显降低（P<0.05）；去甲肾上腺素诱导培养的乳鼠心肌细胞肥大时，QKI-5 mRNA表达量也明显低于对照（P<0.05）。结论：大鼠心脏有QKI mRNA和蛋白质表达，心脏病理性肥厚时其表达发生变化。     

发育和成熟大鼠心室肌细胞中整合素β1的表达差异及其意义

目的:观察发育和成熟大鼠心室肌细胞中整合素β1表达部位和强度的增龄变化,探讨其生物学意义.方法:选择胎鼠(孕约19 d)、新生(9 d)、青年(8月)和老年(14月)SD大鼠各7只,用免疫组织化学显色观察心室肌细胞中整合素β1表达,并用计算机图像分析系统定量分析表达强度.结果:各组近心外膜肌细胞中,整合素β1主要表达于胞质内,胎鼠组表达强度与其他组比较具有统计学意义.深层心肌细胞中,胎鼠组主要表达于胞质内,其他组主要表达于胞核和胞膜上,表达强度与青年和老年组相比具有统计学意义.结论:大鼠心肌细胞发育和成熟过程中,近心外膜心室肌细胞整合素β1分布一致,而深层心室肌细胞整合素β1分布由细胞质转变为细胞核和细胞膜.     

整合素α5β1在成骨细胞与生物衍生材料黏附过程中的表达

背景：整合素在细胞与材料的黏附过程中发挥重要作用。 目的：了解整合素α5β1在成骨细胞构建组织工程骨和组织工程骨膜过程中的表达,探讨在成骨细胞与生物衍生材料黏附过程中整合素α5β1发挥的作用。 方法：选用人胚骨膜来源成骨细胞为种子细胞,接种生物衍生骨及羊膜支架材料上,制备组织工程骨及骨膜,分别培养2,4,6,8,10 d。单纯培养的成骨细胞作为对照组。 结果与结论：实时定量PCR测定结果,培养早期整合素α5表达呈阴性,整合素β1组织工程骨中的表达略高于组织工程骨膜,培养2,6 d组比较差异有显著性意义。单纯细胞培养的对照组中,整合素β1稳定,各时间段比较差异无显著性意义。提示生物衍生材料有利于成骨细胞黏附,但在黏附过程的初期,成骨细胞可能是通过纤维连接蛋白以外的其他蛋白质完成该过程的。     

盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠左心室壁心肌细胞和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白变化

目的 探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响.方法 成年大鼠42只按4mg/(kg·d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组.利用电子/光学显微镜观察不同阶段左心室肌组织结构,免疫组织化学和Western blotting方法检测左心室肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白表达,并利用HAPIS-2000显微图像分析系统和SPSS10.0统计学软件对表达强度和面积百分比进行统计学处理.结果 光镜下观察ISO诱导心内膜下出现心肌细胞缺血坏死区.缺血坏死区有Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白高表达,缺血坏死区所占面积百分比有减小趋势,组间比较l周与4周之间差异无统计学意义(P＞0.05),4周与8周间差异具有统计学意义(P＜0.05);表达强度组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).非缺血坏死区心肌细胞早期表现为大量聚集糖原颗粒,后期以线粒体增多,肌原纤维松散为主要特征;免疫组织化学检测间质I型胶原蛋白所占面积百分比无变化,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);表达强度实验组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但与对照组相比,表达量减小,差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学检测间质Ⅲ型胶原蛋白所占面积百分比呈增多趋势,组间比较,1周与4周间差异具有统计学意义(P＜0.05);表达强度稳定,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Western blotting结果显示,实验组间Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白均呈现从增多到减少的趋势,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 ISO长期诱导致心内膜下心肌细胞缺血坏死,且缺血坏死区面积总体趋势变小;缺血坏死区发生纤维化改变,与心壁僵硬度增大相关.非缺血坏死区心肌细胞肥大与能量代谢相关,间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白不参与心室壁僵硬度和顺应性变化.     

大鼠心肌组织内STAT1蛋白的时空表达差异

目的探讨大鼠心脏发育和成熟过程中信号转导与转录活化因子1(STAT1)蛋白的分布特点和增龄变化。方法分别取胎鼠(孕19 d),新生鼠(出生后10 d),青年鼠(8月)各8只,采用HE染色,免疫组化等技术观察心肌组织结构及STAT1蛋白的分布和增龄变化。利用图像分析系统对STAT1蛋白进行定量分析并进行统计学分析。结果胎鼠与新生鼠光镜结构相似,心肌细胞较小,排列不规则,核浆比较大,横纹不典型;成年鼠心肌变长,排列规则,核浆比小,横纹清晰。STAT1蛋白在心外膜处强阳性表达;在深层心肌成条索状分布,表达强度组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫荧光双标显示STAT1和CD34存在共定位。结论 STAT1在心外膜处参与心肌发育和成熟过程,深层心肌与间质血管内皮细胞形成和成熟有关。     

大鼠出生前后心肌端粒酶逆转录酶表达的变化

目的:探讨大鼠心肌组织端粒酶逆转录酶的发育规律.方法:免疫组织化学和免疫印迹技术检测SD大鼠心肌端粒酶逆转录酶(TERT)的表达,图像分析技术对心肌组织TERT的表达进行定量分析.结果:3组大鼠心肌组织中的心肌细胞、平滑肌和内皮细胞均有TERT的表达.TERT主要位于细胞质和细胞核内.TERT的总表达规律是20 d胎鼠阳性表达强于出生后6 d大鼠,出生后12 d大鼠心肌表达最低,3组之间TERT的组间比较差异有统计学意义.结论:大鼠心肌组织的端粒酶活性随着日龄增加,其表达逐渐减少.     

Neuregulin-1β对压力超负荷心肌肥大大鼠治疗作用及机制的研究

 目的：研究神经调节蛋白 1β（NRG-1β）对压力超负荷所致大鼠心肌肥大的治疗作用并探讨其机制。方法：Wistar雄性大鼠采用腹主动脉缩窄的方法复制心肌肥大模型。术后8周,将模型动物随机分成模型（model）组、NRG-1β治疗组（尾静脉注射NRG-1β,10 μg·kg-1·d-1）和NRG-1β+赫赛汀(Herceptin, HERCE)治疗组（尾静脉注射NRG-1β的同时给予注射HERCE 10 μg·kg-1·d-1）。假手术（sham）组除不以银夹缩窄腹主动脉外,其余操作同腹主动脉缩窄组。7　d后分别采用心动超声、血流动力学评价心功能;Masson染色观察心肌组织的超微结构;放射免疫法检测心肌组织中血管紧张素II（Ang II）,酶联免疫吸附法测定心肌组织中肿瘤坏死因子 α（TNF-α）的变化;RT-PCR法检测心肌中bcl-2和bax mRMA表达的改变。结果：（1）心动超声显示,和模型组比较,NRG-1β组左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(LVFS)升高,左室收缩末内径(LVESD)及舒张末内径(LVEDD)减小（P<0.01）。（2）血流动力学检测显示,NRG-1β治疗组左室收缩末压(LVESP)和左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)均明显高于模型组（P<0.01）;左室舒张末压(LVEDP)低于模型组（P<0.01）。（3）与模型组比较,NRG-1β组心肌胶原容积分数（CVF）下降,心肌中Ang II和TNF-α明显减少,bcl-2 mRNA表达显著升高,而bax mRNA表达下降（P<0.01）。（4）NRG-1β+ HERCE治疗组与模型组相比各项指标无明显改变（P>0.05）。结论：NRG-1可以减少压力超负荷大鼠心肌Ang II和TNF-α的生成,从而减轻Ang II和TNF-α介导的心肌间质重构; NRG-1可通过上调bcl-2 mRNA表达、下调bax mRNA表达,抑制心肌细胞的凋亡,改善压力超负荷大鼠的心功能,进而在心肌肥大的过程中发挥作用。     

Integrin β1对胃癌细胞SGC7901多药耐药性的影响

目的:探究整合素β1(integrinβ1)对胃癌多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法:Western blot法及q PCR实验检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达情况。采用integrinβ1反义寡核苷酸转染,敲减胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测integrinβ1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、细胞色素C(CytC)和p-AKT/AKT的蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中integrinβ1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中加入顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物刺激后,integrinβ1的蛋白表达水平明显升高。敲减integrinβ1的表达可诱导胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的凋亡,增加细胞对化疗药物的敏感性;此外下调Bcl-2/Bax、p-AKT~(Ser473)和p-AKT~(Thr308)的蛋白水平,同时促进线粒体Cyt-C的释放,上调cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:敲减胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的integrinβ1表达可恢复细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞经线粒体路径的凋亡,其机制可能与抑制AKT的磷酸化,阻断该信号通路有关。     

整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化

目的 探讨整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化。方法 利用免疫组织化学和RT-PCR方法,检测胚胎18d(E18d)、生后5d(P5d)、P19d、P40d及生后1年（P1y）大鼠心肌组织的CD11a、CD11b和CD11c的基因和蛋白表达。结果 免疫组织化学结果显示,大鼠心肌
组织CD11a、CD11b和CD11c表达部位在心肌细胞质内;从E18d到P1y大鼠心肌组织CD11a、CD11b和CD11c的表达逐渐减弱。 RT-PCR显示,CD11a、CD11b、CD11c各组均呈阳性表达。其中CD11a在P5d和P40d间,P5d和 P19d间比较（P>0.05）差异无统计学意义,其他各组间比较差异均有统计
学意义;CD11b在E18d、P5d、P19d和P40d分别比较（P>0.05）差异无统计学意义,其他各组差异均有统计学意义;CD11c各组间差异有统计学意义（P<0.01）。结论 CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心肌的发育过程中出现表达量的变化,不同结构的整合素分子在心脏发育过程表现出相似的
表达规律,它们可能对心肌细胞的发育起重要的调控作用。     

过表达endophilin A2减轻异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的:研究过表达吞蛋白A2(endophilin A2,Endo A2)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌肥大的影响。方法:取健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、Ad-EndoA2组、ISO模型组及ISO+Ad-EndoA2组,其中Ad-EndoA2组和ISO+Ad-EndoA2组于给药前1 d左心室壁注射Ad-EndoA2腺病毒,假手术组和ISO组注射磷酸缓冲盐溶液,然后分别连续7 d皮下注射生理盐水或ISO。7 d后用小动物超声测定心功能指标,然后处死大鼠,收集心脏,以心脏重量指数、HE染色及胚胎基因表达水平评价心肌肥大情况,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达。结果:小动物超声结果显示,与假手术组相比,ISO组大鼠处于心肌肥大代偿期(左室收缩期前壁厚度、左室收缩期后壁厚度、射血分数和短轴缩短率升高,左室收缩内径及心输出量下降,均P 0. 05),心脏重量指数、HE染色及RT-qPCR结果也均显示心脏发生了明显肥大(P 0. 05),过表达Endo A2可明显减轻ISO诱导的心肌肥大,改善心功能(P 0. 05)。Western blot结果显示,过表达Endo A2明显逆转ISO引起的自噬水平降低(P 0. 05)。结论:过表达Endo A2可减轻ISO诱导的大鼠心肌肥大,可能与加强自噬有关。     

利用苯肾上腺素诱导新生大鼠心肌细胞肥大基因表达谱构建其调控网络

 目的： 利用心肌肥大病理过程中基因表达谱的变化,构建基因/蛋白质调控网络。方法：以苯肾上腺素诱导新生大鼠心肌细胞肥大为模型,在分析肥大心肌细胞基因表达谱变化的基础上,进一步利用Pathwaystudio和Agilent Literature Search软件结合文献挖掘方法,构建基因/蛋白质相互作用网络。结果：构建的网络包含450个相互作用的基因/蛋白质（节点）以及592个它们之间相互作用的关系（边）。拓扑分析表明该网络具有无尺度特性,同时分析确定14个基因/蛋白质是网络的关键节点。通过GO (gene ontology)分析,发现在苯肾上腺素诱导新生大鼠心肌细胞肥大的过程中,与物质代谢、细胞信号转导及细胞骨架等密切相关的基因可能发挥了重要作用。结论：构建基因/蛋白质网络为研究心肌肥大的分子机制提供了有用的信息和方法。     

α1-Adrenoceptor agonists and IGF-1, myocardial hypertrophic factors, regulate the Kv1.5 K+ channel expression differentially in cultured newborn rat ventricular cells

 Interest has arisen concerning the importance of α-adrenergic function and insulin-like growth factor-1 (IGF-1) in cardiac remodelling. The hypothesis that these two factors may underlie the regulation of voltage-gated K⁺ channel expression in hypertrophied cardiomyocytes was tested by performing Western blot analysis of the Kv1.5 K⁺ channel α-subunit in cultured newborn rat ventricular cells. Myocyte size was quantified by surface area and total cell protein concentration. Cell exposure to the α₁-adrenoceptor agonist phenylephrine (PE, 20 μM) and IGF-1 (60 ng/ml) for 72 h both induced a significant increase of cell size indicating myocyte hypertrophy, which could be separately blocked by the protein kinase C inhibitor staurosporine (20 nM) and the tyrosine kinase inhibitor genistein (15 μM). Western blots of cell proteins prepared from myocyte cultures showed a single protein band at 75 kD recognized by the anti-Kv1.5 antibody, and demonstrated a 56% reduction in the Kv1.5 immunoreactive protein level in the PE-treated cell preparations. This suppression was not affected by staurosporine, but was remarkably attenuated by W7 (20 μM), a selective calmodulin antagonist. In contrast to PE, a 48% enhancement of the protein expression of Kv1.5 channel was induced by IGF-1 and this stimulation was specifically blocked by genistein. Our findings suggest that the differential regulation of cardiac Kv1.5 K⁺ channel expression can be produced by α₁-adrenoceptor activation and IGF-1 via distinctive signalling pathways. Calmodulin-dependent kinase and tyrosine kinase contribute importantly to the α₁-adrenoceptor-mediated decrease and the IGF-1-mediated increase in cardiac Kv1.5 K⁺ channel expression, respectively. Received: 19 August 1997 / Accepted: 14 January 1998     

The expression of the Goodpasture antigen-binding protein (ceramide transporter) in adult rat brain

The Goodpasture antigen-binding protein (GPBP) plays a critical role in brain development. Knockdown of GPBP leads to loss of myelinated tracts in the central nervous system and to extensive apoptosis in the brain during early embryogenesis. GPBP was initially identified as a protein associated with the autoantigen in Goodpasture autoimmune syndrome, where it was shown to be a kinase that regulates type IV collagen organization. GPBP isoforms bind and transport ceramide from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus and are therefore also known as ceramide transporters (CERT). Ceramide dysregulation is involved in autoimmunity and neurodegenerative disorders.In order to analyze the possible role of GPBP in neuroinflammation and neurodegeneration we studied the basal GPBP expression in normal rat brain. High levels of immunoreactivity were detected in neurons of the cerebral cortex, hippocampal formation, the basal ganglia, the olfactory bulb and nuclei of the thalamus, the hypothalamus and the septal area. Lower expression levels of GPBP were observed widely throughout the brain, suggesting that GPBP plays an important role in central nervous system neuron function.