亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体

本文介绍采用免抗鼠IgM血清制备的亲和层祈柱从小鼠腹水中一步提纯单克隆抗体IgM的方法。提纯的IgM应用琼脂糖电泳检测，为一个区带；应用还原条件下的SDS—PAGE检测．分离为分子量～80K的重链和～25K的轻链两条区带，几未见其他杂带；应用免疫印染法鉴引．进一步确证为IgM，不合常见的杂质IgG。实验过程还发现提她的IgM不够稳定，在贮存过程有降解现象。另外厘用同一亲和柱从吸附IgG后的小鼠血清中提取多克隆抗体IgM的效果也是良好的，经用还原条件下的SDS—PAGE检测，同样也只分离为轻，重链两条区带，未见混有其他杂蛋白。     

酶标记兔抗鼠免疫球蛋白的制备与应用

用小鼠血清提取的IgG和IgM混合物,免疫家兔获得血清,再经盐析提纯,酶标记,制成酶标记免抗鼠混合免疫球蛋白(酶标记兔抗鼠IgG-M)。该酶结合物应用效价为1∶8,000-1∶10,000,检测小鼠Ig-G-M的敏感度为0.0625ug/ml。在制备抗甲肝病毒单克隆抗体的大量应用中表明,这种酶标记兔抗鼠Ig-G-M可以检测出分泌IgG和IgM的杂交瘤非特异反应少,结果可靠,并大大减少了杂交瘤初筛的工作量。     

Fab’酶标法用于高灵敏ELISA的研究Ⅰ.抗人肝癌铁蛋白Fab’的制备与鉴定

用硫酸钠-DEAE纤维素层析法从兔抗人肝癌铁蛋白的血清中提纯相应的IgG,回收率为68％。当IgG浓度为8mg/ml时,免疫效价为1:64。再用胃蛋白酶将IgG消化成F(ab′)_2,回收率为65％,分子量为92,000,效价较IgG略有降低。F(ab′)_2用10mM巯基乙醇在pH6.0、37℃的条件下反应1.5小时而被还原成Fab′,回收率达74％,分子量为46,000。Fab′分子中的巯基数为0.95～1.28,平均1.14和理论值1.0接近,符合酶标的要求。若延长还原时间将导致巯基数/分子增加,提示轻-重链间的二硫链亦被还原而可能导致抗体活力的丧失。     

SARS患者特异性SARS-CoV抗体变化的观察

目的　研究SARS患者特异性SARS CoV抗体IgG、IgM动态变化规律 ,探讨机体感染SARS CoV后免疫应答的可能模式及流行病学意义 ,为科学的防治SARS提供理论依据。方法　ELISA测定北京地区最早感染SARS CoV的 3条传播链的SARS患者 4 7例 ,12 4份血清中SARS CoV特异性抗体IgG、IgM。其中 ,山西链 9人 ,13份血清 ;香港链 31人 ,84份血清 ;北京链 7人 ,2 7份血清。结果　 3条传播链SARS患者IgM阳性率 73% ,IgG阳性率 86 %。IgM最早于发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 2～ 3周 ;持续时间短 ,1月后 6 0 %患者IgM逐渐阴转。IgG最早也可在发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 3～ 4周 ,3月后IgG抗体阳性率减少。机体感染SARS CoV后 ,抗体出现有 3种模式。结论　机体感染SARS CoV后 ,近 90 %患者可出现特异性IgG ,病程 3～ 4周阳性率最高 ;特异性IgM抗体在病程2～ 3周阳性率最高 ,但多数只持续 2 0～ 30d。特异性IgG抗体表现 3种免疫应答模式。     

抗兔μ链和抗兔γ链血清的制备及初步应用

用常规生化方法提取正常兔血清中的IgM,用吸附法制备抗兔μ链血清。免疫电泳证明所制备的抗兔μ链血清与兔全血清仅有一条沉淀线,与兔IgG、IgA没有交叉反应。与抗兔μ链结合的兔血清成份有抗体活性,对2-巯基乙醇敏感;分子排阻层析证明,分子量与入骨髓瘤IgM相同。同时制备了抗兔Υ链血清。应用这二种血清检测经福氏2a志贺氏免疫兔的血清抗体证明它们分别对IgM、IgG有特异性,可用于观察免疫后特异IgM、lgG抗体产生的动态规律。     

安泰吉(北京)生物技术有限公司

<正>大鼠、小鼠抗体亚型快速检测卡媲美ELISA灵敏度,用于检测杂交瘤培养上清和纯化抗体的重链亚类和轻链亚型。小鼠亚型检测卡可鉴定IgG1、IgG2a、IgG2b、Kappa、Lambda和IgM。大鼠亚型检测卡可鉴定IgG1、IgG2a、lgG2b、IgG2c、Kappa、Lambda、IgA和IgM。     

提纯血清和腹水中IgG的一种简单非层析技术

几年前，Chanutin与Curnirh报道：在酸性条件下，短链脂肪酸如正辛酸可沉淀血浆中不同蛋白。根据这一理论，Stelnbuch与Audran研究了用正辛酸提纯哺乳动物血清中IgG的方法，而Russo等报道了这一方法在提纯小鼠腹水中McAb的应用。     

免疫球蛋白轻链基因的结构、功能和表达

免疫球蛋白或抗体是哺乳动物血清中的重要蛋白质。最有代表性的免疫球蛋白分子是小鼠的IgG,它是由四条多肽链组成,其中两条相同长度的短链称为轻链(tightchain),另外两条相同的长链为重链(heavy chain)。通过链间和链内的双硫键使其相互连接。IgG是各种免疫球蛋白分子的基本结构,各种不同的免疫球蛋白或者是IgG的寡聚体或者为其多聚体。免疫球蛋白的轻链多肽和重链多肽的氨基末端部分为     

应用辛酸法提取血清和腹水中的免疫球蛋白

<正> 1960年Chanutin首先报告在酸性条件下,利用短链脂肪酸(如辛酸)分步沉淀分离血浆蛋白。1969年Steinbuch等用该法提取哺乳动物血清中IgG,此后Russo等(1983)用此法从小鼠腹水中分离单克隆抗体。1987年McKinney等对用辛酸提取哺乳动物血清中IgG的因素作了探讨。我们参考McKinney的方法略加修改,分离人、兔和小鼠血清中的Ig及小鼠腹水中单克隆抗体,并与其他三种提取Ig的方法作比较。现报告如下。     

小鼠血清免疫球蛋白G、M和单克隆抗体的分离提纯

结合几种生化技术从C_(57)BL/6J小鼠分离得纯度好的IgG和IgM。由单克隆抗体经亲和层析柱和A蛋白—琼脂糖也分离得产量高、纯度好的小鼠IgG_1和IgM。用分离的IgG免疫得兔抗小鼠IgG血清可用为淋巴细胞杂交瘤技术中的试剂。     

抗白念珠菌天然抗体的检测与分析

目的检测正常机体内是否存在抗白念珠菌天然抗体。方法取饲养于无菌条件下的C57BL/6小鼠和SCID小鼠外周血,ELISA和流式细胞术检测血清中抗白念珠菌IgM和IgG抗体的水平。结果ELISA结果显示,与SCID小鼠相比,C57BL/6小鼠血清中存在一定滴度的抗白念珠菌IgM,但没有抗白念珠菌IgG;经白念珠菌预先吸附后,正常血清IgM与白念珠菌的结合明显减弱。流式细胞术分析显示,C57BL/6小鼠血清与白念珠菌的反应明显增强。结论正常机体内天然存在与白念珠菌结合的以IgM型为主的天然抗体。     

免疫透射比浊法测定尿轻链

免疫球蛋白（Ig）是血清中重要的蛋白质,尿液中也有微量存在。免疫球蛋白由二条重链和二条轻链组成,重链有γ、α、μ、δ、ε五种,分别对应于IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,轻链有二种,每个免疫球蛋白分子或含kappa轻链,     

抗人IgMμ链单克隆抗体的一步纯化法

本文应用快速蛋白液相色谱法(FPLC)直接从小鼠腹水中一步纯化抗人IgMμ链单克隆抗体(McAb),其纯度经全自动快速平放电泳检定为单一区带,优于DEAE—纤维素法。在具备FPLC仪器的情况下,本法分变率高,分离速度快,具有实用价值。     

灭活SARS冠状病毒疫苗对小鼠脏器影响的实验研究

目的:探讨灭活SARS冠状病毒疫苗对小鼠是否有损伤作用。方法:用灭活SARS冠状病毒分别免疫BALB/c和C57BL/6小鼠;ELISA法检测小鼠血清中抗SARS冠状病毒抗体水平;免疫8周后取小鼠各脏器,观察其病理形态学改变。结果:免疫8 d后,小鼠血清中就可检测到特异的IgM、IgG抗体;组织切片染色观察,可见少数小鼠肺及肝组织出现轻度损伤,其他脏器未见病变。结论:SARS冠状病毒灭活疫苗可诱导小鼠产生特异性抗体,同时没有造成严重的器官损伤。这将为SARS疫苗进入临床研究打下基础。     

5种Ig蛋白重链在黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中的表达及其临床病理意义

目的探讨黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma)中Ig蛋白重链表达及其鉴别诊断价值和临床病理意义。方法收集50例非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)作为实验组,包括30例MALToma、10例滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)、10例浆细胞瘤(plasmacytoma,PC),并以10例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH)作为对照组,应用免疫组化En Vision法检测两组中IgM、IgA、IgD、IgG、IgE的表达,分析两组间及实验组3种肿瘤中Ig蛋白重链的表达,并分析MALToma中5种Ig蛋白重链表达与各临床病理特征的关系。结果IgM、IgA在实验组、MALToma及PC中的阳性率均低于对照组(P0.05);IgG、IgA在FL中的阳性率低于对照组(P0.05)。IgM在FL、MALToma、PC中的阳性率及表达强度呈升高趋势(P0.05);IgG的阳性率呈下降趋势(P0.05)。Ig蛋白重链在两组表达模式有3种:单种Ig重链、全阴性Ig重链缺失及多种Ig重链表达。MALToma、FL、PC中单种Ig重链/全阴性Ig重链缺失阳性率分别为86.7%、60%、80%,对照组中均为多种Ig重链表达,3种肿瘤与RLH中单种Ig重链/全阴性Ig重链缺失阳性率比较差异均有统计学意义(P0.05)。MALToma中IgG阳性率与肿瘤细胞类型相关(P0.05)。结论 IgM和IgG在FL、MALToma、PC表达呈此消彼长趋势,支持生发中心后来源的MALToma和PC大多经历了抗体类别转换,且高频表达单种IgG。MALToma中单种Ig重链/全阴性Ig重链缺失表达是一种常见高频事件,有助于MALToma与RLH的鉴别诊断。     

SENP1对小鼠B细胞数量及血清免疫球蛋白的影响初探

本研究利用Cre/LoxP系统构建B细胞条件性敲除Senp1基因小鼠模型(CKO),探讨了SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)对C57BL/6小鼠B细胞数量以及对血清免疫球蛋白产生的作用。利用流式细胞术检测对照组(WT)及实验组(CKO)小鼠骨髓、脾脏及淋巴结B细胞含量及分布情况,结果显示,Senp1敲除后可显著降低脾脏和淋巴结中B细胞的比例,而对骨髓中的B细胞比例没有影响。利用ELISA方法检测血清中免疫球蛋白IgM、IgG、IgG3及IgG1亚型的水平,结果显示CKO小鼠血清IgG1的含量明显低于WT小鼠,而IgM、IgG及IgG3含量没有显著差别。以上结果提示SENP1在小鼠外周淋巴器官B细胞分布及IgG1产生过程中可能起调控作用。     

用重组SAG1抗原检测弓形虫抗体

目的探讨重组SAG1抗原对弓形虫IgG和IgM抗体的检测效果。方法用rSAG1作抗原建立免疫印迹方法（rSAG1-WB）,与玻片虫体过氧化物酶免疫染色试验（TSHE）平行检测不同来源血清。结果15例病原学检查阳性小鼠血清和5例免疫兔血清的IgG抗体均为阳性,30例正常小鼠血清和10例正常兔血清均未出现阳性反应。rSAG1-WB检测可疑弓形虫病患者血清阳性率为60．3％（38／63）,献血员血清阳性率为6％（3／50）,与TSHE检测结果（65．1％和4％）均无统计学差异（P〉0．05）。1例IgM强阳性血清和13例IgM弱阳性血清在Western—blot检测中分别出现相应的强阳性与弱阳性反应,50例献血员血清均未出现IgM阳性反应,结果与TSHE一致。结论rSAG1-WB检测弓形虫IgG和IgM抗体均具有高度的敏感性和特异性．与TSHE的符合率高。     

沙眼衣原体重组口服活疫苗的体液免疫学特性

目的检测所构建的沙眼衣原体(Ct)重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答。方法将所构建的重组菌以5×108菌落形成单位(CFU)/只的剂量,口服免疫雌性Balb/c小鼠,随机分为7组,每组3只。于免疫后第2,7,14,21,28,35和42d各取1组,采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本。分别以D型Ct和鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原,检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG,IgA和IgM。取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本,分别用于检测与C型Ct的交叉反应。结果在血清标本中,有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM,在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA。抗D型CtIgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应。结论所构建的疫苗株免疫小鼠后,能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生。     

几种戊型肝炎试剂的比较及IgG抗体定量方法的建立

目的 利用多种抗戊型肝炎病毒(HEV)IgM、IgG检测试剂对戊型肝炎恢复期血清进行确认,建立戊型肝炎病毒ISG抗体的定量检测方法,初步应用于戊型肝炎疫苗接种后抗体效价检测.方法 应用多种抗-HEV IgM、IgG试剂对江苏省确诊的戊型肝炎病人发病后6个月以上的血清样品进行检测;抗-HEV IgG阳性样本应用ORF2 C端抗原和ORF3抗原Western blot进行确认,用WHO抗-HEV Ig标准品标定确认阳性的混合血清抗-HEV IgG的含量,制备抗-HEV IgG定量检测的线性标准品,建立戊型肝炎疫茼免疫后抗体定量检测方法.结果 42份戊型肝炎恢复期血清采用G、K、MP、万泰4种抗-HEV IgG试剂检测的阳性率分别为71.4%、78.6%、92.9%、100%,G试剂阳性率低于MP(X2=5.19,P<0.05)和万泰试剂(χ~2=11.76,P<0.01),K试剂阳性率明显低于万泰试剂(χ~2=7.96,P<0.01);MP、G、X、万泰、K试剂抗-HEV IgM试剂的阳性率分别为21.4%、7.1%、21.4%、64.3%、78.6%;万泰和K试剂的阳性率均明显高于MP(χ~2=15.75,P<0.01;X2=27.43,P<0.01).Western blot确认试验分别有30和18份血清与ORF2、ORF3抗原有阳性反应.13份血清混合为HEV-D01,其抗-HEV IgG浓度经标定为57.94 U/ml.制备了浓度范围为0.077～0.877 U/ml的7个1.5倍系列稀释的定最线性标准品,用于戊肝疫苗临床试验,试验过程中对高、中、低浓度质控品的定量值均在均数±2s范围内,变异系数(cv)分别为16%、16%、12%.结论 不同抗-HEV IgM和IgG试剂之间的质量存在较大差别,建立了抗-HEV IsG定量检测标准品,适用于戊肝疫苗的临床血清抗体IgG定量检测.     

草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM, 以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠, 3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 用ELISA法对杂交瘤进行筛选, 并鉴定mAb的生物学特性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后, 共获得5株抗草鱼IgM的mAbs, 分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6, 它们的细胞上清ELISA效价为1∶ 3 200～1∶ 6 400, 其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶ 6 400和1∶ 256 000, 经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1.交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应, 除mAb 4B3外, 其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应, 而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应.mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应, 而与其他鱼类血清反应很弱.免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链.ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L.结论:制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等, 具有广阔的应用前景.