急性白血病患者WIF-1基因启动子甲基化及β连环蛋白表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者Wnt抑制因子1(WIF-1)基因启动子甲基化及β连环蛋白(β-catenin)的表达在白血病中的意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测山东大学附属千佛山医院2009年1月至2010年6月55例AL患者及对照组骨髓单个核细胞WIF-1基因启动子甲基化情况,流式细胞术检测AL患者及对照组骨髓单个核细胞β-catenin表达.结果 32.7％(18/55)的AL患者WIF-1基因启动子区域有异常甲基化,对照组末检测到WIF-1基因甲基化,两组差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组首次诱导治疗完全缓解率(38.9％,7/18)低于非甲基化组(81.1％,30/37),差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组与非甲基化组β-catenin的表达(17.5％±3.3％、15.4％±3.6％)均高于对照组(10.5％±1.5％,均P＜0.05);甲基化组β-catenin的表达高于非甲基化组(P＜0.05).结论 WIF-1基因启动子甲基化及β-catenin过表达可能参与了AL患者Wnt/β-catenin途径的异常激活.     

慢性白血病Id4甲基化研究

目的探讨Id4基因在慢性白血病患者中的甲基化情况。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）,对初发9例慢淋白血病（CLL）和18例慢粒白血病（CML）患者的骨髓进行Id4基因甲基化检测,以正常骨髓作为对照。结果Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态,在9例CLL患者中全部检测到Id4基因甲基化,而在18例CML患者中,检测到12例Id4基因甲基化。结论慢性白血病患者骨髓Id4基因发生了不同程度的甲基化改变,CLL和CML患者的甲基化发生比例不同。     

Hypermethylation of the p15INK4Bgene in acute leukemia and myelodysplastic syndromes

目的：探讨p15^INK4B基因甲基化在急性白血病（AL）的发病及骨髓增生异常综合征（MDS）向白血病转化中的模式及意义。方法：甲基化特异性聚合酶链反应法（MSP）检测49例AL和22例MDS患p15^INK4B基因CpG高甲基化模式。结果：90％（26/29）初发AL中检出p15^INK4B基因的高甲基化,其中46％为完全甲基化,54％为部分甲基化;3例MDS转化的AL和9例复发AL全部检出p15INK4B基因甲基化,且完全甲基化的比例分别占67％和56％;11例缓解期AL患中仅5例（2例完全缓解,3例部分缓解）检出部分甲基化（45％）。初/复发组p15^INK4B基因甲基化发生率明显高于缓解组（P=0.002）。13例低危MDS(RA/RAS)患中5例（38％）检出p15^INK4B基因甲基化,且80％为部分甲基化;而高危组（RAEB/RAEB-T）9例全部检出p15^INK4B甲基化,且完全甲基化占56％,与低危MDS组有显性差异（P=0.002）。结论：p15^INK4B基因高甲基化频发于白血病和高危MDS,可能与白血病及MDS的发病和发展有关,并可能作为检测微小残留病、预测AL复发及MDS向白血病转化的分子标志。     

急性白血病患儿hTERT基因的表达

目的：探讨人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达与儿童急性白血病(AL)的关系和临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测K562白血病细胞株、40例急性白血病患儿和10例正常对照的hTERT基因表达。结果：K562白血病细胞株、30例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中23例、10例急性髓系细胞白血病(AML)患者中7例有hTERT基因表达。hTERT基因表达见于AL所有亚型,其相对表达水平与AL的完全缓解(CR)率有相关性,相对表达水平≥1．O的患儿CR率低及生存期短。结论：hTERT基因表达与儿童急性白血病发生有关,hTERT基因高表达的患者CR率低、无病生存期短,hTERT基因表达的检测可作为判断儿童急性白血病预后的一项指标。     

Dickkopf1(DKK-1)基因甲基化在急性白血病中的表达分析

目的探讨WNT/β-catenin通路的关键抑制因子Dickkopf1(DKK-1)基因异常甲基化与急性白血病(AL)发病机制的相关性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测4个AL细胞系(NB4、Jurkat、Molt-4、CEM)、65例AL患者及20例正常对照骨髓单个核细胞中DKK-1基因mRNA的表达情况;采用甲基化特异性PCR(M SP)方法检测各标本及细胞系中DKK-1基因启动子区域的甲基化状态。结果与正常对照组比较,AL患者DKK-1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05);正常对照组标本单个核细胞中不存在DKK-1基因的甲基化;DKK-1在AL患者中甲基化率为37.7%(24/65),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化率为41.2%(14/34),急性髄系白血病(AML)患者中甲基化率为28.6%(10/31)。结论 DKK-1甲基化及异常表达在急性白血病中是一种较为普遍的现象,其参与了部分急性白血病的发病过程。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的 探讨降钙素（CT）基因高度甲基化在恶性血液病中的临床意义。方法 采用限制性内切酶（HPaⅡ）消化DNA和聚合酶链反应技术检测73例恶性血液病、6例正常人以及24例非恶性血液病的CT基因的基化程度。结果 12/14例（85.7%)急性淋巴细胞白血病、9/15例（60%）急性非淋巴细胞白血病、8/10例（80%）慢性粒细胞白血病、5/15（33.3%)淋巴瘤、2例（2/5）骨髓增生异常综合征、1例（1/2）恶性组织细胞病、1例（1/3）慢性淋巴细胞白轿病和1例（1/9）多发性骨髓瘤的病人出现CT基因高度甲基化阳性,而6例正常人和24例非恶性血液病无一例阳性。结论 CT基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖的分子基因标志,从而为恶性血液病的诊断、微小残留病的监测及疾病的发展预测提供了一种有用手段。     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞的SFRP2基因启动子高甲基化

目的 研究慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)骨髓细胞SFRP2基因启动子甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子甲基化在CML发病机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测CML细胞系K562细胞...     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因启动子的甲基化

目的 研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和基因表达在初治急性白血病患者中的临床意义.方法 采用MSP方法和RT-PCR方法分别检测60例急性髓系白血病患者、55例急性淋巴细胞白血病患者和17例正常人DAPK基因的甲基化状态及其mRNA的表达,统计学分析各组之间的表达差异.结果 急性淋巴细胞白血病组的DAPK甲基化阳性率(29.1％)高于急性髓细胞白血病组(5％)和正常组(0％)(P＜0.0l25),但甲基化与急性淋巴细胞白血病组患者临床特征无关(P＞0.05).DAPK基因mRNA的表达水平以正常组最高,急性髓细胞白血病组次之,急性淋巴细胞白血病组最低(P=0.000).急性淋巴细胞白血病组患者DAPK mRNA表达与其启动子甲基化呈显著负相关(P＜0.05).结论 DAPK基因启动子在初治急性淋巴细胞白血病患者中甲基化率高于初治急性髓细胞白血病患者和正常人,但与患者临床特征无关.急性淋巴细胞白血病患者DAPK基因表达水平低或不表达可能与其甲基化有关.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓p15基因的表达缺失与启动子甲基化

目的检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓p15基因的表达水平及其启动子区甲基化情况,探讨p15基因异常甲基化在MDS发生、发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR（MS PCR）、逆转录PCR（RT PCR）检测32例MDS患者骨髓p15基因mRNA表达水平及启动子区甲基化状态。结果32例MDS患者骨髓有14例检测到p15基因启动子甲基化（阳性率为43.8%）,且多为高危患者。32例MDS患者中22例骨髓p15mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。MDS患者p15基因启动子甲基化与p15mRNA表达缺失具有明显相关性（P＜0.05）。结论MDS患者骨髓p15基因启动子异常甲基化与基因表达失活密切相关,p15基因启动子区异常甲基化可能与MDS的发生、发展有关。     

急性淋巴细胞白血病p16基因纯合性缺失、点突变及启动子甲基化变异

目的 探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者p16基因的失活机制。方法 从29例患者外周血提取白细胞基因组DNA,采用PCR、PCR—SSCP、MSP分析方法,对p16基因第二外显子的纯合性缺失、点突变及启动子区CpG岛的甲基化变异进行分析。结果 p16基因第二外显子的缺失率为27．6％(8／29),未见其点突变;p16基因启动子区CpG岛的甲基化率为13．8％(4／29)。结论 p16基因的失活和ALL的发生发展有一定的关系。     

A study on DNA methylation status in promoter region of p15 gene in patients of acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome

BackgroundAcute myeloid leukemia (AML) and myelodysplastic syndrome (MDS) are a spectrum of hematological malignancies with a multistep process of accumulated genetic and epigenetic alterations. DNA methylation is most extensively studied epigenetic alteration in malignancies. Recent research studies in the field have brought out translational implications of promoter methylation of tumor suppressor gene p15 in tumors. Therefore, we studied the role of DNA Methylation of p15 gene in AML and MDS.MethodsThe study was carried out in 41 consecutive AML/MDS cases reporting to hematological OPD of a tertiary care center along with 25 age and sex-matched healthy controls. The methylation status in the promoter region of the p15 gene was assessed by methylation-specific PCR (MSP) from blood samples after ethical approval and informed consent of the patients and controls. The association of methylation status was studied with clinical presentations, AML subtypes, and cytogenetics using Chi-square test/Fisher''s exact test tools.ResultsA total of 41 cases included in the study comprised 33 cases of AML and 08 cases of MDS with an age range between 06 months and 82 years. Of the 41 cases, 29 revealed promoter methylation of the p15 gene, which compared to healthy controls was found statistically significant (p < 0.001). The methylation status did not significantly correlate with AML subtypes or the cytogenetic abnormalities detected in cases.ConclusionThe outcome of the study indicates p15 promoter DNA methylation in cases of AML and MDS may identify those individuals who might benefit from the targeted therapeutic approaches.     

抑癌基因Mxi1在白血病细胞中表达的研究

目的分析抑癌基因Mxil在白血病发病中的作用。方法利用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测初治急性白血病(AL)患者26例骨髓单个核细胞,经治疗达完全缓解的AL(AL-CR)患者23例、健康对照者30名外周血单个核细胞和2种髓系白血病细胞株(KG1、K562)Mxil基因表达情况。结果所有标本中均可检测到Mxi1基因的表达,Mxi1 mRNA在初治AL患者的表达水平平均为0.531±0.205,在K562和KG1细胞株中的表达水平平均为0.613±0.223和0.628±0.239,均明显低于健康对照组的0.923±0.187,差异有统计学意义(P<0.05);而AL-CR患者的表达水平为0.812±0.243,明显高于初治AL患者(P<0.05),接近健康对照组(P>0.05)。结论白血病患者细胞中Mxi1基因表达水平下降,提示其可能与白血病的发病有关。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的　探讨降钙素 ( CT)基因高度甲基化在恶性血液病中的临床意义。方法　采用限制性内切酶 ( HPa )消化 DNA和聚合酶链反应技术检测 73例恶性血液病、6例正常人以及 2 4例非恶性血液病的 CT基因的甲基化程度。结果　 12 / 14例 ( 85 .7% )急性淋巴细胞白血病、9/ 15例 ( 6 0 % )急性非淋巴细胞白血病、8/ 10例( 80 % )慢性粒细胞白血病、5 / 15例 ( 33.3% )淋巴瘤、2例 ( 2 / 5 )骨髓增生异常综合征、1例 ( 1/ 2 )恶性组织细胞病、1例 ( 1/ 3)慢性淋巴细胞白血病和 1例 ( 1/ 9)多发性骨髓瘤的病人出现 CT基因高度甲基化阳性。而 6例正常人和 2 4例非恶性血液病无一例阳性。结论　 CT基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖的分子基因标志 ,从而为恶性血液病的诊断、微小残留病的监测及疾病的发展预测提供了一种有用手段     

骨髓增生异常综合征患者Id4基因甲基化研究

目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者中Id4基因甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）对56例不同类型MDS患者骨髓进行Id4基因启动子区甲基化状况检测,并以非恶性血液肿瘤骨髓作为对照。结果Id4基因在非恶性血液肿瘤骨髓中呈完全性非甲基化状态,在MDS各种类型中,骨髓中原始细胞比例分别低于和高于5%的两组患者中,Id4甲基化差异有显著性意义。结论骨髓原始细胞比例高的MDS患者骨髓Id4基因甲基化发生率高。     

启动子DNA甲基化抑制白血病患者WT1基因的表达

目的 研究白血病患者WT1启动子区域DNA甲基化与WT1表达水平之间的关系及临床意义.方法 利用RT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)检测64例白血病患者、56例对照者骨髓内WT1mRNA水平及DNA甲基化状态.结果 骨髓中WT1表达率与WT1启动子DNA甲基化程度呈负相关性,在急性白血病患者(初诊、复发及未缓解者)和慢粒进入加速期和急变期患者骨髓中WT1启动子DNA甲基化率低于健康者和非白血病患者.结论 WT1启动子区域DNA甲基化抑制WT1mRNA表达.激发WT1启动子区甲基化从而抑制WT1表达,与急性白血病发生转化有关,可以作为治疗和预防白血痛发生的一个研究方向和方法.     

LRP16基因的SAGE谱及其在正常血细胞、白血病细胞中的表达状况

目的：通过信息学和实验学的方法检测LRP16基因在肿瘤细胞以及在造血发育不同阶段的表达状况，探讨其在肿瘤发生、发展以及在血细胞成熟过程中可能的作用。方法：以NCBI提供的高通量CGAP／SAGEmap数据库为实验对象，“Virtual Northern”程序为实验工具，分析比较了LRP16基因在多种肿瘤组织、细胞系和相应正常组织中的表达谱；采用半定量RT－PCR方法检测了该基因在多种正常血细胞及白血病细胞中的表达量。结果：SAGE结果显示LRP16在人类多种肿瘤细胞中的表达量明显高于其正常对应组织。脐血中未检测到LRP16表达，正常骨髓及经G－CSF动员的PBSC（peripheral blood stem cells)中的表达量明显低于正常人外周血、原代白血病细胞及白血病细胞系（P＜0．001）。结论：LRP16在不同的血细胞中表达量不同。同时表明LRP16与急性白血病等多种肿瘤的发生、发展存在相关性；在初诊与复发白血病中，LRP16的表达差异值得进一步研究。     

急性白血病MRP1与LRP的表达及临床意义

目的:探讨急性白血病患者多药耐药相关蛋白(MRP1)与肺耐药相关蛋白(LRP)的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学S-P方法检测52例急性白血病患者及12例正常人的MRP1与LRP表达.结果:急性白血病MRP1阳性表达率为28.8%(15/52),LRP为42.3%(22/52).MRP1表达阳性患者的完全缓解(CR)率为33.3%,表达阴性患者CR率为59.5%,两者差异无显著性.LRP表达阳性患者CR率明显低于表达阴性患者,分别为31.8%和73.3%,有十分显著差异(P<0.01).Pearson相关分析MRP1与LRP表达无明显相关(r=0.254,P>0.05).MRP1/LRP过表达CR率明显低于MRP1/LRP 阴性者(分别为22.2%和75.0%,P<0.01).结论:LRP、MRP1/ LRP过表达与急性白血病患者的预后密切相关,是影响急性白血病患者CR率的重要危险因素.     

Methylation of p16 gene in hematological malignancies

Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｓｏｆｃａｎｃｅｒｉｎｖｏｌｖｅｓｏｎｃｏｇｅｎｅｓａｓｗｅｌａｓｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｏｒｇｅｎｅｓ．Ｓｏｆａｒｎｏｓｉｎｇｌｅｇｅｎｅｈａｓｂｅｅｎｓｈｏｗｎｔｏｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｌ...     

WWOX和p73基因在急性髓细胞白血病中的表达

目的研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制。方法收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况。结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化。对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象。WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义。     

Methylation of Gene CHFR Promoter in Acute Leukemia Cells

In order to explore whether gene CHFR was inactivated by methylation in leukemia cells, the expression of CHFR was examined before and after treatment with demethylation agent in Molt-4, Jurkat and U937 leukemia cell lines by means of RT-PCR， The methylation of promoter in Moh-4, Jurkat and U937 cells as well as 41 acute leukemia patients was analyzed by MS-PCR. The results showed that methylation of CHFR promoter was inactivated and could be reversed by treatment with a demethylating agent in Molt 4, Jurkat and U937. CHFR promoter methylation was detected in 39 % of acute leukemia patients. There was no difference in incidence of CHFR promoter methylation between acute myeloeytie leukemia and acute lymphocytic leukemia. In conclusion, CHFR is frequently inactivated in acute leukemia and is a good candidate for the leukemia supper gene. By affecting mitotic checkpoint function, CHFR inactivation likely plays a key role in tumorigenesis in acute leukemia. Moreover, the methylation of gene CHFR appears to be a good index with which to predict the sensitivity of acute leukemia to microtubule inhibitors.