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1.
为研究雷公藤多苷(Tripterygium wilfordii polycoride,TWP)对LPS诱导巨噬细胞炎症反应时,对炎症因子TNF-α,IL-1β的抑制作用,对TLR4/NF-κB调控炎症作用的干预研究,同时观察其对TLR4/NF-κB调控炎症作用的影响。采用噻唑蓝(MTT)法检测受试药物TWP、地塞米松(DXM)及硫唑嘌呤(AZA)对细胞生长的影响,选择合适的药物浓度。通过LPS诱导小鼠RAW264.7细胞株产生炎症反应,ELISA法检测TNF-α及IL-1β的释放,Westen blotting法检测TLR4及NF-κB p65蛋白表达水平,荧光定量PCR(RT-PCR)测定TLR4及NF-κB的表达。实验结果显示TWP剂量依赖性抑制巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α,IL-1β的释放,TWP各剂量组作用均逊于DXM,但TWP高剂量组与AZA组作用比较,对TNF-α作用其优于AZA组;对IL-1β作用其相当于AZA组。对TLR4/NF-κB调控炎症作用的影响,TWP剂量依赖性下调TLR4及NF-κB p65的表达,其作用相当于或优于DXM及AZA。最终得出结论:该项研究显示TWP具有抑制TNF-α及IL-1β的作用,下调TLR4,NF-κB p65受体的表达是其作用的机制之一。 相似文献
2.
目的 探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路,阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法 选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞(BV2),将BV2分为8组,分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组;利用细菌脂多糖(LPS)建立BV2细胞炎症模型,通过细胞增殖活性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性;明场下观察细胞形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达;细胞免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况;通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-κB阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。结果 与正常组比较,LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态,培养液及细胞内的IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达显著升高(P<0.01),NF-κB p65的入核现象明显;与模型组比较,黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后,BV2细胞形态大部分恢复,IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB p65大多存在于细胞质中;黄芩组、黄连组与模型组比较,细胞形态略有恢复,促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量有所降低;与黄芩-黄连组比较,黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组;与模型组比较,应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组,能够明显降低TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并明显抑制NF-κB p65转入细胞核内。结论 黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连;该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活密切相关;通过验证说明TLR4、MyD88、NF-κB为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。 相似文献
3.
目的 研究补肾化痰方对双侧卵巢切除术(OVX)诱导的骨质疏松大鼠脂多糖(LPS)及Toll样受体4(TLR4)/髓样细胞分化蛋白88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将60只SPF级6月龄的雌性大鼠随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组,补肾化痰方低、中、高剂量组,使用双侧OVX造模,造模后1周,每组中挑选8只,戊酸雌二醇组按0.184 mg·kg-1,补肾化痰方低、中、高剂量组分别按4.7,9.4,18.8 g·kg-1灌胃,假手术与模型组给予0.9%生理盐水4 mL灌胃,干预12周后处死取材。运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清LPS含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中TLR4,MyD88,磷酸化(p)-NF-κB p65的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平及通路相关炎症因子白细胞介素(IL)-1β,IL-6 mRNA的表达。结果 与假手术组比较,模型组的血清LPS水平,骨组织中TLR4,MyD88,p-NF-κB p65蛋白表达水平,TLR4,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,IL-6 mRNA水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,戊酸雌二醇组和补肾化痰方高剂量组血清LPS水平,骨组织中TLR4,MyD88,p-NF-κB p65的蛋白表达,TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平,以及下游炎症因子IL-1β,IL-6 mRNA水平有不同程度降低(P<0.05)。结论 补肾化痰方可以降低血清LPS含量,调控TLR4/MyD88/NF-κB通路中TLR4,MyD88,NF-κB p65,p-NF-κB p65的mRNA水平及蛋白表达,降低骨组织中IL-1β,IL-6 mRNA水平,改善骨微结构,抑制绝经后骨质疏松症的病情发展。 相似文献
4.
目的 观察三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响。方法 SD雄性大鼠连续14周给予酒精建立酒精性肝病模型,随机分为模型对照组,三七高、低剂量组和硫普罗宁组,在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周。同时设立正常对照组,连续14周灌胃给水。免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK、c-Jun蛋白的表达。结果 模型对照组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun均较正常对照组明显升高(P<0.01);三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun表达较模型对照组明显降低(P<0.01,P<0.05)。结论 三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-JNK/c-Jun的过度表达,这可能是其有效防治酒精性肝病发生发展的重要机制之一。 相似文献
5.
目的 观察通络蠲痹颗粒对膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞凋亡及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,研究其防治KOA的作用机制。方法 30只新西兰兔按随机数字表法分为假手术组、模型组、通络蠲痹颗粒低、高剂量组(4.1、8.2 g·kg-1·d-1)、塞来昔布组(10.9 mg·kg-1·d-1),每组6只。采用内侧半月板失稳法(DMM)建立兔KOA模型,造模6周后给药,干预8周,每日1次。用苏木素-伊红(HE)染色和番红O-固绿染色观察关节软骨病理改变;原位末端标记法(TUNEL)荧光染色检测关节软骨细胞凋亡;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组关节软骨退变严重,Mankin评分升高(P<0.01),关节液IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.01),软骨细胞凋亡数量增加(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),而Bcl-2的mRNA及蛋白表达下调(P<0.01);与模型组比较,通络蠲痹颗粒低、高剂量组软骨退变得到改善,Mankin评分降低(P<0.01),IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.01),软骨细胞凋亡数量减少(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),且在上述观察指标中通络蠲痹颗粒高剂量组均明显优于低剂量组。结论 通络蠲痹颗粒可抑制KOA兔关节软骨细胞凋亡,改善软骨退变,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。 相似文献
6.
目的 探究蹄叶橐吾提取物(ethanolic extract of ligularia fischeri,EEOLF)的抗炎作用机制,为蹄叶橐吾(Ligularia fischeri, LF)的临床应用提供理论依据。方法 采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用于RAW264.7细胞建立体外细胞炎症模型。实验分6组,即空白对照组、EEOLF组、LPS组、LPS + 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)组、LPS + EEOLF组、LPS + EEOLF + PDTC组。Western blot法检测药物作用于RAW264.7细胞后,细胞核内因子κB p65(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达水平和磷酸化水平。ELISA法测定药物作用于RAW264.7细胞后IL-1β及TNF-α的释放量。结果 与空白组对照比较,LPS能显著增加细胞核内NF-κB p65蛋白表达及其磷酸化水平(P < 0.001);与LPS组比较,EEOLF能显著下调LPS诱导增加的NF-κB p65蛋白表达及其磷酸化水平(P < 0.001)。与空白组比较,LPS能显著增加炎症因子L-1β及TNF-α的分泌(P < 0.001);与LPS组比较,蹄叶橐吾提取物(ethanolic extract of ligularia fischeri,EEOLF)能显著降低LPS诱导增加的L-1β及TNF-α的分泌(P < 0.001)。在NF-κB抑制剂PDTC作用下,LPS诱导的细胞炎症反应减弱,并且在PDTC存在下,EEOLF能更加明显降低LPS所诱导的细胞炎症反应。结论 EEOLF通过作用于NF-κB通路抑制炎性因子的分泌,从而达到抗炎作用。 相似文献
7.
目的: 研究黄芪甲苷(ASI)对γ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞激活的抑制作用及机制。 方法: 不同浓度的ASI(25,50,100 μmol·L-1)预处理BV-2小胶质细胞2 h后,以IFN-γ刺激1.5 h或24 h,分别收集细胞培养基上清和细胞。分别以Griess和ELISA法检测培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;qPCR法检测细胞中CD11b,TNF-α,白介素1β(IL-1β)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平;Western blot法检测细胞STAT1/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达。 结果: ASI能显著抑制 IFN-γ诱导BV-2细胞NO和 TNF-α水平的升高(P<0.001);进一步研究表明,50 μmol·L-1ASI能够显著抑制细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达(P<0.01,P<0.05),并表现出下调iNOS mRNA表达的趋势,但对BV-2细胞CD11b的mRNA水平无显著影响;同时,ASI显著抑制IFN-γ诱导上调的 pSTAT1,pIκB和pNF-κB的蛋白表达。 结论: ASI能够抑制IFN-γ诱导的小胶质细胞的激活,其机制与其抑制STAT1/IκB/NF-κB信号通路的激活,降低炎症状态下小胶质细胞IL-1β,TNF-α以及iNOS的基因表达,从而减少NO和TNF-α的生成有关。 相似文献
8.
目的 研究哈巴俄苷对神经炎症诱导神经元损伤的作用。方法 采用MTT检测血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)和哈巴俄苷对小鼠小胶质BV2细胞活性的影响;观察BV2细胞的形态变化;检测细胞上清液中炎症因子水平;采用免疫荧光检测核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)核易位以及CD86、髓系细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)的表达;采用Western blotting检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(molecule myeloid differentiation factor 88,MyD88)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达。分别使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和TLR4抑制剂(TAK-242)进一步验证哈巴俄苷的作用机制。建立BV2-HT22细胞共培养模型,检测线粒体膜电位、细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达,研究哈巴俄苷对神经炎症引起的神经元损伤的影响。结果 Ang II显著上调BV2细胞TLR4、MyD88、IL-1β、TNF-α和iNOS蛋白表达(P<0.01、0.001),促进NF-κB p65入核(P<0.001),调节小胶质细胞表面炎症标志物CD86和TREM2的表达(P<0.05)。哈巴俄苷和TAK-242可逆转Ang II或LPS诱导的BV2细胞的作用(P<0.05、0.01、0.001)。此外,哈巴俄苷可显著下调BV2-HT22共培养模型HT22细胞中凋亡相关蛋白的表达(P<0.01、0.001),抑制HT22细胞凋亡(P<0.05、0.001)。结论 哈巴俄苷可能通过抑制Ang II诱导的BV2细胞TLR4/MyD88/ NF-κB通路的激活来减轻炎症反应,进而缓解炎症引起的神经元细胞的凋亡。 相似文献
9.
目的 观察蔓性千斤拔素D对大鼠胶原诱导型关节炎(CIA)的作用并探讨其作用机制。方法 将40只大鼠随机分为正常组、CIA组、甲氨蝶呤(MTX)组(1.35 mg·kg-1)、蔓性千斤拔素D低剂量组(1.5 mg·kg-1)及蔓性千斤拔素D高剂量组(3.0 mg·kg-1),每组8只,除正常组外,其余均采用Ⅱ型胶原诱导CIA模型。给药组通过灌胃给予相应药液,正常组给予相应体积生理盐水,MTX组每周1次,蔓性千斤拔素D各组每天1次,共给药28 d。实验中记录各组大鼠关节炎评分和关节肿胀度,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节病理学变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB) p65 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR2、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达量。结果 与正常组比较,CIA组大鼠踝关节明显肿胀,关节炎临床评分及关节肿胀度显著升高(P<0.01),踝关节组织结构明显破坏,血清炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显著升高(P<0.01),TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与CIA组比较,各给药组大鼠关节炎临床评分及关节肿胀度均明显降低(P<0.05,P<0.01),踝关节组织结构病理变化明显改善,血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),踝关节TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论 蔓性千斤拔素D在一定程度上可降低类风湿关节炎大鼠炎性因子的表达,能起到良好的治疗作用,其作用机制可能是通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的活化而发挥抗炎作用。 相似文献
10.
目的 探讨桦木酸对大鼠肺纤维化模型肺组织中NF-κB、β-arrestin2表达的影响。方法 15只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、模型组、桦木酸组,每组5只。对照组予以单次气管内注射1 mL·kg-1 0.9%生理盐水,模型组和桦木酸组予单次气管内快速注射5 mg·kg-1博来霉素建立大鼠肺纤维化模型。造模1天后,对照组及模型组给予10 mL·kg-1 1%可溶性淀粉溶液,桦木酸组给予50 mg·kg-1的桦木酸悬浮液,持续21天。HE、Masson染色方法观察肺组织病理改变。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织匀浆IL-6的水平。免疫组化法检测肺组织中NF-κB、β-arrestin2、IκBα的表达。结果 与对照组相比,模型组肺组织匀浆中IL-6水平升高,NF-κB、β-arrestin2、IκBα蛋白表达均上调(P<0.05)。与模型组相比,桦木酸组肺组织匀浆中IL-6水平降低,肺组织中NF-κB、β-arrestin2、IκBα蛋白表达均下调(P<0.05)。结论 桦木酸可减轻肺部炎症、减慢肺纤维化的发生发展,可能与下调肺组织中NF-κB、β-arrestin2有关。 相似文献
11.
目的 基于Toll样受体9/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR9/MyD88/NF-κB)信号通路研究白芍总苷(TGP)对MRL/lpr狼疮模型小鼠肾脏损伤的干预作用,探讨TGP防治系统性红斑狼疮(SLE)的部分免疫学机制。方法 将SPF级MRL/lpr雌性小鼠随机分为4组,模型组、地塞米松组(0.15 g·kg-1)、TGP高、低剂量组(0.078、0.039 g·kg-1),雌性C57BL/6J小鼠设为空白组,每组7只;各组小鼠每天同一时间段给予相应药物或生理盐水灌胃。4周后采集标本,称取肾脏、脾脏质量,计算脏器指数;生化分析法检测各组血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾脏组织病理学变化;马松(Masson)染色评估小鼠肾脏组织纤维化程度;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-2、干扰素-α(IFN-α)、IL-4和抗核抗体(ANA)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65的mRNA表达;免疫荧光法检测肾组织中TLR9、NF-κB p65蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾、脾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠SCr、BUN及脾脏指数和肾脏指数明显升高(P<0.05),肾组织病理损伤和纤维化程度明显增强;血清IFN-α、IL-4及ANA水平显著升高,IL-2水平明显降低(P<0.05);肾脏和脾脏中TLR9、MyD88及NF-κB p65的mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,TGP高、低剂量组小鼠SCr、BUN及脾脏指数和肾脏指数明显降低(P<0.05),肾组织病理损伤和纤维化程度明显减轻;血清IFN-α、IL-4及ANA水平明显下降(P<0.05),IL-2水平明显升高;肾脏和脾脏组织中TLR9、MyD88和NF-κB p65等分子mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 TGP可能通过调控TLR9/MyD88/NF-κB信号通路,进而抑制其下游相关炎症因子表达,发挥免疫调节及抗SLE肾脏损伤作用。 相似文献
12.
目的 研究4周的跑台运动结合生慧汤对睡眠剥夺大鼠SIRT1/NF-κB信号通路及相关炎症因子的调节作用,探讨其改善睡眠剥夺大鼠学习记忆可能的作用机制。方法 将48只睡眠剥夺模型大鼠随机均分为空白对照组(CON组)、有氧运动组(EX组)、完全睡眠剥夺组(TSD组)、完全睡眠剥夺 + 有氧运动组(TSD + EX组)、完全睡眠剥夺 + 生慧汤 + 有氧运动组(TSD + SHT + EX组)、完全睡眠剥夺+生慧汤组(TSD + SHT组)。EX组、TSD + EX组进行4周的跑台运动、TSD + SHT + EX组同时给与4周的跑台运动及生慧汤之后,采用多平台水环境法建立大鼠完全睡眠剥夺模型,TSD组、TSD + EX组、TSD + SHT组、TSD + SHT + EX组进行72 h的睡眠剥夺。睡眠剥夺结束后采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆,采用Western blot(免疫印迹试验)检测大鼠海马中SIRT1、IκBα(NF-κB的抑制蛋白)、AC-NF-κB p65(乙酰化NF-κB p65)蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR技术和ELISA(酶联免疫吸附剂测定)分别检测海马和血清中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白细胞介素-6)、IL-1β(白细胞介素-1β)mRNA表达水平,采用HE染色(苏木精-伊红染色法)观察大鼠海马的神经元形态。结果 与CON组比较,TSD组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程显著增加,初次抵达平台时间显著延长,目标象限停留时间显著减少;SIRT1、IκBα表达显著降低、AC-NF-κB p65表达显著升高;海马及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平显著升高。与TSD组比较,TSD + EX组、TSD + SHT组、TSD + SHT + EX组大鼠平台潜伏期和游泳总路程显著减少,初次抵达平台时间缩短,目标象限停留时间增加;SIRT1、IκBα表达升高、AC-NF-κB p65表达降低;海马及血清中TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平显著降低;TSD + SHT + EX组、TSD + EX组、TSD + SHT组海马神经元细胞排列较规则,数量增加,细胞核饱满。结论 4周的有氧运动结合生慧汤可抑制神经元损伤,改善睡眠剥夺引起的大鼠学习记忆能力,其机制可能与SIRT1/NF-κB信号通路中的关键蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子表达有关。 相似文献
13.
目的 研究中药地黄饮子抑制脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应的作用机制。方法 使用1 mg·L-1的LPS诱导小鼠小胶质细胞系(BV2)构建细胞炎症模型,实验分组为空白组、模型组、地黄饮子组(14.5 g·kg-1)、米诺环素组(150 mg·kg-1)。地黄饮子组和米诺环素组予以10%的含药血清干预,空白组和模型组给予同等浓度的空白血清。明场下观察细胞形态的变化,实时荧光定量PCR检测促炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平,Western blot检测PPARγ蛋白表达和NF-κB p65活化水平,细胞免疫荧光检测NF-κB p65入核情况。结果 与空白组比较,模型组促炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平均显著升高(P < 0.01);PPARγ蛋白水平明显降低,NF-κB磷酸化水平明显增高,差异均有统计学意义(P <0.01),LPS刺激使BV2细胞核内NF-κB含量明细增多;给予地黄饮子或米诺环素含药血清干预后,与模型组比较,炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的 mRNA 水平均显著降低(P < 0.05),PPARγ蛋白水平明显升高(P < 0.05),NF-κB磷酸化水平和入核含量明显减少(P < 0.05)。结论 地黄饮子可能通过调控PPARγ/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应。 相似文献
14.
目的 探究龙胆苦苷(GPS)对四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤小鼠模型是否有保肝疗效及其对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将60只小鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、水飞蓟素(150 mg·kg-1)组及GPS高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg-1)。给药组的小鼠按10 mL·kg-1灌胃处理,正常组和模型组灌胃相同量的蒸馏水,每天1次,连续灌胃给药10 d后,除正常组腹腔注射花生油(10 mL·kg-1),其余各组腹腔注射0.12% CCl4花生油(10 mL·kg-1)溶液建立小鼠急性肝损伤模型。腹腔注射后禁食16 h,摘除小鼠眼球取血,收集肝脏组织。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学改变。生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),碱性磷酸酶(ALP),总超氧化物歧化酶(T-SOD),γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的水平,肝组织中丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肝脏组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)含量。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝脏组织中TLR4,MyD88,NF-κB蛋白表达情况;免疫组化检测磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平显著升高(P<0.01),T-SOD,GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平降低(P<0.05,P<0.01),T-SOD、GSH-Px活性明显上升(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量显著升高(P<0.01),TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达显著上升(P<0.01);与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量明显降低(P<0.05,P<0.01),TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论 GPS对CCl4引起的急性肝损伤小鼠具有一定的保肝效果,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及减弱氧化应激反应相关。 相似文献
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目的 观察黄芩-黄连对动脉粥样硬化(AS)小鼠斑块稳定性的影响,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨其可能的作用机制。方法 10只正常C57BL/6J小鼠作为正常组,同品系的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠高脂饲料喂养12周构建动脉粥样硬化模型,随机分为5组,即模型组、阿托伐他汀组、黄芩-黄连低、中、高剂量组,每组10只。正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,黄芩-黄连低、中、高剂量组分别给予1.95、3.9、7.8 g·kg-1药物灌胃8周。观察小鼠一般状态;苏木素-伊红(HE)染色观测主动脉根部斑块病理情况并计算斑块面积百分比;马松(Masson)染色、油红O染色联合F4/80、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检测主动脉根部斑块组分并计算斑块易损指数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果 与模型组比较,各用药组小鼠一般状态改善,未见明显不良反应;与模型组比较,黄芩-黄连中、高剂量组AS小鼠主动脉根部斑块面积百分比明显降低(P<0.05);黄芩-黄连高剂量组斑块中胶原纤维及平滑肌细胞含量显著增多(P<0.01),脂质及巨噬细胞含量明显减少(P<0.05),黄芩-黄连各剂量组斑块易损指数明显降低,其中黄芩-黄连中、高剂量组显著降低(P<0.01);黄芩-黄连中、高剂量组主动脉组织中MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05);黄芩-黄连中、高剂量组AS小鼠血清中TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);黄芩-黄连中、高剂量组主动脉组织中TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05),其NF-κB p65磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论 黄芩-黄连可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥抗炎稳斑的作用。 相似文献
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目的 探究中药复方开心散调控中枢神经炎症系统抗抑郁的作用机制。方法 制备开心散不同配伍比例提取物,采用小鼠慢性应激压力(CUMS)模型,通过糖水偏嗜实验、悬尾实验和强迫游泳实验评价开心散不同配伍比例的抗抑郁功效。采用ELISA法测定受试动物海马组织促炎物质如脂多糖(LPS)、IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。采用免疫组织化学染色法观察受试动物海马区小胶质细胞形态。进而采用LPS促进小鼠小胶质永生化细胞(BV2)炎性因子表达细胞模型,采用ELISA法评价开心散抑制炎症因子表达的作用,采用Western blotting法考察NF-κB信号通路的调控情况。结果 开心散不同配伍比例能显著上调模型小鼠糖水偏嗜率,缩短小鼠悬尾和强迫游泳不动时间,以D-652效用最强。该配伍比例通过抑制NF-κB的入核和抑制NF-κB磷酸化等环节,下调BV2细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平。结论 对中枢神经炎症的调控是中药复方开心散抗抑郁的重要作用环节。 相似文献
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目的:探讨刺芒柄花素通过调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响。方法:以LPS诱导大鼠子宫内膜上皮细胞损伤,采用CCK8法检测细胞活性;采用RT-qPCR法检测TLR4过表达效率;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;Western Blot法检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增加,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,刺芒柄花素12μmol/L组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显降低,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);TLR4过表达... 相似文献
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目的 观察五味消毒饮对免疫球蛋白(Ig)A肾病(IgAN)大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,并探讨其治疗IgA肾病的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组,模型组,贝那普利组(10 mg·kg·d-1),五味消毒饮组(2.75 g·kg·d-1),每组10只。采用牛血清白蛋白(BSA)灌胃,四氯化碳(CCl4)皮下注射以及脂多糖(LPS)尾静脉注射方法共9周建立IgAN大鼠模型,各组给予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药28 d。检测大鼠24 h尿蛋白(UTP),血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),血清白蛋白(ALB)水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)的含量,苏木素-伊红(HE)染色,免疫荧光及透射电镜观察肾脏病理改变,免疫组化法(IHC),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肾组织中IL-6,IκB激酶β(IKKβ),磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα),NF-κB p65,磷酸化NF-κB p65(p-p65)的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,系膜增厚,电子致密物沉积增多,大量IgA沉积于肾小球系膜区并呈现不规则颗粒及团块状分布;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著升高(P<0.01);肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ、IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平显著降低(P<0.01),肾组织损伤情况均有所减轻;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著降低(P<0.01);肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著降低(P<0.01)。各组间SCr,BUN,血清白蛋白相比无明显差异。结论 五味消毒饮可降低IgAN大鼠的蛋白尿,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路及其相关炎症因子的过度表达有关。 相似文献
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目的 研究雷公藤红素(Celastrol,Cela)对肝细胞癌的作用和NF-κB信号通路中相关蛋白的影响。方法 将32只6.0-7.0周龄野生型FVB/N小鼠随机分为正常组,模型组,Cela低、高剂量给药组,模型组和Cela低、高剂量给药组采用高压尾静脉转染技术转染AKT/c-Met,正常组转染等量的0.9%氯化钠溶液作为对照。造模4周后,Cela低、高剂量给药组分别腹腔注射雷公藤红素(1 mg/kg/d,2 mg/kg/d),模型组和正常对照组给予等量的空白溶剂(聚氧乙烯蓖麻油)。给药3周后,处死小鼠,分离肝脏组织,进行组织切片HE病理学观察,Western blot法检测小鼠肝脏组织中NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白的表达。根据MTT法筛选HepG2和SMMC-7721细胞给药浓度,考察不同给药浓度和不同给药时间的Cela对HepG2和瞬时转染AKT/c-Met的SMMC-7721细胞中NF-κB、TNF-α蛋白的表达的影响。结果 Cela能改善AKT/c-Met诱导的肝细胞癌小鼠肿瘤负荷,减轻炎性细胞浸润;能降低AKT/c-Met诱导的肝细胞癌小鼠肝脏组织中NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白的表达(P < 0.05或P < 0.01);能降低HepG2和转染AKT/c-Met的SMMC-7721细胞中NF-κB、TNF-α蛋白的表达,并与给药浓度和时间都呈依赖性。结论 Cela可以延缓肝细胞癌发生,其作用机制可能与调控NF-κB信号通路,抑制炎症因子表达有关。 相似文献
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目的 探讨左归降糖通脉方(ZJTP)对高糖合并脂多糖(LPS)损伤后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响及作用机制。方法 通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平确定LPS最适损伤浓度及作用时间、ZJTP含药血清的最佳作用浓度。将HUVECs分为空白组、模型组、ZJTP含药血清组、短链脂肪酸(SCFAs)混合液组。采用ELISA检测内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和TNF-α的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测G蛋白偶联受体43(GPR43)、β-抑制蛋白-2(β-arrestin-2)、核转录因子-κB抑制因子α(IκBα)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达;免疫荧光法(IF)观察NF-κB p65入核情况。运用小干扰核糖核酸(siRNA)的方法观察GPR43在炎性损伤调控中的作用。将干扰后的细胞分为空载体组、ZJTP含药血清组、Si-GPR43组、Si-GPR43+ZJTP含药血清组。ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α含量;Western blot检测通路蛋白表达;IF观察NF-κB p65入核情况。结果 最适造模条件为1 mg·L-1 LPS作用24 h;最佳药物干预条件为5%的ZJTP含药血清作用24 h。与空白组比较,模型组ET-1含量显著升高,NO含量显著下降(P<0.01);炎症因子水平显著上升(P<0.01);GPR43和IκBα蛋白表达量下降,β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著升高(P<0.01);NF-κB p65蛋白由核外转移至核内(P<0.01)。与模型组比较,ZJTP含药血清组ET-1含量下降,NO含量升高(P<0.05);炎症因子水平下降(P<0.05);GPR43和IκBα蛋白表达升高,β-arrestin-2和NF-κB p65表达下降(P<0.05);NF-κB p65由核外转移至核内的数量减少(P<0.01)。机制研究发现,与Si-GPR43组比较,ZJTP含药血清干预后IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著下降(P<0.01);GPR43和IκBα蛋白表达量显著上升(P<0.01),β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著下降(P<0.01);NF-κB p65由核外转移至核内数量减少(P<0.01)。结论 ZJTP对高糖合并LPS诱导炎性损伤的HUVECs具有保护作用,其机制可能与调控GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路有关。 相似文献