应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法;并应用此方法评价常规酶比色法测定血清UA的结果偏倚。方法对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法的准确性及可靠性。以反相HPLC内标法为比较方法,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法,对61份血清样本进行测定。组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估。结果反相HPLC内标法测定UA线性范围达1190μmol/L,批内变异系数(CV)<2.1%,日间CV<3.9%,绝对回收率为96.2%~101.0%,平均相对回收率为95.1%~99.4%。测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%~-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的...     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。     

几种人血清肌酐常规测定方法与反相高压液相色谱测定法的比对研究

目的观察人血清肌酐反相HPLC测定的不精密度和准确性，以HPLC为标准，评价几种人血清肌酐常规测定方法的准确性。方法Beckman LX20测定系统采用Jaffé动力学法，强生Vitros250测定系统采用干化学法，酶法采用协和酶法试剂盒，在Hitatchi7170全自动生化分析仪上进行测定人血清肌酐。肌酐HPLC测定以反相C18为固定相，5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）为内标，于235nm处进行检测。结果HPLC法的批内不精密度（n=5）〈2．0％，日间不精密度（n=20）〈5．1％。绝对回收率〉95．31％，相对回收率〉98．95％。不同肌酐浓度有证参考物质的测定值与靶值一致，平均偏倚为-0．31％-1．35％。HPLC法作为独立变量，当肌酐浓度〈200μmol／L时，Beckman LX20系统、强生干化学系统及酶法的偏倚分别为-19％～21％、-14％～21％和-30％～11％；当肌酐浓度〉200μmol／L时，Beckman LX20系统、强生干化学系统及酶法的偏倚分别为-10％～13％、-13％～14％和-20％～10％，其中酶法结果基本为负偏倚，在肌酐浓度〈70μmol／L时，有的负偏倚达到30％。结论以5-Fu为内标的人血清肌酐反相高压液相色谱法精密度和准确性好。Beckman LX20和强生测定系统与反相高压液相色谱法的偏倚相对较小，酶法测定结果系统偏低，且当血清肌酐浓度〈70μmol／L时不能准确测定。     

四种血清α-淀粉酶厂家系统测量结果的正确性评价

目的 寻找满足IS0 15189要求、测量结果正确的血清α-淀粉酶(AMY)常规检测方法.方法 收集2008年3至12月AMY活性为(40.0～ 750.0)U/L的50份不同浓度的人血清组成患者冷冻血清样本组,优选瑞士Roche公司、日本和光公司、深圳迈瑞公司、四川迈克公司4种AMY厂家系统,分别采用国际临床化学和实验室医学联和会( IFCC)参考方法和基于7170全自动生化分析仪的4种AMY厂家系统同时测量浓度为(70.1 ±3.7) U/L和(418.3 ±22.1)U/L的具有标准物质特性的冷冻血清和患者冷冻血清样本组.用Excel软件进行各厂家系统与IFCC参考方法测量结果的直线回归分析.采用MVS1.380软件的EP9-A2文件方法、Bland-Altman图形分析法和改良Bland-Altman图形分析法分别进行各厂家系统与IFCC参考方法测量结果的等价性判定、一致性评价和各厂家系统测量结果的正确性评定.结果 以IFCC参考方法测量结果做评价标准,Roche、和光、迈瑞、迈克公司厂家系统测量结果存在明显差异:(1)浓度为(70.1±3.7) U/L和(418.3±22.1)U/L的具有标准物质特性的冷冻血清各厂家系统测量结果分别为66.4、70.6、69.4、49.2 U/L和394.0、456.4、406.7、302.4 U/L.迈瑞公司系统结果与IFCC参考方法一致.(2)患者冷冻血清样本组的各厂家系统与IFCC参考方法测量结果的直线回归方程斜率分别为:0.934、1.070、0.930和0.731,截距分别为:0.886、6.249、5.388和3.574.按EP9 -A2文件方法评价,罗氏和光、迈瑞公司系统测量结果与IFCC参考方法等价.按Bland-Altman图形分析法评价,Roche和迈瑞公司系统测量结果与IFCC参考方法测量结果一致.各厂家系统平均偏倚分别为-6.11％(“平均偏倚±2s”分别为-2.81％和9.40％)、1.99％(“平均偏倚±2s”分别为10.35％和-6.36％)、-2.70％(“平均偏倚±2s”分别为2.37％和-7.77％)和- 34.72％(“平均偏倚±2s”分别为- 24.20％和- 45.24％).按改良Bland-Altman图形分析法评价迈瑞公司系统测量结果正确.各厂家系统平均偏倚分别为- 5.92％(“平均偏倚±2s”分别为-2.81％和- 9.03％)、2 10％(“平均偏倚±2s”分别为10.74％和- 6.53％)、- 2.64％(“平均偏倚±2s”分别为2.24％和-7.51％)和-29.51％(“平均偏倚±2s”分别为- 21.82％和-37.21％).结论 (1)不同厂家系统测量结果不一定都具有正确性,尽管各厂家系统测量结果都已声称具有溯源性.(2)当采用不同方法评价测量系统正确性时,同一厂家系统测量结果评价结论可能不一致.实验室应选择并建立常规方法测量结果正确性评价方法,选择并使用符合IS0 15189正确性要求的常规方法.     

参考方法检测3种血清酶结果的国际比对分析

摘要：目的：分析我室2008及2009年参加国际临床化学联合会(IFCC)的参考实验室GGT、CK、LDH的国际比对计划的结果,评估我室所用参考方法的检测质量及完善程度。 方法：用IFCC推荐的酶学活性测定（37 ℃）参考方法测定人血清GGT、CK、LDH,用酶有证参考物质评估参考方法的准确度,同时测定国际RELA比对样本,并对回报数据进行分析处理。 结果：2008年度的国际RELA比对结果室内变异系数(CV) 在0.67%~1.13%之间,与均值的偏倚在±3.50%以内;2009年度的国际RELA比对结果室内CV均在0.88%~1.30%之间,GGT和CK测定结果的偏倚在±1.00%以内,但LDH测定结果的偏倚大于2008年。2008、2009年的GGT、CK、LDH的比对结果均在IFCC公布的等效限内。 结论：本参考实验室所用的GGT、CK、LDH的检测方法比较成熟稳定。     

γ-谷氨酰转肽酶37℃参考方法的建立在临床中的初步应用

目的 建立37 ℃γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的参考方法,并对酶校准品定值,探讨血清GGT测定结果 的准确性与可比性.方法 依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立GGT酶催化活性参考方法,用参考方法 测定GGT(ERM AD452/IFCC)参考品,验证参考方法 的准确度,并对其精密度进行方法 学评价,同时用参考方法 对制备的酶校准品进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案分别比较40例人血清用酶校准品校正的非配套常规方法 、配套常规方法 、理论K值常规方法 和参考方法 GGT结果,计算常规方法 与参考方法 的相关系数及相对偏倚.结果 用参考方法 测定ERM -AD 452 GGT参考品结果 113.6 U/L,在其给定的(114.1±2.4)U/L范围内.初步建立的37 ℃ GGT参考方法 总CV<1%.用酶校准品校正的非配套常规方法 、配套常规方法 、理论K值常规方法 和参考方法 比较,相关性均良好,r2分别为0.999 8、0.999 6和0.999 5,与配套常规方法 、理论K值常规方法 相比较,酶校准品校正的非配套常规方法 与参考方法 的相对偏倚明显降低,在10%以下.结论 GGT参考方法 基本建立,采用参考方法 为酶校准品定值,可以提高血清GGT测定结果 的准确度和可比性.     

丙氨酸氨基转移酶37℃参考方法评价临床常用方法探讨

目的通过建立37℃丙氨酸氨基转移酶(ALT)参考方法,评价干化学和湿化学五种检测组合的临床常用方法 ,探讨ALT测定结果的准确性与可比性。方法依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立ALT参考方法,测定ERMR○-AD 454 ALT参考品,验证参考方法的准确性。并对其精密度进行评估。同时用参考方法为冰冻新鲜血清定值,校准非配套湿化学常用方法。干化学采用Vitros配套系统。按照NCCLS EP9-A方案分别比较40份人血清干湿化学五种检测组合的常用方法和参考方法ALT结果。结果用参考方法测定ERMR○-AD 454ALT参考品结果186.4 U/L,在其给定的186±4 U/L范围内。建立的37℃ALT参考方法总CV0.89%-1.12%。Vit-ros干化学配套系统;Olympus仪器和Roche试剂及校准品组成的湿化学非配套系统;Olympus仪器和Roche试剂及参考方法定值的冰冻血清作校准品组成的湿化学非配套系统;Olympus湿化学配套系统以及Olympus仪器试剂和Roche校准品组成的湿化学非配套系统ALT 5种检测结果和参考方法进行比较,相关均良好(r2分别为0.994,0.998 6,1,0.997,0.99。)。前3种检测系统ALT检测结果与参考方法相对偏倚均在±20%之内,符合CLIA’88的20%的判定标准。后两种检测系统结果与参考方法相对偏倚在ALT低水平高达60%。结论通过ALT参考方法可以评价加入磷酸吡哆醛的临床常用方法,提高血清ALT测定结果的准确性和可比性。不适合评价不加磷酸吡哆醛的临床常用方法。     

IFCC参考方法对两种常规检测系统ALP结果正确度的验证

目的评价常规检测系统测定血清碱性磷酸酶(ALP)的正确度。方法以国际临床化学联合会(IFCC)参考方法和两种常规检测系统(简称A法、B法)同时测定20份新鲜单人份血清样品。按美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件评价两种常规检测系统测定结果的正确度,并用改良Bland-Altman图形分析法进行验证,评价常规检测系统与参考方法测定结果的一致性,综合判断常规检测系统的测定结果。按CLSI EP14-A2文件评价A、B两种方法校准品的基质效应。结果 A法、B法与IFCC参考方法测定结果的直线回归方程分别为YA=0.982 9XIFCC+0.010 8,YB=0.938 3XIFCC+0.012 9,平均偏倚分别为-1.1%、-5.5%。A法和B法检测结果的相关方程为YB=0.955 2XA+0.001 36,R2=0.997 6。A法和B法的校准品均存在基质效应,其中A法校准品的基质效应更明显。结论 A法与IFCC参考方法正确度性能一致,B法与IFCC参考方法正确度性能不一致。     

37℃α-淀粉酶参考方法的建立及其应用研究

目的 通过建立37℃α-淀粉酶(α-Amy)参考方法,对酶校准物定值,探讨血清α-Amy测定结果的准确性与可比性.方法 依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立α-Amy酶催化活性参考方法,测定α-Amy有证参考物(CRM)IRMM-456,验证其准确性,并对其精密度进行评价.同时用参考方法对制备的酶校准物进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案留取40份不同α-Amy浓度范围的人血清,采用A~E五种临床常规检测组合在使用自制酶校准物校准前后测定α-Amy,分别与参考方法进行比较,计算这五种常规方法在使用自制酶校准物校准前后测定结果与参考方法的相对偏倚及相关系数.结果 用参考方法测定IRMM-456结果是547.2 U/L,在其给定的546±18 U/L范围内.所建立的37℃α-Amy参考方法总CV<0.5%.用制备的酶校准物校准前后的五种常规方法和参考方法进行比较,相关性均良好(r2>0.98),校准前后的相对偏倚A方法从30%变为10%以下;B方法从30%变为15%以下;C方法从35%变为10%以下;D方法从20%变为8%以下;E方法从35%变为10%以下.结论 所建立的37℃α-Amy参考方法准确可靠,采用参考方法为酶校准物定值后校准常规方法,可以提高血清α-Amy测定结果的准确度和可比性.     

三种检测系统测定糖化血红蛋白相关性分析及偏倚评估

目的比较三种检测系统测定糖化血红蛋白（HbA1c）结果的差异并评价其偏倚度。方法分别使用Bio-Rad D-10糖化血红蛋白分析仪应用高压液相层析法（HPLC）、Roche Cobas全自动生化分析仪以免疫法、Afinion AS100分析仪以亲和色谱法测定HbA1c,对64例血液样本作比对测定,评估各检测系统之间测定结果的相关性和偏倚;应用高低两个水平质控品分别测定三种检测系统的不精密度。结果三种不同检测系统测定糖化血红蛋白的结果有良好的相关性（P〈0.01）,HPLC和亲和色谱法的总不精密度〈2.0%,免疫法总不精密度接近4.0%,符合临床测定的性能要求。以D-10 HPLC为参考检测系统,Afinion亲和色谱法和Roche免疫法测定结果的相对偏倚分别为0.17%和0.13%。结论 D-10 HPLC法、Afinion亲和色谱法和Roche免疫法测定糖化血红蛋白的准确度、精密度和偏倚符合临床要求,Roche免疫法测定HbA1c结果变异系数较大,应以HPLC法作为参考检测系统定期作比对分析。