D-半乳糖致大鼠衰老模型的研究

目的 探讨D-半乳糖腹腔注射法致大鼠衰老的合适剂量,以复制可靠的大鼠衰老模型.方法 32只SD大鼠随机均分为D-半乳糖低(15mg/kg)、中(30mg/kg)、高(60mg/kg)剂量组和假手术组四组,Y型迷宫测定各组大鼠认知能力;焦油紫染色,TUNEL法检测其海马区细胞形态学变化、神经元凋亡;免疫组织化学染色检测p-AKt表达水平.结果 和假手术组相比较,其他三组大鼠错误次数增加、时间延长,海马区锥体细胞层损伤严重,可见较多TUNEL阳性神经元,p-AKt活性明显降低,尤以D-半乳糖高剂量组最明显.结论 D-半乳糖高剂量组大鼠认知障碍、海马区细胞凋亡及p-AKt表达障碍最明显,可以复制出与衰老大鼠程度近似的模型.     

米诺环素对缺血性血管性痴呆小鼠白质损伤和少突胶质细胞丢失的影响分析

目的研究米诺环素对缺血性血管性痴呆(SIVD)小鼠白质损伤和少突胶质细胞丢失的影响。方法 60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、米诺环素(MNO)高剂量治疗组(H-MNO:50 mg/kg)和低剂量治疗组(LMNO:5 mg/kg),每组15只。模型组和米诺环素治疗组小鼠用手术缝合线永久性结扎右颈总动脉,假手术组只做创伤,不结扎。术后第1天米诺环素高、低剂量治疗组小鼠分别接受剂量为50 mg/kg和5 mg/kg的腹腔注射;模型组与假手术组小鼠腹腔注射等体积量的生理盐水,1次/d注射28 d。分别在治疗1 d、7 d、14 d、28 d用mNSS评分系统评估各组小鼠的神经功能;术后29 d起进行Morris水迷宫测试,记录各组小鼠逃避潜伏期、目标象限内的穿台次数和停留时间;检测结束后取小鼠的脑组织进行HE染色和免疫组化染色,分析各组小鼠脑白质区病理损伤和CX47蛋白表达阳性细胞数; TUNEL染色分析细胞凋亡情况; Western blot检测小鼠脑组织中nestin、Bcl-2、Bad和cleaved-caspase-3蛋白表达量。结果与假手术组相比,模型组mNSS评分显著增加,小鼠的神经功能和学习认知功能明显下降(P 0. 05);随着米诺环素治疗周期的延长,与模型组相比,小鼠的神经功能和学习认知功能明显得到恢复和改善,且高剂量治疗组的效果明显优于低剂量治疗组(P 0. 05)。与假手术组相比,模型组小鼠脑组织细胞水肿和坏死严重;与模型组相比,米诺环素高剂量治疗能够改善小鼠脑组织细胞水肿和坏死。与假手术组相比,模型组小鼠CX47表达的阳性细胞数、nestin蛋白和抑凋亡Bcl-2蛋白的表达量显著下降(P 0. 05),凋亡细胞比率、促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3蛋白的表达显著增高;与模型组相比,米诺环素治疗组CX47表达的阳性细胞数、nestin蛋白和抑凋亡Bcl-2蛋白的表达量显著增加,凋亡细胞比率、促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3蛋白的表达显著受到抑制,且米诺环素高剂量治疗组变化优于低剂量治疗组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论高剂量的米诺环素能够通过抑制脑细胞凋亡,促进少突胶质细胞的再生改善SIVD小鼠白质损伤。     

杏鲍菇多糖对衰老模型小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响

目的观察杏鲍菇多糖对D-半乳糖衰老模型小鼠的影响。方法ICR小鼠72 只,随机分为6 组：多糖低剂量组、多糖中剂量组、多糖高剂量组、脑复康组、模型组、正常对照组,每组12 只。建立D-半乳糖致小鼠衰老模型。6 周后行Y 型迷宫测试,测定脏器指数,采用黄嘌呤氧化酶法、TBA比色法测定大脑超氧化物歧化酶(SOD) 活性和丙二醛含量,Sohal 法测定小鼠大脑组织中脂褐质含量,双波长薄层扫描仪测定全脑谷氨酸的含量。结果与模型组相比,多糖中、高剂量组Y 型迷宫成绩提高(P<0.05),脑SOD活性上升, 丙二醛、脂褐质含量降低;多糖高剂量组脑指数和肾指数上升,脑组织谷氨酸含量降低(P<0.05)。结论杏鲍菇多糖能改善D-半乳糖衰老模型小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力。     

大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡

目的:研究大鼠急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction,AMI)后心肌细胞凋亡的发生情况。方法:实验选用105只雌性SD大鼠,随机抽取78只以结扎左冠状动脉前降支的方法制备AMI模型,术后24h存活的43只作为心肌梗死组;另设假手术组(n=27);各组再按观察时点随机分为48h和4周两亚组,即:心肌梗死48h(n=11)和心肌梗死4周(n=13)组,假手术48h(n=10)和假手术4周(n=10)组。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL)和DNA凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。结果:AMI大鼠梗死区心肌细胞坏死和瘢痕形成的同时,梗死/瘢痕区、梗死边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数均显著升高犤心肌梗死48h组分别为(212.86±155.75)/1000,(198.16±120.0)/1000和(63.23±45.43)/1000,心肌梗死4周组分别为(235.14±130.43)/1000,(80.33±44.29)/1000和(31.61±16.39)/1000,P<0.05～0.01犦。结论:大鼠发生AMI后,梗死区心肌细胞坏死和瘢痕形成的同时,梗死/瘢痕区、梗死边缘区和非梗死区均有心肌细胞发生凋亡。     

牛蒡子提取物对阿尔兹海默病模型小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的研究牛蒡子提取物(FAE)对阿尔兹海默病(AD)模型小鼠学习记忆的影响及机制。方法 50只小鼠随机分为5组,分别为阴性对照组、模型对照组、阳性药奥拉西坦(OC)组(每天800 mg/kg)、FAE高低剂量组(每天800 mg/kg、400 mg/kg),除阴性对照组外各组小鼠皆建立D-半乳糖-氯化铝复合AD模型,每天腹腔注射D-半乳糖100 mg/kg灌胃氯化铝10 mg/kg,实验组在建模第15天开始灌胃给药。建模60 d后对小鼠进行跳台实验、水迷宫实验等行为学检测并测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、总氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、钙离子浓度([Ca2+])、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量,数据采用SPSS软件进行单因素方差分析。结果与模型组比较,FAE组小鼠跳台实验潜伏期延长、游出迷宫时间缩短、水迷宫及跳台实验中错误次数减少(F=11.07,P=0.004;F=8.13,P=0.011;F=6.25,P=0.02),生化指标显示脑组织中MDA、NO、NOS及[Ca2+]含量与模型组比较明显降低(F=5.12,P=0.04,F=4.49,P=0.05,F=4.55,P=0.05,F=4.62,P=0.05);而SOD、T-AOC的活性显著提高(F=6.49,P=0.02;F=4.76,P=0.05)。结论 FAE对AD模型小鼠学习记忆障碍具有改善作用。其机制与提高抗氧化酶活性,减少自由基的产生及NO的神经损伤有关。     

氦氖激光穴位照射对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠行为学的影响

目的:观察氦氖激光(位照射疗法对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠行为学方面的影响。方法:实验于2003-12/2004-05在郑州大学基础医学院人体解剖学实验室进行,取7d龄普通级健康Wistar大鼠56只随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)、激光非(位照射组(n=16)、激光(位照射组(n=16)4组。除假手术组外,其他3组大鼠结扎新生鼠左颈总动脉后,再吸入低浓度氧制成缺血缺氧性脑损伤大鼠模型,氦氖激光照射治疗于模型制备后第2天开始,10min/次,1次/d,并在同一时间进行,10d为1个疗程,共2个疗程,两疗程间隔2d。照射(位选择大椎、百会两(。(位及非(位定位参照大鼠常用的针灸(位。治疗结束后以三等臂辐射状Y迷宫检测Wistar大鼠学习、记忆能力。并取脑组织制备切片,进行脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色。结果:56只大鼠在实验过程中无缺失值,全部进入结果分析。①激光(位照射组达到学会标准平均需要的次数(条件反射形成次数)显著低于模型组和激光非(位照射组,差异有显著性意义[(23.06±4.74),(35.92±5.88),(33.94±4.68)次,P<0.05];记忆能力(错误次数)显著低于模型组和激光非(位照射组,差异有显著性意义[(17.13±2.99),(27.25±5.63),(26.94±3.15)次,P<0.05]。模型组和激光非(位照射组条件反射形成次数显著高于假手术组,差异有显著性意义(P<0.05);模型组和激光非(位照射组记忆能力(错误次数)显著高于假手术组,差异有显著性意义(P<0.05)。②假手术组海马结构CA1、CA2、CA3、齿状回均有大量脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元分布,其中以海马锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层最密集;模型组与激光非(位照射组海马结构内仍有一定量脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元分布,CA1区脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元数量比假手术组显著减少,差异有显著性意义(P<0.05),CA2区、CA3区和齿状回脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元分布基本同假手术组;激光(位照射组CA1区脑神经元胆碱乙酰基转移酶免疫反应阳性神经元数目较模型组与激光非(位照射组增加,接近假手术组,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:氦氖激光(位照射明显提高缺血缺氧性脑损伤新生大鼠的学习记忆能力,可能与氦氖激光(位照射使脑组织合成神经递质脑神经元胆碱乙酰基转移酶增多有关。     

甘草对抗D-半乳糖诱导大鼠糖耐量减低的作用

目的:观察甘草拮抗D-半乳糖诱导大鼠糖耐量减低作用,分析该作用性别差异性,并与二甲双胍和水飞蓟宾作对照。方法:实验于2003-03/05在广州市中医中药研究所药理研究室的普通级动物室完成。①选用鼠龄6～8周的SD大鼠103只,雌雄不拘,随机分为5组:正常对照组(n=21)、模型组(n=18)、甘草组(n=22)、二甲双胍组(n=20)、水飞蓟宾组(n=22)。除正常对照组腹腔注射等量溶媒代替D-半乳糖连续56d外,其余组大鼠腹腔注射D-半乳糖150mg/kg,1次/d,连续56d造成糖耐量减低模型。在后42d造模同时,甘草组:按0.44g/(kg·d)剂量灌胃甘草混悬液(主要成分:甘草,由广东一方制药厂生产,批号:020315,5g/袋,将甘草颗粒剂用蒸馏水配成混悬液);二甲双胍组:以0.25g/kg剂量灌胃二甲双胍(由深圳中联制药厂生产,生产批号:200212305,0.5g/片)溶液;水飞蓟宾组:以0.25g/kg剂量灌胃水飞蓟宾(由江苏中兴药业有限公司生产,批号:20030303,50mg/片)溶液;均1次/d,连续42d。②造模成功后,大鼠称体质量,测空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验后2h血糖,计算空腹血糖与餐后2h血糖差值。③计量资料差异比较采用t检验(方差不齐,用t’检验)。结果:大鼠103只均进入结果分析。①模型组大鼠空腹血糖与正常对照组接近,但口服葡萄糖耐量试验后2h血糖明显高于正常对照组(t=6.5214,P<0.01),即糖耐量减低的胰岛素抵抗状态;而甘草组、二甲双胍组、水飞蓟宾组大鼠体质量和空腹血糖与模型组相近(P>0.05),口服葡萄糖耐量试验后2h血糖明显低于模型组(t=3.585～5.980,P<0.01),空腹血糖与口服葡萄糖耐量试验后2h血糖差值明显低于模型组(t=2.897～6.094,P<0.01),即改善D-半乳糖诱导胰岛素抵抗大鼠的糖耐量减低。另外,模型组大鼠体质量低于正常对照组,但差异不明显(P>0.05)。雄性大鼠各指标组间差异同前。②模型组雌鼠空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验后2h血糖明显高于正常对照组(t=3.4014,6.858,P<0.01),即糖耐量减低的胰岛素抵抗状态。甘草组、二甲双胍组雌鼠空腹血糖明显低于模型组(t=2.288,2.301,P<0.05),水飞蓟宾组雌鼠空腹血糖与模型组相近(P>0.05);3个给药组雌鼠口服葡萄糖耐量试验后2h血糖和空腹血糖与口服葡萄糖耐量试验后2h血糖间血糖差值明显低于模型组(t=4.1763～6.3716,P<0.01),即能改善糖耐量减退。另外,各给药组雄鼠体质量与正常对照组和模型组相近(P>0.05)。结论:①D-半乳糖可诱导以糖耐量减低为表现的胰岛素抵抗,以雌性大鼠更为明显。②甘草、二甲双胍和水飞蓟宾均能改善D-半乳糖诱导胰岛素抵抗大鼠的糖耐量。     

贞芪扶正颗粒和复方阿胶浆干预再生障碍性贫血模型小鼠外周血及骨髓象的变化

目的:观察贞芪扶正颗粒和复方阿胶浆对苯油溶液致小鼠再生障碍性贫血模型的疗效。方法:实验于2005-06/09在河南中医学院药理实验室完成。①选用昆明种成年雄性小鼠90只。按随机数字表法将小鼠分为9组,每组10只:大、中、小剂量贞芪扶正颗粒组:按15,10,5g/kg剂量灌服贞芪扶正颗粒混悬液(主要成分:黄芪、女贞子;甘肃扶正药业科技股份有限公司生产;批号040803,15g/袋)。大、中、小剂量复方阿胶浆组:分别按10,20,30mL/kg剂量灌胃复方阿胶浆(主要成分:阿胶、熟地黄、党参、山楂、人参、蔗糖;山东东阿阿胶股份有限公司生产,批号050446,250mL/瓶),司坦唑醇组:按4mg/kg剂量灌胃司坦唑醇混悬液(司坦唑醇片,广西南宁百会药业集团有限公司生产,批号050306,30mg/片)。空白组和模型组:灌胃同体积的生理盐水(20mL/kg)。每天给药1次,连续给药14d。除空白组外,其余组小鼠皮下注射体积分数0.25苯的玉米油溶液4mL/kg复制苯油溶液致小鼠再生障碍性贫血模型,空白组皮下注射同体积玉米油。②各组小鼠分别于末次给药后24h,进行血常规检测。取右侧股骨,冲出骨髓细胞,采用BI-2000医学图像分析仪计数骨髓有核细胞数。③计量资料符合正态分布、方差齐者用t检验;方差不齐者用t’检验。结果:小鼠90只均进入结果分析。①血细胞测定结果比较:模型组小鼠血红细胞、白细胞、血小板计数和血红蛋白水平明显低于空白组(t=3.39～11.89,P<0.01)。司坦唑醇组3项血细胞计数和血红蛋白水平明显高于模型组(t=4.94～6.73,P<0.01)。大、中剂量贞芪扶正颗粒组和各剂量复方阿胶浆组血白细胞计数明显高于模型组(t=2.32～3.03,P<0.05￣0.01)。中剂量贞芪扶正颗粒组和各剂量复方阿胶浆组小鼠血红细胞计数明显高于模型组(t=2.15～4.84,P<0.05￣0.01)。大、中剂量贞芪扶正颗粒组和各剂量复方阿胶浆组血红蛋白水平明显高于模型组(t=2.33～4.45,P<0.05￣0.01)。大、中剂量贞芪扶正颗粒组和各剂量复方阿胶浆组血小板计数明显高于模型组(t=4.06～6.24,P<0.01)。②骨髓有核细胞数:模型组明显低于空白组(t=8.99,P<0.01)。司坦唑醇组、中剂量贞芪扶正颗粒组和小剂量复方阿胶浆组明显高于模型组(t=2.39～2.82,P<0.05)。结论:贞芪扶正颗粒、复方阿胶浆对皮下注射苯所致小鼠再生障碍性贫血模型血细胞状况及骨髓象均有较好的改善作用,以贞芪扶正颗粒有较为明显的剂量依赖关系。     

促红细胞生成素对发育期小鼠脑损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的 研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid,Ibo)致发育期小鼠兴奋性脑损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响.方法 以144只健康雌性昆明小白鼠作为实验动物,其中7日龄(P7)、21日龄(p21)和42日龄(P42)小鼠各48只；再将同日龄小鼠随机(随机数字法)分为假手术组(n=16)、Ibo模型组(n=16)和EPO治疗组(n=16).采用颅内微量注射法向小鼠左侧海马注射Ibo 1μl(5μg)建立脑损伤模型.EPO治疗组小鼠海马注射Ibo后,腹腔注射5000 U/ (kg·d) EPO,连续3 d；Ibo模型组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水.各组小鼠在建模后3d处死,Nissl染色观察小鼠海马神经细胞凋亡病理改变；双抗体夹心ABC-ELISA法检测caspase-3含量变化；分光光度法检测caspase-3活性改变.结果 光学显微镜观察结果显示,与假手术组相比,Ibo模型组小鼠海马区神经细胞发生明显变性和死亡,神经细胞数量明显减少；EPO治疗组小鼠海马区神经细胞凋亡程度较轻.Ibo模型组与假手术组相比,caspase-3含量和活性明显升高(P ＜0.05)；EPO治疗组caspase-3含量和活性的升高幅度明显低于Ibo模型组(P＜0.05).结论 Ibo致脑损伤时,脑组织caspase-3的表达增强,导致神经细胞凋亡.EPO可减轻脑损伤后神经细胞凋亡,起到脑保护的作用,其机制可能与下调caspase-3的表达有关.     

四种缓解化学药物治疗后骨髓抑制中成药对环磷酰胺所致小鼠血虚模型外周血和骨髓象的影响

目的:观察补气养血、健脾益肾的参芪颗粒,补气养血的复方阿胶浆,补气养阴的贞芪扶正颗粒,温肾健髓、益气养阴、生血止血的复方皂矾丸4种中成药对环磷酰胺所致小鼠血虚模型外周血及骨髓象的影响。方法:实验于2005-06/09在河南中医学院药理实验室完成。①选用健康昆明种成年小鼠150只,雌雄不拘。按随机数字表法分为15组,每组10只:高、中、低剂量贞芪扶正颗粒组分别按15,10,5g/kg(20mL/kg)剂量灌胃贞芪扶正颗粒混悬液(主要成分:黄芪、女贞子;甘肃扶正药业科技股份有限公司生产,批号040803);高、中、低剂量复方阿胶浆组分别按10,20,30mL/kg剂量灌胃复方阿胶浆(主要成分:阿胶、熟地黄、党参等;山东东阿阿胶股份有限公司生产,批号050446);高、中、低剂量复方皂矾丸组分别按2.4,1.6,0.8g/kg(20mL/kg)剂量灌胃复方皂矾丸混悬液(主要成分:皂矾、西洋参、海马等;陕西郝其军制药有限责任公司生产,批号041014);高、中、低剂量参芪颗粒组按3,2,1g/kg(0.2mL/10g)剂量灌胃参芪颗粒混悬液(主要成分:人参、黄芪、当归等;江西山高制药有限公司生产,批号040702);鲨肝醇组按10g(20mL)/kg剂量灌胃鲨肝醇混悬液;空白组和模型组灌胃同体积的生理盐水(0.2mL/10g)。每天给药1次,连续给药10d。从实验的第6天开始除空白组外,各组小鼠腹腔注射环磷酰胺40mg/kg,连续给药5d。②各组小鼠分别于末次给药后24h,进行血常规检测。另取右侧股骨,镜下计数骨髓有核细胞数。③计量资料符合正态分布、方差齐者用t检验。结果:小鼠150只均进入结果分析。①对外周血的影响:模型组小鼠血白细胞、红细胞和血小板计数及血红蛋白水平、血细胞比容均明显低于空白组(t=2.49～8.19,P<0.05￣0.01)。鲨肝醇组、各剂量参芪颗粒组和复方阿胶浆组及贞芪扶正颗粒组、复方皂矾丸组小鼠血白细胞计数均明显高于模型组(t=3.67～9.12,P<0.01)。中剂量复方阿胶浆组、贞芪扶正颗粒组和复方皂矾丸组和高剂量贞芪扶正颗粒组小鼠血红细胞计数明显高于模型组(t=2.58～3.05,P<0.05￣0.01)。高、中剂量复方阿胶浆组和中、低剂量贞芪扶正颗粒组小鼠血血小板计数明显高于模型组(t=2.48～2.84,P<0.05￣0.01)。各剂量复方阿胶浆组和各剂量贞芪扶正颗粒组和中、低剂量复方皂矾丸组小鼠血血红蛋白水平明显高于模型组(t=2.21～3.28,P<0.05￣0.01)。中剂量参芪颗粒组、各剂量复方阿胶浆组、高剂量贞芪扶正颗粒组,以及高、中剂量复方皂矾丸组小鼠血细胞比容明显高于模型组(t=2.15～2.86,P<0.05)。②对骨髓象的影响:与空白组比较,模型组小鼠骨髓有核细胞数均明显低于空白组(t=8.08,P<0.01)。鲨肝醇组,各剂量参芪颗粒组、复方阿胶浆组、贞芪扶正颗粒组、复方皂矾丸组小鼠骨髓有核细胞数明显高于模型组(t=3.05～5.67,P<0.01)。结论:参芪颗粒、复方阿胶浆、贞芪扶正颗粒、复方皂矾丸对环磷酰胺所致小鼠血虚模型外周血血细胞状况和骨髓象均有改善作用;其中贞芪扶正颗粒和复方皂矾丸对白细胞计数、红细胞计数的升高作用为优;贞芪扶正颗粒和复方阿胶浆对血小板计数升高作用为优;贞芪扶正颗粒、复方阿胶浆和复方皂矾丸对血红蛋白升高作用为优;4种中成药对血虚模型血细胞比容的影响相近;贞芪扶正颗粒对血虚模型有核细胞的升高作用为优。     

丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及对MMP-9、TIMP-1及Caspase-3表达的影响

目的探讨丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响以及对基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平的影响。方法将54只KM小鼠随机均分为假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组(20 mg/kg)、丁苯酞中剂量组(40 mg/kg)、丁苯酞高剂量组(80 mg/kg)。模型组和丁苯酞组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型假手术组同样手术操作但不进行线栓。观察各组小鼠神经功能损伤、脑梗死、脑水肿、氧化应激、炎性反应、脑组织凋亡情况以及MMP-9、TIMP-1表达水平。结果与假手术组比较,模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、伊文思蓝(EB)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性、Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型比较,丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、EB、MDA、NO、TNF-α、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9相对表达量明显降低(P<0.05),SOD活性、Bcl-2蛋白水平、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),呈剂量依赖性。结论丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注脑损伤有保护作用,可能与调节小鼠脑组织氧化应激、细胞凋亡以及血脑屏障有关。     

左旋四氢巴马汀在大鼠急性脑缺血再灌注时对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的　观察左旋四氢巴马汀 (L tetrahydropalmatine ,L THP)在脑缺血再灌注时对凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的影响。方法　建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学法、原位末端标记法 ,分别检测假手术组 (S组 )、缺血再灌注组 (Ⅰ组 )、L THP治疗组 (T组 )海马CA1区Bcl 2、Bax蛋白表达水平及凋亡细胞数。结果　 (1)脑缺血再灌注时 ,海马CA1区Bcl 2蛋白的表达显著增加 (P<0 0 1) ,但随时间的延长 ,增加幅度逐渐减小 ;而T组Bcl 2蛋白表达于相应的时间点则明显大于I组 (P<0 0 1)。 (2 )I组各时间点Bax蛋白表达均大于S组 (P <0 0 1) ,且随时间延长增加幅度逐渐增大 ;而T组Bax蛋白表达在相应时间点则下降 (P <0 0 1)。 (3)T组的神经细胞凋亡数与Bcl 2 /Bax蛋白阳性细胞数比值的关系为负相关 :r=- 0 94 173,P <0 0 0 1。 (4)神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加 ,L THP可减少细胞凋亡数。结论　在脑缺血再灌注细胞凋亡过程中 ,L THP可通过上调Bcl 2蛋白表达 ,下调Bax蛋白表达 ,减少神经元凋亡 ,对脑缺血损伤起保护作用     

灯盏花素注射液对脑缺血-再灌注沙土鼠海马ATP含量和ATP酶活性变化的影响

目的 :研究灯盏花素注射液对脑缺血再灌注沙土鼠海马 ATP含量和 ATP酶活性的影响。方法 :90只沙土鼠随机分为假手术组、脑缺血组和灯盏花素组 ,制备脑缺血再灌注模型。测定脑缺血后和再灌注 1、12和 2 4小时海马 ATP含量和 ATP酶活性。结果 :脑缺血后海马 ATP含量明显下降 (P<0 .0 1) ;再灌注后 1小时 ATP有所回升 ,但仍有差异 (P<0 .0 1) ;再灌注后 12和 2 4小时 ATP含量又明显下降 (P均 <0 .0 1)。灯盏花素组海马 ATP含量高于脑缺血组和再灌注不同时间组 (P均 <0 .0 1) ;脑缺血后 ,Na K ATP酶和 Ca2 ATP酶含量明显下降 (P均 <0 .0 1) ;再灌注后 1、12和 2 4小时其含量仍明显低于假手术组 (P均 <0 .0 1)。灯盏花素组缺血 10分钟及再灌注 1、12和 2 4小时海马 Na K ATP酶和 Ca2 ATP酶活性均高于脑缺血组和再灌注不同时间组 (P均 <0 .0 1)。结论 :灯盏花素注射液明显增加脑缺血及再灌注后 ATP含量和 ATP酶活性 ,可减轻脑缺血再灌注损伤。     

扇贝多肽对大鼠脑缺血后缺血半影区Bcl-2和Bax蛋白表达的干预

背景脑缺血时,抑制神经细胞凋亡的Bcl-2基因和诱导细胞凋亡的Bax均参与了其发病过程.扇贝多肽的体外抗氧化和抗凋亡作用,是否可产生对抗脑缺血后中枢神经细胞凋亡的保护作用?目的观察扇贝多肽对大鼠脑缺血半影区内Bcl-2和Bax蛋白参与的细胞凋亡的抑制及其脑保护作用.设计随机对照实验.单位青岛大学医学院的人体解剖学教研室.材料实验于2000-03/04在青岛大学医学院神经解剖实验室完成.选择成年Wistar大鼠32只,随机分为扇贝多肽组、蒸馏水组、模型对照组、假手术组,8只/组.扇贝多肽由中国水产科学院黄海水产研究所提供.干预扇贝多肽组、蒸馏水组和模型对照组采用颈外动脉线栓法建立缺血再灌注模型,假手术组不予造模.扇贝多肽组术前2 d腹腔注射体积分数0.1的扇贝多肽0.1 mL/kg,1次/d,再灌注前15 min加注1次;蒸馏水组术前2 d腹腔注射双蒸水0.1 mL/kg,1次/d,再灌注前15 min加注1次;模型对照组和假手术组术前不给药.然后扇贝多肽组、蒸馏水组和模型对照组开始造模,从颈外动脉插入4-0尼龙线,经颈总动脉分叉处、颈内动脉颅外段进入颈内动脉颅内段到达大脑中动脉分支处阻塞大脑中动脉的起始部,引起大脑中动脉供血区的急性脑缺血.动物苏醒后出现左霍纳综合征,提尾时右前肢内收屈曲,爬行时向右划圈为造模成功.假手术组手术过程不闭塞大脑中动脉,其余步骤同以上3组.将各组大鼠断头取脑,进行免疫组化Bcl-2和Bax蛋白的测定,结果用免疫反应产物吸光度(A)值来表示Bcl-2和Bax蛋白在脑组织缺血半影区的表达水平.主要观察指标各组大鼠脑组织缺血半影区Bcl-2和Bax蛋白表达的差异.结果经补充后32只大鼠进入结果分析.①缺血半影区Bcl-2蛋白的表达模型对照组及蒸馏水组吸光度值明显高于假手术组[0.453±0.048,0.510±0.061,0.211±0.023(F=683.78,q=21.13～24.74,P＜0.01)];扇贝多肽组(0.954±0.059)与模型对照组及蒸馏水组相比呈显著过表达(q=38.08～41.69,P＜0.01).②缺血半影区Bax蛋白的表达模型对照组及蒸馏水组吸光度值明显高于假手术组[0.834±0.082,0.790±0.102,0.125±0.017(F=590.44,q=49.57～51.98,P＜0.01)];扇贝多肽组(0.471±0.045)与模型对照组及蒸馏水组相比表达受到显著抑制(q=23.80～26.23,P＜0.01).结论扇贝多肽能够上调脑缺血半影区内抑制神经细胞凋亡的Bcl-2蛋白水平,同时降低半影区内诱导神经细胞凋亡的Bax蛋白的表达,从而在阻止脑缺血再灌注后细胞凋亡启动中起制动作用,保护脑缺血后半影区内神经元的功能.     

黄皮酰胺对高血压局灶性脑缺血-再灌注大鼠Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响

目的观察黄皮酰胺对肾性高血压大鼠(RHR)脑缺血-再灌注后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响,探讨其脑保护作用机制。方法75只RHR被随机分成假手术组、单纯缺血-再灌注组和黄皮酰胺组。采用线栓法制作局灶性脑缺血-再灌注模型,假手术组不造成缺血。用免疫组化法和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)分别观察缺血2h后再灌注6、12、24、48和72h脑细胞Bcl-2蛋白表达和凋亡细胞数。结果①再灌注6h即可见Bcl-2蛋白表达较多,24h达高峰,此后逐渐下降。与单纯缺血-再灌注组比较,黄皮酰胺组Bcl-2蛋白表达于再灌注后各时间点均明显增高,差异均有显著性(P均<0.01)。②再灌注6h后有较多凋亡细胞,于72h达高峰。与单纯缺血-再灌注组比较,再灌注6-24h黄皮酰胺组凋亡细胞均显著减少(P均<0.01),但再灌注48h后细胞凋亡的抑制作用不明显(P均>0.05)。假手术组及缺血-再灌注组的非缺血侧无Bcl-2阳性细胞,仅见0-2个凋亡细胞。结论局灶性脑缺血-再灌注后Bcl-2表达显著增高,细胞凋亡参与了脑缺血-再灌注损伤的过程。黄皮酰胺能显著上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,并可能与Bcl-2协同抑制细胞凋亡,这可能是黄皮酰胺脑保护作用的机制。     

银杏叶提取物对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响及其作用机制

目的:研究银杏叶提取物(EGB)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠认知功能的影响及其作用机制。方法:SD大鼠48只随机分为6组,各组8只:假手术组,腹腔注射等量生理盐水;对照组,腹腔注射半乳糖60mg/kg,1次/天,连续8周;银杏叶低、中、高剂量组(EGB-L,M,H组),分别腹腔注射半乳糖60mg/kg+EGB 0.4375mg/kg、0.875mg/kg及1.75mg/kg,1次/天,连续8周;治疗组,腹腔注射半乳糖60 mg/kg,1次/天,连续8周,然后注射EGB0.875mg/kg,1次/天,连续2周。Y迷宫测定大鼠认知能力;TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡;免疫组织化学法和Western Blotting检测p-PI3K、p-AKt、PI3K、AKt、Caspase-9p35的表达。结果:与假手术组相比,对照组大鼠达到学会标准的平均时明显延长,海马CA1区可见到较多TUNEL阳性细胞,p-PI3K及p-AKt的活性明显降低,Caspase-9p35的表达明显增加(均P<0.05);银杏叶各剂量组的上述指标较对照组均有不同程度改善(均P<0.05);治疗组与对照组相比,TUNEL阳性细胞数和Caspase-9p35表达的改善不明显,大鼠达到学会标准的平均时及p-PI3K、p-AKt的活性均有显著改善(均P<0.05)。结论:AD大鼠有认知障碍,海马CA1区存在细胞凋亡及PI3K-AKt-caspase-9转导通路的障碍,EGB能激活这一通路并能改善其海马CA1区细胞凋亡和大鼠认知障碍,预防效果比治疗效果更优。     

羟乙基淀粉对脑缺血/再灌注大鼠颅内压及血浆胶体渗透压的影响

目的 探讨羟乙基淀粉对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠血浆胶体渗透压(COP)的调节作用及其对颅内压(ICP)的影响.方法 采用随机对照动物实验研究方法,将24只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组和羟乙基淀粉组,每组8只.采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立脑I/R动物模型,于缺血2 h后再灌注,再灌注开始时尾静脉泵入羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液206 ml·kg-1·d-1.于术后0、2、6、12、18、24 h分别测定ICP和COP;术后24 h测量右侧大脑半球含水量,用免疫组化法观察神经元凋亡情况.结果 模型组和羟乙基淀粉组术后2 h ICP(mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa)即显著高于假手术组(11.50±1.43、12.48±0.75比7.95±0.92,均P＜0.05),之后随时间延长,两组ICP逐渐升高,至24 h达峰值(22.76±0.72、23.32±0.98比8.15±1.09,均P＜0.05);但羟乙基淀粉组与模型组各时间点比较均无差异.羟乙基淀粉组术后各时间点COP(mm Hg)显著高于模型组和假手术组,于术后6 h达高峰(13.49±0.50比12.04±0.47、12.00±0.39,均P＜0.01);模型组与假手术组各时间点比较均无差异.羟乙基淀粉组和模型组脑组织含水量、神经元凋亡率均显著高于假手术组[脑组织含水量:(80.16±0.44)%、(80.59±0.67)%比(78.72±0.52)%;神经元凋亡率:(44.27±7.86)%、(42.82±7.82)%比(3.26±0.00)%,P＜0.05或P＜0.01];但羟乙基淀粉组与模型组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 羟乙基淀粉可以有效提高COP,但尚不能证实提高COP是否能够降低ICP、减轻脑水肿.

Abstract：

Objective To investigate the regulatory effect of hydroxyethyl starch on colloidal osmotic pressure(COP), and its effect on intracranial pressure(ICP)in rats with cerebral ischemia/reperfusion (I/R)injury. Methods Twenty-four male Sprague-Dawley(SD)rats were randomly divided into sham operation group, model group and the hydroxyethyl starch group, each n = 8. Cerebral I/R model was reproduced by middle cerebral artery occlusion(MCAO), followed by reperfusion after ischemia for 2 hours.Rats in hydroxyethyl starch group received hydroxyethyl starch 130/0. 4 206 ml · kg-1 · d-1 via tail vein at the beginning of reperfusion. ICP and COP were evaluated at 0, 2, 6, 12, 18, 24 hours after the surgery.The rats were sacrificed by decapitation. The water content of the right hemisphere was measured at 24 hours after the surgery, and the ratio of apoptosis of neurons was observed by immunohistochemical method. Results Two hours after surgery the ICP(mm Hg, 1 mm Hg=0.133 kPa)of model group and hydroxyethyl starch group was significantly increased compared with sham operation group(11. 50±1.43,12. 48±0. 75 vs. 7. 95±0. 92, both P＜0. 05). With prolongation of time, the ICP gradually increased and reached the peak at 24 hours(22. 76±0. 72, 23. 32±0. 98 vs. 8. 15±1.09, both P＜0. 05). But there was no significant difference in ICP in the hydroxyethyl starch group compared with that of the model group at all time points. The COP(mm Hg)of hydroxyethyl starch group was significantly higher than the model group and sham operation group at each time point, and peaked at 6 hours after surgery(13. 49±0. 50 vs. 12.04±0. 47, 12. 00±0. 39, both P＜0. 01). There was no significant difference in COP between the model group and the sham operation group at all time points. The brain water content, neuronal apoptosis of hydroxyethyl starch group and model group was significantly higher than sham operation group[brain water content:(80. 16 ± 0. 44)%,(80. 59 ± 0. 67)% vs.(78. 72 ± 0. 52)%; neuronal apoptosis:(44. 27 ± 7. 86)%,(42. 82 ± 7.82)% vs.(3. 26 ± 0. 00)%, P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01], but there was no significant difference between the hydroxyethyl starch group and model group(both P＞0. 05). Conclusion Intravenous injection of hydroxyethyl starch 130/0.4 can increase the plasma COP, but it can not significantly reduce ICP and brain water content, and it also can not improve the neuronal apoptosis.     

三七总皂甙对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧为模型,观察三七总皂甙对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:流式细胞术检测凋亡细胞百分率,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca2 浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞LDH的释放。结果:神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧3h时,细胞凋亡百分率明显增高,为19.06%(P<0.01),细胞坏死百分率为6.83%(P<0.01),细胞内Ca2 浓度为169.32nmol/LCa2 浓度(P<0.01),LDH的释放率为27.63%(P<0.01);神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧24h时,细胞凋亡百分率为49.85%(P<0.01),细胞坏死百分率为11.49%(P<0.01),细胞内Ca2 浓度为298.11nmol/L(P<0.01),LDH的释放率为60.35%(P<0.01)。三七总皂甙(25,50mg/L)能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内Ca2 浓度,减少LDH的释放,三七总皂甙的作用随剂量增加而作用增加。结论:三七总皂甙对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2 浓度有关。     

姜黄素对急性肺损伤小鼠肺组织转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察姜黄素对博莱霉素致急性肺损伤小鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 昆明雄性小鼠60只,随机(随机数字法)分为假手术组,模型组,和姜黄素高、中、低剂量组,每组12只。除假手术组外其余各组小鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组一次性滴注等体积的生理盐水。造模后24h开始给药,持续到处死动物的前1d。姜黄素高、中、低剂量组给药剂量分别为200,100,50 mg·kg-1·d-1,假手术组、模型组分别灌服等体积的生理盐水。各组动物分别于给药后第3天和第7天随机处死6只,取肺组织进行HE染色,观察肺组织形态学改变;检测肺湿干比值;同时进行免疫组化显色,检测各组小鼠肺组织中转化生长因子-β1的表达水平。数据以均数±标准差((x)±s)表示。采用SPSS 11.5统计软件进行分析。多样本均数的比较采用单因素方差分析。结果 假手术组小鼠未见明显形态学异常,肺泡内未见水肿液及炎性细胞;模型组肺组织毛细血管明显扩张充血,肺泡间隔增宽,肺泡腔内可见水肿液及大量炎性细胞浸润;姜黄素高、中、低剂量组也可见不同程度的病理改变,但与模型组比肺损伤程度明显减轻。模型组肺湿干比值较假手术组明显升高(P＜0.01),但姜黄索各剂量组湿干比值较模型组明显降低(P＜0.01)。假手术组肺组织TGF-β1呈低水平表达,模型组肺组织TGF-β1表达显著高于假手术组(P＜0.01)。姜黄素高、中、低剂量组肺组织TGF-β1蛋白表达较模型组明显降低(P＜0.01),但仍高于假手术组(P＜0.01)。结论 姜黄素可抑制肺损伤小鼠肺组织中TGF-β1的表达,减轻肺损伤的程度,对急性肺损伤具有一定的保护作用,其保护机制可能是通过抑制肺组织中TGF-β1的表达来实现的。     

缺血再灌注大鼠脑保护过程中蛋白激酶C同工酶抑制剂的作用

背景蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)抑制剂能明显减轻缺血性脑损害,但其毒副作用大、价格昂贵.灯盏花素注射液能明显抑制PKC活性,对缺血性脑损害有一定的保护作用.目的研究局灶脑缺血再灌注大鼠PKC抑制剂灯盏花素缺血脑保护作用的可能机制.设计完全随机设计,对照实验研究.主要观察指标采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型.于缺血1.5 h再灌注4,24,72 h观察PKC同工酶γ蛋白表达及神经元凋亡的变化规律.结果再灌注4h PKCγ及神经元凋亡明显升高,PKCγ在24h达高峰,72h开始下降(P＜0.05);神经元凋亡的变化规律同PKCy(P＜0.01);灯盏花素组再灌注24 h前能明显抑制PKCγ及神经元凋亡的表达(P＞0.05).结论灯盏花素的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ蛋白表达有关.