乳宁冲剂及其拆方对裸鼠移植瘤肺转移的抑制作用与机制探讨

【目的】通过体内实验探讨乳宁冲剂及其拆方对裸鼠乳腺癌肺转移的抑制作用及其机制。【方法】选雌性BALB／c裸鼠，以对数生长的体外培养的MDA-MB-435高转移乳腺癌细胞造模。随机分为模型组、乳宁冲剂组、乳宁冲剂拆方温肾组、乳宁冲剂拆方疏肝活血组、三苯氧胺组（TAM组）、环磷酰胺组（CTX组），给药7周后，解剖显微镜计数肺转移结节并行全肺组织切片，免疫组化检测肿瘤组织VEGF、MMP-9、TIMP-1表达情况。【结果】乳宁冲剂组及拆方温肾组、疏肝活血组对裸鼠乳腺癌移植瘤的肺转移抑制作用分别为46．36％、32．73％、18．2％，乳宁冲剂组作用与CTX组（50．91％）比较无显著差异；而乳宁冲剂组、疏肝活血组均可下调肿瘤VEGF蛋白表达；乳宁冲剂全方、温肾方可明显使TIMP-1mRNA的表达升高，MMP-9表达下降；对MMP-9／TIMP-1蛋白表达比值影响以温肾组下降最明显。【结论】乳宁冲剂全方抑瘤抗转移作用优于拆方，而拆方组以温肾组抗转移作用优于疏肝活血组。同时表明，乳宁冲剂特别是温肾中药可能通过降低MMP-9／TIMP-1比值而影响肺转移的发生。     

乳宁Ⅱ号对乳腺癌小鼠移植瘤生长转移的防治作用及其机制

目的 探讨乳宁Ⅱ号对乳腺癌MA-891 TA2小鼠移植瘤生长转移的作用及其机制.方法 建立乳腺癌MA-891细胞株TA2小鼠移植瘤肺转移模型,观察药物对移植瘤生长转移的影响,结合免疫组化法、图像分析法检测血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体（VEGFR）、微血管数（MVC）、微血管面积（MVA）的水平.结果 乳宁Ⅱ号组瘤重抑制率、肺转移抑制率分别为37.3%,65.4%,肿瘤的生长和肺转移受到明显的抑制;乳宁Ⅱ号组VEGF、VEGFR、MVC、MVA的水平较荷瘤对照组水平明显降低（P＜0.05）.结论 乳宁Ⅱ号能通过抑制新生血管形成发挥抑瘤抗转移的作用,其机制可能与通过下调VEGF、VEGFR表达水平有关.     

“乳宁Ⅱ号”抑制Ca761小鼠乳腺癌生长转移的实验研究

目的：探索“乳宁Ⅱ号”抑制乳腺癌生长转移的机制。方法：检测经“乳宁Ⅱ号”等不同方法处理的小鼠乳腺癌肺转移模型的瘤重,肺转移发生率及IL－2和TNF的含量,并进行组间比较。结果：Z组与CTX组、Z＋CTX组瘤重、肺转移率均低于NX组（P＜0．05）,TNF－α平均值均显著低于NS组（P＜0．05）、Z组与Z＋CTX组高于CTX组（P＜0．01）。结论：“乳宁Ⅱ号”可抑制Ca761小鼠乳腺癌生长及肺转移,其机制与其抑制TNF分泌及促进IL－2分泌有关。     

乳宁II号对TA2小鼠乳腺癌MA-891移植瘤中血管内皮生长因子表达的影响

目的研究乳宁Ⅱ号对TA2小鼠乳腺癌移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)表达及肺转移的影响.方法将体外培养的MA-891小鼠乳腺癌细胞接种于TA2小鼠右腋部皮下,造成小鼠移植瘤肺转移模型,同时予乳宁Ⅱ号治疗.结果乳宁Ⅱ号可抑制移植瘤生长,减少肺转移的发生(P＜0.05),降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达(P＜0.05).结论乳宁Ⅱ号可通过降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达,发挥抑瘤和抗转移作用.     

乳宁Ⅱ号对TA2小鼠乳腺癌MA-891移植瘤中血管内皮生长因子表达的影响

目的研究乳宁Ⅱ号对TA2小鼠乳腺癌移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)表达及肺转移的影响。方法将体外培养的MA-891小鼠乳腺癌细胞接种于TA2小鼠右腋部皮下,造成小鼠移植瘤肺转移模型,同时予乳宁Ⅱ号治疗。结果乳宁Ⅱ号可抑制移植瘤生长,减少肺转移的发生(P<0．05),降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达(P<0．05)。结论乳宁Ⅱ号可通过降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达,发挥抑瘤和抗转移作用。     

乳宁Ⅱ号对Ca761小鼠乳腺癌增殖及细胞凋亡的影响

目的:观察乳宁Ⅱ号对Ca761小鼠乳腺癌移植瘤模型肿瘤抑制率以及肿瘤细胞凋亡的影响.方法:将Ca761细胞2×106个移植于615系小鼠右腋皮下,建立小鼠乳腺癌移植瘤模型.造模后将48只小鼠随机分成4组,每组12只.模型组用生理盐水灌胃,CTX组用CTX腹腔注射,中药组用乳宁Ⅱ号灌胃,中药加CTX组用乳宁Ⅱ号灌胃及CTX腹腔注射.至种植后第21天脱颈处死小鼠.观察肿瘤重量,检测肿瘤组织细胞凋亡发生率,以及移植瘤组织P53、bcl-2癌基因蛋白表达.结果:CTX组、中药组和中药加CTX组瘤重与模型组比较,差异均有显著性意叉(P＜0.05).其中中药组瘤重抑制率更低于CTX组与中药加CTX组(P＜0.05).中药组、CTX组、中药加CTX组凋亡细胞数与模型组比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).中药加CTX组与中药组、CTX组比较,差异亦有显著性意义(P＜0.05).中药组、中药 CTX组P53IRS平均值,均显著低于模型组(P＜0.05);而CTX组与模型组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).中药组、CTX组、中药加CTX组bcl-2阳性表达率,与模型组比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:乳宁Ⅱ号诱导乳腺癌细胞凋亡,主要是通过抑制突变型P53的表达来实现的,而对bcl-2介导的抑制细胞凋亡体系作用不大.     

乳宁Ⅱ号对人乳腺癌MDA-MB-435裸小鼠移植瘤中血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究乳宁Ⅱ号对人乳腺癌MDA-MB-435细胞株裸小鼠移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:将体外培养的人乳腺癌MDA-MB-435细胞接种于裸小鼠右腋部皮下,造成小鼠移植瘤肺转移模型,同时予乳宁Ⅱ号治疗.结果:乳宁Ⅱ号可抑制移植瘤生长,减少肺转移的发生,降低肿瘤组织中EVGF蛋白(P＜0.01)及VEGF mRNA表达(P＜0.05).结论:乳宁Ⅱ号可能是通过降低肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达,发挥抑瘤和抗转移作用.     

健脾疏肝抗毒汤对裸鼠MDA-MB-231-pAcGFP异种移植瘤生长及转移能力的影响

目的:观察健脾疏肝抗毒汤对荷MDA-MB-231-p Ac GFP裸鼠移植瘤生长及转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:应用Fugene HD Transfection Reagent转染三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞,经G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的乳腺癌细胞(MDA-MB-231-p Ac GFP)。流式细胞仪检测荧光细胞百分率。采用皮下接种法建立MDA-MB-231-p Ac GFP细胞异种移植瘤裸鼠,观察移植瘤的生长情况,荧光成像技术观察各脏器转移瘤的数目和大小。结果:流式细胞仪检测乳腺癌细胞转染率高达96.5%,表达有绿色荧光蛋白的MDA-MB-231-p Ac GFP细胞成瘤率为100%。模型组(A组),健脾疏肝抗毒汤组(B组),趋化因子基质细胞衍生因子-1(CXCL12)特异受体(CXCR4)抑制剂组(C组)、健脾疏肝抗毒汤联合CXCR4抑制剂组(D组)瘤体质量分别为(1.30±0.11),(0.75±0.12),(0.48±0.09),(0.44±0.07)g,瘤体体积分别为(6.635±0.500),(4.017±0.466),(2.664±0.700),(2.323±0.492)cm~3,与模型组比较,3组瘤体质量及体积均明显降低(P0.05)。3组的抑瘤率分别为42.18%,62.95%,66.28%。A,C组肝脏可见散在荧光转移结节,B组及D组肝脏未见有荧光结节。结论:健脾疏肝抗毒汤具有抑制MDA-MB-231-p Ac GFP移植瘤生长及肝转移的能力,可为健脾疏肝抗毒汤防治三阴性乳腺癌的生长转移提供实验依据。     

健脾疏肝抗毒方对三阴性乳腺癌荷瘤鼠抗肿瘤作用的研究

目的研究健脾疏肝抗毒方对三阴性乳腺癌荷瘤鼠抗肿瘤作用及其可能的机制。方法建立稳定高表达的p Ac GFP MDA-MB-231细胞株,采用皮下接种法建立MDA-MB-231-p Ac GFP细胞异种移植瘤裸鼠,应用免疫组化法检测不同组别:对照组(A组)、健脾疏肝抗毒方组(B组)、ADM3100(CXCR4抑制剂)组(C组)、健脾疏肝抗毒方联合ADM3100组(D组)肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞、肿瘤相关成纤维细胞浸润,蛋白印迹方法检测各组肿瘤组织CXCR4/CXCL12轴相关分子的表达。结果健脾疏肝抗毒方能显著抑制肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞、肿瘤相关成纤维细胞的浸润,抑制CXCR4/CXCL12轴相关分子CXCR4、CXCL12、HIFα,NF-κB,VEGF的表达,且与ADM3100联合后抑制作用显著增强。结论健脾疏肝抗毒方可以通过改变肿瘤微环境,调节CXCR4/CXCL12轴相关分子的表达而发挥抑制乳腺癌荷瘤鼠异种移植瘤的生长的作用。     

养阴清热理气方及其拆方对食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 研究养阴清热理气方及其养阴、清热、理气3个拆方对食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 将57只BALB/c雌性裸鼠随机分为模型组、全方组、清热组、理气组、养阴组各10只,空白组7只,用人食管癌细胞株EC9706细胞植入裸鼠右胁皮下制造荷瘤裸鼠模型,造模后第2天开始灌胃,各用药组分别给予养阴清热理气方及其拆方,每日1次,共90d.观察各组裸鼠饮食量、体重及移植瘤体积的变化;实验结束后称量各组移植瘤重量并计算抑瘤率.结果 各用药组与模型组比较均可增强荷瘤裸鼠精神和活动状态,增加体重(P<0.01),全方组、清热组和养阴组还可提高动物食量(P<0.05).各用药组对裸鼠皮下移植瘤生长均有不同的抑制作用,瘤体体积、重量与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).各组抑瘤率依次为全方组>养阴组>清热组>理气组,全方组、养阴组抑瘤率与清热组、理气组差异有统计学意义(P<0.05).结论 养阴清热理气方及其拆方具有改善荷瘤裸鼠生存状态和抑制肿瘤生长的作用.     

七叶灵颗粒干预小鼠Lewis肺癌细胞凋亡及MMP9活性表达的研究

目的 探讨七叶灵颗粒在抑制肿瘤生长及肿瘤细胞侵袭和转移方面的作用机制。方法将接种的C57小鼠随机分为4组：不用任何治疗的模型组（A组）、化疗组（B组）、七叶灵颗粒组（C组）和化疗加七叶灵颗粒组（D组）,观察各组小鼠生存质量,比较各组小鼠的体内抑瘤作用。采用原位细胞凋亡检测试剂盒检测标本组织凋亡细胞数,用原位杂交检测,检测标本组织MMP9阳性表达数。结果①c组和D组小鼠的生存质量优于A组和B组。②D组的抑瘤率为74．47％,显著高于A组（P〈0．01）。B、C、D组的平均瘤重显著低于A组（P均〈0．05）。③原位细胞凋亡检测表明,B组、C组和D组瘤组织凋亡细胞数均显著高于A组（P均〈0．05）,且D组显著高于C组（P〈0．05）。④原位杂交检测表明,D组、C组和B组肺癌组织中的MMP9表达水平均显著低于A组（P均〈0．05）。结论七叶灵颗粒有一定的改善C57荷瘤小鼠生存质量、抑制Lewis肺癌细胞生长、诱导Lewis肺癌细胞凋亡及抑制MMP9活性表达的作用。     

疏肝活血、调理冲任法治疗乳腺增生病38例

应用疏肝活血、调理冲任法治疗乳腺增生病38例，2个月为1个疗程，结果总有效率为94．74％。     

熊胆粉联合环磷酰胺用药通过调控肿瘤微环境抑制结直肠癌肝转移作用的研究

目的:探讨熊胆粉联合环磷酰胺(cyclophosphamide,cytoxan,CTX)用药通过调节肿瘤炎症微环境对小鼠结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)肝转移模型的增免抑瘤抗转移作用.方法:脾脏原位注射SL4细胞制作小鼠CRC肝转移模型.随机分5组:模型组、CTX组(80 mg· kg-1)和CTX联合熊胆粉高、中、低剂量组(300,150,75 mg·kg-1).术后口服灌胃给药12d,于第13天取材,解剖肝脾称重,HE染色,免疫荧光分析;外周血、脾和肝转移瘤进行流式细胞免疫表型分析.结果:CTX组及CTX联合熊胆粉各组肝脾质量明显低于模型组(P＜0.05);HE染色和免疫荧光分析表明,正常组织中淋巴细胞浸润较多,肿瘤组织周围有以巨噬细胞为主的大量炎细胞浸润;流式细胞检测结果表明:外周血中,联合治疗组与CTX组相比,T淋巴细胞显著升高(P＜0.05),CD4/CD8增加;脾细胞悬液中,联合治疗组与CTX组比较,淋巴细胞总数增加,以B细胞增加较为显著(P＜0.05),CD11b,F4/80细胞明显降低(P＜0.05);肝转移瘤中,联合治疗后比单独CTX治疗单核巨噬细胞下降(P＜0.05).结论:熊胆粉联合CTX治疗不仅能保肝增免,还可通过调节肿瘤微环境,减少对单核巨噬细胞等的募集起到抗炎进而抗肿瘤转移作用,其中熊胆粉低剂量与CTX联合用药组降低炎症细胞浸润的作用最为显著.     

益气养阴方抗C57小鼠Lewis肺癌转移作用与调节MMP-9、TIMP-1蛋白表达的实验研究

目的免疫组化法观察益气养阴方对C57BL／6小鼠Lewis肺癌瘤体MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响以及抗肺转移作用,探讨该方抗转移作用的机理。方法24只C57BL／6小鼠随机分为3组,每组8只,接种Lewis肺癌瘤株,造模后第2天按如下方案进行干预：荷瘤对照组：0.9％NaCl溶液灌服;中药组：益气养阴方煎汤灌服;顺铂组：顺铂溶液腹腔内注射。第20天处死全部小鼠,称瘤重计算抑瘤率,计数肺转移数,计算抑制肺转移率,免疫组化Envision二步法测定瘤体MMP-9、TIMP-1蛋白表达情况。结果中药组和顺铂组的抑瘤率分别为35.02％和41.18％,具有统计学意义（P〈0.05）。中药组和顺铂组的抑制肺转移率分别为54.20％和39.02％,差异无统计学意义。瘤重与肺转移数之间存在正相关。荷瘤对照组MMP-9和TIMP-1阳性率均为100％,中药组MMP-9阳性率显著低于对照组,TIMP-1阳性表达与对照组比较差异无统计学意义,但中度及强阳性率明显低于对照组。MMP-9和TIMP-1的表达与肺转移数成正相关,两者之间亦存在正相关。结论益气养阴方具有较好的抑瘤作用和抑制肺转移的作用;肺癌均表达MMP-9和TIMP-1蛋白,是促进转移的重要机理和判断指标;益气养阴方能够显著下调肺癌MMP-9的表达,影响TIMP-1的表达,这是其抑制肺癌转移的机理之一。     

中药肺岩宁方及其拆方对小鼠Lewis肿瘤生长、肺转移和微血管密度的影响

目的:观察中药肺岩宁及其拆方对C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、肺转移和肿瘤微血管密度的影响,探讨肺岩宁抗肿瘤生长转移的机制。方法:采用C57BL/6小鼠,接种Lewis肺癌细胞株,随机分为对照组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只,在接种后第2天开始中药灌胃,灌胃21d后处死,观察肿瘤肺转移情况,取瘤称重后石蜡包埋,免疫组化法测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果:肺岩宁的抑瘤率33.4%;补肾组抑瘤率24.2%,抗癌组抑瘤率69.6%。肺岩宁组肺转移数目为(2.91±1.37)个,补肾组肺转移数目为(3.20±1.27)个,均显著低于对照组的(4.76±1.83)个。肺岩宁组MVD为(29.57±2.92)条/200倍视野,抗癌组MVD为(24.23±2.33)条/200倍视野,补肾组MVD为(31.93±4.88)条/200倍视野,明显低于对照组(51.03±3.09)条/200倍视野。结论:补肾中药抑制肿瘤生长和肺转移;抗癌方对肿瘤生长具有显著抑制作用;益气中药可能促进肿瘤生长;抑制血管生成可能是中药肺岩宁方抗肿瘤侵袭转移的机制之一。     

扶正消癌方对Lewis肺癌模型小鼠的抑瘤作用

目的 观察扶正消癌方对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制. 方法 选择60只C57BL/6J小鼠右前肢腋下接种Lewis肺癌细胞建立Lewis肺癌小鼠模型,随机分为荷瘤模型组、环磷酰胺(CTX)组、中药预防组、综合组,每组15只.CTX组接种72h后一次性腹腔注射CTX溶液0.2ml(4mg/ml),中药预防组接种前5天开始灌胃扶正消癌方0.4ml(2g/ml),综合组在CTX组基础上灌胃扶正消癌方药0.4ml(2g/ml),荷瘤模型组给予0.4ml生理盐水灌胃;每天灌胃1次,至造模后12天.观察各组小鼠生存状态及移植瘤生长情况,称量瘤重、胸腺重,计算抑瘤率、胸腺指数.免疫组化法检测瘤组织细胞黏附因子CD44的表达.结果 与荷瘤模型组比较,各组瘤重均显著降低(P＜0.01),综合组瘤重显著低于CTX组(P＜0.01),CTX组、中药预防组、综合组抑瘤率分别为83.97％、55.71％、87.23％.与荷瘤模型组比较,CTX组和综合组胸腺重均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),CTX组胸腺指数显著降低(P＜0.01);与CTX组比较,中药预防组胸腺重量显著增加(P＜0.01),综合组胸腺指数显著增加(P＜0.05).综合组CD44表达程度最低,与CTX组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正消癌方可以协同化疗药物,提高肿瘤细胞对免疫系统及抗癌药物的敏感性,下调或逆转Lewis肺癌模型小鼠黏附因子CD44表达,发挥抑瘤和抗转移作用.     

中肺合剂抗小鼠Lewis肺癌肺转移作用及相关机制的实验研究

 目的 观察中肺合剂对小鼠Lewis肺癌抗肿瘤肺转移的作用,并探索其相关机制。方法 采用Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型观察中肺合剂抗肿瘤肺转移作用,并采用荧光定量QRT-PCR法测定中肺合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶（MMP）-9表达的影响,采用EnVision法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）和CD34蛋白的表达情况,并计数微血管密度(MVD)。结果 中肺合剂低、中、高剂量组（12.7,25.4,50.8 g·kg-1）和环磷酰胺（CTX）阳性对照组对移植性Lewis肺癌小鼠的肺转移抑制率为16.7%、45.8%、19.4%和80.6%,以中剂量组肺转移抑制作用最佳。中肺合剂能下调Lewis肺癌小鼠肿瘤组织MMP-9、VEGF蛋白的表达水平,并降低肿瘤组织MVD。MMP-9、VEGF表达和MVD之间呈正相关。结论 中肺合剂对小鼠Lewis肺癌具有显著的抗肿瘤肺转移作用,以中剂量组最佳。其作用机制可能与该药能降低肿瘤组织MMP-9、VEGF蛋白的表达水平,并降低肿瘤组织MVD有关。     

益肺清化膏对荷瘤小鼠瘤组织CD44、CD44v6、E-cad等mRNA表达水平的影响

目的：观察益肺清化膏对肺癌侵袭转移过程中粘附分子E-cad、CD44、CD44v6等mRNA表达水平的影响,以深入探讨该药的作用机制。方法：以RT-PCR检测用药后荷瘤小鼠体内移植的Lewis肿瘤细胞表达E-cad、CD44、CD44v6的情况。实验动物为C57BL/6j小鼠,随机分为高、低剂量中药两组、CTX组对照及空白对照组4组。每只小鼠均右侧腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞匀浆液0.2ml/鼠。第2天开始灌胃给药,连续15d,CTX腹腔注射给药。每2d测小鼠体重,第21天颈椎脱臼处死动物,结束实验。留取瘤组织处理后行RT-PCR检查,以观察益肺清化膏对肺癌侵袭转移过程中粘附分子E-cad、CD44、CD44V6相应基因mRNA表达的影响。结果：E-cad的表达水平以高剂量中药组为首,其表达与对照组的表达水平存在非常显著的差异（P〈0.01）,与CTX组比较存在显著的差异（P〈0.05）。CD44的表达水平高、低剂量中药组均呈低表达状态,其表达与对照组的表达水平存在显著的差异（P〈0.05）,与CTX组比较也存在着显著的差异（P〈0.05）。CD44v6的表达水平与CD44的表达类似,高、低剂量中药组均呈低表达状态,高剂量中药组的表达与对照组的表达水平存在非常显著的差异（P〈0.01）;不同于前者的是,CTX组表达状态4组中最低,与对照组的表达水平间存在非常显著的差异（P〈0.01）;且低剂量中药组与CTX组的表达水平比较也存在着显著的差异（P〈0.05）。结论：实验证实益肺清化膏具有抑制肿瘤生长以及拮抗肿瘤转移的作用。其抗肿瘤作用的机制,考虑与提高E-cad的表达水平,从而增加肿瘤细胞间的粘附能力,降低肿瘤细胞脱落进入周围组织和血管的几率;同时,益肺清化膏尚可以降低CD44、CD44v6的表达水平,可能通过减弱肿瘤细胞与血管内皮和ECM间的异质粘附,降低肿瘤向基质侵袭,影响肿瘤细胞的迁移和运动能力,或可能通过影响癌细胞的骨架构象和分布,从而影响癌细胞的运动能力来发挥抗肿瘤的目标的。