长臂光敏生物素和光敏地高辛核酸探针检测医学真菌灵敏度的比较研究

建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交。检测真菌的方法，并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性。设计并合成医学真菌通用引物，用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因，用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针，然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交，检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染大鼠，建立念珠菌病的实验动物模型，验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交，检测真菌的敏感性。结果表明，这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种真菌杂交呈阳性结果：与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度，实验证明后者的敏感性最高。总之，应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交，检测上述真菌既特异和敏感，又不需放射性同位素。光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针。     

PCR结合寡核苷酸探针杂交检测临床常见真菌的实验研究

目的 建立PCR结合生物标记的寡核甘酸探针斑点杂交技术,鉴定临床常见的真菌。方法 首先用真菌通用引物扩增白念球菌、热带念球菌、假热带念球菌、近平滑念球菌、光滑念球菌、解脂念球菌、克鲁斯念球菌、季也蒙念球菌、黄曲 霉、烟曲霉的核糖体大亚单位基因的保守区序列,然后用生物素标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物杂交,并将此方法用于临床标本和临床分离菌株的检测。结果 通用引物可以扩增上述11种临床常见真菌的DNA,扩增片段长度在260bp左右。9种特异性探针分别与11种真菌标准菌株的PCR扩增产物杂交,结果表明每种探针都具有高度特异性。斑点杂交法和Southerm杂交法检测敏感性相同,为100fg;琼脂糖凝胶电泳法检测敏感性为1pg。通过69例临床标本和31例临床分析菌株的检测,PCR－杂交法的结果和真菌培养法的结果基本一致。结论 PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针杂交技术可将9种临床常见真菌鉴定到种,方法快速、敏感、特异。     

光敏生物素标记核酸探针在检测人巨细胞病毒感染中的初步应用

探索建立了光敏生物素标记人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡＨｉｎｄⅢＪ．Ｎ、Ｙ、Ｏ片段作为探针检测尿液中ＨＣＭＶＤＮＡ的分子杂交方法，检测灵敏度可达５ｐｇ。研究表明该法不仅有与同位素标记探针相同的特异性和相近的灵敏度，而且更具稳定、简便、安全等优点，利于在基层推广使用。     

应用荧光定量PCR法检测病理组织中幽门螺旋杆菌感染

目的探讨荧光定量PCR方法检测病理组织中幽门螺旋杆菌（Hp）的效果,为临床Hp感染诊断提供快速有效的检测方法。方法应用荧光定量PCR法及苯胺蓝染色法分别对106例临床送检胃窦黏膜组织标本进行幽门螺旋杆菌检测,对检测结果进行对比分析。结果在106例胃窦标本中,荧光定量PCR法检测阳性例数68例,阳性率为64．2％,苯胺蓝染色法检测阳性例数46例,阳性率为43．4％。两种方法检测阳性率比较有显著性差异（P〈0．05）。结论荧光定量PCR技术用于检测病理组织中幽门螺旋杆菌,具有灵敏度高、特异性强的特点,对确诊胃镜活检标本中幽门螺旋杆菌感染具有重要应用价值。     

PCR快速检测幽门螺杆菌

应用ＰＣＲ扩增１５个幽门螺杆菌分离株的ＤＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳均显示一条２９８ｂｐ的区带，而１２株与幽门螺杆菌相关的肠道杆菌都不能扩增出该片段。ＰＣＲ可检出少至１００个幽门螺杆菌细胞，并能检出胃粘膜活检标本中的此菌，全部实验可在５小时内完成。     

2808例幽门螺旋杆菌感染检测结果分析

通过对深圳沙井街道市民门诊体检者血标本幽门螺杆菌(Hp)抗体检测,了解了本地区人群中Hp的感染情况。报告如下。材料和方法1标本来源收集2011年1月至12月2808名深圳沙井街道市民门诊体检者血标本,男性1411名,女性1397名。其中<15岁173名(男性103名,女性70名),15～24岁461名(男性193     

TaqMan探针法与尿素呼气试验法检测胃镜活检标本幽门螺旋杆菌的比较

目的:通过比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的两种检测方法,探讨TaqMan探针法在诊断幽门螺旋杆菌感染中的价值.方法:抽取70例有完整病例资料的胃镜活检标本,进行Hp分型、鉴定检测,并将实验结果与临床的碳14尿素呼气试验和病理结果进行相关性分析.结果:Hp感染的两种检测方法(TaqMan探针法和呼气实验法)一致性程度尚可(Kappa=0.550),两种方法检测的阳性率都随病理炎症程度的加重而增加,而呼气实验法检测Hp的阳性率更高(P<0.05).但TaqMan探针法可以将Hp进行不同毒力类型的鉴定,且TaqMan探针法可区分Hp的阳性强度(1+,2+,3+),其与病理的炎症程度有较好的相关性(γ=0.564,P<0.05).结论:TaqMan探针法可以定性地鉴定Hp,与呼气实验法有较好的一致性.TaqMan探针法可进一步定量Hp的阳性强度,更好地反映临床的病理炎症程度.     

用光敏生物素反意生长抑素(SS)cRNA探针显示组织切片中SS mRNA

由于同位素基因探针原位杂交组化实验周期长,而且对人体有害,因此人们一直希望获得一种非周位素基因探针,而其敏感性与同位素基因探针相似。本文介绍一种光敏生物素标记的反意SScRNA探针显示组织切片SSmRNA的方法,其敏感性与我们以前介绍的~3H-cRNA探针相似。一、材料与方法:含前生长抑素原基因的质粒来源、性质及质粒的线性化请参考我们以前的报导。线性化后,以线性质粒DNA为模板合成未加任何标记物的反意SScRNA。纯化,乙醇沉淀回收此cRNA后,将其溶于灭菌双蒸水中,使其终浓度为0.5-1.0μg/μ1,再与等体积的光敏生物素(1μg/μl)混合,在150瓦卤素灯下,距光源20cm处照射30分钟。用仲丁醇抽提游离生物素,最后丁醇沉淀回收光敏生物素反意SSc-RNA探针,并将其溶于适量的灭菌双蒸水,用紫外分光光度计测探针的OD_260,计算探针浓度。切片的制作,预处理、预杂交、杂交、杂交后冲洗详见我们以前介绍的方法,但探针浓度不同,其最佳工作浓度为2μg/ml,每一切片覆盖20μ1。切片彻底冲洗后,3%牛血清蛋白,37℃孵育1小时,亲和素碱性磷酸酶(1∶500)25℃孵育2小时,然后分别用TSM_1(0.1MTris-Hcl PH7.5、1M Nacl,2mMMgcl_2)冲洗20分钟     

巨幼细胞贫血患儿幽门螺旋杆菌感染检测分析

目的探讨幽门螺旋杆菌(Helicdbacter pylori,H.Pylori)感染与巨幼细胞贫血(megaloblastic anemia)患儿之间的关系。方法以2005年2月至2010年10月在我院就诊的137例巨幼细胞贫血患儿为实验组,随机统计102例健康查体儿童为对照组,分别用胶体金方法进行血清幽门螺旋杆菌抗体检测。结果实验组幽门螺旋杆菌抗体阳性69例(50.36%),对照组幽门螺旋杆菌抗体阳性23例(22.54%),实验组和对照组阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 H.Pylori与MA之间具有显著的相关性,临床治疗MA同时应根除H.Pylori。     

PCR与微孔板杂交结合检测单核细胞增多性李斯特氏菌

ＰＣＲ与微孔板杂交结合检测单核细胞增多性李斯特氏菌姜永强雷祚荣李瑾马颖单核细胞增多性李斯特氏菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，简称单增李氏菌）引起食源性李斯特氏菌病爆发。常规从食品中分离和鉴定单增李氏菌的方法费工、费时。在应用ＰＣＲ方法...     

常规应用PCR/ASO探针检测apoE多态性

载脂蛋白E(apoE)在脂质代谢中处于中心位置。现已发现人群中apoE有3种异型(isoform):E2、E3和E4。E2与E3的区别是前者的第158位氨基酸为半胱氨酸(Cys),后者则为精氨酸(Arg);E3与E4的区别是前者的第112位氨基酸为Cys,后者则为Arg。这些氨基酸序列的差异归园于编码此蛋白质的基因中的单个碱基的替换,即A→C。     

生物素标记探针原位杂交法检测细胞中c-myc基因的表达

本文采用生物素标记的c-mye基因作探针，通过细胞原位分子杂交技术，对人舌癌、膀胱癌和正常细胞中c-myc基因的转录量进行了定性和半定量分析。结果表明与正常细胞相比，舌癌和膀胱癌细胞中c-myc基因异常高度表达。     

免疫组化染色在幽门螺旋杆菌病理检测中的优势与意义

正幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,HP)是消化道疾病的重要致病因子,尤其是慢性胃炎和消化性溃疡,还与十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃腺癌及胃黏膜相关性淋巴瘤的发病相关[1-3]。1994年世界卫生组织国际癌症中心(IARC)将HP列入第一类致癌因子。近年来,大量的研究表明HP感染与胃癌相关[4-5]。因此,临床上对HP进行准确检测显得尤为重要。本实验通过对比HE染色、美蓝染色、银染(War-     

免疫印迹法检测幽门螺旋杆菌及其分型的临床应用

本文通过检测患者血清中幽门螺旋杆菌抗体及分型 ,借以评价幽门螺旋杆菌的感染情况 ,并分析与临床各种胃部疾病的关系 ,为临床诊断与治疗提供依据。采用免疫印迹法检测 5 6例有明确病理诊断的胃部疾病患者的幽门螺旋杆菌的感染情况 ,并作 74例正常对照。结果显示 ,胃部良性疾病患者的CagA阳性率为 6 2 5 %,VacA阳性率为 6 0 0 %,分别高于正常对照的 4 4 5 %和 4 7 3%,尤其胃癌CagA和VacA阳性率都为 1 0 0 %,明显高于其他良性胃部疾病 ;试验还发现幽门螺旋杆菌阳性率随年龄的增长而升高这一趋势。胃部疾病与幽门螺旋杆菌的感染 ,尤其是产毒菌株的感染密切相关 ,免疫印迹法可以应用在临床检测幽门螺旋杆菌抗体 ,并能够判断是否为产毒菌株感染 ,为临床早期制定治疗方案提供有效依据。