IL—2基因修饰增强白血病抗原冲击的树突状细胞诱导的抗肿瘤？…

目的 研究腺病毒介导的白细胞介素（ＩＬ）２基因修饰能否使抗原冲击的树突状细胞（ＤＣ）在体内诱导出更强的抗肿瘤免疫反应。方法 用小鼠粒－巨噬细胞击落刺激因子（ｍＧＭ－ＣＳＦ）和ｍＩＬ－４扩增上鼠骨髓ＤＣ在ＦＢＬ－３红白血病细胞冻融抗原冲击的同时转染ＩＬ－２腺病毒。观察其体外分泌ＩＬ－２的水平,刺激Ｔ细胞增殖的能力,其体内皮下免疫后小鼠引流淋巴结细胞数和组分的变化以及主艉地产生细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴ     

GM—CSF基因修饰,抗原预激的树突状细胞体内诱导白血病细胞分化？…

目的：探讨树突状细胞在肿瘤治疗过程中的作用及机制。方法：以小鼠ＦＢＬ－３红白血病细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立荷瘤模型，采用流式细胞仪分析和透射电镜等技术，观察了粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因修饰的抗原预激的树突状细胞体内治疗作用。结果：采用ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗，可以明显抑制白血病细胞生长；白血病细胞表达ＣＤ３４水平增加，同时ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７－１，Ｂ７－     

人GM—CSF基因转染小鼠肝癌细胞及其致瘤性研究

为建立以腺病毒为载体的ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗，并研究其体内抗肿瘤作用，应用携带有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组腺病毒（Ｒ－Ａｄ５）载体转染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠肝癌细胞株（Ｈ２２），体外应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ法），检测ＧＭ－ＣＳＦ表达水平，以ＧＭ－ＣＳＦ基因转染的Ｈ２２细胞进行致瘤性研究。结果：（１）重组腺病毒载体能成功地介导ＧＭ－ＣＳＦ基因转染Ｈ２２细胞并能持续有效表达２６￣３１天，瘤苗的辐照处     

GM—CSF基因转染瘤苗对小鼠T淋巴细胞亚群及生存期的影响

将携带有人粒细胞－巨噬细胞落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重要病毒载体的转染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠肝癌细胞株（Ｈ２２）体我经＾６０Ｃｏγ射线灭活后制成瘤苗，用以治疗荷瘤小鼠，应用流式细胞仪（ＦＣＭ）测定荷瘤小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化，并观察荷瘤小鼠生存期。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗能量显著提高小鼠外周血ＣＤ＾＋８Ｔ淋巴细胞亚群的含量，荷瘤小鼠生存期显著延长，结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗     

GM-CSF基因修饰、抗原预激的树突状细胞体内诱导白血病细胞分化的实验研究

目的：探讨树突状细胞在肿瘤免疫治疗过程中的作用及机制。方法：以小鼠ＦＢＬ３红白血病细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立荷瘤模型，采用流式细胞仪分析和透射电镜等技术，观察了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因修饰的抗原预激的树突状细胞体内治疗作用。结果：采用ＧＭＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗，可以明显抑制白血病细胞生长；白血病细胞表达ＣＤ１４水平增加，同时ＭＨＣⅡ、Ｂ７１、Ｂ７２、ＶＣＡＭ１表达水平亦显著升高；组织学观察显示瘤组织内具有不同分化阶段的单核细胞，电镜下可见白血病细胞体积减小、细胞器较成熟、胞浆中出现较多的溶酶体、核／浆比值减小及白血病细胞的凋亡。肿瘤内部及外周血中，ＣＤ８＋细胞百分率亦较各对照组明显升高。结论：采用ＧＭＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗，可以体内诱导白血病细胞向成熟单核细胞方向分化     

慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞

慢性髓系白血病（ＣＭＬ）细胞起源于ＣＭＬ多能造血干细胞,树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ,ＤＣ）是功能强大的抗原提呈细胞。ＣＭＬ细胞在ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成ＣＭＬ－ＤＣ,在自体或异体条件下均能刺激Ｔ细胞的显增殖,发挥特异性的抗ＣＭＬ细胞毒效应。     

大肠杆菌CD自杀基因与GM-CSF基因联合转移对小鼠红白血病的治疗作用

目的：观察自杀基因与细胞因子基因联合转移的抗肿瘤作用与免疫机制。方法：将表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（ＣＤ）的重组腺病毒（ＡｄＣＤ）及表达小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因的重组腺病毒（ＡｄＧＭＣＳＦ）直接进行体内注射，合并应用５氟胞嘧啶（５ＦＣ）对红白血病皮下荷瘤小鼠模型进行治疗。结果：联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长，并明显延长其生存期（Ｐ＜０．０５）；免疫功能检测表明，联合基因治疗组小鼠ＣＴＬ杀伤活性明显高于单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭＣＳＦ、对照病毒ＡｄＬａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗组；病理分析显示，联合基因治疗组肿瘤细胞发生明显坏死，瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润。结论：应用自杀基因与细胞因子基因联合转染可更有效地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，且可诱导抗肿瘤免疫应答     

LAK细胞和活化NK细胞对小鼠骨髓造血功能影响的实验研究

目的 探讨淋巴细胞因子激活的杀伤细胞／ 活化自然杀伤细胞（ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞）与造血的关系及其对同基因骨髓移植小鼠造血重建的影响。方法 ①将同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞与骨髓细胞一起置于体外半固体琼脂培养体系中,观察其对ＣＦＵＧＭ 形成的影响。②在小鼠同基因骨髓移植中, 联合注射同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞, 观察其对移植后小鼠造血重建的影响。结果①当骨髓细胞置于有外源性集落刺激因子（ＣＳＦ） 的适宜培养体系中,同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞抑制ＣＦＵＧＭ 形成;而当骨髓细胞置于无ＣＳＦ 不良培养体系中,同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞促进ＣＦＵＧＭ 形成。②在小鼠同基因骨髓移植中,联合注射同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞,能显著促进ＣＦＵＳ 和ＣＦＵＧＭ 增殖和显著升高白细胞和血小板数量。结论 ①同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞对ＣＦＵＧＭ 形成有双向调节作用。②在小鼠同基因骨髓移植中,联合注射同基因ＬＡＫ 细胞／ 活化ＮＫ 细胞,能促进移植后小鼠造血重建。     

白细胞介素2基因和白细胞介素3基因共转染白血病瘤苗的抗白血病作用的实验研究

目的：研究白细胞介素２（ＩＬ－２）和白细胞介素３（ＩＬ－３）基因共转染的白血病细胞瘤苗对白血病小鼠的治疗效果。方法：用ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）和（或）ＩＬ－３重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－３）转染红白血病细胞株ＦＢＬ－３，６０Ｃｏ照射后制备成瘤苗对实验性白血病小鼠进行治疗，观察肿瘤生长，小鼠生存期及治疗后小鼠腹腔巨噬细胞、ＮＫ细胞、诱导杀伤性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性，并与低剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）合用，观察其抗肿瘤作用。结果：用ＩＬ－２或ＩＬ－３基因转染瘤苗治疗的白血病小鼠肿瘤生长明显减缓，生存期显著延长（Ｐ＜０．０５），用联合转染ＩＬ－２和ＩＬ－３基因的瘤苗治疗较单独转染ＩＬ－２或ＩＬ－３基因的瘤苗治疗效果更佳，与低剂量ＣＴＸ合用后抗肿瘤效果最佳。治疗后小鼠腹腔巨噬细胞、ＮＫ细胞、ＣＴＬ细胞杀伤活性显著增强。结论：ＩＬ－２、ＩＬ－３基因转染的瘤苗能够有效地通过诱导机体抗肿瘤免疫功能而发挥抗肿瘤作用，与低剂量ＣＴＸ合用后，抗肿瘤效果更佳。     

IL-6基因转染的白血病细胞不同条件下小鼠体内外分泌IL-6水平的研究

为了解白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的高分泌ＩＬ－６的ＦＢＬ－３红白血病细胞（ＦＢＬ－３－ＩＬ－６＋）株体内外的生物学特性，动态观察在不同剂量６０Ｃｏγ射线照射后其ＩＬ－６的分泌水平，同时动态观察经腹腔、局部皮下注射途径将其移植入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内后，血清和局部细胞培养上清液中ＩＬ－６含量。结果表明，ＦＢＬ－３－ＩＬ－６＋细胞以８Ｇｙ照射剂量为制备瘤苗的最佳照射剂量，照射后２周内一直保持较高水平的ＩＬ－６分泌量。体内移植时，经腹腔途径注入后可测得一定浓度的血清ＩＬ－６，皮下注入时注射局部细胞培养上清中亦有一定水平的ＩＬ－６。为将该细胞作为治疗白血病瘤苗及其注射间隔时间提供了实验依据。     

IL-2基因修饰增强白血病抗原冲击的树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫反应

树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ,ＤＣ）是目前所知的最有效的激活初始型Ｔ细胞的专职抗原提呈细胞（ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ,ＡＰＣ）,也是功能最强的ＡＰＣ,在肿瘤免疫治疗中具有独特的地位［１］。Ｐｏｒｇｏｄｏｒ等［２,３］发现用ＭＨＣⅠ类分子限制性抗原多肽冲击致敏从小鼠骨髓诱导的ＤＣ可以在体内诱导产生抗原特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）,并发现经抗原肽冲击致敏的ＤＣ皮下免疫的小鼠可以产生特异的抗肿瘤效应。ＤｅＭａｔｏｓ等［４］报道用冻融抗原（ｌｙｓａｔｅｓ）冲击的ＤＣ免…     

女性海洛因依赖者子宫、卵巢变化的B超检查及探讨

阿片类药物可以使人体许多系统受累,海洛因对内分泌器的影响已经有多方面的报道。在戒毒工作中,女性吸毒者月经紊乱、闭经、流产很常见,除内分沁的改变外,子宫、卵巢有否变化引起我们的注意。为此,我们从３１８例女性吸毒者中,选择海洛因依赖者１０５例进行Ｂ超观察...     

Does B7-1 expression confer antigen-presenting cell capacity to tumors in vivo?

Tumors engineered to express the costimulatory molecule B7-1 can elicit CD8+ cytotoxic T lymphocyte (CTL)-dependent antitumor responses in immunocompetent mice. It has been postulated that this result reflects direct priming of CTL by the modified tumor in vivo. Previous studies of the immune response to a B7-1- murine colon carcinoma expressing influenza nucleoprotein (NP) as a model tumor antigen have demonstrated the crucial role of bone marrow-derived antigen-presenting cells (APCs) in the priming of NP-specific CTL in vivo. In this system, no evidence of direct CTL priming by tumor was detected. We have performed a similar analysis to determine if B7-1 transfectant of this tumor results in the direct priming of CTL, and to compare this response to that primed by host APCs. When H-2b-->H-2bxd bone marrow chimeras were immunized with a single injection of CT26/NP/B7-1 (H-2d), NP-specific CTL were detected that were restricted to the bone marrow haplotype (H- 2b), but not to the tumor haplotype. In contrast, CTL recognizing the NP antigenic epitope in the context of the tumor's major histocompatibility complex were detectable only after multiple immunizations. These results suggest that whereas B7-1+ tumor vaccines result in some degree of direct presentation to CD8+ T cells, the dominant mechanism of CTL priming is through the uptake and presentation of tumor antigens by bone marrow-deprived APCs. However, repeated immunization with B7-1+ tumor cells can efficiently expand the directly primed CD8+ CTL population.     

白细胞介素2基因和白细胞介素3基因共转染白血病瘤苗的抗白…

目的：研究白细胞介素２（ＩＬ－２）和白细胞介素３（ＩＬ－３）基因共转染的白血病细胞瘤苗对白血病的小鼠的治疗效果。方法：用ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）和（或）ＩＬ－３重组腺病毒转染红白轿病细胞株ＦＢＬ－３，＾６０Ｃｏ射后制备成瘤苗对实验性白血病小鼠进行治疗，观察肿瘤生长，小鼠生存期及治疗后小鼠腹腔巨噬细胞，ＮＫ细胞，诱导杀伤性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性，并与低剂量环磷酰胺合用，观察其抗肿瘤     

脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤实验研究

目的:用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞的融合疫苗,观察其在体内外抗肿瘤的作用。方法:分离脐血CD34 干细胞并诱导扩增为成熟DC,并与EC109细胞经聚乙二醇法融合;免疫磁珠法筛选EC109-DC;MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力;重建SCID小鼠免疫功能;体内抗肿瘤免疫治疗实验。结果:(1)融合疫苗可体外生长,且同时高表达叶酸受体和CD80。(2)疫苗能有效刺激淋巴细胞增殖反应,体外诱导细胞毒T细胞(CTL)对EC109的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05)。(3)在免疫治疗中,用融合瘤苗治疗的荷瘤小鼠,肿瘤大小和重量明显小于对照组(P<0.05)。结论:(1)EC109-DC能在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导特异性CTL杀伤作用;(2)融合瘤苗治疗荷瘤小鼠有一定的效应。     

自身肺癌抗原致敏DCs的抗肺癌体外免疫效应研究

目的探讨自身肺癌抗原致敏树突状细胞（DendriticCeil，DC）的体外免疫效应。方法体外原代培养肺癌细胞，并制备冻融抗原，冲击DCs，致敏肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和外周血T淋巴细胞，MTT法检测DCs瘤苗体外联合抗肺腺癌细胞效应。结果采用效靶比为30：1和20：1的比例，30：1和20：1的CTL杀伤率为（18．21±2．89）和（24．69±3．51）；30：1和20：1的CTIL杀伤率为（25．46±3．02）和（27．52±2．68），CTIL比CTL杀伤率高（P〈0．05）。结论负载自身肺癌抗原的DCs致敏的肿瘤浸润淋巴细胞TIL比外周血T淋巴细胞杀伤率高，为肺癌的生物治疗提供了新的思路。     

Dendritic cell immunization induces Nonprotective WT1-specific CTL responses in mouse

In the present article we describe the immunogenicity in the mouse of 2 epitopes from the tumor-associated antigen Wilms tumor 1 antigen (WT1). The newly described K-restricted pWT330 epitope stimulates high-avidity allo-major histocompatibility complex restricted cytotoxic T lymphocyte (CTL) capable of killing WT1-expressing tumor cell lines. The epitope pWT126 has been previously described as a D-restricted CTL epitope. Both epitopes are weakly immunogenic as immunization with incomplete Freund adjuvant induced poor CTL responses. In contrast, when coated onto dendritic cells (DCs) both peptides readily induced CTL responses. However, these peptide-specific CTL were of low avidity and unable to recognize WT1-expressing tumor cells in vitro and to protect against tumor challenge in vivo. In contrast, vaccination with DCs coated with peptides derived from the nonself antigen ovalbumin (OVA) induced CTL that recognized OVA-expressing tumor cells and protected against tumor growth in vivo. These data show that although DC vaccination readily stimulated CTL against WT1 peptides, these CTL did not display antitumor activity in vitro and in vivo. This suggests that tolerance to the 2 WT1 epitopes interferes with the generation of protective CTL immunity in mice.     

Connective tissue growth factor linked to the E7 tumor antigen generates potent antitumor immune responses mediated by an antiapoptotic mechanism

A novel method for generating an antigen-specific cancer vaccine and immunotherapy has emerged using a DNA vaccine. However, antigen-presenting cells (APCs) have a limited life span, which hinders their long-term ability to prime antigen-specific T cells. Connective tissue growth factor (CTGF) has a role in cell survival. This study explored the intradermal administration of DNA encoding CTGF with a model tumor antigen, human papilloma virus type 16 E7. Mice vaccinated with CTGF/E7 DNA exhibited a dramatic increase in E7-specific CD4(+) and CD8(+) T-cell precursors. They also showed an impressive antitumor effect against E7-expressing tumors compared with mice vaccinated with the wild-type E7 DNA. The delivery of DNA encoding CTGF and E7 or CTGF alone could prolong the survival of transduced dendritic cells (DCs) in vivo. In addition, CTGF/E7-transduced DCs could enhance a higher number of E7-specific CD8(+) T cells than E7-transduced DCs. By prolonging the survival of APCs, DNA vaccine encoding CTGF linked to a tumor antigen represents an innovative approach to enhance DNA vaccine potency and holds promise for cancer prophylaxis and immunotherapy.     

bcr-abl融合基因真核表达载体诱导小鼠特异性免疫应答

目的在小鼠体内外研究bcr-abl融合基因真核表达载体诱导的特异性免疫应答,探索肿瘤免疫治疗的新途径。方法构建表达bcr-abl融合基因cDNA片段的真核细胞质粒pVbcr-abl,将 pVbcr-abl质粒用纳米颗粒聚乙烯亚胺包裹后给BALB／c小鼠肌内注射,检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。小鼠免疫后20 d皮下接种具有相同遗传背景的SP2／0／ber-abl细胞(H-2~d),观察小鼠生存情况、移植肿瘤的生长情况和肿瘤细胞浸润情况。利用免疫组织化学方法观察肿瘤组织中T淋巴细胞浸润情况;流式细胞术分析免疫小鼠脾脏T细胞亚群的变化;LDH释放法检测脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果成功构建真核表达载体pVbcr-abl,bcr-abl融合基因cDNA片段在真核细胞中可得到高效表达。pVbcr-abl免疫BALB／c小鼠能激活机体免疫系统,诱导产生特异性抗体和特异性CTL活性,并形成特异性免疫保护力。免疫小鼠的移植肿瘤形成时间、表面出现破溃时间、生长速度明显降低,荷瘤生存时间明显延长。免疫小鼠移植肿瘤组织中有大量CD3~+T细胞浸润。免疫小鼠的脾细胞杀伤SP2／0／bcr-abl细胞的细胞毒活性明显升高。小鼠脾脏T细胞亚群发生改变,CIM~+／ CD8~+细胞比值升高到1．54±0．29。结论pVbcr-abl真核表达载体除能在小鼠体内诱导产生特异性抗体以外,还能诱导高水平特异性CTL活性,直接杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的生长速度。