胫骨癌痛大鼠脊髓Toll样受体4及其下游细胞因子表达的变化

目的 评价胫骨癌痛大鼠脊髓Toll样受体4(TLR4)及其下游细胞因子(TNF-α和IL-1β)表达的变化,探讨TLB4信号转导通路在骨癌痛中的作用.方法 健康雌性SD大鼠72只,体重150～180 g,随机分为3组(n=24):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和胫骨癌痛组(BP组).BP组于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μl Walker 256(1×10~5)乳腺癌细胞制备胫骨癌痛模型,S组仅左侧胫骨上端注入Hank液5μl.于接种前(基础状态)、接种后2、4、6、9、12、14、16、18和21 d时行痛行为学评分,测定机械痛阈.于接种后6、12、18 d时行胫骨X线摄片,观察胫骨破坏情况,并于各时点取3只大鼠,处死后取L_(4～6)脊髓,测定TLR4、TNF-α和IL-1β的mRNA表达,各时点另取3只大鼠,处死后取L_(4～6)脊髓,计数TLR4阳性细胞;测定TLR4蛋白表达.结果 与基础值比较,BP组接种后6～21 d时痛行为学评分逐渐升高,机械痛阈逐渐降低(P＜0.05),C组和S组各时点痛行为学评分差异无统计学意义(P＞0.05).与C组和S组比较,BP组痛行为学评分升高,机械痛阈降低,TLR4 mRNA和蛋白、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达上调,TLR4 阳性细胞计数增多(P＜0.05或0.01).BP组接种后6 d即可见左侧胫骨上端骨小梁轻微缺损,12 d时多处骨小梁缺损,骨皮质破坏,18 d时胫骨上端双侧骨皮质明显破坏,大片骨质缺损.结论 大鼠胫骨骨髓腔内肿瘤细胞通过激活脊髓TLR4,导致其下游细胞因子大量释放,而诱发骨癌痛.TLR4可能是胫骨癌痛潜在治疗靶点.     

沉默髓系细胞触发受体1基因对神经病理性痛大鼠的影响

目的探讨髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1,TREM1)在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制。方法成年雄性SD大鼠,体重220~300 g,取鞘内置管成功大鼠48只,随机分为四组(n=12):对照组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、TREM1sh RNA组(RNAi组)和阴性慢病毒组(Virus组)。采用慢性坐骨神经压榨性损伤法(CCI)制备神经病理性痛模型。RNAi组于造模前1周鞘内注射p GLVU6/RFP/Puro-sh RNA 30μl(1×109IU/ml);Virus组、CCI组和S组分别鞘内注射等量阴性慢病毒和生理盐水。于造模前1 d和造模后1、3、7、14d测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于造模后14 d痛阈测定结束后,处死大鼠,取L4-5节段脊髓组织,采用Western blot法测定脊髓TREM1、TLR4、My D88、IκBα和p-NF-κB p65蛋白含量,RT-PCR法测定脊髓IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量。结果与S组比较,CCI组和Virus组TREM1蛋白含量明显增加(P0.05);与CCI组比较,RNAi组TREM1蛋白含量明显降低(P0.05)。与S组比较,CCI组、RNAi组和Virus组造模后各时点MWT和TWL明显降低(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显增加,IκBα蛋白含量明显降低(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显升高(P0.05)。与CCI组比较,RNAi组大鼠造模后各时点MWT和TWL明显升高(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显降低,IκBα蛋白含量明显增加(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论干扰TREM1基因可以缓解大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

脊髓TNF-α在小鼠骨癌痛发生中的作用

目的 探讨脊髓TNF-α在小鼠骨癌痛发生中的作用.方法 雄性C3H/He小鼠72只,体重18～25 g,周龄4～6周,随机分为3组(n=24):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)和TNF-α拮抗剂依那西普组(E组).采用股骨远端骨髓腔注射肿瘤细胞的方法制备小鼠骨癌痛模型,S组注射等量不含肿瘤细胞的α-MEM,E组于注射肿瘤细胞前3 d、注射前即刻、注射后3、6 d时分别腹腔注射依那西普100μg(溶于0.5 ml生理盐水).分别于注射肿瘤细胞前、注射后3、5、7、10、14 d(T1～6)时测定热痛阈和机械痛阈.分别于T4～6时随机取8只小鼠测定痛阈后处死取脊髓,采用RT-PCR法检测TNF-αmRNA的表达水平.结果 与S组比较,BCP组T3～6时热痛阈和T5、6时机械痛阈降低,T4～6时TNF-αmRNA表达上调,E组T4～6时热痛阈降低,T5,6时机械痛阈降低、TNF-αmRNA表达上调(P<0.05);与BCP组比较,E组T4～6时热痛阈、T6时机械痛阚升高,T5,6时TNF-α mRNA表达下调(P<0.05).结论 脊髓TNF-α参与了小鼠骨癌痛的发生.     

血必净对尿源性SIRS猪肾组织细胞因子的影响

目的 观察血必净注射液对尿源性SIRS猪肾组织细胞因子表达的影响,探讨血必净治疗尿源性SIRS的作用机制. 方法 健康实验猪45头按随机数字表法分为假手术对照组、模型组和血必净治疗组3组,每组15只,每组所有动物按时间点又分为术后0、4、6、12和24 h5个时间点亚组.建立尿源性SIRS猪模型.应用RT-PCR法检测肾组织中TNF-α、IL-6、IL-10、NF-κB p65mRNA的表达;采用Western blot法检测肾组织中NF-κB的活性. 结果 模型组猪的SIRS表现最为明显,血必净治疗组SIRS表现明显较轻.模型组猪肾组织TNF-α、IL-6、NF-κB p65mRNA的表达以及NF-κB的蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.05);血必净治疗组较模型组的TNF-α、IL-6、NF-κB p65mRNA的表达以及NF-κB的蛋白表达显著降低(P＜0.01);IL-10 mRNA的表达情况则与之相反. 结论 血必净通过抑制NF-κB活性、上调IL-10、下调TNF-α,IL-6及NF-κB的表达而达到治疗尿源性SIRS的作用.     

钙调神经磷酸酶在弗氏佐剂致大鼠炎性痛中的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在弗氏佐剂致大鼠炎性痛痛觉过敏中的作用。方法选择雄性SD大鼠75只,体重200~300g,将其随机均分为对照组(C组)、完全弗氏佐剂(CFA)组(F组)和CaN+CFA组(NF组)。C组大鼠右侧后爪趾底注射生理盐水100μl,F组和NF组大鼠右侧后爪趾底注射CFA 100μl制备炎性痛模型,NF组大鼠于右侧后爪趾底注射CFA前1d鞘内注射CaN 10 U。三组大鼠于右侧后爪趾底注射前30 min(T0)、注射后0.5h(T_1)、1h(T_2)、2h(T_3)及4h(T_4)测定大鼠热刺激缩足潜伏期(PWTL);同时各取5只大鼠脊髓组织,Western blot法测定各组大鼠脊髓中CaN、核因子κB(NF-κB)p65蛋白含量;RT-PCR法测定大鼠脊髓中CaN及NF-κB基因的表达。ELISA法测定大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α和IL-10浓度。结果T_2~T_4时F组,T_3、T_4时NF组PWTL明显短于T0时和C组(P0.05);T_2~T_4时NF组PWTL明显长于F组(P0.05)。T_1~T_4时F组,T_2~T_4时NF组脊髓组织CaN蛋白含量明显低于,NF-κB p65蛋白明显高于T0时和C组(P0.05);T_2~T_4时F组、NF组脊髓组织CaN基因表达、IL-10浓度明显低于,NF-κB基因表达及IL-1β、TNF-α浓度明显高于T0时和C组(P0.05);T_1~T_4时NF组脊髓组织CaN蛋白含量和基因表达明显高于,NF-κB p65蛋白含量和基因表达及IL-1β、TNF-α明显低于,IL-10浓度明显高于F组(P0.05)。结论 CaN通过抑制NF-κB,调节抗炎细胞因子和促炎细胞因子的平衡,抑制大鼠炎性痛的发生发展。     

髓系触发受体-1在脆弱类杆菌诱导小鼠脓毒血症中的作用

目的 探讨小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体(Lentivector,LV)TREM-1 vshRNA对脆弱杆菌脓毒血症小鼠脾脏中促炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达及NF-κB通路的影响.方法 将清洁级BALB/c雄性小鼠分成4组,即正常对照组(C组),脆弱类杆菌脓毒症模型生理盐水组(S组),TREM-1 vshRNA干扰实验组(T组)和GFPvshRNA干扰实验组(G组).观察各组中小鼠脾内TREM-1,TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白表达以及IkBa,pDAP12,NF-κB p65的表达情况的变化.结果 与C组比,T组TREM-1 mRNA及蛋白表达均有显著增加(P＜0.01);T,G,S组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较C组显著增加(P＜0.01);T组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较S,G组明显降低(P＜0.01).S组脾细胞中的pDAPl2和核内NF-κB p65蛋白表达水平明显增强,IκBa蛋白表达水平降低;而T组与S组比较,pDAP12和NF-κB p65蛋白的表达水平显著下调.结论 小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体可选择性抑制TREM-1表达,下调脆弱类杆菌诱导的促炎症因子的分泌,而转染可能是通过下调DAPl2的表达,稳定IkBa/NF-κB复合物,抑制TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8基因的转录,而对脆弱类杆菌脂多糖炎症反应产生抑制作用.     

磷酸化核转录因子-κB在骨癌痛大鼠脊髓背角的表达变化

目的 观察骨癌痛大鼠脊髓水平磷酸化核转录因子κB(phospho-nuclear factor-κB,p-NF-κB)的表达位置及表达变化. 方法 雌性未交配Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,体重160 g～200 g,采用随机数字表法将其随机分为两组:假手术组(S组)、骨癌痛(bone cancer pain,BCP)组(BP组),每组24只.选用yon Frey纤维丝检测各组大鼠造模前及造模后3、7、14、21 d机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT),评价疼痛行为学变化.采用免疫荧光法检测S组和BP组术前ld及术后7、14、21 d大鼠脊髓L4-6节段背角Ⅰ、Ⅱ板层p-NF-κB阳性细胞数的变化.免疫荧光双标法检测脊髓L4-6节段背角Ⅰ、Ⅱ板层p-NF-κB与神经元标志物神经元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)、小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子-1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1)、星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glia fibrillary acidic protein,GFAP)共表达情况. 结果 各组肿瘤细胞接种前MWT比较差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,BP组肿瘤细胞接种后第7天MWT[(3.57±1.29)g]、第14天MWT[(1.66±0.39)g]、第21天MWT[(1.40±0.16)g]降低(P＜0.05);S组各时间点MWT差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比较,BP组大鼠术后7d脊髓L4-6节段背角Ⅰ、Ⅱ板层p-NF-κB表达水平升高,随时间延长逐渐升高(P＜0.05).p-NF-κB几乎都与GFAP共表达,而很少与NeuN、Iba-1共表达. 结论 BCP大鼠脊髓背角水平星形胶质细胞内p-NF-κB参与介导BCP大鼠机械痛敏.     

右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓Toll样受体4和NF-κB表达的影响

目的 评价右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓Toll样受体4和NF-κB表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠108只,6～8周龄,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和右美托咪定组(D组).采用坐骨神经慢性压榨性损伤法制备神经病理性痛模型,D组于术后即刻开始至处死前1d腹腔注射右美托咪定50μg/kg,1次/d.S组和NP组以等容量生理盐水替代.于术前1d,术后3、7、14 d时测定机械痛阈和热痛阈,并于术后测定痛阈后处死,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达,采用免疫组织化学法测定脊髓背角TLR4和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,NP组和D组机械痛阈和热痛阈降低,TLR4及其mRNA、NF-κB及其mRNA的表达上调(P＜0.05);与NP组比较,D组机械痛阈和热痛阈升高,TLR4及其mRNA、NF-κB及其mRNA的表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制TLR4和NF-κB表达有关.     

TLR4/NF-κB信号通路在多次七氟烷麻醉致新生大鼠远期认知功能障碍中的作用

目的评价Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路在多次七氟烷麻醉致新生大鼠远期认知功能障碍中的作用。方法 SPF级健康新生SD大鼠75只, 6日龄, 体质量12～20 g, 雌雄不拘, 采用随机数字表法分为3组(n=25):对照组(C组)、多次七氟烷麻醉组(S组)和TLR4抑制剂+多次七氟烷麻醉组(I+S组)。S组和I组大鼠于出生后6、7和8 d时吸入3%七氟烷麻醉2 h。I组大鼠于每次吸入七氟烷麻醉前即刻腹腔注射TLR4抑制剂TAK-242 10 mg/kg。于出生后29 d时行旷场实验评估自发活动能力, 于出生后30～34 d时行Morris水迷宫实验评估认知功能。行为学测试结束后采集腹主动脉血标本, 然后深麻醉下处死大鼠分离海马组织, 采用ELISA法检测血清S100β、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及海马IL-1β、IL-6和TNF-α的水平, 采用Western blot法测定TLR4、NF-κB p65和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的表达, 计算p-NF-κB p65/NF-κB p65比值, HE染色后观察海马CA1区病理学...     

NF-κB信号通路在鞘内注射血小板活化因子诱发大鼠痛敏中的作用

目的 评价NF-κB信号通路在鞘内注射血小板活化因子(PAF)诱发大鼠痛敏中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠64只,体重200～250 g,随机分为6组:人工脑脊液(ACSF)对照组(AC组,n=16)鞘内注射ACSF 10μl;PAF诱发大鼠痛敏组(PAF组,n=16)鞘内注射PAF 10μg(溶于10μl ACSF);二甲基亚砜(DMSO)对照组(DC组,n=8)和低、中和高剂量SC-514组(S1-3组,n=8)分别于鞘内注射PAF前2 h腹腔注射0.1%DMSO溶液2 ml、SC-514(溶于2 ml 0.1%DMSO溶液)10、50、100 mg/kg.分别于鞘内给药前、给药后5、15、30、45和60 min时测定机械痛阈和热痛阈,随后每间隔30 min测定1次,连续4 h,ELISA法检测脊髓TNF-α和IL-lβ的表达.结果 鞘内注射PAF可诱发机械痛敏和热痛敏,上调大鼠脊髓TNF-α和IL-1β的表达;Iκβ激酶-β抑制剂SC-514可剂量依赖性地减轻PAF诱发的痛敏,抑制脊髓TNF-α和IL-1β的表达上调.结论 NF-κB信号通路参与了鞘内注射PAF诱发大鼠痛敏的过程.     

鞘内注射艾芬地尔对骨癌痛小鼠脊髓NR2B mRNA表达的影响

目的 探讨鞘内注射艾芬地尔对骨癌痛小鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)mRNA表达的影响.方法 雄性C3H/HeJ小鼠140只,体重20～25 g,4～6周龄,随机分为5组(n=28):假手术组(S组)、骨癌病组(B组)和艾芬地尔2.5μg、5μg、10μg组(I1-3组).I1-3组和B组于小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种NCTC 2472溶骨性纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;S组不接种肿瘤细胞.I1～3组于接种肿瘤细胞后14 d分别鞘内注射艾芬地尔2.5、5、10 μg,B组和S组鞘内注射艾芬地尔溶媒.各组于接种肿瘤细胞前1 d、鞘内注射艾芬地尔或溶媒前1 h、注射后2、12和24 h(T1～5)时随机取7只小鼠测定机械痛阈和热痛阈,并于T2～5,时测定后断头处死,取L3～5脊髓,采用RT-PCR法测定脊髓组织NR2B mRNA的表达水平.结果 与S组比较,除I3,组T3时热痛阈差异无统汁学意义(P0.05)外,B组和I1～3组机械痛阈和热痛阈均降低(P<0.05),B组和I1组脊髓组织NR2B mRNA表达上调,I2组该指标表达下调(P<0.05);与B组比较,I2.3组机械痈阈和热痛阈升高,脊髓组织NR2B mRNA表达下调(P<0.05),I1组各时点以上指标差异均无统计学意义(P0.05);与I2组比较,I3组机械痛阈和热痛阈升高,脊髓组织NR2B mRNA表达下调(P<0.05).结论 鞘内注射艾芬地尔可通过阻断含2B亚基的NMDA受体缓解小鼠骨癌痛,并下凋脊髓组织NR2B mRNA的表达抑制痛敏反应.     

丙泊酚对大鼠移植肝NF-κB活化、ICAM-1、IL-1β和TNF-α表达的影响

目的 探讨丙泊酚对供肝保护的机理.方法 24只健康雄性SD大鼠,采用Kamada袖套法建立大鼠原位肝移植动物模型,随机均分为三组.移植肝再灌注前30 min,P100组和P50组分别腹腔注射丙泊酚100 mg/kg和50 mg/kg;C组腹腔注射生理盐水15 ml/kg作为对照.于肝脏再灌注6 h抽取下腔静脉血,测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,ELISA法测定肝组织核因子(NF)-κB p65转录因子,免疫组织化学染色检测肝组织细胞间黏附分子(ICAM)-1、白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达.结果 再灌注6 h后,P100组、P50组大鼠血浆ALT、AST活性较C组明显降低(P<0.01);P50组ALT、AST活性较P100组增高(P<0.01).与C组相比,P100组和P50组在再灌注6 h大鼠肝组织NF-κB p65转录因子活化水平、TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA明显降低(P<0.01).P100组大鼠在再灌注6 h肝组织NF-κB p65转录因子活化水平、TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达明显低于P50组(P<0.01).结论 丙泊酚能抑制大鼠局灶性肝缺血-再灌注时NF-κB的活化,进而抑制炎症反应.这可能是其肝保护作用的机制之一.     

腺苷酸活化蛋白激酶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及可能机制

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及可能机制。方法将48只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组,每组12只。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,AMPK抑制剂组大鼠建模前腹腔注射Compound C 20 mg/kg,生理盐水组建模前给予等量生理盐水。于建模后6、12、24和48 h用Basso、Beattie、Bresnahan(BBB)评分法评估大鼠神经运动功能,末次评估完成后处死大鼠并取脊髓组织标本,用HE染色法检测大鼠脊髓组织病理变化,TUNEL法检测大鼠脊髓组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测大鼠脊髓组织中AMPK、p-AMPK、NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白表达,ELISA法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果建模后6、12、24和48 h,模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组BBB评分均低于假手术组,而AMPK抑制剂组BBB评分高于模型组和生理盐水组,差异均有统计学意义(P 0.05)。假手术组脊髓组织结构清晰完整,未见神经元凋亡;模型组和生理盐水组大鼠脊髓组织出现神经元变性和坏死、炎性细胞浸润,可见大量神经元凋亡;AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织病理改变减轻,神经元凋亡减少。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中p-AMPK、NF-κB和p-IκBα蛋白相对表达量均高于假手术组,AMPK和IκBα蛋白相对表达量均低于假手术组,差异均有统计学意义(P 0.05);AMPK抑制剂组p-AMPK、NF-κB和p-IκBα蛋白相对表达量与模型组和生理盐水组相比均降低,差异均有统计学意义(P 0.05),AMPK和IκBα蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度均高于假手术组,AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度与模型组和生理盐水组相比均降低,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论 AMPK可能参与大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与NF-κB通路介导的炎性反应有关;抑制AMPK活性可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤、保护神经元。     

富氢液对大鼠骨癌痛行为学及脊髓低密度脂蛋白受体1/核因子-κB通路的影响

目的 探讨富氢液对大鼠骨癌痛行为学及脊髓低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low-density lipoproteinreceptor-1,LOX-1)/NF-κB通路的影响. 方法 清洁级健康雌性SD大鼠32只,体重180～200 9,按照随机数字表法分为4组(每组8只):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、骨癌痛+富氢液组(BH2组)和骨癌痛+生理盐水组(BS组).BH2组在造模后1、3、5、7、9、11、13 d腹腔内注射富氢液(5 mg/kg),BS组注射等量的生理盐水(5 mg/kg).分别在造模前1d,造模后1、3、5、7、10、12、14 d测定大鼠的机械缩足反射阈值(paw mechanical withdrawal threshold,PMWT)和热缩足反射潜伏期(paw thermal withdrawal latency,PTWL).术后14 d行为学测定后处死大鼠,取脊髓腰膨大节段,利用Western blot技术检测脊髓LOX-1、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的表达. 结果 与S组比较,BCP组造模后3～14 d大鼠PMWT和PTWL明显下降(P＜0.05);与BS组比较,BH2组术后7～14 d PMWT和PTWL明显升高(P＜0.05).与S组比较,BCP组和BS组LOX-1、p-NF-κB表达明显升高(P＜0.05);与BS组比较,BH2组LOX-1、p-NF-κB表达明显下降(P＜0.05). 结论 腹腔内注射富氢液明显抑制大鼠骨癌痛,其机制可能与抑制LOX-1/NF-κB通路活化有关.     

骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化

目的 评价骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化.方法 雌性SD大鼠,体重180～220 g,采用MADB-106鼠源性乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨建立骨癌痛模型.14d后,选择一般状况良好、体重无减轻、进食好、活动正常、热痛阈<18.5 s、机械痛阈<27.8 g的大鼠16只,随机分为2组:对照组(n=7)注射等容量生理盐水;吗啡耐受组(n=9)皮下注射吗啡3次/d,连续5 d,每天单次注射剂量按10、20、40、50、60 mg/kg递增.于造模前和造模后10 d开始隔日1次测定热痛阈和机械痛阈;造模后19 d皮下注射吗啡3 mg/ks,30 min后测定热痛阈和机械痛阈.随后处死动物,取腰段脊髓,采用RT-PCR法测定脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;采用ELISA法测定脊髓IL-1β和TNF-α的含量;采用免疫组化法测定脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力.结果 与造模前比较.对照组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈降低(P<0.05);与对照组比较,吗啡耐受组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈升高,造模后19 d时热痛阈和机械痛阈降低,左侧脊髓IL-1β mRNA和TNF-αmRNA表达升高,脊髓IL-1β和TNF-α的含量增加,脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力增强(P<0.05).结论 骨癌痛大鼠连续递增剂量腹腔注射吗啡可引起脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞进一步活化,IL-1β和TNF-α释放增加,从而发生吗啡耐受.     

脊髓背角星形胶质细胞NF-κB在紫杉醇诱发大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓背角星形胶质细胞NF-κB紫杉醇诱发大鼠神经病理性痛中的作用.方法 健康雄性SD大鼠20只,6周龄,体重180～200 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n＝10):对照组(C组)和神经病理性痛组(NP组).NP组隔日腹腔注射紫杉醇2 mg/kg,共4次;对照组隔日腹腔注射生理盐水1 ml/kg,共4次.于给药前和给药结束后1、7、14 d时分别测定体重、机械痛阈和热痛阈.给药结束后14 d时,处死大鼠,取L4～6脊髓组织,采用免疫荧光法测定脊髓背角星形胶质细胞NF-κB p65的表达.结果 两组体重比较差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,NP组给药结束后7和14 d时机械痛阈和热痛阈降低,脊髓背角星形胶质细胞NF-κB p65表达上调(P＜0.05或0.01).结论 紫杉醇通过激活脊髓星形胶质细胞中的NF-κB,诱发大鼠神经病理性痛.     

胫骨癌痛大鼠脊髓细胞外信号调节激酶5活性的变化

目的 评价胫骨癌痛大鼠脊髓细胞外信号调节激酶5(ERK5)活性的变化.方法 雌性未交配SD大鼠108只,体重160～ 180 9,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):对照组(C组)、假手术组(S组)和胫骨癌痛组(BCP组).BCP组胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射等容量生理盐水;C组不作任何处理.于接种前1d、接种后3、5、7、14和21 d时,测定机械痛阈.C组和S组于接种后21 d痛阈测定结束后随机处死6只大鼠,BCP组分别于接种后3、5、7、14和21 d痛阈测定结束后随机处死6只大鼠,取脊髓组织,采用Westernblot法测定脊髓背角磷酸化ERK5(p-ERK5)、ERK5和Fos蛋白的表达.结果 C组和S组各时点机械痛阈、脊髓背角p-ERK5、ERK5和Fos蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).与C组和S组比较,BCP组接种后7-21 d时机械痛阈下降,接种后5-21 d时脊髓p-ERK5和Fos蛋白表达上调(P＜0.05),ERK5表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞可能通过增强脊髓ERK5活性,导致其下游Fos蛋白的释放,从而诱发骨癌痛.     

盐酸戊乙奎醚对内毒素血症大鼠全身炎性反应的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚对内毒素血症大鼠血清TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),肺组织NF-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)含量的影响. 方法 健康SD大鼠60只,采用随机数字表法分为5组(每组12只):对照组(C组)、内毒素组(LPS组)、LPS+低剂量盐酸戊乙奎醚组(P1组)、LPS+中剂量盐酸戊乙奎醚组(P2组)、LPS+高剂量盐酸戊乙奎醚组(P3组).LPS组腹腔注射内毒素8 mg/kg制备内毒素血症模型,C组给予等量生理盐水,P1组～P3组给予相应剂量的盐酸戊乙奎醚5 min后注射LPS,给药6h后处死动物取标本.采用ELISA检测血清TNF-α含量,采用比色法测血清iNOS活力,Western blot检测肺组织NF-κB p65含量,并观察肺组织病理学改变. 结果 与C组比较,LPS组、P1组、P2组、P3组血清TNF-α含量显著升高(P＜0.05),iNOS活力水平明显升高(P＜0.05),肺组织NF-κB p65表达明显增高(P＜0.05);与LPS组比较,P2组、P3组血清TNF-α、iNOS活力水平和肺组织NF-κB p65含量均下降(P＜0.05),而P1组TNF-α、iNOS活力和NF-κB p65表达水平,差异无统计学意义(P＞0.05);P2组、P3组间各指标表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);P2组、P3组肺组织病理学损伤程度明显轻于LPS组(P＜0.05). 结论 盐酸戊乙奎醚可能通过下调TNF-α、NF-κB p65的表达,减少iNOS活化来抑制内毒素休克大鼠全身炎症反应.     

老龄大鼠术后早期认知功能障碍与神经调节蛋白1β的关系

目的评价老龄大鼠术后早期认知功能障碍与神经调节蛋白1β(NRG1β)的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠30只,18～20月龄,体重600～700 g,侧脑室置管成功后,采用随机数字表法分为3组(n=10):对照组(C组)、手术组(O组)和NRG1β(N组)。N组于术前1 d侧脑室注射NRG1β 0.5 μg/kg。于术后第3天行Morris水迷宫实验,随后处死大鼠,分离海马组织,采用Western blot法检测核蛋白NF-κB p65的表达,ELISA法检测IL-1β和TNF-α含量。结果与C组比较,O组和N组术后逃避潜伏期延长,海马核蛋白NF-κB p65表达上调,IL-1β和TNF-α含量升高(P<0.05);与O组比较,N组术后逃避潜伏期缩短,海马核蛋白NF-κB p65表达下调,IL-1β和TNF-α含量降低(P<0.05)。结论 NRG1β可能通过抑制NF-κB通路激活,抑制炎症反应,参与了老龄大鼠术后早期认知功能障碍的内源性保护机制。     

脊髓趋化因子配体2在大鼠胫骨癌痛中的作用

目的 探讨脊髓趋化因子配体2(CCL2)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 健康成年雌性SD大鼠84只,体重160～ 180g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=28):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(P组).P组胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射生理盐水;C组不作任何处理.于接种前ld、接种后l、3、7、10、14和21 d时,测定机械性刺激阈值.于接种前ld、接种后7、14和21'd时痛阈测定结束后,各组随机处死6只大鼠,取L4～6脊髓组织,采用ELISA法测定CCL2含量,反映其表达.接种后14 d时痛阈测定结束后,P组随机取4只大鼠,采用免疫荧光双标染色法观察脊髓背角CCL2与离子钙接头蛋白分子-1(小胶质细胞特异性标记物)、胶质纤维酸性蛋白(星形胶质细胞特异性标记物)和神经元特异核蛋白(神经元特异性标记物)的共表达情况.结果 与C组和S组相比,P组接种后7～21 d时机械性刺激痛阚下降,接种后7、14和21 d时脊髓CCL2表达上调(P＜0.05).骨癌痛大鼠脊髓背角CCL2在小胶质细胞和星形胶质细胞中存在表达,而在神经元中无表达.结论 脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞中释放的CCL2参与了大鼠胫骨癌痛的发生发展.