促红细胞生成素对大鼠脑出血神经的保护作用

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对脑出血神经保护作用的机制.方法 用立体定向技术,将自体小凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型.110只Wistar雄性大鼠,随机分成四组:正常组、假手术组、ICH对照组、rhEPO治疗组.应用免疫组化及原位细胞凋亡检测脑出血灶周组织Bcl-2、Bax表达及凋亡细胞.统计学方法采用LSD-t检验及Pearson相关分析.结果 ICH对照组及rhEPO治疗组术后6 h血肿周围皮质TUNEL,Bcl-2,Bax阳性细胞明显增加,72 h达到高峰,120 h下降,各时间点与假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01).rhEPO治疗组TUNEL、Bax阳性细胞数明显少于同时点ICH对照组(P<0.01),但Bcl-2阳性细胞数明显增加(P<0.01).Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2均与细胞凋亡呈正相关(P<0.01).结论 凋亡机制参与脑出血后继发性损伤过程,EPO通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑出血后神经损伤起保护作用.     

EPO对脑出血大鼠脑组织氧自由基损害的保护作用

目的观察体外注射重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠脑出血时血肿周围脑组织氧自由基损伤的保护作用。方法采用立体定向技术将自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,测定血肿周围脑组织匀浆中丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及脑组织含水量。结果与假手术组相比,脑出血模型组脑含水量与MDA含量均显著增高（P〈0．05）,而GSH-Px与SOD活性均显著下降（P〈0．05）与脑出血模型组相比,rhEPO治疗组大鼠脑含水量与MDA含量显著下降（P〈0．05）,而GSH-Px与SOD活性均显著增高（P〈0．05）。结论EPO对脑出血后血肿周围组织具有保护作用,其机制可能与抗自由基损伤有关。     

局部亚低温对大鼠脑出血模型脑组织中紧密连接相关蛋白-5表达的影响

目的:探讨局部亚低温对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型紧密连接相关蛋白-5(Claudin-5)表达的影响以及局部亚低温减轻ICH后水肿的可能机制。方法:选取雄性SD大鼠216只,采用自体血注入法制备ICH模型,并随机分为ICH组和ICH加局部亚低温(ICH+H)组。每组又分为假手术组以及ICH后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d组共6个亚组。ICH+H组于注血后给予局部亚低温治疗。采用免疫组织化学法检测Claudin-5的表达,采用伊文思蓝法进行血脑屏障通透性的检测,采用干湿质量法进行脑组织含水量的检测。结果:ICH组大鼠血肿周围脑组织中Claudin-5表达在ICH后6 h开始减少,ICH后24 h下降最显著,ICH后7 d时仍低于假手术组(P<0.05);ICH组大鼠在ICH后6 h开始出现血脑屏障通透性及脑组织含水量增加(P<0.05),在ICH后3 d达到高峰,然后逐渐消退。ICH+H组大鼠ICH后各时间点Claudin-5表达均高于ICH组(P<0.05),而血脑屏障通透性、脑组织含水量则低于ICH组(P<0.05)。结论:局部亚低温可能通过提高Claudin-5的表达来抑制ICH后脑水肿的形成。     

大鼠脑出血后低氧诱导因子表达及中药干预的作用

目的：利用大鼠脑出血模型探讨脑出血期间脑组织中低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的时程和分布特征及中药干预对脑出血后HIF-1α表达的影响。方法： 39只体重250—300g的健康成年雄性SD大鼠,采用Nath改良法建立脑出血模型,随机分为脑出血组、中药（脑血通）干预组,另设生理盐水和正常组作为对照。分别于造模后第6h、24h、72h、第7天,利用Bederson等的3级标准评定动物的神经系统功能,然后分别处死取脑用免疫组织化学法检测HIF-1α的表达。结果：正常脑组织和生理盐水组无HIF-1α的表达。脑出血后第6小时同侧基底核血肿区周围出现HIF-1α表达增加,至第72小时达高峰,第7天明显下降。与单纯脑出血组比较,中药干预后可以使上述各时间点HIF-1α表达较脑出血组减少,在第24h、72h、7d有显著性意义(P<0.01),神经功能障碍体征改善在第72h、第5天时间点有显著性意义（P<0.05）。结论：脑出血后血肿周围HIF-1α的表达明显上调,并可能参与了脑出血后血肿周围神经细胞的继发性损伤过程;中药具有神经保护作用,能有效地抑制脑出血后HIF-1α表达。     

促红细胞生成素对挫裂伤脑组织线粒体的影响

目的 探讨重组促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠颅脑损伤后脑线粒体能量代谢以及线粒体呼吸功能的影响.方法 健康雄性SD大鼠63只,随机分为rhEPO治疗组(n=28):以自由落体法制作大鼠腑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射rhEPO 10 U/g,每10 h重复注射1次;对照组(n=28):同样脑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射相同剂量生理盐水;假手术组(n=7):只钻孔不致伤.采用生化检测的方法分别测定治疗组治疗后6 h、12 h、24 h和48 h及各自的对照组大鼠脑组织线粒体ATP酶和SOD的活性和MDA水平以及线粒体呼吸功能.各组数值进行F和t检验.结果 重组促红细胞生成素治疗后12 h、24 h和48 h治疗组大鼠脑组织线粒体ATP酶、SOD活性和呼吸功能均高于各自时间点对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),而MDA水平则明显低于各自对照组(P＜0.01).结论 重组促红细胞生成素可以通过影响线粒体能量代谢及呼吸功能而减轻大鼠创伤性脑损伤后的继发性脑损害.     

促红细胞生成素对大鼠脑创伤细胞凋亡和脑水肿影响的实验研究

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠实验性脑创伤后细胞凋亡及脑水肿的影响.方法改进的Feeney氏法制作脑创伤模型,48h后测定各组大鼠脑组织含水量及计数每高倍镜视野下凋亡细胞数.结果 rhEPO治疗组较对照组外伤侧脑组织含水量降低,细胞凋亡数减少,不同剂量rhEPO存在剂量效应关系.结论 rhEPO能显著降低脑外伤后脑组织含水量,减少周围水肿区细胞凋亡,对外伤后脑组织有良好的保护作用.     

心肺复苏大鼠脑红蛋白缺氧诱导因子-1α的表达变化

目的 研究大鼠心肺复苏后不同时间点脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在mRNA水平表达中的变化规律,探讨Ngb在心脏骤停后脑缺血缺氧损伤病理变化中的作用机制及其诱导表达途径.方法 SD雄性大鼠40只随机分为五组(n=8):假手术组及复苏后1 h、6 h、12 h、24 h组.窒息法致大鼠心脏骤停后予以心肺复苏,复苏后不同时间点处死大鼠,应用RT-PCR法观察脑组织Ngb mRNA、HIF-1α mRNA表达情况.结果 复苏组脑组织Ngb mRNA表达高于假手术组(P<0.05),并于损伤后12 h达高峰;与假手术组比较,复苏组脑组织HIF-1α mRNA表达增加(P<0.05),且于复苏后1 h、6 h、12 h、24 h呈持续上升趋势.结论 大鼠心脏骤停后早期脑组织Ngb mRNA、HIF-1α mRNA表达增加,且呈时相性改变.     

脑缺血急性期应用促红细胞生成素的抗凋亡作用

目的：探讨促红细胞生成素在脑缺血急性期对神经细胞的抗凋亡作用。方法：实验于2004-04在暨南大学医学院第二附属医院动物实验中心完成。取SD大鼠54只随机分成9组，即假手术组、盐水对照组和促红细胞生成素实验组，其中对照组和实验组大鼠按缺血时间(3，6，12，24h 4个时间点)随机分为4亚组。假手术组和每亚组各6只大鼠。各组实验动物采用颈内动脉线栓环扎法建立大鼠局灶脑缺血模型：假手术组线栓只插入9mm，不环扎，不造成阻塞血管情况；促红细胞生成素实验组于栓塞同时给予腹腔注射促红细胞生成素(5000U／kg)，盐水对照组给予同体积的生理盐水。观察缺血中心区和边缘区神经细胞形态变化及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TdT-mediatedd UTP-biotinnick end labeling，TUNEL)的表达。结果：盐水对照12，24h组，促红细胞生成素实验24h组各有1只脱失，其余大鼠均纳入结果分析。随缺血时间延长，盐水对照组和促红细胞生成素实验组边缘区TUNEL阳性细胞数均增加，中心区均减少；各时间点促红细胞生成素组的TUNEL阳性细胞数明显少于同时间点盐水对照组，差异有显著性意义(F=12．047，P&;lt;0．05)。结论：脑缺血后，中心及边缘区凋亡细胞的增加，应用促红细胞生成素后，中心及边缘区凋亡阳性细胞数明显减少，提示促红细胞生成素对脑缺血急性期的神经细胞具有抗凋亡作用。     

促红细胞生成素对大鼠脑出血炎症反应的抑制作用及机制*

目的： 研究实验性大鼠脑出血后血肿周围核因子-κB (NF-κB)及其抑制因子κBα(IκBα)的表达,以及促红细胞生成素（EPO）对其干预作用,探讨EPO对出血性脑炎症反应的作用及机制。方法：将126只大鼠随机分为假手术组、脑出血组、EPO干预组。每组各42只,分别为术后第3、6、12、24、48、72小时和第7天亚组,每亚组各6只。采用大鼠尾动脉自体不凝血 50 μl注入尾状核区建立脑出血模型,分别在不同时间点断头取脑,连续切片作NF-κB 及IκBα免疫组化染色;观察各组各时间点NF-κB、 IκBα蛋白的表达并进行分析比较。结果：脑出血第6小时后NF-κB 及IκBα表达增高,第24小时明显增高,第72小时达到高峰,各时间点与假手术组比较差异均有显著性(P＜0.01)。EPO干预后NF-κB表达明显降低,与脑出血组比较有显著性差异(P＜0.01);经EPO干预后IκBα表达显著增多,与脑出血组比较有显著性差异(P＜0.01)。结论：脑出血周围NF-κB及IκBα表达均有增多,EPO通过抑制NF-κB表达、促进IκBα表达抑制炎症反应从而起到神经保护作用。     

脑缺血耐受大鼠缺氧诱导因子-1α和促红细胞生成素的表达

目的：探讨脑缺血预处理诱导脑缺血耐受形成中促红细胞生成素（EPO）及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA及蛋白表达的变化。方法：将99只Wistar大鼠随机分成假手术对照组9只、假手术＋再缺血组45只、预缺血＋再缺血组45只,后两组再随机分成5个亚组。线栓法阻塞大脑中动脉建立局灶性缺血预处理模型（预缺血10min）,分别在预缺血后1d、3d、7d、14d、21d进行再次缺血2h再灌注22h,然后取脑检查。应用免疫组化方法检测HIF-lα与EPO蛋白的表达,应用反转录聚合酶链式反应技术检测EPOmRNA和HIF-1αmRNA的表达。结果：①与假手术组各对应亚组相比,缺血预处理组中的1d、3d、7d亚组HIF-lα蛋白表达增高,3d、7d亚组中EPO蛋白表达增高,差异有显著性意义（P〈0.05;P〈0.01）。②与假手术组各对应亚组相比,缺血预处理组3d、7d亚组中HIF-lαmRNA及EPOmRNA表达明显增高,差异有显著性意义（P〈0.05）。③EPOmRNA表达与HIF-1αmRNA表达呈显著正相关。结论：缺血预处理诱导了脑缺血耐受,预缺血诱导的内源性HIF-lα及EPO表达增加参与脑缺血耐受形成的机制。     

亚低温对脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和低氧诱导因子-1α表达的影响

目的探讨亚低温对脑缺血再灌注大鼠内皮生长因子(VEGF)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法 30只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和亚低温组,每组10只。后两组制备大脑中动脉闭塞(MCAO)2 h再灌注动物模型,亚低温组进行亚低温处理24 h。Longa评分评估各组大鼠神经功能;湿/干重法测定脑含水量;TTC染色观察脑梗死体积;ELISA法检测脑组织VEGF、HIF-1α蛋白含量;q PCR法检测脑组织VEGF m RNA水平。结果与假手术组比,模型组神经行为学评分升高,脑含水量及脑梗死率增加,脑组织HIF-1α蛋白、VEGF蛋白及m RNA水平上调(P0.05)。与模型组比,亚低温组神经神经行为学评分显著降低(χ~2=26.657,P0.001),脑含水量及脑梗死率降低,脑组织HIF-1α蛋白、VEGF蛋白及m RNA水平进一步上调(P0.05)。结论亚低温可能通过HIF-1α介导VEGF上调,促进缺血组织区新生血管形成,从而发挥对缺血性脑卒中的保护作用。     

不同时间窗高压氧治疗对脑出血大鼠出血灶周围HIF-1α表达的影响

目的 观察不同介入时间的高压氧治疗对脑出血大鼠出血灶周围缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)表达的影响。 方法 采用胶原酶诱导法建立雄性Wistar大鼠脑出血模型,将185只大鼠按照随机数字表法分为正常组（5只）、假手术组（60只）、脑出血对照组（60只）和高压氧治疗组（60只）。高压氧治疗组再按不同的介入治疗时间分为6 h组、1 d组、2 d组和3 d组4个亚组,每组15只。高压氧治疗压力2.0 ATA,稳压吸氧60 min,每日1次。所有大鼠均饲养在相同环境中,正常组和脑出血对照组不进行特殊治疗。正常组大鼠于饲养3 d后处死,其余各组分别于高压氧治疗1 d、3 d、5 d后断头取脑,每个时间点各5只。用免疫组化法测定HIF-1α的表达。 结果 正常组大鼠脑组织HIF-1α吸光度值为（0.0725±0.064）。与正常组和假手术组组间比较,脑出血对照组和高压氧治疗组术后各介入点的HIF-1α 吸光度值均较高（P<0.05）。与脑出血对照组同时间点比较,高压氧术后6 h、1 h介入点的HIF-1α 吸光度值较低,且持续至治疗3 d、5 d,差异有统计学意义（P<0.05）。与高压氧治疗组术后6 h比较,高压氧治疗组术后1 d、2 d、3 d介入点的HIF-1α 吸光度值较高,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 高压氧治疗可以减少出血灶周围HIF-1α表达,且介入时间以6 h为佳。     

促红细胞生成素抑制急性梗死心肌炎症因子的表达

背景：研究表明,炎症细胞因子可影响心肌梗死后的预后,在心脏重构的进程中起重要作用。同时促红细胞生成素的促红细胞生成之外的非造血效应也被广泛证实：促红细胞生成素可通过与靶细胞膜表面的促红细胞生成素受体结合而减少炎症反应,从而减少心肌缺血后的再灌注损伤。目的：观察重组人促红细胞生成素对大鼠急性心肌梗死后心脏重构中炎症因子表达的影响。方法：通过结扎左冠状动脉前降支建立 SD 大鼠急性心肌梗死模型,分为 5 组,假手术组注射生理盐水,手术对照组造模后注射生理盐水,SB203580 组造模后注射 p38 MAPK 的高选择性阻断剂 SB203580,促红细胞生成素组造模后注射促红细胞生成素注射液,促红细胞生成素＋SB203580 组造模后注射促红细胞生成素＋SB203580 混合液,分别在造模前、造模后 1 d、1 周、2 周及 4 周进行尾静脉采血,酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α水平变化。结果与结论：造模前各组大鼠血清白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α检测值差异均无显著性意义（P 〉 0.05）。假手术组各时段白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α检测值差异无显著性意义（P 〉0.05）,其余 4 组不同时段各因子检测值呈现造模后 1 d 最高,造模后 4 周回降的趋势（P 〈 0.05）。造模后手术对照组血清各因子检测值较其他组升高明显,而假手术组血清各因子检测值均低于其他 4 组（P 〈 0.05）;使用药物进行干预的 3 组中,促红细胞生成素＋SB203580 组各因子检测值较低（P 〈 0.05）,而促红细胞生成素组与 SB203580 组各因子检测值差异无显著性意义（P 〉 0.05）。提示重组人促红细胞生成素抑制了大鼠急性心肌梗死后心脏重构中炎症因子白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α的表达,重组人促红细胞生成素抑制炎症因子表达的机制可能与转化生长因子β1-TAK1-p38 MAPK 信号路径相关。     

脑缺血急性期应用促红细胞生成素的抗凋亡作用

目的:探讨促红细胞生成素在脑缺血急性期对神经细胞的抗凋亡作用。方法:实验于2004-04在暨南大学医学院第二附属医院动物实验中心完成。取SD大鼠54只随机分成9组,即假手术组、盐水对照组和促红细胞生成素实验组,其中对照组和实验组大鼠按缺血时间(3,6,12,24h4个时间点)随机分为4亚组。假手术组和每亚组各6只大鼠。各组实验动物采用颈内动脉线栓环扎法建立大鼠局灶脑缺血模型:假手术组线栓只插入9mm,不环扎,不造成阻塞血管情况;促红细胞生成素实验组于栓塞同时给予腹腔注射促红细胞生成素(5000U/kg),盐水对照组给予同体积的生理盐水。观察缺血中心区和边缘区神经细胞形态变化及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TdT-mediateddUTP-biotinnickendlabeling,TUNEL)的表达。结果:盐水对照12,24h组,促红细胞生成素实验24h组各有1只脱失,其余大鼠均纳入结果分析。随缺血时间延长,盐水对照组和促红细胞生成素实验组边缘区TUNEL阳性细胞数均增加,中心区均减少;各时间点促红细胞生成素组的TUNEL阳性细胞数明显少于同时间点盐水对照组,差异有显著性意义(F=12.047,P<0.05)。结论:脑缺血后,中心及边缘区凋亡细胞的增加,应用促红细胞生成素后,中心及边缘区凋亡阳性细胞数明显减少,提示促红细胞生成素对脑缺血急性期的神经细胞具有抗凋亡作用。     

化瘀涤痰汤对急性硬膜下血肿模型大鼠脑组织中HIF-1α和Claudin-5蛋白表达的影响

目的:探讨化瘀涤痰汤对急性硬膜下血肿大鼠脑组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和紧密连接蛋白5(Claudin-5)蛋白表达的影响。方法:复制急性硬膜下血肿大鼠模型,造模成功后将大鼠分为:假手术组、模型组、化瘀涤痰汤高剂量组(HG组)、化瘀涤痰汤中剂量组(HZ组)、化瘀涤痰汤低剂量组(HD组)、天丹通络胶囊阳性组(TD组),每组10只大鼠,每日给药1次,持续给药14天后处死取脑组织,免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠血肿侧脑组织中HIF-1α和Claudin-5的蛋白表达量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠注血侧脑组织中HIF-1α蛋白表达量上调(P0.01),Claudin-5的蛋白表达量显著降低(P0.05),与模型组比较,HG、HZ、HD组和TD组HIF-1α的表达均显著下调(P0.05,P0.01),HG组和TD组大鼠脑组织中Claudin-5表达均升高(P0.01)。结论:化瘀涤痰汤降低急性硬膜下血肿大鼠脑组织中HIF-1α蛋白表达并增加Claudin-5蛋白的表达。     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的:观察给予外源性重组人红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-03/06在解放军第四军医大学病理实验室进行。①取新生7dSD大鼠72只,随机分为3组(n=24),假手术组、模型组和促红细胞生成素组,各组又分为造模后6,24,48,72h组4个亚组,每组6只大鼠。②促红细胞生成素组和模型组大鼠结扎右颈动脉,手术后即刻分别腹腔内注射重组人红细胞生成素注射液(10U/g)及同体积生理盐水,手术后2h两组大鼠吸入体积分数为0.08氧气和体积分数为0.92氮气的混合气体2h,建立缺氧缺血脑损伤新生鼠模型及促红细胞生成素治疗模型。假手术组分离动脉不结扎,不缺氧。③各组大鼠在造模后相应时间点断头处死,采用TUNEL法检测大脑海马区神经细胞凋亡情况。结果:经补充后72只进入结果分析。①模型组6h右侧海马CA1区出现凋亡细胞[(19.10±5.90)个],24h显著增高,48h达高峰[(65.70±8.33)个]后逐渐下降,但72h仍高于假手术组[(28.70±5.74),(0.60±0.84)个,F=71.587,P<0.01]。②促红细胞生成素组各个时间点CA1区的凋亡细胞数均少于模型组(P<0.01),尤其在24h最明显[(28.20±7.77),(60.30±7.75)个,t=-9.251,P<0.01]。结论:外源性重组人红细胞生成素能抑制缺氧缺血性脑损伤后的神经细胞凋亡,对脑组织确有保护作用。     

重组人促红细胞生成素对大鼠颅脑损伤后NF-κB表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对创伤性颅脑损伤(TBI)后脑组织NF-κB活性及NF-κB mRNA表达的影响,探讨其在继发性颅脑损伤中的作用。方法 84只雄性SD大鼠建立颅脑损伤模型,随机分为颅脑损伤组(TBI组,n=42)和rhEPO治疗组(TBI-rhEPO组,n=42),于预定时间点行神经功能损伤评分(NSS),通过光镜观察创伤灶及周围脑组织变化,采用免疫组化方法检测脑组织中NF-κB及TNF-α的表达情况,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达情况。结果颅脑损伤后12 h至7 d,TBI-rhEPO组NSS始终低于同一时间点TBI组(P<0.05);TBI组大鼠不同阶段NF-κB蛋白表达及mRNA表达明显升高,NF-κB表达水平与TNF-α表达水平呈正相关关系(r=0.519,P<0.05),且与组织炎症损伤程度一致,TBI-rhEPO组不同阶段NF-κB蛋白及mRNA表达均明显低于TBI组(P<0.05)。结论颅脑损伤早期应用rhEPO,可能通过抑制NF-κB活性,降低NF-κB、TNF-α的表达,从而抑制继发性炎症反应,减轻继发性颅脑损伤。     

不同吸氧时间高压氧治疗对脑出血大鼠血肿周围AQP4和SOD表达的影响

目的:探讨不同吸氧时间高压氧(HBO)治疗对脑出血(ICH)大鼠血肿周围水通道蛋白(AQP4)和超氧化物歧化酶(SOD)表达的影响,从而探讨HBO治疗脑出血的最佳吸氧时间。方法:正常组Wistar大鼠5只,胶原酶诱导法建立Wistar大鼠脑出血(ICH)模型125只,随机分为对照组(不用高压氧干预,25只)和实验组(ICH后6小时给予高压氧干预,100只),实验组根据吸氧时间不同又分为ICH+HBO 40min组,ICH+HBO 60min组,ICH+HBO 80min组,ICH+HBO 100min组,共4个亚组,各25只。每组大鼠分别在行HBO治疗第1、3、5、7、14天后于相同时间点处死,之后采用干湿比重法测定出血灶周围脑组织含水量,用免疫组化法检测血肿周边脑组织中AQP4蛋白表达情况,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力。结果:(1)出血灶周围脑水含量:实验组较对照组相比,各时间点脑组织水含量均减少且有差异(P0.05)。(2)大鼠脑组织AQP4表达的变化:对照组大鼠的AQP4表达在ICH术后第1天开始升高,第3天持续升高,第5天达到高峰,之后逐渐下降直至第14天。HBO实验组各时间点AQP4的表达较对照组减少,差异有显著性意义(P0.05)。其中ICH+HBO 60min组第7天下降的幅度最大,较其他三组相比具有显著性意义(P0.01)。(3)大鼠脑组织SOD表达的变化:对照组和实验组SOD上调表达规律与AQP下调表达一致,其中ICH+HBO 60min组回升幅度最大,其在第14天表达的值与其他三组相比均有显著性差异(P0.01)。结论:HBO可以减轻脑水肿,其中最佳吸氧时间是60min。其机制可能与降低了出血灶周围AQP4表达水平、提高了SOD表达水平有关。     

促红细胞生成素干预肾缺血再灌注损伤后肾小管间质的纤维化

背景：促红细胞生成素能减轻炎症反应、抗凋亡以及对缺血再灌注肾损伤有保护性作用。目的：分析促红细胞生成素对肾缺血再灌注损伤后细胞凋亡和肾小管间质纤维化的关系。方法：通过单侧肾缺血再灌注损伤构建患侧肾小管间质纤维化模型。实验小鼠随机分为4组：假手术组、缺血再灌注组、促红细胞生成素低剂量组和促红细胞生成素高剂量组。苏木精-伊红、Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测肾组织中Bcl-2和Bax蛋白表达水平,Western blot检测Caspase-3的表达。结果与结论：与缺血再灌注组相比,两促红细胞生成素干预组肾小管和间质病变减轻。缺血再灌注组和两促红细胞生成素干预组肾脏Bcl-2和Bax表达均较假手术组明显上调,但缺血再灌注组更明显;缺血再灌注组Bcl-2/Bax比值较假手术组低,而两促红细胞生成素干预组Bcl-2/Bax比值却较缺血再灌注组高;两促红细胞生成素干预组Caspase-3表达高于假手术组而低于缺血再灌注组。结果表明,肾缺血再灌注损伤后期肾小管间质纤维化进程与细胞凋亡相关,Bcl-2/Bax及Caspase-3起了重要作用;低剂量促红细胞生成素也能减轻小鼠肾缺血再灌注损伤后期肾小管间质纤维化程度。     

骨髓间充质干细胞缺氧后促红细胞生成素信号通路的改变

目的研究骨髓间充质干细胞缺氧后细胞死亡情况及促红细胞生成素信号通路成分的表达改变。方法从Wistar大鼠股骨提取骨髓分离培养骨髓间充质干细胞并在体外扩增。取第4至6代接近融合的骨髓间充质干细胞置于氧浓度为0．5％的缺氧箱内培养24、48、72、96h后行台盼蓝染色计数阳性细胞并提取蛋白行Western blot检测促红细胞生成素、促红细胞生成素受体、HIF-1α、ERK、磷酸化ERK表达改变,另取0．5％缺氧培养48h的细胞免疫荧光染色观察EPO表达改变,Hoechst 33342染细胞核。结果常氧浓度培养对照组骨髓间充质细胞组台盼蓝染色阳性率为3．5％±0．4％,缺氧培养24、48、72、96h组分别为3．9％±0．2％、5．0％±0．4％、5．9％±0．5％、7．1％±0．5％。Western blot和免疫荧光染色发现EPO表达在缺氧48h后开始明显上调。F20R表达在缺氧后24h即开始显著上调且倍数更高。总ERK在对照组和不同缺氧时间组表达改变不明显,但HIF-1α和磷酸化ERK缺氧24h后即上调,72h达高峰。结论骨髓间充质干细胞对单纯缺氧损害较耐受,缺氧后促红细胞生成素信号通路的主要成分均显著上调,提示促红细胞生成素信号通路在骨髓间充质干细胞耐缺氧和旁分泌保护能力中起着重要作用。