短双歧杆菌携带内皮抑素和干扰素γ的特性及其抗小鼠肺癌的作用

目的：以短双歧杆菌为载体,以内皮抑素（ES）和干扰素γ（IFNγ）为目的基因,探讨携带目的基因的短双歧杆菌在小鼠体内的分布特性及其抗小鼠肺癌的效果。方法：构建原核表达载体pNZ44-IFNγ及pNZ44-ssEndostatin,电穿孔法将质粒转入用3H-TdR标记的短双歧杆菌,筛选鉴定。制备荷瘤小鼠,实验分为对照组(Control)、双歧杆菌无质粒组（B-b）、双歧杆菌空质粒组（B-b-pNZ44）、双歧杆菌内皮抑素组（B-b-pNZ44-ssEndostatin）、双歧杆菌干扰素组（B-b-pNZ44-IFNγ）和双歧杆菌联合组（B-b-pNZ44-ssEndostatin + B-b-pNZ44-IFNγ）,通过尾静脉注射和灌胃给予携带目的基因的短双歧杆菌。观察短双歧杆菌在小鼠体内的分布情况,以及移植瘤体积、小鼠免疫学指标和肿瘤间质微血管密度(IMVD)的变化。结果：成功构建了携带目的基因的短双歧杆菌。经尾静脉注射后,实验动物的心脏、肝脏、肺脏和肾脏中双歧杆菌逐步被清除,从第3天开始,各器官中放射活性较第1天明显降低（P<0.05）;肿瘤组织的放射活性随时间延长逐渐增加,从第3 天开始放射活性与第1天比较差异有统计学意义（P<0.05）。通过灌胃和尾静脉注射携带目的基因的短双歧杆菌,能抑制小鼠肺癌移植瘤的生长,并且增加CTL细胞活性、NK细胞活性和TNFα分泌活性,降低IMVD。结论：携带ES和IFNγ的短双歧杆菌能够靶向性地在肿瘤组织中定植,并通过免疫增强和抑制血管生成等机制起到抗肿瘤作用。     

口服转内皮抑素基因双歧杆菌制剂对肺癌的疗效

目的：探讨转人内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂对肺癌的治疗效果。方法：选择肺癌患者118例,比较服用转内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂前后患者症状和体征,影像学检查（X线、CT,MRI）,细胞学检查,纤维支气管镜检查及病理活检、免疫学检查（CEA）和生活质量等方面的变化。结果：服用转内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂后患者症状和体征及生活质量等较服用前均有好转或明显好转,肺癌细胞生长被明显抑制。结论：转内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂对肺癌有较好的治疗效果。     

黄精多糖的抗肿瘤活性研究

目的 研究黄精多糖的抗肿瘤活性.方法 对黄精中的多糖进行了提取、分离、纯化,取得黄精粗多糖,采用动物在体实验,进行黄精多糖对动物移植性肿瘤Heps、Eac的活性研究.结果 黄精多糖各剂量组的瘤质量均小于对照组,均可显著抑制小鼠移植瘤Heps、Eac的生长(P<0.01),抑瘤率均较高,100及50 mg/kg剂量组对动物体质量影响较大(P<0.01).结论 黄精多糖对Heps和Eac瘤株有显著抗肿瘤作用,具有很好的抗肿瘤应用前景.     

马钱子碱及其脂质体对移植性荷瘤小鼠抗肿瘤作用的对比研究

目的评价和比较马钱子碱及其脂质体对移植性肿瘤模型荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用和生存时间的影响。方法用ICR小鼠接种S180、EAC腹水瘤、肝癌Heps瘤株造成相应的移植性荷瘤小鼠模型,考察马钱子碱及其脂质体对实体瘤模型(S180和Heps)小鼠的抑瘤率和对腹水瘤模型(EAC和Heps)小鼠生命延长率的作用以研究两者的抗肿瘤活性。结果马钱子碱及其脂质体能有效抑制实体瘤模型荷瘤小鼠体内肿瘤生长,1.61、3.23、6.46mg/(kg·d)马钱子碱对Heps小鼠的抑瘤率分别为35.05%、43.70%和46.09%,而1.61、3.23mg/(kg·d)马钱子碱脂质体的抑瘤率分别为45.41%和58.19%;1.61、3.23、6.46mg/(kg·d)马钱子碱对S180小鼠的抑瘤率分别为37.59%、36.13%和38.87%,而1.61和3.23mg/(kg·d)马钱子碱脂质体的抑瘤率分别为53.00%和48.37%,明显高于马钱子碱;但两者对腹水瘤模型(EAC和Heps)荷瘤小鼠的生存时间均无延长作用。结论马钱子碱及其脂质体有显著的抑制荷瘤小鼠肿瘤生长作用,马钱子碱脂质体抗肿瘤作用明显强于马钱子碱。     

人内皮抑素部分序列——Es-2的生物活性研究

目的：检测人工合成多肽Es-2抑制血管生成活性及其对肿瘤生长的影响。方法：采用MTT法和鸡胚给药实验，观察Es-2对肿瘤细胞和鸡胚尿囊绒膜（CAM）上血管生成的抑制情况。建立C57BL／6黑色素瘤（B16F10）小鼠模型，以不同剂量皮下注射给药，测量各组小鼠皮下移植肿瘤体积变化和抑瘤率。结果：Es-2对肿瘤细胞无抑制现象；在CAM实验中，新生血管生长受到明显的抑制。C57BL／6小鼠给药10d后治疗组与对照组相比，Es-220mg／kg组对小鼠黑色素瘤生长有一定抑制作用，其效果相当于10mg／kg内皮抑素的治疗效果（P〈0．05）。结论：Es-2具有开发成抗肿瘤药物的前景。     

重组免疫毒素EGF-TCSredlk治疗实体肿瘤实验研究

目的：使用EGF-TCSredlk重组蛋白对裸鼠的肿瘤模型进行体内抑瘤实验,观察其抗肿瘤效果。方法：分别给裸鼠皮下接种人肝癌BEL-7402细胞,接种后第6天,尾静脉注射100、50和25μg/kg EGF-TCSredlk进行治疗,设空白对照组,停药后第2天处死小鼠,称量瘤重,计算抑瘤率;肿瘤组织做免疫组织化学实验,从而研究其抑制肿瘤生长的途径。结果：高、中、低剂量组的抑制率分别为75.5%、54.5%和35.4%。对治疗结束后各组平均瘤重进行统计学分析,结果有显著性差异（Welch=82.617,P=0.000）;免疫组化结果显示EGF-TCSredlk可以明显的抑制肿瘤血管的形成,高剂量组肿瘤组织未有可见血管,中低剂量组肿瘤组织血管明显少于模型组,其抑制肿瘤生长的途径可能是通过抑制肿瘤血管生长从而达到治疗目的。结论：EGF-TCSredlk可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长,预示了该免疫毒素在肿瘤治疗中的潜在应用价值。     

对甲苯磺酰胺瘤内注射结合放疗及化疗治疗裸鼠移植性肝癌的实验观察

目的 观察放疗及化疗结合对甲苯磺酰胺(PTS)瘤内局部注射对裸鼠移植性肝癌的治疗作用,为临床应用提供实验依据.方法 制作裸鼠皮下移植性肿瘤模型,将60只Balb/c(nu/nu)裸鼠随机分为6组,即PTS组、放疗组、放疗+PTS组、化疗组、化疗+PTS组和对照组,分别经皮瘤内注射PTS、局部肿瘤单纯放疗、瘤内注射PTS+局部肿瘤放疗、局部肿瘤经尾静脉注射丝裂霉素化疗、瘤内注射PTS+局部肿瘤经尾静脉注射丝裂霉素化疗、生理盐水,观察各组抑瘤率和生存期.结果 (1)放疗、化疗、PTS和放疗、化疗分别结合PTS局部肿瘤注射明显抑制肿瘤生长,而放疗、化疗结合局部肿瘤注射PTS抑制肿瘤生长又优于单纯化疗,与单纯放疗相比无统计学意义;(2)放疗、化疗、PTS和放疗、化疗分别结合PTS局部肿瘤注射裸鼠生存时间无统计学差别.结论 放疗、化疗结合局部肿瘤注射PTS治疗裸鼠移植性肝癌,疗效优于单纯放疗或单纯化疗.     

人纤维蛋白溶酶原kringle5（K5）抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达，组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白，SDS—PAGE和Western blot方法鉴定K5蛋白的表达：MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响；建立皮下种植肝癌鼠模型，瘤内注射K5，检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。【结果】SDS-PAGE及Western blot鉴定获得K5纯化蛋白；K5特异性地抑制BRCEC的增殖，IC50=160nmol／L，而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用：K5显著抑制小鼠肝癌生长，治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组。【结论】K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长，特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制。K5具有治疗肝癌的潜在临床价值。     

人内皮抑素基因获两项国家发明专利

我院分子医学研究所的“人内皮抑素基因在抗肿瘤血管再生治疗中的应用”于 2 0 0 0年 12月 2 2日获国家发明专利 ,“转人内皮抑素基因双歧杆菌口服制剂”于 2 0 0 1年 1月 5日被授予国家发明专利。根据国家知识产权局查新 ,这是国际上该基因首次获得的两项国家发明专利 ,这将促进人内皮抑素基因和转基因双歧杆菌口服制剂的临床应用。长期从事分子医学研究的徐根兴教授带领课题组全体人员 ,从人体肝脏基因文库中筛选克隆出中国人内皮抑素基因 ,并把该基因导入人体内唯一一种不产生内、外毒素的双歧杆菌中 ,使双歧杆菌作为一种导向基因载体 ,…     

内皮抑素的研究现状及其进展

1997年O’ReiHy从鼠的血管内皮细胞瘤(EOMA)培养液提取出内皮抑素——一种新的血管生成抑制因子。经过7年的实验动物研究和Ⅰ期、Ⅱ期临床试验证明，内皮抑素能促使肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤的生长和转移，具有很强的抗肿瘤特性。近年来，内皮抑素基因治疗与化学治疗、放射治疗、免疫疗法的联合疗法已经成功用于实验动物和临床试验研究，取得了可喜的进展。现就内皮抑素药理作用、作用机制、应用基础研究现状及其进展综述如下。     

Inhibitory Effect of Recombinant Endostatin on Angiogenesis and Tumor Growth of Hepatoma

LivercancerisoneofthemostcommontumorsinChina ,themortalityofwhichranksthesecondplaceofallmalignanttumors[1] Thetreatmentoftencomestofailurebecauseofthehighresistancetochemotherapyorradiationandthesevereside effectsinduced Atpresenttheonlycurativeoptionsarepar tialhepatectomyortotalhepatectomywithlivertransplantation Butthechanceforsurgeryisverylimited Someothertreatmentssuchasintratumoralinjectionofethanoloraceticacid ,transarterialcatheterembolization ,andthermaldestructionormi crowavecoagu…     

人内皮抑素基因的克隆及其表达产物抗肿瘤活性

目的：克隆人内皮抑素（endostatin)基因并对其表达产物进行抗肿瘤活性研究。方法：从人肝cDNA文库中获得人endostatin基因，构建人载体PET15b，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，将表达产物（rhEndostatin)纯化后应用于小鼠Lewis肺癌治疗，并通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验。观察rhEndostatin的血管抑制作用。结果：rhEndostatin可抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成，明显抑制小鼠Lewis肺癌的生长。结论：rhEndostatin具有抗肿瘤活性。且此活性可能与其抑制肿瘤新生血管形成有关。     

解毒祛瘀法对肿瘤血管生成影响的实验研究

[目的]证实中医解毒祛瘀法能够抑制血管生成,调控血管生长基因,抑制肿瘤生长和转移作用。[方法]1)采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,将含有解毒祛瘀法提取液的载体置于7d胚龄的CAM上,作用48h观察抑制血管生成情况,并予氢化可的松相比较。2)采用家兔角膜移植肿瘤模型观察解毒祛瘀法对肿瘤血管生成抑制作用。3)解毒祛瘀法对荷瘤小鼠肿瘤生长及血管生成抑制作用研究。[结果]解毒祛瘀法能够使CAM及家兔角膜移植瘤的血管生成明显减少甚至消失。抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,抑瘤率为49.6%,降低血管密度,促进肿瘤血管内皮细胞凋亡。[结论]中药复方解毒祛瘀法能够抑制CAM、家兔角膜移植瘤及荷瘤小鼠肿瘤生长和血管生成作用,提示解毒祛瘀法能够通过抑制肿瘤血管生成起到抑制肿瘤生长作用。     

恩度对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应及对Bcl-2、Bax基因表达的影响

 目的 探讨恩度对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应及机制。方法 用体外培养的SGC-7901人胃癌细胞细胞制作荷瘤裸鼠,研究恩度作用对肿瘤生长的抑制效应。分别采用实时荧光定量PCR法、免疫组织化学染色法研究肿瘤组织中Bax及Bcl-2在mRNA及蛋白水平表达的变化。结果 恩度治疗组肿瘤体积明显小于对照组（P<0.05）,实验第7、10、13、16、19天恩度的抑瘤率分别为26.2%、47.7%、38.9%、45.8%、51.7%。实时荧光定量PCR法结果表明,恩度组作用后Bcl-2在mRNA水平的表达显著低于对照组（P<0.05）,但对Bax的表达无影响（P>0.05）。免疫组织化学结果与实时荧光定量PCR法结果一致。结论 恩度可显著抑制裸鼠SGC-7901人胃癌的生长,可能是通过降低Bcl-2的表达而发挥其杀伤效应。     

内皮抑素基因联合小剂量阿霉素对裸鼠乳腺癌的治疗

目的：探讨鼠原性内皮抑素（Es）联合小剂量阿霉素治疗裸鼠乳腺癌的疗效。方法：构建逆转录病毒载体质粒DFG—ESDNA,建立乳腺癌裸鼠模型,将肿瘤生长均匀的裸鼠分成对照组、ES组、小剂量阿霉素组、ES与小剂量阿霉素联合治疗组。分别于肿瘤对侧背部皮下注射1X10^6（0．1mL）转染ES的人成纤维细胞,尾静脉注射阿霉素1mg／kg。每周测量1次肿瘤大小,根据V=0．52×L2XW计算体积。结果：ES与小剂量阿霉素联合治疗组肿瘤体积明显小于其他各组（P〈0．01）,细胞凋亡率明显高于其他各组（P〈0．01）。结论：ES可以有效抑制肿瘤血管生成,抑制裸鼠乳腺癌的生长,与小剂量阿霉素联合应用可明显增强其抗乳腺癌生长的疗效,为今后探索乳腺癌治疗提供新途径。     

血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

目的：将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素endostatin基因进行原核表达、纯化,检测重组endostatin的生物学活性。方法：利用原核表达载体pBV220在大肠杆菌DH5α中表达endostatin,利用肝素Sepharose亲和层析及SephacrylS-200分子筛纯化;通过体外内皮细胞（ECV304）增殖实验及体内鸡胚尿囊膜（CAM）新生血管实验检测其抑制活性。结果：Endo-statin在DH5α中的表达率为28.5%,纯化后纯度可达90.5%.En dostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖.IC50为72ug/ml;20时使细胞于48h发生明显凋亡;200ug/ml的endostatin可使CAM新生血管化率下降30%.结论:研究结果表明endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用.提示其在肿瘤及新生血管性疾病的治疗中有潜在的应用前景。     

蝎毒多肽提取物对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用

目的 观察蝎毒多肽提取物(PESV)对Lewis肺癌(LLC)生长及转移的影响并探讨其作用机制.方法 采用30只C57BL/6J小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,建立皮下种植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-FU治疗组、PESV治疗组,连续灌胃给PESV18d,检测肿瘤体积并计算抑瘤率.另取20只C57BL/6J小鼠,尾静脉注射Lewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌实验转移模型,随机分为荷瘤对照组和PESV组,连续灌胃给PESV28d,观察肺部转移灶数目并计算转移抑制率;采用免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清中骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 PESV抑瘤率为46.02%,肺转移抑制率76.19%;与荷瘤对照组相比,瘤组织和血清中OPN和MMP-9的表达明显降低(P<0.05).结论 PESV能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制OPN和MMP-9的表达有关.     

人参皂甙Rg3抑制肿瘤新生血管形成的研究

目的 :探讨人参皂甙 Rg3抗肿瘤生长的作用机制。方法 :利用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)观察 Rg3作用后肿瘤新生血管的生长情况 ,并采用 L ewis肺癌模型进一步探讨 Rg3在体内对肿瘤生长及肿瘤新生血管形成的影响。结果 :Rg3浓度为 0 .1和 0 .5 mm ol/L时 ,CAM血管生长抑制指数分别达 (6 2 .4± 9.3) %和 (4 5 .6± 5 .7) % ,与对照组相比差异非常显著 (P<0 .0 1)。对 L ewis肺癌荷瘤小鼠分别以 5、10、2 0 mg/kg的剂量隔日灌胃一次给予 Rg3,连续 10次 ,2 0 d后观察到 3组的肿瘤瘤质量分别为 (1.77± 0 .2 1)、(1.5 8± 0 .17)及 (1.2 2± 0 .2 9) g,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ,生长抑制率分别为 2 3.0 4%、31.30 %和 47.10 % ,同时观察到 Rg3组的新生血管数也明显减少。 结论 :人参皂甙 Rg3可明显抑制 L ewis肺癌的生长 ,其抑瘤作用部分是因为抑制了肿瘤诱导的新生血管形成     

复方消瘤丸抗癌作用的研究

采用抗移植性肿瘤实验方法研究中药制剂复方消瘤丸（ＦＦＸＬＷ）的抗癌活性。结果表明，ＦＦＸＬＷ１．０，２．０ｇ／ｋｇｉｇ能明显抑制小鼠移植性肉瘤（Ｓ１８０）、肝癌实体型（Ｈｅｐｓ）的生长；０．５，１．０２．０ｇ／ｋｇｉｇ能明显抑制小鼠艾氏实体瘤（ＥＣ）的生长。ＦＦＸＬＷ对Ｓ１８０，Ｈｅｐｓ和ＥＣ的实验最大抑瘤率分别达４５．１９％，５５．１０％和３８．９４％。实验结果经ｔ检验分析有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。ＦＦＸＬＷ对荷瘤小鼠的免疫功能亦有增强作用。     

复方苦参注射液对小鼠移植性S180肉瘤血管形成抑制作用

[目的]探讨复方苦参注射液对肿瘤血管形成的抑制作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,运用免疫组化方法,观察复方苦参注射液对小鼠移植性S180肉瘤血管形成抑制作用。[结果]小鼠腹腔注射复方苦参注射液0.3,0.6g/kg,连续8d后瘤体较对照组分别减小25%,36%;瘤体微血管密度较对照组分别减小32%,40%。[结论]复方苦参注射液能够抑制肿瘤的生长,具有抑制肿瘤血管形成的作用。