靶向NBS1的RNA干扰对鼻咽癌CNE-2细胞放射增敏作用的研究

目的:研究靶向NBS1的RNA干扰对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用。方法:靶向NBS1的小干扰RNA转染鼻咽癌CNE-2细胞48小时后,4Gy剂量X射线照射。照射后24小时,流式细胞仪分析鼻咽癌细胞凋亡率。结果:X线照射+RNAi-NBS1组的细胞凋亡率显著高于单独X线照射组和X线照射+RNAi-阴性对照组(P<0.01)。结论:靶向NBS1的RNA干扰在鼻咽癌CNE-2细胞中有显著的放射增敏作用,诱导细胞凋亡是其放射增敏的重要机制之一。     

人鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2的光声光谱

目的:了解人鼻咽癌细胞的光谱吸收特性。方法:利用单光束光声光谱技术测量两株人鼻咽癌细胞(CNE-1、CNE-2)的归一化光声光谱。结果:在波长为380nm~700nm范围内,这两株人鼻咽癌细胞的光声光谱吸收特性存在着显著差异,它们的光谱吸收强度大小为:CNE-2>CNE-1。结论:利用光声光谱技术能够区分不同的人鼻咽癌细胞株的光谱差异性,从而表明该技术能为鼻咽癌的研究提供一种新方法。     

PI3k/Akt抑制剂对鼻咽癌细胞CNE-1放射敏感性影响的实验研究

目的体外实验研究PI3K/Akt抑制剂(LY294002)对鼻咽癌细胞CNE-1放射敏感性的影响。方法体外培养人鼻咽癌细胞CNE-1,本实验分为四组:对照组(A)、单纯放射组(B)、单纯药物组(C)、加药联合放射组(D),按细胞逐步稀释,采用的逐渐增加的放射剂量,分别为0、2、4、6、8、10Gy,PI3K/Akt抑制剂(LY294002)的试验浓度为20mol/L,利用细胞克隆形成实验观察各组CNE-1细胞存活情况,单击多靶数学模型以及L-Q模型拟合剂量存活曲线。结果①LY294002联合照射组Do、Dq、SF2明显比单纯放射组低。CNE-1细胞集落形成实验结果显示:鼻咽癌细胞受不同剂量照射后,B组和D与A组相比,细胞集落形成能力受抑制,放射剂量的增加,集落形成能力受抑制更明显;在相同的放射剂量时,D组细胞集落形成率明显低于B组;根据数据结果在电脑拟合的细胞存活曲线,其结果显示:D组Do值为0.522Gy,Dq值为2.54Gy;B组Do值为0.783Gy,Dq值为2.16Gy,SER为1.36;a/β值B组(1.78Gy)小于D组(9.65Gy)。结论 PI3k/Akt抑制剂(LY294002)联合照射可以提高鼻咽癌细胞CNE-1放射敏感性。     

Wnt10b、β-catenin与鼻咽癌放射敏感性的关系

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系.方法 收集对数生长期以及经直线加速器6MV X射线0、2、4、6 Gy照后48 h的鼻咽癌CNE2细胞和放射抗拒的CNE-2 (R743)细胞,RT-PCR方法检测Wnt10b基因、β-catenin基因mRNA的表达,Western blot检测Wnt10b、β-catenin蛋白的表达.结果 放射抗拒株CNE-2(R743)细胞的Wnt10b和β-catenin基因mRNA及蛋白的表达均高于放射敏感的CNE 2细胞(P＜0.05).经照射后CNE 2细胞和CNE-2 (R743)细胞的Wnt10b和β-catenin的mRNA及蛋白表达量随着照射剂量的增加而增加;在相同照射剂量下放射抗拒株CNE-2 (R743)细胞Wnt10b和β-catenin的表达量均高于CNE 2细胞(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号通路可能与鼻咽癌细胞放射敏感性有关.     

鼻咽癌CNE2细胞X射线照射诱导的多药耐药

目的 探讨鼻咽癌CNE2细胞X射线照射前后细胞P糖蛋白（P-gp）表达的差异及鼻咽癌CNE2细胞不同时期X射线照射时抑制率的差异,为临床鼻咽癌综合治疗的放化疗顺序的安排提供理论依据. 方法 用免疫细胞学检测CNE2细胞株X射线照射前后P-gp阳性表达的差异. 用四甲耦氮唑盐（MTT）法检测CNE2细胞株X射线照射前、后化疗药处理及同时X射线照射化疗药处理抑制率的差异. 结果 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射前P-gp阳性表达率为6.7%、X射线照射后阳性表达率为72.7%（P＜0.05）. 鼻咽癌CNE2细胞株X射线照射后化疗药处理抑制率较X射线照射前化疗药处理及X射线照射化疗药同时处理,在顺铂、紫杉醇、氟尿嘧啶均下降（P＜0.05）. 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射化疗药同时处理抑制率与X射线照射前化疗药处理比较,在顺铂、氟尿嘧啶,紫杉醇均差异无显著性（P＞0.05）. 结论 鼻咽癌CNE2细胞X射线照射后可以诱导P-gp表达升高,降低对化疗药物的敏感性. 鼻咽癌综合治疗时先化疗再放疗或同时放化疗可能效果更好.     

埃克替尼联合放疗对鼻咽高分化鳞癌细胞系的增敏效应

目的探讨埃克替尼对鼻咽高分化鳞癌细胞系CNE-1的放射增敏作用。方法细胞培养鼻咽癌CNE-1,分为空白对照组、埃克替尼组(0.094、0.188、0.376μmol·L-1)、照射组(照射剂量分别为0、2、4、8 Gy)和实验组(各浓度埃克替尼+各剂量照射组),利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,MTT法观察药物对体外培养的CNE-1细胞凋亡的影响,荧光染色法检测凋亡细胞,流式细胞术分析药物对CNE-1细胞周期的影响,高倍光镜下观察细胞形态。结果埃克替尼作用后,0.094、0.188、0.376μmol·L-1的放射增敏比分别为1.095、1.433、1.639,随药物浓度增加而变大;通过流式细胞仪检测发现,埃克替尼和放射治疗具有协同作用,可使CNE-1细胞周期发生改变,凋亡指数增加,0.376μmol·L-1埃克替尼+照射8Gy的凋亡指数达(50.82±6.54)%。结论埃克替尼对鼻咽高分化鳞癌细胞系CNE-1有明显的放射增敏效应。     

没食子酸对鼻咽癌体外放射敏感性的影响

目的 探讨没食子酸对鼻咽癌细胞体外放射敏感性的影响及其分子机制.方法 深部X射线多分次亚致死剂量暴露法筛选放疗抵抗鼻咽癌细胞株;放射克隆存活法鉴定鼻咽癌细胞株放疗敏感性差异;MTT法检测没食子酸对细胞活力的影响;Hoechst33258染色荧光显微镜和流式细胞术7-AAD/Annexin V-FITC双染法观察细胞凋亡...     

细胞放射生物学参数的分析

目的通过测定鼻咽癌HNE1细胞株和HNE1-O(将空载体质粒pEGFP-N1转染到鼻咽癌细胞HNE1)的放射生物学参数,解决生物医学研究中放射剂量-存活曲线的拟合问题,给予统计软件技术上的支持。方法采用细胞转染技术,将空载体质粒pEGFP-N1转染到鼻咽癌细胞HNE1细胞株,荧光显微镜下观察结果。克隆形成实验测定HNE1和HNE1-O两组细胞在不同剂量照射下的存活分数。采用SPSS实现单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数D0、Dq、N和α、β、α/β、SF2值。结果分别对2种常用放射剂量-存活曲线的生物物理模型,给出曲线拟合的SPSS程序,并进行实例分析,估计相应的模型参数。结论给出的SPSS程序适用于放射剂量存活曲线的拟合。为基因治疗及细胞放射敏感性研究奠定理论和技术基础。     

不同剂量X射线照射Ec9706细胞的FTIR研究

目的研究不同剂量X线照射人食道癌（Ec9706）细胞的最佳剂量。方法利用傅立叶红外光谱（FTIR）技术采集不同剂量X线照射Ec9706细胞后的红外光谱,并对光谱进行对比分析。结果受不同剂量X线照射的Ec9706细胞1400cm^-1谱线逐渐红移1～3cm^-1,1454cm^-1谱线逐渐蓝移1～3cm^-1、2847cm^-1谱线逐渐蓝移4～8cm^-1,8Gy剂量组蓝移最大为8cm^-1。表明这些谱线对应的基团构象的改变。在所设定的各剂量组癌细胞吸收光谱中,吸收峰强度比I1654/I1542、I1454/I1400、I2958/I2847变化明显,其中均以8Gy剂量组最为明显,表明该剂量组细胞的癌化程度最小。结论在所设计的各剂量中,8Gy剂量X线照射Ec9706细胞效果最好。     

黄芪注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞株的抑制作用研究

目的:研究黄芪注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的体外抑制作用。方法:以不同浓度的黄芪注射液(实验组)作用于人鼻咽癌CNE-2细胞,应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法测定细胞的增殖状态,应用细胞形态学和流式细胞仪观察细胞凋亡,并与未处理的对照组进行比较。结果:与对照组比较,实验组对受试细胞株增殖均有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),且与浓度和作用时间呈正比;实验组细胞发生病理形态改变。结论:黄芪注射液可抑制人鼻咽癌CNE-2细胞株增殖并诱导其凋亡。     

鼻咽清颗粒抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖及对放疗敏感性的影响

摘 要 目的：体外考察鼻咽清颗粒对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制和放射增敏作用。方法: 以体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞为研究对象,MTT法考察鼻咽清颗粒对CNE-2细胞的增殖抑制作用,克隆形成实验检测鼻咽清颗粒对CNE-2细胞的放射增敏效应,流式细胞仪检测鼻咽清颗粒对CNE-2细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果: 鼻咽淸颗粒浓缩液能抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈时间 剂量依赖性;24,48和72 h的IC₅₀分别70.79,60.13,51.63 mg·mL^-1（按主药材质量计）;集落形成实验表明鼻咽清颗粒的浓缩液联合放射能明显降低CNE-2细胞集落形成,随着主药浓度的增加,CNE-2细胞集落形成减少,阴性对照组、单纯放射组、10 mg·mL^-1和20 mg·mL^-1 （按主药材的重量计）鼻咽清浓缩液的集落形成数差异具有统计学意义（P<0.05）;随着培养基中鼻咽清主药含量的增加,G2/M期所占的百分比提高,凋亡细胞所占的比例也相应增加,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:鼻咽清颗粒可抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖,将CNE-2细胞阻滞于G2/M期,诱导鼻咽癌细胞凋亡,具有放疗增敏作用。     

siRNA沉默Twist基因对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响

目的探讨RNA干扰沉默Twist基因对人鼻咽癌细胞株CNE-2的迁移、侵袭和增殖等生物学活性的影响。方法构建Twist-shRNA表达载体,脂质体法将重组质粒分别转染入鼻咽癌细胞株CNE-2中,RT-PCR法检测Twist mRNA、Western blot法检测Twist蛋白表达量的变化。MTT法检测细胞的增殖,细胞创伤愈合试验观察细胞迁移能力,Tran-swell小室试验检测细胞侵袭能力的变化。结果沉默Twist基因可减慢CNE-2细胞生长速度(与对照组比较P<0.05),降低CNE-2细胞的迁移速度,抑制CNE-2的体外侵袭能力。结论靶向封闭Twist基因的表达,可明显抑制CNE-2细胞的增殖、迁移及侵袭能力,提示Twist可作为鼻咽癌防治的一个新的靶点。     

NS398对放射抗拒食管鳞癌细胞的放射增敏作用

目的探讨环氧化酶-2选择性抑制药NS398对放射抗拒食管癌细胞的放疗增敏效应。方法通过γ射线反复照射EC9706细胞,每次照射剂量200cGy,再克隆培养,重复以上过程达到累计放射剂量6000cGy,筛选得到放射抗拒细胞株EC9706R,采用克隆形成实验检测EC9706R及其亲本细胞的放射敏感性。采用不同浓度的NS398处理EC9706R细胞,研究它对EC9706R细胞放射敏感性的影响。结果筛选得到的放射抗拒人食管鳞癌细胞株EC9706R较亲本细胞显示出明显的放射抗性,不同浓度的NS398对食管癌EC9706R细胞均具有放疗增敏效应,25,50,100,150μmol.L-1的NS398作用24h后均能检测到放疗增敏作用,其放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.05,1.10,1.15,1.23和1.14,1.28,1.36,1.67,呈剂量依赖关系。结论NS398对放射抗拒食管癌细胞EC9706R具有明显的放疗增敏作用。     

大黄素对鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用与细胞自噬关系的研究

目的研究大黄素在放射增敏过程中对鼻咽癌CNE-1细胞是否产生自噬现象,并探讨其放射增敏作用与自噬相关基因mRNA表达的关系。方法鼻咽癌细胞分为空白组、大黄素组、照射组和大黄素联合射线增敏组,采用透射电镜观察各组细胞内自噬小体的形成及超微结构的改变,并运用荧光定量PCR方法检测基因ULK1、GABARAPL1、Beclin1、Bcl-2的mRNA表达水平。结果除空白组外其余各实验组均可观察到自噬小体的形成。与空白组比较,各组ULK1mRNA表达均升高(P<0.05),其中大黄素增敏组表达最高(P<0.01);而Beclin1和Bcl-2 mRNA表达下调;GABARA-PL1除大黄素增敏组升高外(P<0.05),其它各组变化不明显。结论大黄素在鼻咽癌细胞放射增敏过程伴随着自噬产生,自噬性死亡可能是大黄素放射增敏的途径之一。     

多西紫杉醇对人鼻咽癌CNE-2细胞辐射敏感性及侵袭转移相关因子表达的影响

目的：研究多西紫杉醇（docetaxel）对人鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的作用及对侵袭转移相关因子MMP-2、MMP-9表达的影响。方法：采用CCK-8法检测多西紫杉醇对CNE-2细胞增殖能力的影响,克隆形成实验测定多西紫杉醇对细胞放疗敏感性,化学发光法检测MMP-2启动子质粒转染细胞后双荧光素酶活性,荧光定量PCR法检测细胞MMP-2、MMP-9mRNA表达,Westernblot法检测细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果：多西紫杉醇对GNE-2细胞增殖有明显的抑制作用,24、48、72h的IC50值分别为30．6、25．4、12．8gmol／L;无毒剂量（5gmol／L）多西紫杉醇处理CNE-2细胞后,其对放疗的敏感性明显增强（P〈0．05）,MMP-2启动子活性比未处理组显著降低;MMP-2和MMP-9基因rnRNA和蛋白表达均较未处理组下降。结论：多西紫杉醇联合放疗能显著提高人鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,其作用机制可能与其抑制细胞内MMP-2、MMP-9基因转录,下调细胞内MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。     

青蒿对鼻咽癌细胞CNE-1、SUNE-1生长的影响

目的研究青蒿对鼻咽癌细胞系CNE-1、SUNE-1的生长抑制作用。方法①采用血清药理学的方法提取中草药青蒿的含药血清;②采用MTT法检测青蒿对CNE-1、SUNE-1细胞生长的抑制作用。结果 MTT法证实青蒿含药血清对鼻咽癌细胞CNE-1、SUNE-1细胞生长均有抑制作用;在SUNE-1细胞中无剂量-效应关系和时间效应关系;在CNE-1细胞中有剂量-效应依赖关系,无时间-效应依赖关系;结论青蒿含药血清对SUNE-1、CNE-1细胞的生长有抑制作用。     

检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制

目的 探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.方法 实验分4个组,对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组.采用流式细胞仪分析G2/M期分布比例及凋亡百分比,Western-Blotting检测CyclinB1的表达,改良的荧光染色法观察核碎片形态.结果 联合处理组G2/M期分布比例较高,CvclinB1表达较高,并产生更多的核碎片,放射诱导的凋亡百分比并不增加.结论 G2/M 期分布比例增高,CyclinB1表达增加是温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.     

检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制

目的 检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.方法 实验分对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组.采用流式细胞仪分析G2/M期分布比例及凋亡百分比,Western-Blotting检测CyclinB1的表达,改良的荧光染色法观察核碎片形态.结果 联合处理组G2/M期分布比例较高,CyclinB1表达较高,并产生更多的核碎片,放射诱导的凋亡百分比并不增加.结论 G2/M期分布比例增高,CyclinB1表达增加是温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.     

蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响及机制研究

摘要：目的:探讨蛇床子素对人肝癌Huh7细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并初步探究其作用机制。方法:采用不同浓度(0,2.5,5,10,20,40μg·ml-1)的蛇床子素干预人肝癌Huh7细胞,噻唑蓝（MTT）法检测蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50);10μg·ml-1蛇床子素联合不同照射剂量（0,2,4,6,8 Gy）的X射线处理Huh7细胞,MTT检测细胞增殖能力,筛选照射剂量;克隆形成实验检测Huh7细胞放射敏感性变化,分别采用10μg·ml-1蛇床子素、4 GyX射线照射及两者联合干预Huh7细胞,流式细胞术检测Huh7细胞凋亡率,Western Blot检测Huh7细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved caspase-9）的表达水平。结果:蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖有明显抑制作用,IC50为20.14μg·ml-1;与单纯照射组相比,蛇床子素联合不同剂量X射线照射下均能够明显抑制细胞存活率,筛选出4 Gy剂量用于后续放射实验。与单纯照射组相比,蛇床子素联合照射组Huh7细胞的放射敏感性、Huh7细胞凋亡率、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论:蛇床子素能够抑制肝癌Huh7细胞增殖,促进细胞凋亡,并增强细胞对放射的敏感性,其作用机制可能与蛇床子素上调cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达有关。