逆基因NANOGP8表达与人胃癌SGC-7901细胞的生物学特性相关

目的探讨p EGFP-N1-NANOGP8真核表达载体及pshRNA-NANOGP8干扰质粒转染人胃癌SGC-7901细胞后,对细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法构建p EGFP-NI-NANOGP8真核表达载体及针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8,进行酶切、测序鉴定。将测序正确的质粒在脂质体的介导下转染入SGC-7901细胞,通过荧光显微镜、反转录PCR和Western blot法检测其表达情况,CCK-8法检测SGC-7901细胞增殖情况,流式细胞术分析胃癌细胞周期变化和凋亡情况,TranswellTM实验验证迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建出p EGEP-N1-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8重组质粒。将重组质粒转染胃癌细胞后,能观察到GFP的表达;反转录PCR结果显示p EGEP-N1-NANOGP8转染组高表达NANOGP8 mRNA,而pshRNA-NANOGP8转染组NANOGP8 mRNA低表达。NANOGP8高表达组能促进肿瘤细胞增殖,促使细胞进入S期,迁移侵袭能力明显增强。而低表达组细胞增殖受抑制,细胞周期停留在G0/G1期,迁移、侵袭能力受抑制。结论逆基因NANOGP8的转录表达,与胃癌的增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭有密切的关系。     

shRNA抑制Nanog基因的表达对胃癌细胞SGC-7901分子生物学行为的影响

目的:利用RNA干扰技术构建并筛选出对Nanog基因有抑制作用的重组质粒pshRNA-Nanog,转染入胃癌细胞SGC-7901中,检测其对Nanog表达的影响及其对胃癌细胞SGC-7901的增殖、周期、凋亡以及迁移的影响。方法:构建出针对人Nanog基因构建出的干扰质粒pshRNA-Nanog,在脂质体的介导下将其转染胃癌细胞SGC-7901,通过荧光显微镜,RT-PCR和Western blot法检测其表达,筛选出抑制率最高的一组;将筛选出的转染效率最高的一组pshRNA-Nanog重组质粒转染胃癌细胞SGC-7901中,通过CCK-8检测其胃癌细胞SGC-7901增殖情况,流式细胞仪分析SGC-7901周期变化和凋亡情况,Transwell迁移实验验证Nanog对SGC-7901的迁移能力以及侵袭实验验证Nanog对SGC-7901侵袭能力的影响。结果:成功构建并筛选出了对胃癌细胞SGC-7901干扰效果最明显的一组重组质粒;细胞的增殖受到抑制,胃癌细胞侵袭能力及迁移能力减弱,细胞周期停滞在S期,细胞的凋亡明显增加。结论:Nanog基因与胃癌细胞的增殖能力、周期及凋亡、迁移和侵袭能力有密切的关系。     

曲古抑菌素A通过上调原钙黏蛋白9表达抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭

目的 探讨曲古抑菌素A（TSA）对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,及其可能的分子机制。 方法 体外常规培养SGC-7901细胞至对数生长期,给予不同浓度TSA（5、10、20、40、80、160 nmol/L）处理48 h,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力,脂质体介导法将人原钙黏蛋白9（PCDH9）真核表达质粒转染SGC-7901细胞并筛选出稳定表达的细胞系,Transwell实验检测迁移率和侵袭率,RT-PCR法检测PCDH9 mRNA表达水平,免疫印迹法(Western blotting)检测PCDH9、Snail、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9的蛋白表达水平。 结果 TSA在80 nmol/L以上时对人胃癌SGC-7901细胞活力有显著的抑制作用（P<0.05）;而在较低浓度下（5～20 nmol/L）可剂量依赖性地抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）,下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平（P<0.05）,上调E-cadherin和PCDH9蛋白表达水平（P<0.05）,上调PCDH9 mRNA表达水平（P<0.05）;PCDH9高表达也可抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白表达并下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达（P<0.05）。 结论 TSA可在体外抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭,这可能与其促进PCDH9基因表达,继而下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。     

SIRT2沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究沉默信息调节蛋白2(SIRT2)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测SIRT2在胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES-1细胞中的表达。采用RNA干扰技术处理SGC-7901细胞,SIRT2沉默组转染靶向SIRT2的干扰小RNA(SIRT2-siRNA1组、SIRT2-siRNA2组),阴性对照组转染SIRT2-si RNA阴性对照序列,空白对照组不转染。CKK-8法和平板细胞克隆形成实验检测SGC-7901细胞增殖, Transwell法检测SGC-7901细胞侵袭迁移能力,蛋白印迹检测SGC-7901细胞中SIRT2、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)蛋白表达。结果人胃癌细胞SNU-1、KATO III、SGC-7901中SIRT2m RNA和蛋白水平均高于正常胃上皮GES-1细胞(P0.05)。转染SIRT2-si RNA的SGC-7901细胞中SIRT2m RNA和蛋白水平均低于阴性及空白对照组(P0.05);转染SIRT2-si RNA后,SGC-7901细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力均降低(P0.05);转染SIRT2-siRNA后SGC-7901细胞中Akt、PI3K蛋白磷酸化程度显著下降(P 0.05)。结论 SIRT2在胃癌细胞中表达上调,沉默SIRT2可能通过调节PI3K/Akt通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,推测SIRT2可能作为潜在靶标应用于胃癌的基因治疗。     

HOXB7基因沉默对人胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响

目的:探讨靶向沉默HOXB7基因对人胃癌SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭作用的影响及潜在机制。方法:设计靶向HOXB7的siRNA,然后瞬时转染胃癌SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测siRNA靶向沉默的效果。MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,实时荧光定量PCR和Western blot法检测胃癌SGC-7901细胞PTEN和VEGF的表达水平以及p-AKT的蛋白水平。结果:胃癌组织中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表达均显著高于对照组织。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901细胞中HOXB7的表达,且沉默HOXB7表达后SGC-7901细胞活力明显下降,同时细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1的表达亦下调。靶向沉默HOXB7可明显抑制SGC-7901细胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌细胞的侵袭转移,同时下调VEGF的表达水平,抑制胃癌组织中的肿瘤血管生成。结论:HOXB7作为一个癌基因,可上调细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1和侵袭相关分子VEGF的表达,上调AKT的磷酸化水平,进而抑制PTEN的功能,促进胃癌细胞SGC-7901的生长、迁移和侵袭能力。     

慢病毒介导的GOLPH3基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响*

 目的：通过体外实验探讨沉默高尔基体磷蛋白3（Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3）基因对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法：将携带GOLPH3 shRNA的慢病毒载体转染SGC-7901细胞,建立稳定沉默GOLPH3的细胞株LV-GOLPH3-RNAi,分别用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测GOLPH3 mRNA 和蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖力,Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移力和侵袭力。结果：稳定沉默GOLPH3的细胞株构建成功;GOLPH3 mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-GOLPH3-RNAi组细胞的增殖力受到抑制（P<0.05）,迁移力(56.7±1.5 vs 186.0±3.4、183.3±4.2,P<0.05） 和侵袭力 （33.5±3.0 vs 85.0±3.9、83.1±4.4,P<0.05） 也明显受到抑制。结论：沉默GOLPH3基因的表达可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖力、迁移力和侵袭力,提示GOLPH3有可能成为潜在的肿瘤标志物和独立的预后因子。     

MicroRNA-10b对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨Micro RNA-10b(miR-10b)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法应用Real-time PCR方法检测21例胃癌组织和癌旁正常组织中miR-10b的表达水平,应用Lipofectamine?LTX试剂将化学合成的miR-10b mimics和miR-10b inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞,采用MTT方法检测SGC-7901细胞增殖能力的变化,Transwell小室法检测SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的变化;应用Western Blot方法检测P21蛋白表达水平。结果与正常组织相比,miR-10b在胃癌组织中的表达水平显著增高。与对照组相比,miR-10b表达沉默能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力,显著增加P21的蛋白表达水平。miR-10b过表达的作用与之相反。结论 MiR-10b沉默抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭可能与上调P21蛋白表达相关。     

重组CRT/MAGE-A3腺病毒转染SGC-7901细胞及对其抑制作用的研究

目的 探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人胃癌细胞SGC-7901的表达及对其体外侵袭、凋亡及血管形成能力的影响.方法 Ad-CRT/MAGE-A3转染SGC-7901,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达,Transwell方法检测Ad-CR...     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2增殖

目的检测miR-129对鼻咽癌细胞系CNE2细胞生物学功能的影响。方法人工合成miR-129模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),转染至鼻咽癌CNE2细胞中,RT-qPCR检测细胞miR-129表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果与对照组相比,转染miR-129 mimics组的miR-129表达水平明显升高(P0.05);转染miR-129 inhibitor组的miR-129表达水平均明显降低(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 mimics组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著下降(P0.05),凋亡显著增多(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 inhibitor组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著升高(P0.05),凋亡显著下降(P0.05)。结论 miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.